微生物实验技能总结

1 / 18 微生物实验技能总结 微生物实验总结 微生物在地球上存在了 30 多亿年，人类在数百万年前出现之后就一直和微生物发生着千丝万缕的联系。发面、果酒和啤酒酿造、牛奶和奶制品的发酵等都是那些看不见的小生命做出的贡献。微生物存在于我们生活中的每一个角落，通过微生物实验我们可以更 加的了解微生物的 “ 习性 ” 就如同养的宠物一样，什么样的食物会发育更好，什么样的天气会心情好，什么样的玩具会有益等等。培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对 PH 值的要求一般不同。同过这些实验便能一一考证。 实验是培养学生的动手能力、观察能力、思维能力、表达能力、合作能力、创新能力等的最佳途径 。还要求实验技术人员必须具备相应的素质，实验操作人员必须 具备较扎实的专业基础、熟练的实验技能及高度的责任心，在工作中要善于总结，同时还要和理论课老师积极沟通，这样才能够真正2 / 18 的学好微生物实验这门课程。在每一次实验中不仅仅要专心认真的做实验，还要认真的写实验报告，并从实验中总结不足。再比如在调试显微镜的时候由低倍向高倍慢慢调试，在使用高倍时更应该小心调试细准焦螺旋，以免压坏载玻片，在使用油镜后要将油镜拭擦干净，保证显微镜的清洁，这些细节是需要注意的。 以下就我们做的实验错误做列举： 进行菌种接种的时候，选择合适的方式并，注意不要把平板弄破，等到平板凝固后才可以进行接种。接种时也要注意在无菌条件下接种。经过培养后，再观察最后得出结论。在酸奶中菌落测定时，封口不及时有外界的细菌污染。药敏实验中因为试验中放置牛津杯时也将培养基戳破，导致实验观察受到影响，并且在接种时因为乱放培养基将未接种和已接 种的培养基混淆导致试验中 3 个培养基并没有实验结果，实验失败。 我们的自主设计实验是探究渗透压对微生物生长的影响，原理是将细菌置于抵渗液中，菌体因吸收水分膨胀甚至破裂；如果将菌体置于高渗液中，则菌体内的水分就会渗出，结果发生质壁分离现象。不同的细菌对渗透压的抵抗力不同。但3 / 18 无论哪种细菌对渗透压的抵抗力是有一定限度的，超过一定限度则使菌体生长受到抑制只有在等渗溶液中，微生物才能正常生长、繁殖。实现这一 理论我们需要制作 200ml 的牛肉膏蛋白胨培养基，将其调 PH 至 ,后平均分成四份各 50ml，分别加入 0g、 1g、 5g 的 NaCl 固体，配置成 NaCl 浓度分别为0%、 2%、 5%、 10%的 4 种不同浓度的牛肉膏蛋白胨培养基 .从培养基中吸取 10ml 加入试管中，不同浓度的培养基各取三支试管。在此操作时因实验思考不严谨是采取分别称量配置了 3 份不同浓度的溶液，而正确的做法应该是配一份未加入NaCl 的培养基，再份为 3 份，加入不同克数的 NaCl，这样一来可以避免由于营养素的计量不同导致的误差。虽后来的实验结果并未受到影响，但思考 不严谨是值得反思的。 通过以上的错误我们明白了做好实验的具体要求，实验前做好预习，并思考实验原理。实验中正确选择实验方法与实验器材，学会控制实验条件。 知道如何实验、判断结果的可靠程度。 理解和掌握有关课程内容和重要的物理概念，以形成物理思想，培养解决物理问题的能力。 通过实验培养掌握基本物理量的测量方法，以培养实验技能。最后就是最重要的一点，培养自己严谨的实验态度、科学的实验方法及良好的实验习 惯。 4 / 18 微生物实验总结 姓名 :赵叶锋 班级：食品科学 113 学号： 2016013522 大三的第二学期块结束了，这个学 期操作了四个微生物实验，以及一个自主设计性实验。通过前阶段对四个实验的操作和认知的基础上，展开第五个实验的自主设计。