Sema3F及其受体在子宫内膜异位症发生发展机制中的初步研究.doc

Sema3F及其受体在子宫内膜异位症发生发展机制中的初步研究 庄翡翠 广东省汕头市潮南区人民医院妇产科,广东汕头515141 摘要目的研究Sema3F及其受体在子宫内膜异位症发生、发展机制中的作用。方法选择于我院行腹腔镜治疗的20例腹膜子宫内膜异位症患者、20例深部浸润型子宫内膜异位症患者及20例卵巢巧克力囊肿患者作为实验组，另选择于我院行宫腹腔镜联合治疗的20例非子宫内膜异位症（如不孕或子宫肌瘤）患者作为对照组。采用原位PCR免疫组织化学实验分别对2组对象组织的Sema3F及其受体NRP2、PlexinA1的表达水平进行检测。结果实验组患者组织Sema3F蛋白阳性表达率明显低于对照组（P0.05）。同时实验组3亚组中，患者组织的Sema3F蛋白阳性表达率排列顺序为：卵巢巧克力囊肿浸润型内异症腹膜内异症。实验组患者组织NRP2、PlexinA1蛋白阳性表达率明显高于对照组（P0.05）。同时，实验组3亚组中，患者组织的NRP2、PlexinA1蛋白阳性表达率排列顺序为：卵巢巧克力囊肿浸润型内异症腹膜内异症。结论Sema3F作为的潜在的肿瘤抑制因子，其在子宫内膜异位症的发生、发展中可通过受体NRP2、PlexinA1抑制子宫内膜异位症的发生及病情发展。 关键词子宫内膜异位症；sema3f；nrp2；plexina1 R4A1672-5654（xx）05（a）-0103-02 临床上，子宫内膜异位症是导致慢性盆腔痛和不孕的重要病因之一，目前其发病机制虽尚未明确，但众多研究倾向于认为异位子宫内膜细胞的生物学行为（如细胞的生长、增殖、粘附、迁移等）与肿瘤细胞相似1。而轴突导向分子（Sema3F）及其受体（NRP2、PlexinA1）可影响肿瘤细胞的上述生物学行为，由此推断，Sema3F及其受体在子宫内膜异位症中也可能通过一系列信号转导通路影响异位内膜细胞的生物学行为，从而参与了内异症的发生发展2。本文以我院收治的子宫内膜异位症患者为研究对象，探讨Sema3F及其受体在子宫内膜异位症发生、发展机制中的作用，现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选择xx年1月xx年6月期间在我院行腹腔镜治疗的20例腹膜子宫内膜异位症患者、20例深部浸润型子宫内膜异位症患者及20例卵巢巧克力囊肿患者作为实验组，所有患者均为女性，年龄3265岁，平均年龄（46.55.5）岁。 另选择于我院行宫腹腔镜联合治疗的20例非子宫内膜异位症（如不孕或子宫肌瘤）的患者作为对照组，所有患者均为女性，年龄3368岁，平均年龄（47.24.3）岁。2组患者均经病理检查证实，均签署伦理学知情同意书。同时，2组患者在性别、年龄比较上差异均无统计学意义（P0.05），具有可比性。 1.2方法 1.2.1主要试剂和仪器Sema3F单抗（上海信然实业有限公司生产），Neuropilin2单抗（上海研晶生物科技有限公司生产），PlexinA1单抗（上海信然实业有限公司生产），PBC缓冲液（北京西门子医疗诊断设备有限公司生产），DAB显色剂（上海科兴商贸有限公司生产），苏木素（天津市赛瑞达生物工程有限公司生产）。 1.2.2原位PCR免疫组织化学实验首先，行实验组和对照组组织切片，大小约为5m，室温下切片脱蜡水化，PBS冲洗。微波进行抗原修复程序（高能量3min，低能量7min，浸润在0.01M的柠檬酸盐缓冲液中），用去离子水洗涤2次后用TBS（Trisbufferedsaline）/Tween漂洗5min。然后，滴加一抗，60min，PBS洗；滴加二抗，10min，PBS洗；滴加链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶溶液，10min，PBS洗。最后，滴加DAB显色液，5min，水洗；苏木素复染，3min，水洗；中性树胶封片。用已知上述3种抗原的阳性片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照3。 1.2.3原位PCR将组织细胞固定于预先用四氟乙烯包被的玻片上，用多聚甲醛处理，再灭活除去细胞内源性过氧化物酶；用60g/mL的蛋白酶K处理组织细胞片；在组织细胞片上，加PCR反应液，进行PCR循环扩增，标记的寡核苷酸探针进行原位杂交。待内源性DNA和RNA经过核酶充分消化后，行原位PCR扩增，扩增产物经原位核酸杂交，以杂交信号指示待测抗原。 1.2.4免疫组织化学检测结果判断由2个病理学专家分别对各个标本的染色结果进行盲法评定。