毕业论文范文——吴茱萸对大鼠肝线粒体呼吸功能的影响

江西中医学院 20 届毕业论文 论文题目：吴茱萸对大鼠肝线粒体呼吸功能的影响 课题来源：国家课题 论文性质：应用基础研究 学生姓名：XXXXXX 学生学号：XXXXXXXXXX 所在班级：XXXXXXXXXXXXXXXXX院 XXXXXXX班 导师姓名：XXXXXXXXXXXX 导师职称：XXXXXXXXX 导师电话：XXXXXXXXXXXX 导师签名：XXXXXXXXXXXX 实习单位：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX 单位地址：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX 完成时间：XXXX年 XX月 目 录 一、论文 1、标题和作者？ 2、中文摘要及关键词？ 江西中医学院毕业论文 3、英文摘要及关键词？ 4、前言？ 5、正文？ 6、讨论或小结？ 7、参考文献？ 8、文献综述？ 9、致谢及声明？ 二、导师评阅意见表（单张） 三、优秀论文申报表（单张）、优秀导师申报表（单张） 四、实习总结（单张） 五、优秀实习生申报表（单张）、优秀实习组申报表（单张） 六、平时成绩表（单张） 吴茱萸对大鼠肝线粒体呼吸功能的影响 吴玉霞（江西中医学院 330004） 黄丽萍（江西中医学院药学院 330004） 中文摘要 目的：本试验尝试从给药组与空白组表征大鼠肝脏线粒体呼吸功能各指标变化的角度， 探索吴茱萸对机体呼吸功能的调控机制，以证实吴茱萸对大鼠肝脏线粒体呼吸功能的影响。 方法：采用Clark 氧电极法测定大鼠肝脏线粒体在密闭反应体系中耗氧的变化，以确定线粒 体耗氧速率。 结果：与空白组比较，给药组有较高的 RCR，差异显著。 结论：吴茱萸组通过加 快态呼吸耗氧速率，降低态耗氧速率而提高 RCR。 关键词 吴茱萸； 肝脏线粒体； 呼吸功能 ABSTRACT Purpose:To prove the effect of Evodia rutaecarpa on the respiratory system of mitochondria in 2 江西中医学院毕业论文 mouse liver,the indes of these have been detected,and also the Regulatory mechanism.Methods:The Clark oxygen electrode is used to test the change of oxygen ,which consumed by mitochondrium in mouse liver ,to calculate the rate of the consumption of mitochondrial oxygen. Result: Compared with the blank group, the administration group have a higher level of RCR, and the difference was obvious. Conclusion：Evodia rutaecarpa is helpful to the higher level of RCR,by accelerating the rate of the oxygen consumption of state ,and reducing that of state . Key words Evodia rutaecarpa；liver mitochondria; respiratory chain function 前 言 现代实验已证实,寒证的出现可能与人体能量代谢降低有关，由于能量代谢降低，身体 热量不足，体温较低，呼吸缓慢，心跳减慢，心搏出量减少，体表毛细血管及小动脉反射性 收缩，大脑皮层兴奋性减低而产生上述一系列“寒”的证候1。 