实验分别是菌落总数测定，霉菌和酵母的检查和计数，乳酸菌的检验，微生物药敏试验以及探讨环境因素对微生物生长的影响。 这学期的微生物实验是在上学期微生物实验的基础上的累积和扩展延伸：以培养基的制备与灭菌，玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌，微生物接种技术和细菌的革兰氏染色为技术基础进行的，以加 强学生基础理论知识和基本技能的培养为目的。 下面我来谈谈我在实验中的心得体会。 第一个实验是菌落总数测定。让我重新认识了一下这个名词：菌落形成单位，我现在的理解就是： 1ml 或者 1g 待测样品中菌落的个数，一定要注意的是单位是 CFU/ml 或 CFU/g。5 / 18 还有就是要掌握好对高压蒸汽灭菌锅的操 作。实验之前要充分做好预习工作，以便实验的进行。由于是测定微生物实验，就要尤其小心其他杂菌的混入影响实验结果。因此要做好实验仪器和各种试剂的灭菌，有培养皿，试管，移液枪头，按要求配置好的琼脂培养基和生理盐水，按各自要求用纱布和报纸包扎好，送入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。玻璃仪器在包扎前要进行清洗，并烘干，以免水分沾湿报纸。灭完菌后取出物品进入超净工作台，超近工作台的紫外灯在进入 20 分钟前开启，并在进入时关闭，以免影响人体。要对台面进行消毒处理，用酒精擦拭。可以在等待琼脂培养基冷却到 50摄氏度左右前对待测样品进行 10倍系列稀释至需要的浓度。要注意的是一定要标记好浓度或者按顺序排列在试管架上以免弄混，同一个试管里吸取样品才能用同一个枪头进行移液。再进行平板接种。待琼脂培养基冷却好后，用右手打开纱布并将锥形瓶拿住，将瓶口靠近酒精灯再进行灭菌，左手拿培养皿用大拇指和食指稍微打开培养皿盖，将琼脂培养基倒入培养皿中心内，不用倒很多，使琼脂培养基没过培养皿表面即可。培养皿一定是平拿在手上的，倒好后轻轻盖上培养皿盖，缓慢地平方在超净工作台台面边缘处，再推至中间。再用移液枪取 1ml 样品快速打入培养皿中央，盖上培养皿盖，然后用手轻轻 摇晃，千外不要太大力。然后贴上标签记号，静置。如此依次操作下去。静置一段时间待培养基凝固后倒6 / 18 置放入恒温培养箱培养一段时间再取出进行观察计数。 我们组的实验结果不甚理想，培养皿中的微生物都是连成一片的，或者是培养皿壁上也都长着，主要是由于待测样品打入培养皿后，摇晃不均匀或者太大力了，以至于菌液没分散开来或是跑到培养皿壁上去了。 第五个实验是自主设计实验环境因素对微生物生长的影响。选取 3 个环境因素物理、化学和生物因素均可进行设计。根据前四个实验的基础，通过小组探讨和交流设计出实验方案。并加以验证。通过自主设计实验可以结合小组的智慧，加强团队协作精神和创新思维，通过实验可以验证理论，增加感性认识，培养独立工作能力和思考能力，并使具有过硬的专业技术水平。 通过这次的实验，我明白了任 何事情丢不是一蹴而就的，而是一个慢慢积累的过程。虽然实验结果不是很理想，但是我参与了过程，通过小组讨论我们也分析了失败的原因，找到了解决的方法，避免了下一次失误。并且从中理解了团队讨论和合作的重要性。以上即是我的全部感想。 微生物实验总结 7 / 18 本学期的微生物实验包括七个 基础实验和一个综合性实验。在基础实验中，我学习掌握了培养基的配制、微生物的分离与纯化技术、细菌的革兰氏染色、不同菌种的形态观察、微生物大小数量的检测、细菌的生理生化反应试验和氧气影响微生物生长的试验等。综合性实验选择了糯米甜酒的酿制，它很好地考察了我在基础实验中学到的知识的掌握程度。