课件：分枝杆菌.ppt

1,病例1,患者，男，20岁。自诉大约在1个月前逐渐开始疲乏、食欲减退、发热、咳嗽，每天咳出带血丝的痰，近1个月内，体重下降。查体：T38，bp120/70mmHg。右上肺叶可闻及啰音。胸部X线片提示右上肺叶后段空洞。取痰作抗酸染色发现大量细长红色杆菌。问：（1）鉴于上述状况，患者可能感染什么细菌？（2）该菌的主要传播途径是什么？（3）描述该菌形染特征及典型菌落特征；（4）若进行分离培养，如何进行标本采集与处理？常选用哪几种培养基？（5）目前常用什么方法快速鉴定该菌？,2019,-,2,病例2: 21岁女青年，因咳嗽乏力盗汗和消瘦2个月就诊。病人1个月前开始有干咳，痰少，无胸痛，有明显乏力夜间盗汗和自觉午后低热。体格检查无阳性发现，X线透视在肺尖部有小块阴影，边缘模糊，X线摄片怀疑为肺结核。实验室检查：血沉55mm/h，3次查痰结核分枝杆菌结果报告找到结核分枝杆菌。经休息和用链霉素、异烟肼治疗后开始好转。 A.哪些实验室检测方法有助于结核病的诊断？ B.如何预防和治疗结核分枝杆菌感染？ C.简述结核菌素试验的原理、方法、结果判断和应用。 D.试述结核分枝杆菌脂质及其生物学意义。,2019,-,第十三章 分枝杆菌属,2019,-,3,细长略弯，繁殖时有分枝生长的趋势 胞壁含大量脂质，故不易着色，但加温或延长染色时间着色后能抵抗盐酸乙醇的脱色，故又称为抗酸杆菌 无鞭毛、无芽孢，不产生内外毒素侵袭性酶 本菌属种类颇多，可分为3组： 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌 所致疾病多为慢性感染过程长期迁延并有破坏性的组织病变,2019,-,4,5,第一节 结核分枝杆菌,老杀手卷土重来,2019,-,结核分枝杆菌 结核分枝杆菌是结核病的病原菌，俗名结核杆菌，1882年由科霍（ Robert Koch ）发现。 对人有致病性的有人型和牛型结核杆菌。,2019,-,6,7,结核杆菌的发现 结核杆菌的发现者是德国的细菌家罗伯特.科赫。科赫从小就爱跟昆虫打交道，经常爬在地上观察它们的活动。1862年，19岁的科赫进入哥丁根大学学医，毕业后行医。由于他对巴斯德是由微生物引起的学说颇感兴趣，于是开始了对微生物的探索。他首先发明了苯胺染色方法把颜色涂到细菌身上，这样就容易识别了。 1887年秋天起，科赫着手进行探索肺结核病因的试验。他研究了因结核病死亡人的肺，但没有发现细菌。可是把病肺磨碎，擦在老鼠和兔子身上，它们都得了结核病。在反复实验中，科赫发现结核菌是透明的，用显微镜是看不见的。因此，他用各种色素去染患结核病而死亡的人的肺，终于发现了染上兰色素的结核菌。用蓝色素染出的结核菌是细棒状的。接着他又用血清培养基对结核杆菌进行培养，16天后，终于获得了人工培养的结核杆菌。他把这种培养菌接种在动物身上，动物也感染了结核菌病，至此，完全证实了结核杆菌是这种传染病的病因。,2019,-,8,1995年底世界卫生组织（WHO）将每年3月24日作为世界防治结核病日（World Tuberculosis Day），是为了纪念1882年德国微生物学家罗伯特科霍向一群德国柏林医生发表他对结核病病原菌的发现。以提醒公众加深对结核病的认识。,“世界防治结核病日”3月24日,2019,-,2019,-,9,2019,-,10,国际主题 2012: Stop TB in my lifetime Call for a world free of TB. 2011: On the move against TB: Transforming the fight towards elimination 2010: On the move against TB: Innovate towards action 2009: I am stopping TB 2008: I am stopping TB 2007: TB anywhere is TB everywhere 2006: Actions for life Towards a world free of TB 2005: Frontline TB care providers: Heroes in the fight against TB 2004: Every