温里药具有温中散寒、 补火助 阳、 回阳救逆等功效，通过提高能量代谢对于寒证患者有很好的调节作用。 吴茱萸为芸香科植 物吴茱萸、 石虎或疏毛吴茱萸的干燥近成熟果实，属热性中药代表，具有散寒止痛、 降逆止呕 助阳止泻的功效。 生物能量是维持机体生命的重要物质基础，能量代谢是人体物质代谢的最基本形式。 线粒体是细胞活 动的主要供能场所，是物质代谢和能量转化的中心站 2。线粒体通过氧化磷酸化 (oxidative phosphorylation，OXPHOS)生成大量ATP供应细胞内各种化学反应与功能的能量需要3。 本实验尝试从给药组与空白组表征大鼠肝脏线粒体呼吸功能各指标变化的角度，探索吴 茱萸对大鼠肝脏线粒体呼吸功能的影响，以期探讨热性中药影响能量代谢的途径与机制。 正 文 1 试验材料 1.1 试验动物 健康雄性SD大鼠40只，体重220士20g，由江西中医学院实验动物中心提供。 动物质量合格证编号:SCXK（赣）20060001；将大鼠按随机数字表法分为4组，每组10只动 物，分别为吴茱萸20天组、 吴茱萸30天组、 吴茱萸40天组、 空白组。 试验期间动物均饲养于同一 环境下，保持室温1824，环境安静，动物随意进食进水，空白组给等体积生理盐水。所 有动物于试验前12h禁食，但自由饮水。 3 江西中医学院毕业论文 1.2 试验药材 吴茱萸，购自北京鹤元堂医药科技有限公司。 1.3 试验试剂 蔗糖（solarbio）、甘露醇（天津市恒兴化学试剂制造有限公司）、EDTA- 2K（国药集团化学试剂有限公司 批号：F20080423）、KCl（上海实验试剂有限公司 批号： 200805025）、KH2PO4（天津市福城化学试剂厂 批号：20080913）、Tris（solarbio）、HCL （上海焱晨化工实业有限公司）、 线粒体提取试剂盒（碧云天生物技术研究所）、 考马斯亮蓝 G-250（sigma 公司）、琥珀酸钠（sigma 公司）、ADP-2Na（sigma 公司）、Janusgreen B（sigma公司）、 95%乙醇（天津市恒兴化学试剂制造有限公司 批号：20090123）、 85%磷酸 （天津市恒兴化学试剂制造有限公司 批号：20081203）。 1.4 仪器设备 782-1Channel Oxygen system（Strathkelvin Instruments）， 低温高速 离心机（Thermo），-80冰箱（Thermo ），DY89-型电动匀浆机（宁波新芝生物科技股 份有限公司），SC-15数控超级恒温槽（宁波新芝生物科技股份有限公司），722型可见分光 光度计（上海欣茂仪器有限公司），Gilson P型移液器，Sartorius PB-10 PH计，ELGA purelab UHQ超纯水机，分析天平（1/100、1/1000、1/10000、1/100000）（Sartorius）。 2 试验方法 2.1 实验试剂配置 2.1.1 线粒体呼吸功能反应介质：称取 4.0991g 的甘露醇、2.5673g蔗糖、0.1211g Tris 、 0.0020g EDTA-2K、0.0373g KCL、0.0680g KH2PO4(PH=7.4)用双蒸水定容至 100ml。 2.1.2 线粒体提取缓冲液：称取21.393g蔗糖、0.151g Tris、0.101gEDTA-2K；(PH=7.4)用 双蒸水定容至250ml。 2.1.3 底物（0.4M 琥珀酸纳）：称取 1.62g 琥珀酸钠用双蒸水定容至25ml。 2.1.4 50mM ADP：称取0.02365gADP-2Na用双蒸水定容至1ml。 