下面结合几个我印象较深的实验说说我的心得体会。 我遇到的第一个微生物实验是细菌的革兰氏染色。在做实验之前，负责实验 课的老师向我们介绍了实验的基本规范，比如要提前预习、进实验室要穿实验服、爱护仪器等，重点强调做实验勤思考、勤动手。革兰氏染色法大致思路是先将细菌标本用结晶紫染色，再加媒染剂碘液，使它和结晶紫在菌体细胞中形成较大的紫碘复合物，而后用酒精脱色。最后用番红复染。假使细菌细胞不被脱色而保留初染紫色，称为革兰氏阳性菌；若被脱色，而染上复染的红色，则称为革兰氏阴性菌。本实验所用的材料是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。具体的操作步骤先取一片干净的载玻片，用无菌操作方法挑一环菌，在载玻片上做一薄而均匀的菌膜；于空气中自然干燥；加 热法固定细菌，防止菌体烧焦变形，准备染色；用结晶紫染色 1 分钟，加碘液 1 分钟，用乙醇脱色约 20 秒，最8 / 18 后番红复染 1 分钟：置于显微镜下观察，革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。实验过程中，涂片要均匀 ,不能太厚；脱色时间很重要，过长则脱色过度，会使阳性菌被染成假阴性菌，过短则脱色不够，会使阴性菌被染成假阳性菌。我在观察时发现多数被染为淡红色，很少是蓝紫色的。猜想乙醇脱色环节处理不到位，阳性菌被染成假阴性菌。经过重复实验，终于得到较为理想的实验结果。另一个实验是微生物的分离与纯化及技术。这是一个把成群的菌 体分离并得到单菌体的技术。整个实验分两部分，其一是适合菌体生长的培养基平板制作，其二是微生物的接种于培养。制作培养基平板之前，要配制一定量的培养基，注意称量准确，因为是制作固体平板，所以要加入 % 2%的琼脂，然后对培养基和空平板进行灭菌。待培养基稍冷却开始倒平板，等待培养基冷却即制成固体平板。土壤菌悬液需要进行101106 倍，然后在酒精灯火焰附近取 105、 106 倍稀释液各分别接入不同培养基平板，涂布均匀。涂布完后，把平板倒置在 30 度下培养，一定时间后，观察生长菌落。分离纯化操作全过程要有无菌意识划线时，接 种环要圆滑，避免划破培养基。 不过最有趣的实验就是糯米甜酒的酿制这一综合性实验。它的原理是淀粉在米根霉等微生物的糖化酶作用下分解成葡9 / 18 萄糖，再被酵母菌的发酵转化为乙醇，在这两类微生物共同作用下就产生了米酒。糯米甜酒的配置步骤如下取一定量的糯米，用水洗净后，加水量为米水比 1： 1 加热煮熟成饭，即为甜酒培养基； 糯米冷却至 350C 以下，加入适量酒曲并喷一些清水拌匀，然后装入干净的容器中，装饭量为容器 1/32/3，中央挖洞，饭面上再撒一些酒曲，扎好口袋置 2530 下培养发酵；发酵2d 开始渗出清液， 3d4d 后渗出液越来越多，将洞填平继续发酵；培养发酵至 7d 取出，汁液即为甜酒原液。之后我们利用甜酒原液分离纯化其中的酵母和根霉等微生物，经过多天的培养，我们成功获得酵母菌，但根霉菌生长不理想，可能是供其生长的培养受污染或组分浓度改变抑制其生长。 实验是培养我们学生动手能力、观察能力、思维能力、合作能力等的最好途径， 它要求我们必须具备相应的素质、扎实的专业知识、高度的责任心，同时还要与老师积极沟通。在每一次实验中，不仅要提 前预习，认真做实验，还要写好实验报告和做好总结。通过微生物实验，我们对微生物有了更加深入地认识，并且培养了我们的实验技能，特别是严谨的实验态度和良好的实10 / 18 验习惯。 微生物实训专业技能训练总结 本次实验主要是训练了我们对生物实验的操作进一步的掌握。