芳酸及其酯类药物分析-专.ppt

药物分析专论,药物结构,性质,分析方法,各论部分学习思路：,（鉴别试验方法、杂质检查内容、含量测定方法）,药物 1.鉴别试验 掌握典型试剂及反应原理与现象 2.杂质检查 掌握典型杂质及其来源和检查方法 3.含量测定 掌握药物及其制剂测定原理、主要条件,第六章 芳酸类药物的分析 The Analysis of Aromatic Acids,芳酸及其酯类药物分子结构的共性是,既具有苯环,又有羧基,或另有取代基.游离羧酸呈酸性,可以成盐或酯,而取代基往往决定各药物的特性. 分类: 1.水杨酸类 2.苯甲酸类 3.其他芳酸及其酯类药物,概 述,第一节 水杨酸类药物的分析,贝诺酯,（水杨酰水杨酸酯）,二、理化性质 （一）物理性质 （1）固体 具有一定的熔点 （2）溶解性 游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂。,溶解行为常可作为供试品溶液的配制或 含量测定时滴定介质选择的依据。,（三）化学性质,1. 本类药物的基本结构为邻羟基苯甲酸。由于羧基邻位的羟基取代，能与羧基形成分子内氢键，增强了羧基中氧氢键的极性，使其酸性增强。因此水杨酸的酸性比苯甲酸更强。当邻位羟基被酰化后酸性下降，如阿司匹林（乙酰水杨酸）的酸性较水杨酸弱，但仍较苯甲酸的酸性强。,2.与三氯化铁反应 本类药物分子结构中具有酚羟基,可与三氯化铁试液作用,生成紫堇色的配位化合物,可用于鉴别. 3.重氮化-偶合反应 本类药物分子具有芳伯氨基,可发生重氮化-偶合反应,生成猩红色的沉淀. 4.水解性 水杨酸的酯类,酯键可水解,利用水解产物的特殊性质进行鉴别和含量测定. 5.紫外特征吸收 含有苯环,有紫外吸收.,四 鉴别试验,（一）、FeCl3反应,具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物，在中性或弱酸性条件下，与FeCl3反应生成紫堇色配位化合物,直接：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯。 水杨酸 ChP（2005） 鉴别 （1）取本品的水溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。,间接：阿司匹林、贝诺酯,阿司匹林 ChP（2005） 鉴别 （1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。,(二) 水解反应,（三）、重氮化-偶合反应 对氨基水杨酸钠和贝诺酯的水解产物对氨基酚分子结构中均具有芳伯氨基结构，在盐酸酸性溶液中，与亚硝酸钠试液发生重氮化反应，生成重氮盐，与碱性萘酚偶合产生猩红色沉淀。,(四) 紫外吸收光谱法,贝诺酯(7.5mg/ml的无水乙醇溶液),其紫外吸收光谱的最大吸收波长为240nm； 在240nm波长处的吸收系数为730760.,(五) 红外吸收光谱法,水杨酸、阿司匹林、二氟尼柳、贝诺酯、对氨基水杨酸钠，其红外光图谱与对照图谱一致.,（六）TLC 二氟尼柳胶囊 （七）HPLC 中国药典（2005年版）鉴别阿司匹林肠溶胶囊与泡腾片的方法如下：在含量测定项下记录的色谱图中，供试溶液主峰的保留时间应与对照溶液主峰的保留时间一致。,五 、杂质检查,阿司匹林的杂质检查,1、 炽灼残渣 2、 重金属 3、 易炭化合物,合成工艺,4.溶液的澄清度检查 (检查碳酸钠试液中的不溶物),酚类(未反应完全的酚类及水杨酸精制时脱羧形成的酚类) 合成过程中的副产物(醋酸苯酯、水杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯）,来源:,5.水杨酸 来源:,生产过程中乙酰化不完全 贮藏过程中水解产生,原理：,阿司匹林,FeCL3,水杨酸,FeCL3,紫堇色的配位化合物,对照液同法操作,中国药典（2005年版） 检查方法：取阿司匹林0.1g，加乙醇溶解后，加冷水适量使成50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液1ml，摇匀；30秒如显色，与对照液比较不得更深（0.1）,适用：阿司匹林原料、片剂、肠溶片 而肠溶胶囊、泡腾片、栓剂采用HPLC法进行水杨酸的检查,、对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查 杂质来源 原料残存(间氨基酚)、脱羧产生(间氨基酚),氧化(二苯醌型, 3,5,3,5-四羟基联苯醌),【 】,【 】,2. 