虎仗中有效成分大黄素的提取工艺研究.pdf

6 5 2 安 徽医 药A n h u i Me d i c a l a n d P h a r m a c e u t i c a l J o u r n a l 2 0 0 6 S e p ； 1 0 ( 9 ) 虎仗中有效成分大黄素的提取工艺研究 毕敏 ， 赵新民 ( 1 安徽 医科大学第一附属医院药剂科； 2 合肥联盛医药科技有限公司， 安徽合肥2 3 0 0 2 2 ) 摘要 ： 目的确定中药虎仗有效成分大黄素的提取方法； 方法采用高效液相法测定大黄素的含量， 通过正交实验 ， 了解不同醇 浓度、 浸渍时间和流速对虎仗浸膏中大黄素含量的影响； 结果7 0的乙醇浓度、 浸渍3 6 h大黄素含量最高； 结论 醇浓度和 浸渍时间对虎仗中有效成分大黄素含量的影响具有显著意义， 流速对其影响不大。 关键词： 虎仗； 大黄素； 提取工艺； 正交实验 On e x t r a c t i o n t e c h n i q u e o f p o l y g o n u m c u s p i s t u m BI Mi n ZHA0 Xi n mi n ( 1 D e p t o fP h a r m a c y ， t h e F i r s t A f fil i a t e d H o s p i t a l ofA n h u i Me d ic a l U n i v e r s i t y ； 2 H e f e i L i a mhen g M e d ic a l S c i e n c e T r a d e C o L t d 2 3 0 0 3 2 ) Ab s t r a c t ： Ai m T o s t u d y t h e e x t r a c t me t h o d o f e f f e c t i v e i n g r e d i e n t e mo d i n i n p o l y g o n u m c u s p i s t u m M e t h o d T h e c o n t e n t o f e m od i n i n p o l y g o n u m c u s p i s t u m w a s d e t e r mi n e d b y HP L C We i n s p e c t e d t h e e f f e c t o f d i f f e r e n t a l c o h o l c o n c e n t r a t i o n， e x t r a c t t i me a n d t h e fl o w r a t e f o r t h e c o n t e n t o f e mod i n i n e x t r a c t u m p o l y g o n u m c u s p i s t u m w i t h o r t h o g o n al t r i a1 Re s u l t s T h e y i e l d r a t e o f t h e e x t r a c t u m p o l y g o n u m c u s p i s t u m a n d t h e c o n t e n t o f e mod i n i s t h e mo s t e f f e c t i v e d e gre e wh i l e t h e c o n d i t i o n i s 7 0 alc h o l c o n c e n t r a t i o n， 3 6 h e a c h t i me for e x - t r a c t i o n Co n c l u s i o n I t i s mo s t s i g n i fi c a n t t h a t alc o h o l c o n c e n t r a t i o n a n d e x t r a c t t i me h a v e a n e f f e c t o n t h e y i e l d r a t e o f t h e e x t r a c t u m p o l y