2.2 吴茱萸水煎剂的制备 取 2.0kg 吴茱萸药材，加入 10 倍量水，浸泡 60min，回流提取 60min，倒出药液，残渣 再加入8 倍水，回流提取60min。 合并两次药液，滤过、 浓缩后制成吴茱萸水提液，制备成生 药浓度为0.42g/ml，放置于-20冰箱保存备用。 2.3 大鼠肝脏线粒体的制备 2.3.1 大鼠实验前禁食12小时,动物麻醉后，迅速手术、切取肝脏组织。 2.3.2 肝组织处理：迅速取出肝脏，移入 25ml烧杯加入足量带冰渣生理盐水，将肝组织剪 碎，清洗积血以尽可能减少残留血液。清洗完后迅速用滤纸吸干后用万分之一分析天平称取 150mg肝脏组织，将称好的组织转移至预冷的玻璃电动匀浆器中，加入线粒体分离试剂， （注意：分离试剂要保存在4的冰水浴中）。 4 江西中医学院毕业论文 2.3.3 匀浆：用玻璃电动匀浆器匀浆，（注意：匀浆器应置于冰水浴中）。 2.3.4 离心：将匀浆分装在 2 个 1.5ml 的离心管内，平衡离心，4下以 600g 离心 5 分钟， 此时细胞核，红细胞和细胞碎块及各种细胞器分布在不同层次，轻轻倒出上清装进两个离心 管内，（注意：倾倒时必须小心勿将底部的细胞核倒出以保证所制备线粒体的纯度），平衡 后 11000rpm离心 10 分钟，将大部分上清倒出，所得褐色沉淀为最后制备的线粒体。取少量 保存介质，将沉淀悬浮起来，用较大的 Tip 头缓慢的吹打均匀，操作中尽量避免出现气泡， 取样测定蛋白浓度，此为最后制备的线粒体悬液，（整个线粒体制备过程均在 4进行）。 2.4 线粒体活性鉴定 2.4.1 JanusgreenB 染色原理：JanusgreenB 是对线粒体专一的活细胞染料，具有脂溶性，能跨过细胞膜， 解离后，有染色能力的基团带正电，结合在负电性的线粒体内膜上，内膜上的细胞色素氧化酶使染料保 持氧化状态，呈蓝绿色，而在胞质内染料被还原成无色。有活性的线粒体被染成蓝绿色4。 2.4.2 0.02%JanusgreenB 配置:称取0.02g 的 JanusgreenB,用生理盐水定容至 100ml,装入棕色瓶中。 2.4.5 载玻片的制备：在载玻片上滴一滴线粒体溶液，再滴一滴 0.02%JanusgreenB，混匀，然后盖住盖玻 片。 2.4.6 线粒体活性检测：将光学显微镜预热 20min，再对制备好的载玻片进行观察。结果显示:视野中有大 量呈蓝绿色游动的颗粒，提示提取的线粒体有较好的活性。见图 1。 图 1 在光学显微镜 40下观察用 Janusgreen B 染色的线粒体 2.4 线粒体蛋白定量5 2.4.1 线粒体蛋白含量用 Bradford 法进行蛋白含量的测定，用标准的牛血清白蛋白作标准 曲线，室温下测试。具体步骤为： 试剂准备：100mg 考马斯亮蓝 G250 溶于 50ml95%乙醇中，再加入 100ml85%的磷酸，用蒸馏 5 江西中医学院毕业论文 水定容至1L,混匀，用滤纸过滤，4保存备用 准备各种不同浓度的牛血清白蛋白标准液， 2.5ug/100ul，5.0ug/100ul，10.0ug/100ul，20.0ug/100ul，14.0ug/100ul，每个浓度做三 个样，以标准蛋白含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图，即得到一条标准曲线。 见图2。 图2 蛋白定量标准曲线 计算待测蛋白样品的浓度。取 4支试管，1支作空白，3支留作测定管，分别加入生理盐水 100ul、 60ul、 60ul、 60ul，向后 3支测定管中加入40ul的线粒体提取液，使每支试管总体积 为100ul。最后各试管中分别加入3.0ml考马斯亮兰 G250染色液，每加完一管，立即在旋 涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。