每个标本随意选取观察和计数3张切片，每张切片随意选取5个视野，采用半定量方法，将阳性细胞百分数和细胞染色强度分为4级并分别记03分：无阳性细胞为0分，阳性细胞10%为1分，10%50%为2分，50%为3分；无显色为0分，浅黄色为1分，桔黄色为2分，棕黄色为3分。将两项计分相加后除以2得出最后评分，将0分定为阴性（），0.5或1分为弱阳性（+），1.5或2分为阳性（+），2.5或3分为强阳性（+）4。 1.2.5统计学方法应用SPSSforWindows11.0统计软件包。采用2检验分析不同组之间蛋白表达强度的关系；KruskalWallis和MannWhitney检验分析各组之间的基因表达水平；Spearman检验分析各个蛋白之间的关系。以P0.05视为差异有统计学差异。 2结果 2.1实验组和对照组患者组织的Sema3F蛋白表达 见表1。 从上表可以看出，实验组患者组织Sema3F蛋白阳性表达率为15%，对照组为90%，实验组患者组织Sema3F蛋白阳性表达率明显低于对照组（P0.05）。同时，实验组3亚组中，患者组织的Sema3F蛋白阳性表达率排列顺序为：卵巢巧克力囊肿浸润型内异症腹膜内异症。提示：随着子宫内异症病情的加重，Sema3F的阳性表达率逐渐降低。 2.2实验组和对照组患者组织的Sema3F受体NRP2蛋白表达 见表2。 从上表可以看出，实验组患者组织NRP2蛋白阳性表达率为55%，对照组为5%，实验组患者组织NRP2蛋白阳性表达率明显高于对照组（P0.05）。同时，实验组3亚组中，患者组织的NRP2蛋白阳性表达率排列顺序为：卵巢巧克力囊肿浸润型内异症腹膜内异症。提示：随着子宫内异症病情的加强，NRP2的阳性表达率逐渐升高。 2.3实验组和对照组患者组织的Sema3F受体PlexinA1蛋白表达 见表3。 从上表可以看出，实验组患者组织PlexinA1蛋白阳性表达率为53.33%，对照组为0，实验组患者组织PlexinA1蛋白阳性表达率明显高于对照组（P0.05）。同时，实验组3亚组中，患者组织的PlexinA1蛋白阳性表达率排列顺序为：卵巢巧克力囊肿浸润型内异症腹膜内异症。提示：随着子宫内异症病情的加重，Plexin阳性表达率逐渐升高。 3讨论 子宫内膜异位症主要指具有生长功能的子宫内膜组织生长在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位的症状，其发病率约为1%15%，3040岁的妇女为该病的高危人群5。Sema3F作为的潜在的肿瘤抑制因子，通过对Sema3F及其受体在子宫内膜异位症发生发展机制中的研究明确Sema3F及其受体与子宫内膜异位症的关系，可进一步揭示子宫内膜异位症的发生发展机制，为临床寻找新的治疗靶点提供重要依据6。本研究中，通过对实验组和对照组对象组织的Sema3F及其受体NRP2、PlexinA1的表达水平的检测，结果显示实验组患者组织Sema3F蛋白阳性表达率明显低于对照组，且随着子宫内异症病情的进展，Sema3F表达水平逐渐降低。杨景等3等指出Sema3F蛋白表达在肿瘤的发生、发展及预后中发挥重要的作用，通过调节瘤细胞及内皮细胞的增殖、凋亡、黏附、迁移来影响肿瘤的生长与脉管生成。王春红等4采用免疫组织化学检测34例异位症患者在位内膜、异位内膜(内异症组)及34例正常内膜(对照组)组织中Sema3F及其受蛋白的定位及表达。结果强调Sema3F低表达或表达缺失可能是子宫内异症发生的机制之一。与本研究结论相一致。 同时，实验组患者组织NRP2、PlexinA1蛋白阳性表达率明显高于对照组，且随着子宫内异症病情的进展，NRP2、PlexinA1表达水平逐渐升高。仝进毅等6指出NRP2、PlexinA1的表达通过增强淋巴管内皮细胞增殖、迁移、趋化和小管形成的能力可显著地促进子宫内异症生成。因此，Sema3F作为的潜在的肿瘤抑制因子，其在子宫内膜异位症的发生、发展中可通过受体NRP2、PlexinA1抑制子宫内膜异位症的发生及病情发展。 参考文献 1王冰冰,孔红霞,陈雁南,等.SEMA3A和NRP-1在宫颈癌发生发展中的作用J.中国妇幼保健，xx，9(5)：172-173. 2叶春福,臧传兰,魏艾,等.SEMA3B在胃癌中的表达和临床意义J.中国实验诊断学，xx，7(1):228-230. 3杨景,吴峰,卞修武,等.SEMA3F在肿瘤中的作用及其机制研究进展J.临床与实验病理学杂志，xx，12(12):335-337. 4王春红,魏静波,曲银娥,等.血管内皮生长因子及其受体在子宫内膜异位症中的表达和意义J.中国免疫学杂志，xx，5(6)：221-223. 5刘威,高文霞.子宫内膜异位症患者血清VEGF及其受体的变化研究