GB13087-1991饲料中异硫氰酸酯的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲料中异硫氮酸醋的测定方法G B 1 3 0 8 7 一 9 1Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f i s o t h i o c y a n a t e s i n f e e d s， 主 题内 容与 适用 范困 本标准规定了配合饲料和菜籽饼粕中异硫氰酸醋的测定方法。 本标准适用于配合饲料( 包括混合饲料) 和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸醋的测定 。 第一篇气相色谱法2 原理 配合饲料中存在的硫葡萄搪昔， 在芥子酶作用下生成相应的异硫氰酸酷， 用二氯甲 烷提取后再用气相色谱进行测定。3 试剂和溶液 除特殊规定外， 本标准所用试剂均为分析纯， 水为蒸馏水或相应纯度的水。3 . 1 二氯甲 烷或氯仿( G B 6 8 2 ) .3 . 2 丙酮( G B 6 8 6 ) ,3 . 3 p H 7 缓冲液: 市售或按下法配制。 量取3 5 . 3 m L O . 1 m o l / L 柠檬酸( C 6 H e 0 c H 2 0 ) 溶液， 置入2 0 0 m L定容瓶中， 用0 . 2 m o l / L磷酸氢二钠( N a 2 H P O , 1 2 H 2 0, G B 1 2 6 3 ) 稀释至刻度， 配制后检查p H值。3 . 4 无水硫酸钠。15 酶制剂: 将白芥( S i n a p i s a l b a L . ) 种子( 7 2 h内发芽率必须大于8 5 ， 保存期不超过两年) 粉碎后， 称取1 0 0 g ， 用3 0 0 m L丙酮( 3 . 2 ) 分1 0 次脱脂， 滤纸过滤， 真空干燥脱脂白芥子粉， 然后用4 0 0 m L水分两次提取脱脂粉中的芥子酶， 离心， 取上层混悬液体， 合并， 于合并混悬液中 加入4 0 0 m L丙酮( 3 . 2 ) 沉淀芥子酶， 弃去上清液， 用丙酮( 3 . 2 ) 洗沉淀5 次， 离心， 真空干燥下层沉淀物， 研磨成粉状， 装入密闭容器中， 低温保存备用， 此制剂应不含异硫氰酸醋。3 . 6 丁基异硫氰酸酷内 标溶液: 配制0 . 1 0 0 m g / m L丁基异硫氰酸酷C C H , ( C H 2 ) , N C S 二氯甲 烷或氯仿( 3 . 1 ) 溶液， 贮于4 C ， 如试样中异硫氰酸酷含量较低， 可将上述溶液稀释， 使内 标丁基异硫氰酸醋峰面积和试样中异硫氰酸酷峰面积相接近。4 仪器、 设备气相色谱仪: 具有氢焰检测器。氮气钢瓶: 其中 氮气纯度为9 9 . 9 9 0 0 0微量注射器: 5 p L ,分析天平: 感量。 . 0 0 0 1 g .41424.344国家技术监督局 1 9 9 1 一 0 7 门 6 批准1 9 9 2 一 0 4 一 0 1 实施免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 3 0 8 7 一 9 14 . 54 . 64 . 74 . 84 . 9实验室用样品粉碎机。振荡器( 往复， 2 0 0 次/ m i n ) .具塞锥形瓶， 2 5 m L e离心机。离心试管: 1 0 m l , .5 试样制备 采集具有代表性的配合饲料样品， 至少2 k g ， 四分法缩分至约2 5 0 g ， 磨碎， 过1 m m孔筛， 混匀， 装入密闭容器， 防止试样变质， 低温保存备用。6 测定步获6 . 1 试样的酶解 称取约2 . 2 g 试样于具塞锥形瓶( 4 - 7 ) 中， 精确到0 . 0 0 1 g ， 加入5 m L p H 7 缓冲液( 3 . 3 ) , 3 0 m g 酶制剂( 3 . 5 ) , 1 0 m L丁基异硫佩酸醋内标溶液( 3 . 6 ) ， 用振荡器( 4 - 6 ) 振荡2 h ， 将具塞锥形瓶( 4 - 7 ) 中内容物转入离心试管( 4 - 9 ) 中， 离心机( 4 - 8 ) 离心， 用滴管吸取少量离心试管( 4 - 9 ) 下层有机相溶液， 通过铺有少量无水硫酸钠( 3 - 4 ) 层和脱脂棉的漏斗过滤， 得澄清滤液备用。6 . 2 色谱条件6 . 2 - 1 色谱柱: 玻璃， 内 径3 m m， 长2 m ,6 . 2 . 2 固定液: 2 0 %F F A P ( 或其他效果相同的固定液) .6 . 2 . 3 载体: C h r o m o s o r b W, H P , 8 0 -1 0 0 目( 或其他效果相同的载体) 。6 . 2 . 4 柱温: l o o 0C 。6 . 2 . 