breath counts Stop TB now! 2003: DOTS cured me it will cure you too! 2002: Stop TB, fight poverty 2001: DOTS: TB cure for all 2000: Forging new partnerships to Stop TB1,11,“世界防治结核病日”3月24日,2019,-,中国主题 1996 We are all at risk 我们面临结核感染的危险 1997 防治结核病，人人保健康 1998 The effectiveness of controlled daily doses of medication 结核病严重威胁人民健康的传染病， 实行归口管理，有效控制结核病 1999 Stop TB Use DOTS 依法控制结核病，防止结核病蔓延 2000 Forging New Partnerships to Stop TB 动员全社会,共同关注结核病 2001 DOTS - TB cure for All 积极发现、治愈肺结核病人 2002 Stop TB, fight poverty 遏制结核病、消除贫困 2003 DOTS cured me - It will cure you too DOTS治愈我的病，也能治好你的病 2004 Every breath counts-Stop TB now 控制结核病，让每一次呼吸更健康 2005 promoting frontline TB nurses and care providers 防治结核，早诊早治，强化基层 2006 Action for Live:towads a world free tuberculosis 防治结核，坚持不懈 2007 TB Anywhere is Everywhere 结核流行广泛,控制从我做起,2019,-,12,2008年主题：控制结核，人人有责。 2009年主题：控制结核，人人有责（关注农民工，共享健康） 2010年主题：遏制结核，健康和谐 2011年主题：遏制结核，共享健康 2012年主题：你我共同参与，消除结核危害 2013年主题：你我共同参与，消除结核危害 2014年主题：你我共同参与，依法防控结核,13,2019,-,态生两靥之愁， 娇袭一身之病。 泪光点点， 娇喘微微。 闲静时如姣花照水， 行动时如弱柳扶风。,14,2019,-,拜伦（17881824）,15,美神的女儿也没有你 那份魅力的神奇 你的声音是那么甜美 如音乐漫过淼淼的海水 那乐曲让大海也着了迷 屏住了自己的呼吸 海浪，静静安卧，泛着波光微微 风儿，稍声无息，似在梦中沉睡,2019,-,据世界卫生组织估算：目前 全球有1/3的人口（约20亿）已感染了结核菌， 现有结核病人2000万， 每年还会新发生800-1000万病人， 每年有300万人死于结核病， 此外每年新发病人中传染性(痰涂片阳性)病人约 380万； 新发成年病人中合并艾滋病毒感染者的比例占12%； 新发病人中耐多种抗结核药物的比例为3.2%，病人数约3060万，实际耐多药病人总数约100万。,16,2019,-,我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病人数仅次于印度，居第二位。 现有结核菌感染者4亿人， 活动性肺结核病患者500万人， 其中传染性肺结核病患者150万人， 每年结核病发病人数为133万，占全球的15%， 每年因结核病死亡的人数达13万人。 据我国传染病发病监测网络报告显示，肺结核发病和死亡人数始终位居各种传染病之首位。在肺结核患者中，3/4是最具有生产能力的青壮年。因此，结核病在我国已成为因病致贫、因病返贫、制约农村特别是贫困地区经济和社会发展的重大疾病之一。,17,2019,-,形态与染色,一、生物学特性,2019,-,18,19,2019,-,20,2019,-,培养特性 馋营养要求较高，必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基（罗氏培养基）上才能生长良好。 懒生长缓慢，1824h分裂1次，在固体培养基上24w才出现肉眼可见的菌落。 