待测蛋白以及标准蛋 白中加入 3ml中的考马斯亮蓝，用漩涡混合器混匀后静置 2 分钟，用 722 型可见分光光度 计分别测量其在595nm 处的吸光度值。 2.4.2 加完试剂后室温下静置 25分钟后，分别倒入 0.5cm 光径玻璃比色皿中，用可见分光 光度计在波长为 595nm 处测定各样品的 OD 值，空白对照为第 1 号试管，即 100ul 双蒸水加 3.0mlG-250染色液。 2.4.3 根据标准曲线方程计算待测蛋白的浓度。 2.5 线粒体呼吸功能检测6（Strathkelvin 782 氧电极法） 2.5.1 预热生物测氧仪30 分钟，恒温30。 y = 6.1099x + 0.0044 R2 = 0.997 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 00.010.020.030.040.05 标准蛋白含量(mg) 吸光度 系列1 线性 (系列1) 6 江西中医学院毕业论文 2.5.2 调节氧电极，用保险粉测试电极探头，确保仪器设施良好，可用于样品的测定。 2.5.3 在反应槽中加入 0.7ml 反应介质(75mmol/L 蔗糖、225mmol/L 甘露醇、0.05mmol/L EDTA-2K、 5mmol/L KCl、 5mmol/L KH2PO4、 10 mmol/L Tris-HCl)加入反应池中孵育 2min，以空 气饱和（反应温度 28），使仪器稳定 810mins，调节仪器将最大相对氧浓度值设定为 20 左右。测定介质量反应总体积（23ml）肝脏线粒体悬浮液体积琥珀酸体积ADP 体 积。 2.5.4 加入 0.1ml肝脏线粒体悬液(含 0.1mg 线粒体蛋白)，记录一段时间基线，1min后加入 反应底物10l(0.5mol/L 苹果酸钠、0.5mol/L丙酮酸钠)28温浴1 min,出现IV 态呼吸。 2.5.5 记录约两分钟后，加入 0.1mol/L ADP 5l,出现 III 态呼吸，记录氧耗曲线，待 ADP 完全消耗后线粒体又恢复到IV 态呼吸。 2.5.6 RCR 即加入 ADP加入后(态呼吸, ST3)和ADP 耗尽后(态呼吸,ST4)的氧耗量 。 RCR 反映线粒体膜的完整性和氧化磷酸化的偶联程度。P/O值为反应体系中加入ADP的nmol 数与相应所消耗的nmol 原子氧之比。 2.5.7 线粒体呼吸活性以单位时间内每毫克线粒体蛋白消耗多少表示(nmolmin-1mg-1)。 3 结果 3.1 大鼠肝脏线粒体呼吸耗氧曲线，见图3。 图3 肝脏线粒体呼吸耗氧曲线图 3.1.1 吴茱萸对大鼠态3、态4 的影响：见表 1，结果表明吴茱萸组能显著加快态呼吸耗氧速率， 降低态呼吸耗氧速率，（P0.01）。 7 江西中医学院毕业论文 表1 吴茱萸对大鼠肝脏线粒体态3、态 4呼吸的影响 3.1.2 吴茱萸对大鼠 RCR 的影响：见表2，结果表明给药组 RCR 高于空白组 RCR，可见给药组的能量生 成、利用及产热均高于空白组（P0.01）。 表2 吴茱萸对大鼠肝脏线粒体RCR 变化的影响 组别N 剂量（g生药/kg）RCR 空白组10等体积3.770.27 吴茱萸 20天组104.25.641.35 吴茱萸 30天组104.23.961.21 吴茱萸 40天组104.24.090.21 注：与空白对照组比较 P0.01 3.2 讨论 线粒体是一切生物进行生命活动的动力之源，是所有真核生物进行能量代谢、 产生ATP的 重要场所7。 线粒体的结构、 功能变化必将引起其所在细胞的生物活性改变。 要了解它的结构、 功能变化就必需进行各种实验研究，首先就需要获得较为完整的线粒体。线粒体的提取主要 是破膜以后使用梯度离心，利用沉降系数的不同获得线粒体。获得线粒体之后，需要检测线 粒体的活性以确保获得的线粒体未受损伤。