5 进样口及检测器温度: 1 5 0 0C,6 . 2 . 6 载气( 氮气) 流速: 6 5 m L / m i n ,6 . 3 测定 用微量注射器( 4 . 3 ) 吸取1 一2 p L上述澄清滤液， 注入色谱仪， 测量各异硫氛酸酷峰面积。7 测定结果计算公式x =刀孟 e1 1 5 . 1 9 X S , X十 ( 4 / 5 X 1 2 7 .石 C ( 4 / 3 X 9 9 . 1 5 X S , ) +( 4 / 4 X 1 1 3 . 1 8 X S O2 1 X S , ) ) X 1 0 0 0 ， 月.二 二一S , X m( 1 - 1 5 S . +0 - 9 8 S 、 十 0 . 8 8 S , ) X 1 0 0 0(1): X 试样中异硫氰酸醋的含量， m g / k g ; m试样质量， 9 ;m , - I O m L丁基异硫氰酸醋内标溶液中丁基异硫氛酸醋的质量, m g ;S , 丁基异硫氛酸醋的峰面积;S , 丙烯基异硫氰酸醋的峰面积;S , 丁烯基异硫氰酸醋的峰面积;S , 戊烯基异硫氰酸酷的峰面积。，中不式7 . 2 结果表示 每个试样取2 个平行样进行测定， 以其算术平均值为结果。 结果表示到1 m g % k g .免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 3 0 8 7 一 9 1了 . 3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定， 所得结果之间的差值; 在异硫氰酸酷含量小于或等于1 0 0 m g / k g 时， 不超过平均值的1 5 0 0 在异硫氰酸酷含量大于1 0 0 m g / k g 时， 不超过平均值的1 0 0 0 0 第二篇 银t法8 原理 菜籽饼粕中存在的硫葡萄糖昔， 在芥子酶作用下可生成相应的异硫氰酸醋。 用水气蒸出后再用硝酸银一 氢氧化铁溶液吸收而生成相应的衍生硫脉。 过量的硝酸银在酸性条件下以硫酸铁按为指示剂用硫氰酸铁回滴， 再计算出异硫氰酸醋的含量。9 试荆和溶液 除特殊规定外， 本标准所用试剂均为分析纯， 水为蒸馏水或相应纯度的水。9 . 1 乙醉( G B 6 7 9 ) : 9 5 %( V / V) 。9 . 2 去泡剂: 正辛醉( C s H , 7 0 H ) ,9 . 3 6 m o l / L 硝酸溶液: 量取1 9 5 m L浓硝酸( G B 6 2 6 ) ， 加水稀释至5 0 0 m L o9 . 4 1 0 0 o 氢氧化按溶液: 取氨水( 3 0 0 o , G B 6 3 1 ) 1 0 0 m L ， 加2 0 0 m L水混匀。9 . 5 硫酸铁按溶液: 称取1 0 0 g 硫酸铁按( N H , F e ( S O , ) Z 1 2 H , O , G B 1 2 7 9 ) , 溶于5 0 0 m L 水中。9 . 6 0 . 1 m o l / L 硝酸银标准溶液: 准确称取在硫酸干燥器中干燥至恒重的基准硝酸银1 6 . 9 8 7 g ， 用水溶解后加水定容至1 0 0 0 m L , 置棕色瓶中避光保存。9 . 7 0 . 1 m o l / L 硫氰酸按标准贮备液: 称取7 . 6 g 硫氰酸按( N H , C N S , G B 6 6 0 ) , 溶于1 0 0 0 m l水中。按下法标定: 准确量取1 0 . 0 0 m L o . 1 m o l / L硝酸银标准溶液( 9 . 6 ) ， 加1 m L硫酸铁按( 9 - 5 ) 指示剂和2 . 5m L 6 m o l / L 硝酸( 9 . 3 ) ， 摇动下用0 . 1 m o l / L硫氰酸按标准贮备液滴定， 终点前摇动溶液至完全清亮后， 继续滴定至溶液所呈淡棕色保持3 0 : . 硫氰酸按标准贮备液的摩尔浓度按式( 2 ) 计算:N_N , V ,. . . . . . . . . 。 二。 。 。 . 。 . (2)式中: N 硫氰酸钱标准贮备液摩尔浓度， m o l / L ; N, 硝酸银标准溶液摩尔浓度， m o l / L ; V ， 一一 硝酸银标准溶液的用量， m L ; V 消耗硫氰酸钱标准贮备液的体积， m L ,9 . 8 0 . 0 1 m o t / L硫氰酸钱标准工作液: 临用前将。1 m o l / L硫氰酸按标准贮备液( 9 - 7 ) 用水稀释1 0倍， 摇匀9 . 9 p H 4 缓冲液: 称取4 2 g 柠檬酸( C s H , O , H O ) , 溶于1 L水中， 用浓氢氧化钠溶液调节p H至4 ,9 . 1 0 粗酶制剂: 取白芥( S i n a p i s a l b a L) 种子( 7 2 h内发芽率必须大于8 5 0 o ， 保存期不得超过两年) ，粉碎后用冷石油醚( 沸程4 0 -6 0 C ) 或正己 烷脱脂， 使脂肪含量不大于2 a , 然后再粉碎一次使全部通过。 . 2 8 m m筛， 放4 冰箱可使用6 周。仪器、 设备分析天平: 感量。 0 0 0 1 g ,恒温箱: 温度范围3 0 -6 ( ) C, 精度士VC;1010llD2免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 3 0 8 7 一 9 11 0 . 3 异硫氰酸酷蒸馏装置: 见下图， 其中a 为5 0 0 m L三角烧瓶( 具塞) , b为2 5 0 m 1圆底烧瓶( 在7 0m L处有一刻度) 。尺寸( m.旧斗I O .L接口1 4 / 2 3接口1 9 / 2 6接口2 9 1 3 2接口1 9 / 2 6接 口2 9 / 3 2团底烧庙2 5 0 mL ( 7 0 -L处有 刻度异硫氰酸醋蒸馏装置图1 0 . 4 冰水浴。1 0 . 5 沸水浴。1 0 . 6 三角烧瓶: 1 0 0 , 5 0 0 ( 具塞) m L ,1 0 . 7 容量瓶: 1 0 0 m L .1 0 . 8 移液管: 1 0 , 2 5 m L ,1 0 . 9 吸量管: 5 , 1 0 m L ,1 0 . 1 0 半自 动滴定管: 5 m L , JR小分度为。 . 0 2 m L ,1 0 . 1 1 滤纸。1 0 . 1 2 回流冷凝器， 可与瓶b 相配。免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 3 0 8 7 一 9 11 飞 试样制备 采集具有代表性的样品至少2 5 0 g ， 四分法缩分至5 0 g 。 若样品含脂率大于5 %时需要事先脱脂， 测定脂肪含量; 若含脂率小于5 %时， 则进一步磨碎使其8 0 % 能通过。 . 2 8 m m ( 4 0 目) 筛， 混匀， 装入密闭容器中， 置一1 5 保存备用。1 2 测定步驻1 2 门 称取试样2 . 2 g 于事先烘烤并精确称重至0 . 0 0 1 g 的烧杯中， 1 0 3 士2 C 烘烤至少8 h ， 在干燥器中冷却至室 温后 精确称 重至0 . 0 0 1 g ,1 2 . 2 试样的酶解 将上述烘烤过的试样全部转移至5 0 0 m L 三角烧瓶a 中， 加入1 0 0 m L p H 4 缓冲液( 9 . 9 ) ， 同时加入0 . 5 g 粗酶制剂( 9 . 1 0 ) 。 另 取1 个5 0 0 m L 三角 烧瓶( 1 0 . 6 ) 加入1 0 0 m L p H 4 缓冲液( 9 . 9 ) 和0 . 5 g 粗酶制剂( 9 . 1 0 ) ， 将三角烧瓶塞好塞子， 置4 0 C 恒温箱( 1 0 . 2 ) 中保温3 h ， 中间不时轻摇几次。1 2 . 3 蒸馏接收瓶准备 准确量取1 0 . 0 0 m L硝酸银标准溶液( 9 . 6 ) 至2 5 0 m L圆底烧瓶b中， 并加入2 . 5 m L氢氧化按溶液( 9 . 4 ) 。 将此瓶b 与蒸馏装置( 1 0 . 3 ) 相连并置于冰水浴( 1 0 . 4 ) 中， 冷凝器( 1 0 . 1 2 ) 末端必须没于硝酸银-氢氧化铁液中。1 2 . 4 蒸馏 将盛试样的三角 烧瓶a 冷至室温， 加入几粒玻璃珠和几滴去泡剂( 9 - 2 ) ， 然后与蒸馏装置( 1 0 - 3 ) 相连， 从上面漏斗中 加人1 0 m L 9 5 %乙 醉( 9 - 1 ) ， 另加3 m L乙 醇( 9 . 1 ) 于接收瓶上的安全管中。 缓慢加热蒸馏， 至馏出液达到接收瓶b 7 0 m L刻度处。1 2 . 5 试样测定 取下接收瓶b ， 将安全管中的乙醇( 9 - 1 ) 倒入此瓶中， 将它与回流冷凝器( 1 0 . 1 2 ) 连接， 于沸水中加热瓶中内 容物3 0 m i n , 然后取下冷却至室温。 将内 容物定量地转至1 0 0 m L 容量瓶( 1 0 . 7 ) 中， 用水洗接收瓶6 2 -3 次， 用水稀释至刻度， 摇匀后过滤于1 0 0 m L三角烧瓶( 1 0 . 6 ) 中， 用移液管( 1 0 . 8 ) 取2 5 m L滤液于另一1 0 0 m L三角烧瓶( 1 0 . 6 ) 中， 加1 m L 6 m o i / L硝酸( 9 . 3 ) 和0 . 5 m L硫酸铁按指示剂( 9 . 5 ) ， 用0 . 0 1m o l / L硫氰酸按标准工作液( 9 . 8 ) 滴定过量的硝酸银， 直到稳定的淡红色出现为终点。1 2 . 6 空白测定 按同样测定步骤操作， 但不加试样， 得到空白 测定值。1 3 测定结果1 3 . 1 计算公式一X =4 X ( V , 一 V z )XcX 5 6 . 5 9 力2c ( V , - V i ) X 2 2 6 . 3 6