检查方法 ChP（2005） （双相滴定法） 原理:利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨基酚溶于乙醚的性质，使二者分离后，在乙醚中加水适量，用盐酸滴定，控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚限量。,方法：取本品，研细，称取3.0g，置50ml烧杯中，加入用熔融氯化钙脱水的乙醚25ml，用玻璃棒搅拌1分钟，注意将乙醚溶液滤入分液漏斗中，不溶物再用脱水的乙醚提取2次，每次25ml，乙醚液滤入同一分液漏斗中，加水10ml与甲基橙指示液1滴，振摇后，用盐酸滴定液（0.02mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗盐酸滴定液（0.02mol/L）不得超过0.30ml,双相滴定法(ChP2005),滴定前：间氨基酚,滴定中： 间氨基酚+盐酸,盐酸盐,滴定终点：过量HCl， 使指示剂变橙红色,水相,乙醚相,甲基橙指示剂，呈黄色 （pH3.14.4）红 黄,USP（29） 离子对HPLC法（内标法）,色谱条件 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶（C18，10mm），色谱柱为250mm4.6mm；流动相为磷酸二氢钠溶液（0.05mol/L）磷酸氢二钠溶液（0.05mol/L）甲醇（含氢氧化四丁基铵1.9g）（425：425：150）；检测波长为（254nm）；流速约为1.5ml/min 内标溶液为磺胺溶液（5mg/ml),讨论： 反相离子对色谱法是分离有机离子的有效方法，离子对试剂和其他添加剂的选用规则表明： 样品中含有COOH，SO3H基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的有机铵盐，以此增加样品阴离子在反相色谱中的保留值，选用的流动相一般都为甲醇水； 除加入离子对试剂外，一般还需加入磷酸盐或其他缓冲液，以控制流动相的酸度，从而使这些酸性官能团获得解离；,样品中含有NH2基团或其他阳离子时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐； 样品中同时含有COOH，SO3H ， NH2等不同性质的基团时，则规则或选用的离子对试剂或添加剂均为合理。 因此，在对氨基水杨酸钠中检查间氨基酚的高效液相色谱法中，鉴于对氨基水杨酸钠、间氨基酚以及内标磺胺的分子结构中具有COOH ，OH ，SO3H基团，按规则和选用离子对试剂氢氧化四丁基铵和磷酸盐缓冲液，调整了色谱保留行为，从而提高了样品保留值的重现性和色谱峰的对称性。,六、含量测定 (一)、阿司匹林含量测定酸碱滴定法 1 . 直接滴定法,原理：阿司匹林具有游离羧基，具有酸 性，以标准碱滴定液直接滴定。,阿司匹林 ChP（2005） 取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,（1）反应摩尔比为11 （2）讨论 溶剂的选择 指示剂的选择 中性乙醇的作用,含量%=,优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰(不断振摇下快速滴定） 酸性杂质干扰（如水杨酸及醋酸） 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定,2. 水解后剩余滴定法 原理:阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解,加入定量过量的氢氧化钠滴定液,加热使酯水解,剩余的碱用酸回滴.,操作:,样品,H2SO4滴定液(0.25mol/L),煮沸,10min,放冷,酚酞指示液,NaOH滴定液(0.5mol/L),1.需做空白试验校正. 目的：NaOH在加热时易吸收CO2, 用酸回滴定会消耗酸，影响结果 2.水杨酸干扰测定 3.计算公式:含量%=,讨论,3. 两步滴定法 阿司匹林片、阿司匹林肠溶片 片剂除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外, 制剂工艺又可能有水解产物如：水杨酸、醋酸的产生。 因此不能采用直接滴定法或水解后剩余滴定法,而采用先中和供试品共存的酸,然后再照“水解后剩余滴定法”测定. 