通常使用线粒体的呼吸控制率(respiratory control ratio)表示线粒体的活性。呼吸控制率是线粒体呼吸III态(StateIII，有呼吸底物 和ADP)和呼吸IV态(StateIV，有呼吸底物，没有ADP)耗氧量的比值8。线粒体的呼吸耗氧偶 联着ADP与Pi合成ATP的磷酸化反应，ADP/O值是指线粒体每吸收一克原子氧的同时，生成ATP 的克分子数的比值，它反映线粒体的能量转化效率。 呼吸控制率(RCR)与磷/氧(P/O)比值是反 映磷酸化活性的重要指标，因而成为反映线粒体呼吸功能的主要指标9，10 。 本实验研究发现，从呼吸功能指标方面看,吴茱萸组肝线粒体呼吸过程中R3较空白组快, 因而使吴茱萸组RCR值(R3/ R4)高于空白组，表明给热性中药吴茱萸后能增加肝脏线粒体的 组别N剂 量 （ g生 药/kg） 态 3(nmolO2/)态4(nmolO2/) 空白组10等体积102.0416.3025.533.38 吴茱萸20天组104.286.877.4816.174.52 吴茱萸30天组104.266.2013.4917.293.71 吴茱萸40天组104.2118.7721.5428.994.73 8 江西中医学院毕业论文 有效氧耗。 本实验的结果,考虑可能与以下因素有关:1、吴茱萸产地不同是否会影响本实验结论 2、本实验只研究 了时效药物对大鼠肝脏线粒体的影响，缺少不同剂量下药物对大鼠肝脏线粒体的影响，因此，需要增加 剂量组进一步考察。 本实验只是呼吸功能研究中的一小部分内容，在研究中尽管选择了一些方法，但与全面 反应吴茱萸对机体的作用可能还有一段距离。 有关线粒体呼吸功能的研究还有待进一步探讨。 因此，有意义的呼吸功能的研究及分析方法的建立，在今后的研究中仍然是一个重点和难点。 参考文献 1 程彬彬中药四气的现代研究概况时珍国医国药，2000，11(9)：11-12 2 Kiberstis PAMitochondria make a comebackScience，1999，283，5407：1475 3 Newmeyer DD，Ferguson-Miller SMitochondria：releasing power forlife and unleashing the machineries of deathCell，2003，1 12：481-490 4 潘家秀.蛋白质化学研究技术M.北京:北京科学技术出版社，2001，22. 5 Bradford M.Anal.Biochem.1976,72:248 6 张桦，焦选茂，刘树森.缺血再灌注对大鼠心肌线粒体电子传递与质子泵出偶联的影响J.中国病理生 9 江西中医学院毕业论文 理杂志.1993，9(5):561一563. 7 仇万山 陈亦江,线粒体结构、功能和常用研究方法.国际麻醉学与复苏杂志2007,28-3 8 Cawthon D ， Beers K ， Bottj e WG Electron transport chain defect and inefficient respiration may underlie pulmonary hypertension syndrome(ascites)一associated mito chondrial dysfunction in broilersJPoult Sci，200 1，80(4)：474 9 Oliveira CP 。 Coelho AM ， Barbeiro HV ， el a1 Liver mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the pathogenesis of experimen|al nonalcoholic fatty liver diseaseJBraz J Med Biol Res，2006，39(2)：189 10 刘锐，黄慧玲.