细菌代谢产物的检测及鉴定.ppt

,细菌的分类及鉴定 同济医院检验科,细菌的生物化学试验,原理：由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别细菌的类别，这种试验称为细菌的生化反应试验,常用检查方法,碳水化合物代谢试验 氨基酸和蛋白质代谢试验 碳源利用试验 呼吸酶类试验 抑菌试验,碳水化合物代谢试验,糖（醇、苷）类发酵试验,原理 由于细菌含有发酵不同糖类的酶，故分解糖的能力不同，终末产物亦不一致。 应用 鉴定细菌最主要的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要 。,氧化一发酵试验(OF试验),原理 氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖 发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解 葡萄糖 产碱型：在有氧或无氧环境中都不能 分解葡萄糖,结果： 两支培养基均无变化为产碱型； 两支培养基均产酸为发酵型； 若不加石蜡的培养基产酸为氧化型。 应用：肠杆菌科细菌（发酵型） 非发酵菌（产碱型/氧化型） 葡萄球菌（发酵型） 微球菌（氧化型）,-半乳糖苷酶试验,原理：有的细菌可产生-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-D-半乳糖苷(ONPG)，而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可检出。,结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在2030min内显色。 应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。,七叶苷水解试验,原理： 七叶苷 七叶素 黑色化合物 培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。,细菌,枸橼酸铁,结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 应用：D群链球菌（+） 其它链球菌（-）,甲基红试验,原理： 葡萄糖 丙酮酸 混合酸（pH ) 醇酮醛（pH ) 红色反应（+） 橘黄色（-）,细菌,甲基红试剂,培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。 应用：大肠埃希菌（+） 产气肠杆菌（-） 肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属则为阴性。,V-P试验,原理： 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 红色化合物（+） 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基,细菌,OH-,O,胍基,结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35 4h后仍如故者即为阴性。 应用：常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。 产气肠杆菌（+） 大肠埃希菌（-）,蛋白质和氨基酸代谢试验,吲哚试验,原理 色氨酸 吲哚 玫瑰吲哚 （红色） 应用 肠道杆菌的鉴定。 大肠埃希菌（+） 沙门菌属（-）,对二甲基氨基苯甲醛,硫化氢试验,原理 含硫氨基酸 硫化氢 硫化铅/硫化亚铁 （黑色） 应用 肠杆菌科菌属间的鉴定。,细菌,醋酸铅/硫酸亚铁,尿素（脲）酶试验,原理： 无色 尿素 氨 红色 应用：肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定。,细菌,苯丙氨酸脱氨酶试验,原理 苯丙氨酸 苯丙酮酸 10%氯化铁 绿色化合物 应用：肠杆菌科的鉴定 变形杆菌属、摩根菌属、普罗威 登斯菌属（+）,氨基酸脱羧酶试验,原理：氨基酸 特异性脱羧酶 胺CO2 指示剂变色 应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如肺炎克雷伯菌赖氨酸为阳性，鸟氨酸为阴性。,明胶液化试验,原理：明胶 明胶酶 氨基酸 失去凝固力 应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如沙雷菌、普通变形杆菌、阴沟肠杆菌等。,碳源利用试验,枸橼酸盐利用试验,原理 枸橼酸盐 碳酸盐+氨（pH ) 溴麝香草酚蓝 绿色 深蓝色 应用：肠杆菌科细菌的鉴定 埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌 属（-）,呼吸酶类试验,细胞色素氧化酶试验,原理 盐酸二甲基对苯二铵 醌类化合物 （深紫色） 应用 奈瑟菌属、假单胞菌属（+） 肠杆菌科（-）,细菌,Cyt氧化酶,过氧化氢酶（触酶）试验,原理 某些细菌分泌过氧化氢酶，使过氧化氢生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。 应用 金黄色葡萄球菌、奈瑟菌属（+） 链球菌属（-）,（血浆）凝固酶试验,原理 金葡 血浆凝固酶 应用：致病性葡萄球菌的鉴定,游离,结合（凝聚因子）,协同因子,凝血