如阿司匹林片的测定：,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,第一步 中和,第二步 水解后剩余滴定,水解：,剩余滴定： 2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O 反应摩尔比为0.51(硫酸:阿司匹林) 本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰,片剂含量测定结果的计算,剩余滴定法,（二）:阿司匹林栓剂含量测定HPLC,适用：,阿司匹林栓剂,因为栓剂基质不易分离,对含量 测定有干扰,中国药典2005版采用HPLC 测定其含量.,计算公式：,先求Cx,阿司匹林的标示量%=,稀释倍数:,稀释倍数=5050/2,稀释倍数=105050/（25）,(三)、亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠具有芳伯氨基,能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量的发生重氮化,生成重氮盐. (四)、紫外分光光度法 贝诺酯在240nm处有最大吸收,测定吸收度,计算含量.,第二节 苯甲酸类药物的分析 一、结构（代表药物）,羟苯乙酯,丙磺舒,泛影酸,二、理化性质 （一）、物理性质： 1、大多数是结晶性固体 2、溶解性： 游离芳酸类药物，几乎不溶于水，易溶于有机溶剂 芳酸碱金属盐易溶于水,（二）、化学性质 1、酸性：本类药物分子中具有COOH，具有酸性，可以与碱成盐。 2、三氯化铁反应：本类大多数药物可与三氯化铁作用，生成铁盐。 3、分解性：某些药物因含有特殊的结构，在一定的条件下可以发生分解，其分解产物可发生特殊的反应，可以用于鉴别和含量测定。 4、紫外吸收： 具有苯环，所以具有紫外吸收,（一）、 FeCl3反应 1、苯甲酸 苯甲酸的碱性或中性溶液与三氯化铁试液生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀。,三、鉴别,2、丙磺舒 丙磺舒的钠盐水溶液与三氯化铁试液作用，生成米黄色的沉淀。,（二）、 分解产物的反应 1、苯甲酸钠 苯甲酸钠可分解生成苯甲酸，苯甲酸具有升华性，可供鉴别。例如：苯甲酸钠置于燥试管中，加硫酸后，加热，不炭化，但析出苯甲酸，在试管内壁凝成白色升华物。 2、丙磺舒 丙磺舒为含硫药物，与氢氧化钠共热熔融，分解生成亚硫酸，经硝酸氧化后生成硫酸，显硫酸盐的反应。 丙磺舒高温加热时，能产生二氧化硫气体，具有SO2臭味。 3、泛影酸 泛影酸为有机碘化物，加热破坏后分解生成碘蒸气，可供鉴别。如将泛影酸置坩埚中，小火加热，即分解产生紫色的碘蒸气。,（三）、 其他方法 1、TLC 如：泛影酸的鉴别 2、UV 如：羟苯乙酯、氯贝丁酯、丙磺舒的鉴别 3.IR 如：苯甲酸、苯甲酸钠、羟苯乙酯、布美他尼、丙磺舒和泛影酸的鉴别,四、杂质检查 （一）、羟苯乙酯中的杂质检查 水杨酸 来源：制备过程中引入 原理：同阿司匹林中水杨酸的检查,（二）泛影酸的杂质检查,1.游离碘的检查（利用碘使淀粉变蓝的原理）,2.卤化物的检查（利用卤化物与硝酸银试液作用生成卤化银的原理）,3.碘化物的检查（利用碘化物在酸性条件下被过氧化氢氧化，生成游离碘的原理）,4.氨基化合物的检查（芳伯胺）,（三）布美他尼的杂质检查,芳伯胺的检查,五、含量测定 （一）、酸碱滴定法 1.直接酸碱滴定法,样品,中性乙醇,酚酞,NaOH滴定液(0.1mol/L),粉红色30s不褪,适用：苯甲酸、丙磺舒、布美他尼原料药的含量测定,2. 水解后剩余滴定法 原理:羟苯乙酯的酯结构在碱性溶液中水解,生成对羟苯甲酸钠和乙醇，剩余的碱用酸回滴.,空白试验,3. 双相滴定法 (芳酸碱金属盐 ),如苯甲酸钠 ChP(2005),溶剂：水乙醚,原理:苯甲酸钠溶于H2O 苯甲酸 不溶于H2O，溶于乙醚,滴定前：苯甲酸钠 甲基橙指示剂，呈黄色 （pH3.14.4）红 黄,滴定中： 苯甲酸钠+盐酸,苯甲酸,滴定终点：过量HCl， 使指示剂变橙红色,水相,乙醚相,取本品约1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25m1、乙醚50ml及甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液（0.5mo1/L）滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中,加乙醚20m1，继续用盐酸滴定液0.5mo1/L)滴定，随滴定随振摇，至水层显持续的橙红色。每1ml的盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于72.06mg的C7H5NaO2。,乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底 滴定中要强力振摇:随着滴定不断进行，将苯甲酸萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。 