g o nu m c us pi s t u m a n d t he c o nt e nt o f e mo di n Th e flo w r a t e i s o f l i t t l e i mpo r t a n c e Ke y wo r d s： p o l y g o nu m cu s pi s t u m ； e mo di n； e x t r a c t i o n t e c h ni q ue； o rth o g o n a l t rial 虎杖( P o l y g o n u m c u p i d a t u m) 为蓼科( P o l y g o n a c e a e ) 蓼属 ( P o l g o h u m d u o n i a n s hen g) 多年生灌木状草本植物虎杖 ( 尸 o - l y g o n u m c u p i d a t u m S l e d ) 的根 和根 茎 ， 为我 国传统 中药 ， 其 性 味苦平 ， 有缓泻、 利尿、 通经、 去瘀、 解毒之功效。虎杖在我国 分布广、 贮量大； 其化学成分主要为蒽醌类， 其中大黄素的含 量较高。我们通过正交试验， 系统考察其渗漉所用的醇浓度， 浸渍时间和流速对虎杖的有效成分大黄素的影响。 1 材料、 试剂及仪 器 虎杖( 购于安徽省中药材公司)； 大黄素( 购于中国药品 生物检定所 ) ； H H S - 2 1 - 4型恒 温水浴 锅 ； R E - 5 2型 旋转蒸 发 仪； 2 0 2 - 2型电热恒温鼓风干燥箱； 岛津 S P V 1 0 A高效液相色 谱仪。 2 实验方法与结果 2 ， 1 方法 2 1 1 提取工艺 虎仗药材经粉碎加工成粗颗粒； 用药材 6 倍量的乙醇浸渍、 渗漉， 收集渗漉液。 2 1 2 提取 工 艺优 选根据渗漉法 的特 点 ， 选 定醇浓度 、 浸 渍时间和流速 3个 因素 ， 以大黄素作 为考察指标， 选用 k ( 3 ) 正交表进行试验， 因素水平见表 1 。 2 2 大黄素含量测定方法色谱条件与系统适用性试验 ： 色 表 1 试验 因素水平表 谱柱： 岛津 C L C - O D S分析柱( 2 5 0 m m4 8 m m， 5 m) ； 流动 相： 甲醇 ： 0 1磷酸溶液 ( 8 0 ： 2 0 ) ； 流速： 1 m l mi n ； 检测 波长为： 4 3 7 n m， 柱温为 4 0 ， 理论塔板数按大黄素峰计算 ， 应 不低于 5 0 0 0 。 2 2 1 标准曲线制备精密称取 P ： O ， 干燥至恒重的大黄素 对照品约 1 0 m g ， 置 1 0 0 m l 量瓶中， 加乙醇溶解并稀释至刻 度， 摇匀， 密塞， 作对照品溶液。精密吸取此溶液 0 5 、 1 0、 2 0 、 3 0 、 4 0、 5 0于 1 0 m l 容量瓶中， 加乙醇稀释至刻度， 摇匀， 密塞， 作对照品稀释液。分别精密吸收对照品稀释液 2 0 测 定， 以峰面积为横坐标， 以溶液浓度为纵坐标 ， 绘制标准曲线 ， 并计算回归方程， 结果显示大黄素在 5 5 0 m g L 范围内 呈良好线性关系， 回归方程为： Y=2 1 6 4 2 3 4 2+1 3 8 5 3 6 6 1 X 标准差 S =4 5 9 3 2 ， 9 4 ， 相关系数 r = 0 9 9 9 7 。结果见表 2 。 复方氯唑沙宗胶囊中的两个组分对乙酰氨基酚和氯唑沙宗主 要药动学参 数 T 、 C 、 A U C 。 - 1 5 h 、 A U C 。 与孙 氏 报 道 的 略有差别， 可能与给药剂量， 试验条件的控制等因素有关。 