NFκBp65和ICAM1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义.doc

NF-Bp65和ICAM-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义 作者：李成， 漆明， 张敬， 马爱玲【摘要】 目的 研究体内核转录因子NF-Bp65和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学染色法检测30例口腔鳞状细胞癌组织和10例正常成年人口腔黏膜组织的NF-Bp65蛋白及ICAM-1的表达水平。结果 (1)口腔鳞状细胞癌组织中NF-Bp65蛋白和ICAM-1表达水平均较正常口腔黏膜组织增强(P0.001)；(2)NF-Bp65蛋白表达和ICAM-1表达呈正相关(r=0.864，P=0.000)。结论NF-Bp65的激活导致口腔鳞状细胞癌患者体内ICAM-1表达增强，促进了机体自身细胞免疫抗肿瘤的作用，可能成为口腔鳞状细胞癌治疗的一个新靶点。 【关键词】 口腔鳞状细胞癌； NF-Bp65蛋白； ICAM-1；免疫组织化学NF-B(nuclear factor-B，NF-kappaB)是近年来发现的调节细胞基因转录的关键因子，参与多种相关基因转录调控，控制着细胞因子、黏附分子及生长因子等基因的表达，在肿瘤的发展过程中发挥着重要作用1-2。而细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecules-1，ICAM-1)参与介导细胞间的黏附、识别，对肿瘤的转化起着重要作用3。本研究通过测定分析口腔鳞状细胞癌组织和正常口腔黏膜组织中NF-Bp65和ICAM-1的表达，探讨其在口腔鳞状细胞癌组织中的作用及临床意义。 1 材料和方法 1.1 材料来源 收集宁夏医科大学附属医院病理科2006年11月2008年1月30例口腔鳞状细胞癌的组织标本存档蜡块，其中男22例，女8例，年龄3072岁，平均62.5岁。患者术前均未接受非甾体类消炎药治疗及放、化疗。10例正常口腔黏膜组织标本取自宁夏医科大学附属医院口腔科门诊自愿捐献口腔黏膜的健康志愿者，其中男4例，女6例，年龄2152岁，平均30.5岁。 1.2 主要试剂和仪器 1.2.1 主要试剂 浓缩型鼠抗人NF-Bp65单克隆抗体；浓缩型鼠抗人ICAM-1单克隆抗体；PV9000免疫组化试剂盒；DAB显色试盒及多聚赖氨酸；阳性对照片。以上试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3 实验方法 1.3.1 常规HE染色 实验标本经常规石蜡包埋、切片、HE染色。 1.3.2 免疫组织化学染色Pv-9000法检测NF-Bp65和ICAM-1抗原，具体步骤按试剂盒操作如下：组织切片5m，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；NF-B、ICAM-1采用微波抗原修复(3档，10min)，PBS洗3min3次；3%过氧化氢，37孵育10 min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗3min3次；一抗(NF-B，1200；ICAM-1，1200)37孵育2h，PBS洗3min3次；滴加试剂1，37孵育20min，PBS冲洗，3min3次；滴加试剂2，37孵育30min，PBS冲洗，3min3次；DAB显色液显色5min，自来水冲洗终止反应；苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗为阴性对照，以试剂盒中已知阳性切片作为阳性对照。 1.4 免疫组织化学结果判断 NF-Bp65位于胞浆和(或)胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应，高倍镜下(400)每张片随机选5个视野，计数200个细胞/视野。染色强度与背景无明显差别为-，阳性细胞数30%为+，30%为+，60%为+；ICAM-1以胞膜和胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，染色以阳性细胞数5%为-，阳性细胞数5%为+，30%为+，50%为+。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。 1.5 统计学方法 采用SPSS 12.0统计软件，观察值是一端无确切数值的等级资料采用轶和检验，等级相关用Kendalls taub等级相关分析。显著性差异水平为=0.01。 2 结果 2.1 NF-Bp65和ICAM-1的表达 (表1) 30例口腔鳞状细胞癌组织中NF-Bp65均呈阳性表达，其中4例+，15例+，11例+(图1，见封3)；10例正常口腔黏膜组织2例-，8例+(图2，见封3)。口腔鳞状细胞癌与正常对照组NF-Bp65阳性表达差异有统计学意义(P0.01)。ICAM-1蛋白在30例口腔鳞状细胞癌组织中3例-，7例+，10例+，10例+(图3，见封3)；10例正常组织均无表达(图4，见封3)。口腔鳞状细胞癌与正常对照组ICAM-1阳性表达差异有统计学意义(P0.01)。表1 NF-Bp65和ICAM-1在口腔鳞癌与正常口腔黏膜表达的比较 口腔鳞状细胞癌中NF-Bp65蛋白表达与ICAM-1表达呈正相关，r=0.864，P0.01(表2)。