优点：消除了反应产物的干扰,（二）银量法 泛影酸 先进行有机破坏（在碱性条件下，用锌粉还原），可使碳碘键断裂，生成无机碘化物，采用直接银量法测定含量。,第三节 其它芳酸类药物的分析 一、结构（代表药物）,布洛芬,二、理化性质 1、物理性质 聚集状态：布洛芬是结晶性固体，氯贝丁酯是无色或黄色的澄清油状液体。 溶解性： 布洛芬、氯贝丁酯几乎不溶于水，易溶于有机溶剂,2、化学性质 1、异羟肟酸铁反应：本类药物为脂肪酸及其酯，其酯与盐酸羟胺及三氯化铁试液作用，可生成有色的异羟肟酸铁，可用于鉴别。,（一）、 异羟肟酸铁反应 1、氯贝丁酯 氯贝丁酯分子结构中具有酯键，在碱性溶液中可与盐酸羟胺作用生成异羟肟酸盐，在弱酸性条件下与三氯化铁试液作用生成紫色的异羟肟酸铁。,三、鉴别,2、布洛芬 布洛芬具有羧基，在氯化亚砜作用下，与乙醇反应，生成酯，再在碱性溶液中可与盐酸羟胺作用生成异羟肟酸盐，在弱酸性条件下与三氯化铁试液作用生成紫色的异羟肟酸铁。,（二）、 其他方法 1、UV,2、IR,四、含量测定 酸碱滴定法 1.直接酸碱滴定法 适用于：布洛芬原料药及其片剂的含量测定 2.双步酸碱滴定法 适用于：氯贝丁酯原料药及其胶囊的含量测定,鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是 A. 碘化钾 B. 碘化汞钾 C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁 E. 亚铁氰化钾,C,阿司匹林片剂可采用的测定方法为 A. 非水滴定法 B. 水解后剩余滴定法 C. 两步滴定法 D. 双相滴定法,C,测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方法是 A. 重量法 B. 酸碱滴定法 C. 高效液相色谱法 D. 络合滴定法 E. 高锰酸钾法,BC,苯甲酸钠的含量测定，中国药典（2005年版）采用双相滴定法，其所用的溶剂体系为 A. 水乙醇 B. 水冰醋酸 C. 水氯仿 D. 水乙醚 E. 水丙酮,D,采用直接酸碱滴定法测定阿司匹林的含量时，已知阿司匹林的分子量为180.2，所用氢氧化钠滴定溶液的浓度为0.1mol/L，请问1ml氢氧化钠滴定溶液相当于阿司匹林的量应是 A. 180.2mg B. 180.2g C. 18.02 mg D. 1.802mg E. 9.01mg,C,阿司匹林加碳酸钠试液加热后，再加稀硫酸酸化，此时产生的白色沉淀应是 A. 苯酚 B. 乙酰水杨酸 C. 水杨酸 D. 醋酸钠 E. 醋酸苯酯,C,水杨酸与三氯化铁试液生成紫堇色产物的反应，要求溶液的pH值是（） A. pH10.0 B. pH2.0 C. pH78 D. pH46 E. pH2.00.1,D,两步滴定法测定阿司匹林片或阿司匹林肠溶片时，第一步滴定反应的作用是（） A. 测定阿司匹林含量 B. 消除共存酸性物质的干扰 C. 使阿司匹林反应完全 D. 便于观测终点 E. 有利于第二步滴定,对氨基水杨酸钠中的特殊杂质是（） A. 水杨酸 B. 间氨基酚 C. 氨基酚 D. 苯酚 E. 苯胺,能用与FeC13试液反应产生现象鉴别的药物有（） A苯甲酸钠 B水杨酸 C对乙酰氨基酚 D氢化可的松 E丙酸睾酮,采用双相滴定法测定苯甲酸钠含量时，加入乙醚的目的是 A. 防止反应产物的干扰 B. 乙醚层在水上面，防止样品被氧化 C. 消除酸碱性杂质的干扰 D. 防止样品水解 E. 以上都不对,A,阿司匹林中含量最高的杂质为（） A. 乙酰水杨酸酐 B. 乙酰水杨酸水杨酸 C. 水杨酸 D. 水杨酰水杨酸 E. 以上都不对,区别水杨酸和苯甲酸钠，最常用的试液是（ ） A. 碘化钾 B. 碘化汞钾 C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁 E. 亚铁氰化钾,用直接滴定法测定阿司匹林含量（ ） A. 反应摩尔比为1：1 B. 在中性乙醇溶液中滴定 C. 用盐酸滴定液滴定 D. 以中性红为指示剂 E. 滴定时应在不断振摇下稍快进行,芳酸类药物的酸性强度与 有关。芳酸分子中苯环上如具有电负性大的取代基，能使苯环电子云密度降低，进而引起羧基中羟基氧原子上的电子云密度降低和使氧-氢键极性增加，使质子较易解离，故酸性 。反之， 。 具有 的芳酸类药物在中性或弱酸性条件下，与 反应，生成 色配位化合物。反应适宜的pH为 ，在强酸性溶液中配位化合物分解。,阿司匹林的特殊杂质检查主要- 检查。 对氨基水杨酸钠在潮湿的空气中，露置日光或遇热受潮时，也可生成 ，再被氧化成 ，色渐变深，其氨基容易被羟基取代而生成3，5，3，5-四羟基联苯醌，呈明显