亚低温治疗颅脑创伤大鼠脑线和凋亡相关基因表达变化的研究J ，2007，5:10- 10. 文献综述 寒热症与能量代谢 吴玉霞（江西中医学院330004） 黄丽萍（江西中医学院药学院330004） 摘要： 寒热是八纲中重要的两个方面，不少人对寒体和热体在能量代谢方面的差异和影 响进行了研究。 观察寒、 热药性中药对正常大鼠及寒、 热症动物大鼠线粒体能量代谢的影响， 研究其可能的作用机制，以及从线粒体能量代谢的角度阐释寒热药性的现代内涵。本文从寒 热症与机体能量代谢的关系、 寒热症在能量代谢上的研究进展、 以及展望三方面进行了阐述。 10 江西中医学院毕业论文 关键词：寒热症；能量代谢 1.寒热症与机体能量代谢的关系 有研究表明，热证时机体内物质代谢特别是分解代谢亢进，能量代谢增高，生热效应加 强；寒证时则相反，机体内物质代谢特别是分解代谢受到抑制，生热效应降低，能量产生不 足。 寒症的主要表现是：体温低，畏寒，口不渴，小便清长，大便稀溏，脉迟缓或沉细无力。 寒症的出现可能与人体能量代谢降低有关，由于能量代谢降低，身体热量不足，体温较低， 呼吸缓慢，心跳减慢，心搏出量减少，体表毛细血管及小动脉反射性收缩，大脑皮层兴奋性 减低而产生上述一系列“寒”的证候。 热症的主要表现是：发热，手足温暖，不恶寒反恶热，口渴饮水多，喜欢冷饮，小便短赤，大便秘 结，面色红，舌色红苔黄，脉数或脉洪有力。热症的病理生理基础可能与能量代谢增高有关，由于能量代 谢增高，体温升高，呼吸增快，心搏出量增加，皮肤血管舒张，血流加快，以及皮肤表面和呼吸器官蒸 发水分增多，因而引起一系列热的症候1。 早在上世纪60年代徐上林2根据临床报导指出，寒症或阳虚症患者基础代谢率偏低；热症 阴虚证病人基础代谢率偏高。 寒症患者神经类型多为抑制型，热症患者偏于兴奋型。 梁月华3 等发现寒症患者体温、 心率、 呼吸频率、 血压等均有不同程度的下降，唾液量则增加，植物神 经平衡指数降低，尿内CAs、 17-OHCS排出量减少；而热症患者体温、 心率、 呼吸频率和血压均 有所上升，唾液量尊，植物神经平衡指数升高，尿CAs、 17-OHCS排出量明显增加。 张伟荣等4 采用肝脏ADK活性和细胞能荷作为反映能量生成状态的指标，肝Na+-K+-ATP酶作为能量利用状 态的指标，对寒、热体大鼠进行能量代谢方面的研究，结果显示：热体组ADK活性比寒体组、 正常组均高；热体大鼠的肝匀浆Na+-K+-ATP酶活性比寒体大鼠高。 可见，热体的能量生成、 利 用及产热均比寒体高。陈群5等观察热症模型大鼠肝细胞线粒体SDH的变化，结果表明：热症 时SDH活性升高，提示此时机体的能量代谢处于亢盛状态，即热证与机体能量代谢变化趋势 呈正相关。 神农本草经 中指出 “疗寒以热药，疗热以寒药” ，药物的寒热特性对机体会产生不同的 生物效应。寒性药消除机体“热”的病症, 热性药消除机体“寒”的病症。寒、热中药或其有 效成分可通过影响线粒体能量代谢的某些环节, 实现其对机体能量代谢的调节。如丁安荣6 等证明大黄、栀子等也具有抑制Na+-K+-ATP酶活性作用；相反,温热药淫羊藿则被证实能够使 Na+-K+-ATP酶活性回升，并能对抗地塞米松引起的Na+K+-ATP酶“耗竭”现象。寒热中药或其 有效成分可以通过作用于多个环节对于机体线粒体能量代谢产生影响7-9。 11 江西中医学院毕业论文 3.寒热证在能量代谢上的研究进展 能量代谢（energy metabolism）10，顾名思义就是生物体内物质代谢过程中所伴随的 能量释放、转移和利用，在分解代谢过程中，营养物质蕴藏的化学能便释放出来，这些化学 能经过转化，便成了机体各种生命活动的能源，所以说分解代谢的放能反应。