表2 30例口腔鳞状细胞癌患者NF-Bp65 和ICAM-1表达的关系(例数) 3 讨论 1986年Sen和Baltimore 首先从B淋巴细胞核抽提物中检测到一种能与免疫球蛋白轻链基因增强子B序列(5-GGGACTTTCC-3)特异结合的核蛋白因子，称之为NF-B2，4。而p65是NF-B活性形式中具有转录激活作用的主要成分。正常情况下NF-B与I Kapa B相结合而处于无活性状态存在于胞质，当被许多的诱导剂激活，如TNF-、PMA、LPS、IgG等激活后从胞质转位于胞核发挥功能。当NF-B被不恰当激活，定位于胞核而不能返回胞质时，其功能可异常增高，进而改变细胞正常的信号转导，促进细胞癌变5。目前多项研究表明，NF-B因子的持续活化可作为包括乳腺肿瘤、卵巢肿瘤、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等多种实体肿瘤的标志1，6。本研究结果显示在口腔磷状细胞癌组织中NF-Bp65蛋白表达高于正常口腔黏膜组织(P0.01)，提示NF-Bp65过度活化与口腔磷状细胞癌发病密切相关。然而NF-Bp65的过度活化是否可作为口腔鳞状细胞癌的特殊标志需要进一步的研究。 ICAM-1是黏附分子免疫球蛋白超家族的糖蛋白分子，是一种主要的细胞表面黏附分子之一。其主要功能是白细胞黏附，作用有：(l)使血流中的白细胞流动速度减慢，易与血管内皮细胞黏附；(2)使炎症细胞与血管内皮细胞黏附；(3)增加炎症细胞在浸润部位停留时间的功能7。作用机制是ICAM-1能通过与其配体2整合素-LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原，CD11a/CD18)和Mac-1(巨噬细胞1，CD11b/CD18)的结合而促进T细胞活化及白细胞从血管内向炎症部位浸润，在炎症和免疫反应中起重要作用7。有研究表明，ICAM-1在一些恶性肿瘤中过度表达，如肝癌、乳腺癌、结肠直肠癌、黑色素瘤、霍奇金病、胃癌和肺癌等8。我们对30例口腔鳞状细胞癌患者的癌组织进行研究结果发现ICAM-1也呈过度表达，与对照组10例正常口腔黏膜组织相比，两组差异有统计学意义(P0.001)，说明ICAM-1在口腔鳞状细胞癌中存在过度活化现象。 在对照组10例正常口腔黏膜中NF-Bp65有表达，ICAM-1表达均为阴性，两组比较有统计学意义(P0.01)；在口腔鳞癌组中NF-Bp65与ICAM-1表达呈正相关性(r=0.864，P=0.00)。提示：NF-Bp65存在于正常口腔黏膜中，而ICAM-1在正常口腔黏膜中不存在。说明NF-Bp65参与了机体正常的生理及病理过程，NF-Bp65的高度活化导致了ICAM-1表达的增强，ICAM-1是受NF-Bp65调控的下游因子，与张雪萍等人的研究结论相同9。NF-Bp65被激活后，通过与ICAM-1基因启动子区域的NF-B位点结合，引起ICAM-1基因的转录增强，以致ICAM-1表达增多10。有研究表明ICAM-1促进了T淋巴细胞活化机制可能是机体抗肿瘤免疫增强的一种反应，而ICAM-1在癌组织中的高表达发挥了机体免疫系统的抗肿瘤作用，起到了机体肿瘤免疫监视的功能11。因此，我们认为两者之间的正相关，可能会为肿瘤的治疗提供一个新的切入点。【参考文献】 1 Yu HG，Yu LL，Yang Y，et al.Increased expression of RelA/nuclear factor-appa B protein correlates with colorectal tumor-genesisJ. Oncology，2003，65(1)：37-45.2 Amnesty，Hanson JL，Cogs well PC，et al. A nucleosomal function for Ikappa B kinas-alpha in NF-kappa B-dependent gene expressionJ. Nature，2003，423：659-663.3 Maruo Y，Gochi A，Kaihara A，et al.ICAM-1 expression and the soluble ICAM-1 level for evaluating the metastatic potential of gastric cancerJ. Int J Cancer，2002，100(4)：486-490.4 Read MA，Whitley MZ，Williams AJ，et al.NF-kappa B andkappa B alpha：an inducible regulatory system in endothelial activationJ. J Exp Med，1994，179(2)：503-512.5 王文举，李鸿钧，孙茂盛.NF- B与持久炎症及肿瘤发生关系J.生命的化学，2007，27(3)：43-45.6 Dejardin E，Deregowski V，Chapelier M.Regulation of NF-B activity by IB-related proteins in adenocarcinoma cellsJ. Oncogene，1999，18：2567-2577.7 唐可京，李幼姬，谢灿茂.ICAM-1和VCAM-1的结构与表达调控J.国外医学分子生物学分册，2002，24(3)：35-36.8 Finzel A H，Reininger A J，Bode P A，et al.ICAM-1 support adhesion of human small-cell lung carcinoma to endothelial