丑典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样。,2019,-,21,2019,-,22,23,生长于L-J培养基上18天的结核分枝杆菌,2019,-,抵抗力 对理化因素抵抗力较强： 耐干燥：在干痰中存活68个月。 耐酸、碱：在3%HCI或NaOH溶液中能耐受30分钟。 对湿热、紫外线敏感：在液体中加热626315分钟，日光直射下23小时，75%酒精内2分钟即死亡。,2019,-,24,25, 对紫外线、乙醇、甲醛敏感,病人用过的物品在强阳光下直晒半日，基本可达到消毒的目的。,直接接触70%75%乙醇530分钟可被杀死，可用于皮肤消毒。但不能用于痰的消毒。,1%甲醛处理5分钟杀灭，5%甲醛和痰液等量混合12小时以上才杀菌。,抵抗力,2019,-,26, 对链霉素、异烟肼、利福平、卡那霉素、对氨基水杨酸等敏感,2019,-,变异性 结核分枝杆菌易发生形态、菌落、毒力以及耐药性的变异：, 耐药率2050%,多重耐药率520%。 多重耐药结核杆菌（MDRTB）指至少耐异烟肼和利福平两种抗结核药的结核杆菌。,27,耐药性变异,2019,-,L型变异 L形细菌常见于陈旧性肺结核和强力化疗或用3种主要抗痨药异烟肼、链霉素及乙胺丁醇等治疗效果不佳的病人。因细胞壁缺陷，可逃避抗细胞壁抗体的作用而能在体内长期存留。,28,2019,-,变异性 卡介苗（BCG）就是牛型结核分枝杆菌经230次传代，历时13年得到的毒力变异株，对人无致病性，而仍保持良好免疫性的菌株。卡介苗接种人体后，可获得抗结核免疫力。,2019,-,29,30,BCG 19081921法国巴斯德研究所的Calmette 和 Guerin制备; 中国:1993年全国统一推行由上海生物制品研究所“种子批”菌种D2-PB302S甲10株（来源于50年代始用的“丹麦亚株823”）为我国生产BCG菌种； 已使用的活疫苗： BCG、布氏菌病菌苗、鼠疫菌苗、炭疽菌苗、脊灰疫苗、麻疹疫苗、黄热疫苗 80年代后： 伤寒TY21a活菌苗、乙脑活疫苗、风疹活疫苗等,2019,-,致病物质 不产生内、外毒素以及侵袭酶 1、脂质 ：磷脂；硫酸脑苷脂；索状因子；蜡质D 2、蛋白质 ：结核菌素 3、多糖 4、核酸 5、荚膜 感染途径：呼吸道、消化道、皮肤黏膜,二、致病性,2019,-,31,32,2019,-,1、肺部感染 原发：外源性 原发后感染：多见内源性感染，形成结核结节 2、肺外感染,所致疾病,2019,-,33,多发生于儿童 原发综合征 纤维化和钙化 转归 或全身感染,肺部感染原发感染,2019,-,34,原发感染,2019,-,35,36,2019,-,37,结核杆菌可通过呼吸道、消化或皮肤损伤侵入易感机体, 其中肺结核为最多。,慢性纤维空洞性肺结核,干酪样肺炎,粟粒性肺结核,2019,-,多由原发病灶潜伏的结核菌引起 多发于成年人 病灶多局限，不易播散 易发生干酪样坏死和形成空洞 为开放性肺结核,肺部感染继发感染/原发后感染,2019,-,38,免疫力低下患者 常见于脑、肾、骨、关节、生殖系统 少数形成全身粟粒性结核或播散性结核,肺外感染,2019,-,39,40,难治疗的淋巴结核,2019,-,皮肤结核,41,2019,-,三、免疫性与超敏反应 （1）结核病的细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用，在细胞免疫的同时发生IV型超敏反应。 （2）结核的免疫为有菌免疫或感染免疫。 （3）结核分枝杆菌感染机体后，可刺激机体产生抗体。,2019,-,42,结核菌素试验 1.原理 结核菌素（OT或PPD）注入皮内后如受试者已感染结核，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发型超敏反应，若受试者未感染过结核则无反应。,2019,-,43,结核菌素试剂 旧结核菌素（OT) 纯蛋白衍化物(PPD),2.