比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作.ppt

比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用,113200900130021 薛晓东（组长） 113200900130002 汪文龙 113200900130030 赖雪莹 113200900130031 刘云鹭 113200900130049 石敏 113200900130051 李睿,,前言,比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用,,前言,多数情况下，缺血后再灌注可使组织器官功能得到恢复，损伤的结构得到修复，患者病情好转康复；但有时缺血后再灌注不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。缺血再灌注的损伤主要通过活性氧的作用与钙超载两种途径，而亚甲蓝与维拉帕米的作用机制分别是抑制自由基的细胞毒性作用与拮抗钙离子进入细胞，因此通过这两种药物，可以有效地减小缺血再灌注损伤，本实验旨在以这两种机制为切入点，探究以及比较亚甲蓝与维拉帕米这两种药物的保护作用。,,前言,比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用,,实验目的,1.验证亚甲蓝在缺血再灌注损伤中的保护作用 2.验证维拉帕米在缺血再灌注损伤中的保护作用 3.比较亚甲蓝、维拉帕米这两种药物对于小肠缺血-再灌注损伤的保护作用,,前言,比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用,,活性氧机制：再灌注后，肠组织产生大量活性氧，活性氧攻击细胞膜，攻击蛋白质分子使蛋白质分子氧化而发生变性，还可以攻击核酸，造成细胞功能障碍。 钙超载机制： 1.损伤线粒体 2.激活钙离子依赖性磷脂酶，损伤生物膜 3.促进氧自由基生成,实验原理-缺血再灌注损伤的原理,,实验原理,缺血-再灌注损伤的保护,维拉帕米为钙离子阻滞剂，可减少钙内流对细胞造成的损伤,亚甲蓝具有还原作用，可减少氧自由基的细胞毒性作用,产生MDA,比较两者作用后产生的MDA的量,,操作原理,肠缺血-再灌注后，自由基的大量产生使脂质发生过氧化反应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性，丙二醛数值的增加反应细胞膜性结构破坏的程度,因此，以丙二醛的数值变化来反映家兔肠缺血-再灌注损伤程度。,,前言,比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用,,实验操作,兔急性肠道缺血再灌注损伤模型的建立及正常家兔血液标本采集,实验动物的处理,标本采集及指标观察,,实验操作材料,设备：光学显微镜、石蜡切片机、低速离心机、试管（12）、一次性医用注射器（15）、分光光度计、常用手术器材、小血管夹 材料与试剂： 材料：实验家兔（6） 试剂：生理盐水、水合氯醛溶液、葡萄糖氯化钠注射液、维拉帕米、亚甲蓝溶液、苏木精染液、伊红染液、固体石蜡、甲醛溶液、LpH7.4 的 PBS 、梯度乙醇、二甲苯、MDA检测试剂盒,,兔急性肠道缺血再灌注损伤模型的建立及正常家兔血液标本采集,分组：选用健康家兔6只,雌雄不限，分为甲乙丙三组，每组2只分别编号为甲A、B，乙A、B，丙A、B。所有家兔术前 12 h 禁食 ,自由进水。 处理：,100 g/ L 水合氯醛(3 mL/ kg)腹腔内注射麻醉,耳缘静脉补充 50 g/ L葡萄糖氯化钠注射液(50 mL/ kg),下腔静脉穿刺取血5 mL于6支试管中,静置30 min , 3 000 r/ min 离心 15 min后 - 20 保存,阻断肠系膜上动脉,,实验动物的处理,甲组家兔缺血30min，于家兔耳缘静脉注射生理盐水5mL，30min后恢复血流。,对照组家兔的实验处理,维拉帕米对兔小肠缺血再灌注损伤的保护作用,亚甲蓝对兔小肠缺血再灌注损伤的保护作用,乙组家兔缺血30min，以2mg/kg剂量的维拉帕米配制成5mL注射液于家兔耳缘静脉注射，30min后恢复血流。,丙组家兔缺血30min，以5mg/kg剂量的亚甲蓝配制成5mL注射液于家兔耳缘静脉注射，30min后恢复血流。,,标本采集及指标观察,100 g/ L 水合氯醛(3 mL/ kg)腹腔内注射麻醉,耳缘静脉补充 50 g/ L葡萄糖氯化钠注射液(50 mL/ kg),下腔静脉穿刺取血5 mL于6支试管中,静置30 min , 3 000 r/ min 离心 15 min后 - 20 保存,采用 MDA 测定试剂盒检测血清中 MDA 含量的变化,各组实验终点，动物处死前，每组家兔于再灌注2 h后沿原切口入腹,,前言,比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用,,实验结果及总结,一、家兔实验前后血标本MDA测量值 1.仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值 2.以吸光度OD值为纵坐标(Y)，相应的MDA标准品浓度为横坐标(X)，做得相应的曲线，样品的MDA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 3.检测值范围：0-80umol/L 4.敏感度： 0.1 umol/L,,实验结果及总结,实验前后血标本MDA测量值（单位：nmol/L）,甲组 乙组 丙组,1 2 3 4,,实验结果及总结,二、家兔实验后小肠黏膜组织病理检查评分,实验后小肠黏膜组织病理检查评分,甲组 乙组 丙组,A B,Tha