病原微生物标本的采集保存及运输.ppt

病原微生物标本的采集 保存及运输 绵阳市CDC微检所 周良君 主要内容 正确采集、保存、运输标本的意义 采集标本的用途 标本采集的原则 常见传染病标本采集的种类 各种标本的采样时间和方法 标本的保存 标本的安全运输 标本采集时生物安全 正确采集、保存、运输标本的意义 标本的质量的好坏直接影响实验结果 的正误，而标本的质量与标本的采集、保 存、运输密切相关，标本采集、保存不当 可导致假阴性、假阳性结果的出现。因此 正确地采集、保存、运输标本是保证实验 室检验结果准确可靠的前提。 采集标本的用途 可以分为以下两类： 一类是用于细菌或病毒病原的检测（病原分离或核 酸检测） 常用标本如：粪便、咽拭子、血液、气管分泌物、 脑脊液等； 另一类标本是用于病原抗体检测 标本通常包括血液和脑脊液 标本采集的原则 u早期采集 采集时间最好是发病初期、发热期、 症状典型期 u在药物使用前采集 u无菌采集 采集的标本应无外源性污染。盛装标本 的容器应为一次性或经高压灭菌的无菌容器，不 能用酸类或消毒剂处理 u采集的标本要适量且具有代表性 u安全采集标本 防止标本中病原微生物的传播和 自身感染 常见传染病采集标本的种类 呼吸道传播的病毒性疾病（流感、禽流感、 甲型H1N1流感、SARS、麻疹、风疹等） 咽拭子咽拭子 含漱液含漱液 痰液 血清标本血清标本 脑脊液脑脊液 尸检组织尸检组织 下呼吸道标本下呼吸道标本 常见传染病采集标本的种类 肠道传播的病毒性疾病（人手、足、口病 ） 粪便标本 咽拭子标本 血液标本 疱疹液 肛拭子标本 尸检标本 脑脊液标本 常见传染病采集标本的种类 经呼吸道传播的细菌性疾病（如流脑） 咽拭子 脑脊液 血液 瘀点、瘀斑 常见传染病采集标本的种类 虫媒传播的疾病（乙型脑炎） 血液 脑脊液 常见传染病采集标本的种类 经消化道传播的细菌性疾病 （伤寒、细菌 性痢疾、细菌性感染性腹泻、霍乱等) 粪便（肛拭子） 可疑食物 呕吐物 血液、脑脊液、尿液（伤寒肠热症） 常见传染病采集标本的种类 人感染猪链球菌病（主要经破损皮肤粘膜 传播的疾病） 脑脊液 血液 瘀点、瘀斑 胸、腹水 常见标本采集的时间、方法 用于抗原检测的标本 咽拭子 采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原检测 （病原分离、核酸检测的阳性率较高 ）。患者用 清水漱口后，用专用采样棉签，令患者仰头张口 ，将无菌拭子（用无菌盐水浸湿）伸入口腔适度 用力拭抹双侧咽后壁部位，应避免触及口腔及舌 部； （必要时可使用压舍板），迅速将棉签放入 装有3-5ml保存液的15ml外螺旋盖采样管中，在 靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防 干燥。采样管外表贴上标签，注明患者的姓名、 样本的种类、采样的时间、采样人等基本信息。 悬雍垂 含嗽液： 发热72小时内采集。含漱液通过用小体积（5- 10ML）的无菌盐水含漱获得，并收集液体到有旋转 盖的50ml塑料管离心管中. 痰液： 只采集重症病人，无时间限制。病人将痰液咳入无 菌平皿中，然后用棉签刮取痰液放入含45 ml样本 运输液的螺口试管中。病人将痰液咳入无菌、内装4 5 ml标本运送液、带垫圈的50ml螺口塑料管中。 下呼吸道标本（适用于气管插管病人）： 只采集重症病人，无时间限制。收集气管吸取液或 支气管灌洗液510ml放入无菌、带垫圈的50ml螺口 塑料管中。 疱疹液 瘀点瘀斑 先用75%的酒精对疱疹液 瘀点瘀斑周围的皮肤进 行消毒，待皮肤干燥后，用消毒针将疱疹液 瘀点 瘀斑挑破用棉签蘸取液体，迅速将棉签放入内装 有3-5ml保存液的采样管中，在靠近顶端处折断棉 签杆，旋紧管盖并密封。可同时采集多个疱疹液 瘀点瘀斑作为一份标本。采样管外表贴上标签， 注明患者的姓名、样本的种类、采样的时间、采 样人等基本信息。 粪便标本 一般采集病人发病3日内的粪便标本，用于 病原检测。用药前自然排便的标本，采集 脓血粘液部分量2-3g，液体便取絮状物1- 2ml，采集后立即放入无菌采便管内（或保 存液中)。采样管外表贴上标签，注明患者 的姓名、样本的种类、采样的时间、采样 人等基本信息。 用于抗原检测的标本 肛拭子标本 采集病人发病3日内的肛拭子标本，用于病原检 测。用专用采样棉签，从患儿肛门轻轻插入，适 度用力弧型左右擦拭数下，拔出后,迅速将棉签放 入装有35ml保存液的15ml外螺旋的采样管中， 在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖，并密封， 以防干燥。采样管外表贴上标签，注明患者的姓 名、样本的种类、采样的时间、采样人等基本信 息。 