方法与试剂,2019,-,44,方法 取5单位PPD 注入前臂掌侧皮内 4872小时后观察红肿硬结直径 结果判断 阴性：5mm或无硬结 阳性：5mm 强阳性：15mm,2019,-,45,46,2019,-,47,2019,-,2019,-,48,结核菌素试验结果分析,阳性 强阳性 阴性,硬结、红肿直径 5-15mm之间,出现超敏反应 不表示正患结核病,硬结直径超过15mm以上,表明可能有活动性结核，应进一步检查,注射部位有针眼大的红点或稍有红肿，硬结直径小于5mm,无结核感染， 但应考虑： 原发感染的初期 正患严重结核病 机体细胞免疫功能低下,2019,-,49,选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种后的免疫效果 作为婴幼儿结核病的辅助诊断 测定机体细胞免疫功能状态 了解人群自然感染率,结核菌素试验应用,2019,-,50,标本取材 依病变部位的不同采相应的标本 痰：晨痰，深咳而得为宜，容器应消毒，停药12天 尿：清晨一次全部或24h尿沉淀1015ml 胃液脑脊液胸水/腹水/关节液/脓液无菌试管送检 合格痰标本：鳞状上皮细胞25个/低倍视野,微生物学检查了解,2019,-,51,痰培养查TB处理？（前处理） 目的液化标本，消除杂菌，保护分枝杆菌。 方法： （1）酸处理法取痰标本12ml于无菌试管内，加2%H2SO4溶液24倍混匀后室温处理30min，期间震荡痰液23次，使痰液液化，待接种。 （2）碱处理法取痰标本12ml于无菌试管内，加40g/LNaOH溶液24倍混匀后置37孵箱内放置30min，期间震荡痰液23次，使痰液液化，待接种。 （3）胰酶-新洁尔灭法痰标本加入等量1g/L胰酶震荡消化数min，再加入等量0.3%新洁尔灭混匀，放置5min后，待接种。,52,2019,-,检验方法： 1、标本直接检查: （1） 形态学检查：直接涂片染色镜检、浓缩集菌涂片检查法 （2）核酸检测：PCR法 （3）抗原检测：ELISA查血清中抗PPDIgG （4） 抗体检测,53,2019,-,54,2019,-,固体培养基培养法、液体培养法 鉴定试验： （1）PCR反向膜探针杂交ELISA法（PCR杂交梳） （2）DNA探针 （3）16srRNA基因序列测定 （4）高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸 3、药物敏感性试验 4、免疫学诊断 OT试验、全血IFN测定法,55,2、分离培养与鉴定,2019,-,接种卡介苗预防 接种对象：新生儿和结核菌素试验阴性的儿童 免疫时间：35年 药物治疗 联合应用 长期用药,特异性防治,2019,-,56,结核分枝杆菌存在的地点,1、各种临床标本，通常是痰，胃或支气管灌洗液、脑脊液、尿液等。 2、被污染操作台、器械、仪器、试剂。 3、收集的结核分枝杆菌菌株。,57,生物安全知识补充了解,2019,-,安全防护, 试验前开启紫外线灯对实验室和操作区域照射1小时以上；试验结束后，照射消毒2小时以上。 试验开始和结束，操作人员要用70%酒精浸泡双手或仔细擦后，用清洁剂或清水洗净。 试验结束后清理实验台，用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗实验台面。,58,2019,-,安全保障, 采集病人痰标本应在户外进行，避免因病人咳漱造成室内气溶胶污染。 普通实验室应注意气流方向，实验过程中尽量避免强气流变化而产生气溶胶（如涂片、染色过程中）。 细菌的分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作均应在生物安全柜中进行。,59,2019,-,结核病实验室废物处理, 实验室含有生物危险物的临床标本及被污染的一次性用品，试验完成后，应在操作台或实验区域内以紫外灯近距离照射消毒 2小时以上，再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。,60, 可重复使用的实验用品及器材，完成实验后，应在操作台或实验区域内经紫外灯近距离照射消毒2小时以上后，再交有关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。,2019,-, 实验用的试管、吸管、注射器，须装在加盖不漏的容器内，经高压灭菌后取出。,61, 实验室内未经消毒的污水，禁止直接排入公共排水系统，更不允许混入居民生活垃圾。