机体所需的能 量来源于食物中的糖、 脂肪和蛋白质。 这些能源物质分子结构中的碳氢键蕴藏着化学能，在氧 化过程中碳氢键断裂，生成CO2和H2O，同时释放出蕴藏的能。这些能量的50以上迅速转化 为热能，用于维持体温，并向体外散发。其余不足50则以高能磷酸键的形式贮存于体内， 供机体利用。体内最主要的高能磷酸键化合物是三磷酸腺苷（ATP）。 生理状态下的机体“寒”、“热”状态反映了能量生成和能量利用之间的平衡关系，其 中主要是ATP的生成， 利用和产热作用，多种激素对此有调节作用。张伟荣等11的实验采用 肝脏ADK活性和细胞能荷作为反映能量生成(主要是ATP生成)状态的指标， 肝Na+ -K+-ATP酶 活性为能量利用(主要是ATP利用及产热)状态的指标并观察了多种激素的水平，以期发现一 些规律性的变化。DEAlkinson曾指出，细胞的能态及其变构调节物的均衡可用细胞的能 量载荷表示，是细胞能量生成和利用的平衡状态的二种重要参数，能荷值越高，表明细胞内 生成ADP的活性强，AD正是调节ADP生成ATP的关键酶。在正常情况下，机体细胞的能荷值在 0.85左右，并且强有力地抗拒任何偏移1213。实验结果表明，热体组ADK活性比寒体组高， 且也比常体组高。 所以热体的细胞内能量生成率高。 细胞能荷的测定也表明，热体比寒体确具 有更高的能量生成能力。体内Na+-K+-ATP酶是个重要的消耗能量的酶,消耗能量大约占整个细 胞总能量的406014，Na+-K+ATP酶在消耗ATP的同时也释放出大量的热能。所以Na+-K+- ATP酶的活性越高，体内能量消耗和产热过程也越强。实验表明，热体大鼠的肝匀浆Na+-K+ ATP酶活性比寒体大鼠要高， 两者相比有显著性差异。可见热体的能量生成和利用都比寒体 要高，新陈代谢率要快。 体温的维持主要与气的温煦作用有关15， 难经二十二难 曰:“气主煦之”。 说明气 是人体热量的来源。 人体的体温是靠气的温煦作用来维持恒定的。 而这种以温煦作用为主的气 即是阳气。 而 内经 中就有“阳虚则外寒,阴虚则内热”的论述,提示阴阳与机体体温调节有 一定的关系。 实验研究发现,从肢端和穴位皮肤温、 腋温、 胃温和舌下温等多部位观测,初步证 明阳虚、阴虚证具有体温规律性异常变化。阳虚患者体温平均水平低于正常,而阴虚患者高于 正常。 阴阳二者体温行为性调节异常,阳虚动物有显著的蜷缩拥挤、 竖毛,这种体温调节行为是 机体在阴虚或阳虚状态下导致的产热散热失衡的自主性保护性反应,说明阴虚阳虚状态 下存在体温调节功能的障碍,进一步研究发现阳虚证患者体温调定点上移。 现代研究进一步表 明,阴阳寒热的差异,其机制可能与机体微量元素及与之有关的能量代谢激素、 DNA修复能力等 12 江西中医学院毕业论文 改变有关,如反映能量代谢的Na+-K+-ATP 酶的活性,调节产热的T1 、T4 以及升高基础体温的性 激素孕酮含量,寒体动物均明显低于热体,DNA修复水平寒体亦低于热体。许上林16报道，热 证患者基础代谢率偏高，侯灿17把热证的原因归结为机体能量过剩。李华安18提出体温的高 低标志着机体热量代谢的盈亏。 寒热是中医的核心问题，展望未来，寒热本质和能量代谢的研究将有更大的突破。 参考文献 1 匡调元，张伟荣，丁镛发，等. 寒体与热体的研究. 中医杂志，1995，36(9)：553-556 13 江西中医学院毕业论文 2 徐上林. 对“寒热虚实”实质的初步探讨. 广东中医，1962,(5):3. 3 梁月华. 中医寒热本质的初步研究. 中华医学杂志，1979，59(12)：705-709. 4 陈群，刘亚梅，徐志伟，等. 实热证、虚热证模型大鼠肝细胞琥珀酸脱氢酶活性研究. 北京中医药大 学学报. 2000；23(5)：48-49. 5 丁安荣，李淑莉，王志奇. 