用于抗原检测的标本 尸检标本 病人死亡后越早采集越好。 采集脑、肝、肺和肠淋巴结等重要组织标本，每 一采集部位分别使用单独的消毒器械。每种组织 应多部位取材，每部位应取2-3份约5-10g的组织 ，淋巴结2个，分别置于15ml-50ml无菌的有外螺 旋盖的冻存管中，采样管外表贴上标签，注明患 者的姓名、样本的种类、采样的时间、采样人等 基本信息。 用于抗原检测的标本 脑脊液标本 当患者出现神经系统症状时，可采集脑脊 液标本，进行病原分离或核酸，抗体检测 。采集时间为出现神经系统症状后3天内， 采集方法采用腰椎穿刺，采集量为1.0- 2.0ml。采集后立即装入无菌带垫圈的冻存 管中。采样管外表贴上标签，注明患者的 姓名、样本的种类、采样的时间、采样人 等基本信息。 用于抗原检测的标本 血液标本 作血液病原培养时，严格用无菌穿刺法采 肘静脉血，移入无菌的有螺口的抗凝的容 器或血培养瓶中送检，或直接接种血平皿 。血培养瓶接种比例一般按1：5-1：10， 目的是稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀 菌物质。 用于抗体检测的标本 血清 单份血清 急性期血清 IgM抗体 双份血清 采集急性期（发病0-7d）和恢复期（发病14-30d）双份配 对血清同时检测，如IgG抗体滴度有4倍以上升高才有意义 。 静脉采集3-5ml全血，置于真空无菌采血管中，自凝后， 分离血清，将血清移到2ml外螺旋的血清保存管中，贴上 标签，注明患者的姓名，采集急性期和恢复期血清瓶盖最 好采用不同的颜色 ，以便区分。将血清置于-20以下冰 箱中冷冻保 注意:全血标本不可冷冻 用于抗体检测的标本 脑脊液 一般于出现神经症状时采集，查IgM只需一份脑 脊液，而查IgG则需收集两次，时间间隔，保存 同前所述。 病原微生物标本的保存 病原微生物的保存取决于运送时间的 长短及不同病原微生物对干燥、温度 、营养、pH值的耐受能力。能确保目 标细菌的存活并抑制其他微生物的过 度生长，应选择合适的培养基和推荐 保存温度。 病原微生物标本的保存 细菌 用于分离培养细菌的标本应在运送培养基 中运送并保存于合适的温度。分离不同的 病原菌使用的运送培养基也不同，一般冷 藏运送（奈瑟菌属，流感嗜血杆菌应在35 37C保温运送） 病原微生物标本的保存 病毒 用于分离病毒的标本，一般应放在保温容器（0C4C）里，最好12 小时内送达实验室，最长放置不可超过4天，如不能立即分离病毒时 ，应将标本-20 C冻存保存，放置不可超过1周。若长期储存，最好 在70C冻存。 采集病毒拭子推荐使用：灭菌人造纤维拭子（如聚酯纤维）和塑料棒 注意 采集咽拭子或肛拭子等用于检测核酸时不能使用棉拭子和木质 拭子棒，因为这类材料中含有核酸扩增抑制剂 病毒采样液推荐使用：病毒保存液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和 真菌生长的抗生素，缓冲液 ） 专用病毒采样盒（海南兴南峰医药器械有限 公司， TelFax 免疫检测标本的保存 用于检测抗原或抗体的标本可在4C8C 保存2428h，在20C保存时间更长。 检测抗体的血清可在4C保存约一个星期， 最长10天；超过一周必须在-20C下冷冻。 检测核酸样品 要求低温快速送检 从标本采集到检测的间隔时间要尽可能短 ，并尽可能将标本处于冷藏状态。检测前 保存时间较长时则需冷冻标本防止核酸降 解。 标本的运输 标本包装 标本必须放在大小合适的带螺旋盖、内有橡胶圈的 塑料管里拧紧； 将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋里密封，每 袋装一份标本； 在塑料管上用油性记号笔写明样本的种类、采样时 间、编号、姓名； 标本的运输 标本包装 填写标本送检登记表（应包括的基本信息：姓名 、性别、年龄、职业，现住址、发病日期、标本 种类、采集日期、一般的临床症状等），连同塑 料管用另一塑料袋密封； 将装标本的密封袋放入专用运输箱内，放入冰排 ，用具吸水和缓冲能力的材料填充 同一患者两份以上的密封标本，可放在同一个塑 料袋内再次密封。所有容器必须印有生物危险标 识运输标本的外包装必须有明确的标签，标明寄 送人和接收人的详细联系方式、包装日期和运输 日期等 标本应在带有冰袋或者冰排的泡沫箱或保温箱中运输 。 保证样品运送所需温度的方法 为维持4C8C，运送盒中要填充冰袋。为保证-20C 条件，在外包装袋内装干冰，但需确保二氧化碳能释 放以防爆炸。为保证70C条件，可采用液氮用来储存 和运送。 标本运送要求专人专车 生物安全 传染性疾病的临床样本中均存在活的病原微 生物，在突发公共卫生事件