,2019,-,意外事故的处理, 实验过程中，如污染物溅落到身体表面或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等，应立即停止实验工作，更换被污染的实验服，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒或酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。,62,2019,-,绝对禁止使用的事故处理方法, 任何可能造成污染面积扩大的去污方法，如用70%乙醇或甲酚皂液擦洗污染区。 直接用火焰对未经任何处理的污染地面、操作台、器械等进行烧灼处理。 使用消毒效果未经证实的消毒剂消毒。 使用低浓度的消毒剂和紫外灯进行短时间、长距离的照射。,63,2019,-,结核病职业暴露,卫生服务人员应接受免疫以预防其可能被所接触的生物因子感染。应按有关规定保存免疫记录。,64,2019,-,65,病例1参考答案,（1）患者可能感染结核分枝杆菌； 主要传播途径是通过呼吸道、消化道及受损的皮肤侵入易感机体； 抗酸染色阳性染成红色，细长微弯分枝状；R型菌落，米黄色颗粒，“菜花样” 取晨痰，深咳而得为宜，容器应消毒，停药12d；或留取12h或24h痰（容器加酸或碱（以液化标本，消除杂菌，保护分枝杆菌）；常用培养基有L-J（罗氏）、米氏、苏通氏、酸性液体等； （5）快速鉴定方法有：PCR技术测结核分枝杆菌DNA，用ELISA法测患者血清中结核分枝杆菌抗原、抗PPDIgG，高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸等。,2019,-,麻风病的病原菌 慢性传染病 主要表现为皮肤、粘膜和神经末梢的损害。晚期可侵犯深部组织和器官，形成肉芽肿。 世界各地均有报道 主要分布在亚、非和拉丁美洲,第二节 麻风分枝杆菌,2019,-,66,细长略弯曲 无芽胞，无荚膜，无鞭毛 抗酸染色阳性 典型的胞内寄生菌,形态与染色,2019,-,67,传染源，患者 传播途径，直接接触或由飞沫传播 潜伏期长，一般是6个月至5年 发病慢、病程长 主要表现为皮肤、粘膜和神经末梢的损害。晚期可侵犯深部组织和器官，形成肉芽肿。 麻风分为4种类型 瘤型 结核样型 界限类 未定类,致病性,2019,-,68,2019,-,69,早发现、早隔离、早治疗 目前多采用二三种药联合治疗 氨苯砜（dapsone，DDS）,防治原则,2019,-,70,一、牛分支杆菌 二、非结核分支杆菌,第三节 其他分枝杆菌,2019,-,71,72,DOTS即directly observed treatment +short course chemotherapy,为对非住院肺结核患者实行全面监督化学治疗,从而可保证患者规律用药,提高治愈率.,2019,-,73,C13 课堂检测题,1、结核杆菌的致病特点是（ ） A 产生外毒素和内毒素 B 产生侵袭性酶 C 菌体脂质在致病中起重要作用 D 结核菌素与脂质结合可诱发I型超敏反应 E 临床上以肾结核最常见,2.TB在罗氏培养基上形成典型菌落形态为（ ） A 光滑湿润的无色菌落 B 粗糙干燥的淡黄色菌落 C 蔓延生长的菌膜 D 具有透明溶血环的金黄色菌落 E 光滑湿润边缘不整齐灰绿色菌落,2019,-,3. 临床上取病人痰标本后，应（ ） A 立即温箱干燥后，送实验室 B 置于4生理盐水中保存 C 立即送实验室检测 D 置于增菌液中保存 E 室温过夜,4. 关于结核分枝杆菌的生物学特性正确的是（ 多项 ） A 抗酸染色阳性菌 B 专性厌氧菌 C 生长速度缓慢 D 不耐酸碱 E 专性需氧生长，营养要求高,2019,-,74,75,5.关于结核分枝杆菌的生物学特性错误的是（ ） A 抗酸染色阳性菌、革兰染色阳性菌 B 专性厌氧菌 C 营养要求高，生长速度缓慢 D 耐受一定浓度酸、碱 E 细胞内含脂类物质比例高,6. BCG的一种（ ） A、外膜蛋白 B、减毒活疫苗 C、灭活疫苗 D、脂多糖 E、基因工程疫苗,2019,-,76,7.脑脊液外观乳白色静置2h出现凝块见于（ ） A 脑脊髓梅毒 B 病毒性脑膜炎 C TB性脑膜炎 D 化脓性脑膜炎 E 绿脓杆菌所致脑膜炎,8化脓性脑膜炎与结核性脑膜炎的脑脊液最大区别是（ ） A 细胞数升高 B 蛋白质升高