大黄、栀子对小鼠红细胞膜Na+、K+-ATP 酶活性的影响. 中国中药杂志， 1990,15(1)：52-53. 6 张蕾. 冬虫夏草提取液对糖尿病小鼠肝线粒体氧化损伤的保护效应. 中国临床康复算,2006,10 （39）. 7 徐辉 肉苁蓉醇溶成分对致衰大鼠肝线粒体的保护作用. 黑龙江医药科学,2007,30 （1）. 8 方路，邹书兵等，丹参对离体大鼠肝组织保护作用的实验研究J.实用临床医学,2005，6（12）:1- 3. 9 王耘，史新元，乔延江. 中药复杂性研究的内容与方法. 中国天然药物，2005，3(5)：262-265. 10 姚泰,生理学,人民卫生出版社,2004,468473 11 张伟荣,寒体和热体的实验研究,中西医结合杂志,1991,11（8）:477 12 任邦哲,等译,生物化学,细胞结构和功能的分子基础 第一版 北京 科学出版社,1981:471-472. 13 t1Rex Monigomery,et a1Bio Chemistry 3rd edition London：Mosby Company,1980:2O32O6 14 陈锐群等,阴虚内热证初探知母对钠泵作用的大鼠体内实验,中西医结合杂志,1983,(4):235. 15 吴丽丽,严灿,中医脏腑功能与能量代谢和体温调节,甘肃中医学院学报,1003-8450(2004)01-0012- 02. 16 许上林,对“寒热虚实”实质的初步探讨,广东中医,1962,(5):3. 17 侯灿,“八纲”病理生理学基础初步探讨,中医杂志,1964,(120):460 18 李华安,寒热虚实100 例:关于辩证客观化指标的探讨,山东中医杂志,1986,(13):19. 14 江西中医学院毕业论文 致 谢 本课题是在黄丽萍教授精心指导下完成的。 从课题的设计、 实验操作、 数据分析到论文最 终定稿，黄老师无不悉心指导，倾注了很多心血，是该课题得以顺利完成的重要保证。她严 谨的治学态度，活跃的学术思想，时时刻刻感染着我，鞭策着我，督促我用更高的标准要求 自己。 黄老师在工作、 在学习以及生活上给与我最大限度的帮助、 支持和谅解，在此谨表示最 衷心的感谢! 感谢其他老师在实验操作具体安排上面给予我的帮助。 给子我许多宝贵的建议、 意见及指 导，使我顺利完成本课题及本论文。 最后，再次衷心感谢曾经给与我帮助、 支持的所有的人，感谢江西中医学院给我提供了良 好的学习环境和机会！ 此致 敬礼！ 05中药班 吴玉霞 2009 年5月 江西中医学院毕业论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在老师指导下独立进行研究所取得的科研成果。除 了文中特别加以标注引用的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果 和作品。 对本论文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确的方式表明。 本人完全明 白本声明的法律后果由本人承担。 签名： 年 月 日 关于毕业论文使用授权的声明 本人完全了解江西中医学院有关保留、 使用毕业论文的规定。 相关规定的内容是：学校有 权保留所送交论文的原件，允许本论文被查阅和借阅；学校可以公布本论文的全部或部分内 容，可以影印或其他复制手段保存本论文和汇编本论文。 签名： 年 月 日 15 江西中医学院毕业论文 江西中医学院毕业论文指导教师评阅意见表 （药学类专业） 论文题目 学生姓名学号系院 导师姓名职称单位 论文评阅意见：（导师根据任务书、 开题报告的要求对学生的能力、 工作量、 格式规范、 研究方法、 完 成质量等方面作出评审意见。） 是否同意推荐该论文为优秀论文 同意（ ） 不同意（ ） 指导教师： （签