参考文献 ： 1 张士洋 阿奇霉素片剂的药代动力学研究 J 安徽医药， 2 0 0 3 ， 7 ( 3 )： 1 7 2 5 ， 2 孙瑞元 ， 桂常青 生物 等效性 试验 的实施注 意事项 及计 算简法 J 安徽 医药 ， 1 9 9 9， 3 ( 1 ) ： 16 3 孙亚欣 ， 肇丽梅 ， 邱枫 ， 等 复方氯唑 沙宗分 散 片的相对 生物 利用度 J ， 中国药学 杂志 ， 2 0 0 5 ， 4 0( 6 ) ： 4 8 7 9 4 伏光华 ， 刘梅娟 ， 韩静 ， 等 高效液相 色谱法 同时 测定 复方氯 唑沙宗片中两组分血药浓度 J 中国药学杂志 ， 2 0 0 0 ， 3 5 ( 1 1 ) ： 7 6 5 7 5 杜玲 ， 崔文海 对复方氯唑沙宗片含量的 HP L C法测定中流动 相配比的改进 J 山东 医药工业 ， 2 0 0 1 ， 2 0 ( 3 ) ： 2 8 9 ( 收稿 日期 ： 2 0 0 60 21 4) 维普资讯 安 徽 医 药A n h u i Me d i c a l a n d P h a r m a c e u t i c a l J o u r n a l 2 0 0 6 S e p ； 1 0 ( 9 ) 6 5 3 表 2 大黄素含量测定标 准曲线 浓度 g m l 5 2 1 0 4 2 0 8 41 6 8 3 2 峰面积( A)5 2 9 8 7 1 4 3 8 7 0 8 8 6 7 8 1 3 1 3 5 7 8 3 3 7 5 2 4 2 3 1 0 8 7 5 4 6 5 1 7 0 5 回归方程 Y=2 1 6 4 2 3 4 2+1 3 8 5 3 6 6 1 X 线性 范围 2 7 4 3 2 m g L 2 2 2 仪 器精 密度 考察取 含量测定项下对照品溶 液 ， 连续 进样 5次， 记录峰面积并计算其偏差， 结果见表 3 。 2 2 3 溶 液稳 定性 试验取 标准 曲线项 下 对照 品溶 液 ， 于 不同时间进样测定， 记录峰面积并以0 h峰面积为 1 0 0 计算 溶液的稳定性 ， 结 果见表 4 。 2 2 4 重复性试 验取标 准 曲线 项 下对 照 品溶 液 ， 连续 进 样 6次， 记录峰面积， 计算偏差， 测定结果见表 5 。由试验结 果可见 ， 本 品含量测定方法 的重 复性试 验 良好。 2 2 5 回收率精密称取已知含量的虎杖细粉 ， 分别定量加 入一定量的大黄素对照品， 按样品测定方法测定， 计算回收 率 ， 结 果见 表 6 。由试验结果可 见 ， 本品含量测定方 法的 回收 表 3 大黄素进样精密度结果 表 6 大黄素回收率试验结果( n - 3 ) 率 良好 。 2 3 数据处理采用大黄素含量为考察指标的方法优选提 取工艺。结果见表7 。 表 7正交实验结果 试验号 A B C 大黄素含量 8 9 KI K2 K3 R 3 3 3 6 8 5 3 6 5 0 6 1 6 8 4 1 7 3 7 5 3 1 2 5 6 2 6 6 1 3 8 5 5 1 8 5 0 9 4 91 由表 7结果表明： B因素( 时间) 和 A因素( 醇浓度) 对虎仗中 有效成分大黄素提取的影响具有显著意义 ， C因素对其影响 不大 。 3 讨 论 虎杖 植物化学成 分研究 已较为 深入 ， 迄今 已从 中分离得 到的 化学成分有 ： 葸醌类 、 二苯乙烯类、 萘醌类 、 黄酮类等“ 。其 中蒽醌类化合物主要有： 大黄素- 6 甲醚( P h y s c i o n ) ， 大黄素 l e mo d i n ) ， f a l l a c i n o l ， 大 黄素 8 甲醚 ( q u e s t i n ) ， 大黄素 8- 0 G D 葡萄吡喃糖甙( e m o d i n一 8- 0 B D g l u c o p y r a n o s i d e ) ， 2 一 甲氧 基一 6 一 乙酰基 一 7 一 甲基胡桃醌 (P C 1 6 ) ， 白藜芦醇( r e s v e r a t r o )和 白藜芦醇甙 ( p i c e i d )。 近代药理研究表明， 大黄素可抑制肾小球系膜细胞增殖， 抑制系膜细胞 自分泌或旁分泌白细胞介素一 1 ， 白细胞介素- 6， 肿瘤坏死因子等带来的肾小球局部炎症效应 。大黄素对 正常小 鼠免疫系统有不同程度的抑制作用， 如减轻免疫器官 的重量 ， 并减少抗体的产生， 抑制碳粒廓清功能和腹腔巨噬细 胞吞噬功能， 降低 白细胞数” ， 对 C C 1 4引起 的 A C T、 A S T和 MD A水平升高有显著的抑制作用并能显著改善损伤肝细胞 的增殖 ， 对大鼠肝纤维化具有治疗作用 。 为了从虎杖中分离出大黄素 ， 笔者采用乙醇从虎杖根茎 提取物中提取分离出大黄素， 通过正交实验结果表明， 我们认 为虎仗 中有效 成分大黄素 的最佳提