本次实训我们总共做了 6 次实验包括：微生物大小的测定，水中细菌总数的测定，食品接触面微生的实验，发酵乳实验，酒精发酵。 通过本次实验验我进一步掌握了自己以前不熟悉的实验操作以及对细节的注重性以及实验操作过程中的注意事项。下面就以上几方面来写一下通过该次实训的的心得体会。 首先在实验之前要做好充分的准备，认真 听老师实验前的讲解，因为该过程中有许多操作技能以及注意事项。通过对微生物大小的测定我认识到显微镜使用的重要性，并不是说你会使用了就好了，而是要准确快速的使用。这就需要我们反复使用，在使用过程中掌 握技巧。比如观看载玻片时要找到所要观察的微生物时就要熟悉熟悉操作步骤以及调焦等技能。如果我没有熟悉这些技巧那就会导致观察所需的时间比别的同学多甚至有可能找不到所要观察的目标。该次实验不但让我学会可镜台侧微11 / 18 尺的校正更重要的是让更进一步的掌握了显微镜的使用，已经能够快速准确的找到所要观察的目标。对于水中细菌总数的测定 实训，我认识到微生物检测的重要性，它与我们的生活密切相关，我们都知道水是生命之源，人们的生活环境离不开水，水质的好坏对人们的生活起重要作用而判断微生物在水中的数量，种类是必不可少的。因此对该次实验要持着严谨认真的态度。假如因为自己的不谨慎认真导致检测错误有可能会让一些治病细菌超标从而危害到人类的健康甚至生命安全。固然通过本次实验我掌握了水中微生物菌群的测定，更重要的是它让我认识到生物技能操作的重要性，在实验过程中要做到严谨谨慎。首先在实验之前要确保所用的器具消毒灭菌。在操作过程中要避免杂菌的污染，假如被污染了就会导致测量数据不正确从而导致实验失败。通过第三次实验食品微生物的实验的学习我认识到了微生物实验与我们的生活密切相关。对该次实验我不仅了解到了什么是食品接触面微生物实验，掌握了食品接触面微生物的检验方法。本次实验堆涂抹法要有更高的要求，需要正确在实际操作过程中掌握该技能还有救市平板暴露法也就是食品生产空气中微生物检测的方法。在放置平板的时候要注意一些问题如：平板的放置位置以及取样的时候要避开一些空气流通的入口以及在空气中暴露的时间要在 5 分钟左右。这些实验细节决定了实验的成 12 / 18 败。让我明白了操作过程中的细节不容忽视。 在土壤中微生物的分离培养及鉴定实训中我学习了平板分离技术的基本原 理和方法，并掌握了其基本技能。了解到了从混杂的微生物群体获得所需要的一种或某一类微生物的过程称为微生物的分离与纯化。对于该实验在实际操作过程中对综合技能的要求较高。首先要准确的掌握稀释菌液的方法以及倒平板还有涂布等操作。涂布要求均匀，这样培养后菌落在整个平板表面才能分布均匀。平板划线要求快速，接种环在平板上迅速划动。整个实验要获得成功的话不仅要求我们掌握有关操作技能还需要在实验过成中耐心，细心，操作过程要井井有条。实训 5 是发酵乳实验：通过该实验我掌握了发酵的原理及操作方法还就是进一步掌握了菌种的制备，灭菌， 接种等操作。本次实验还让我知道微生物在食品工业上的应用。因此对实验操作过程对于卫生的的要求更高，要获得最佳乳酸，要严格控制操作各阶段所需要的温度尤其是发酵温度，还有在食品工业上对实验更需要确保所用的器具要清洁，使用原料要优良，保持制作环境清洁。因此要求我们在平时操作过程中就要养成良好的习惯。如在操作台里操作前要用酒精擦手，操作过程中不要中途把手拿出来。最后一个实训是酒精的发酵，本次实验学习了玉米粉和13 / 18 固定化酵母菌发酵产酒精。通过实验掌握了酒精的生产过程和发强工艺并熟悉了操作方法。要使酒精发酵成功选择优良的玉米 和采用符合生产要求的酵母菌中极为重要；制作固化酵母时一定要使酵母沉淀物与生理盐水混合均匀，。严格控制实验阶段所要求的温度以及 PH且实验过程的器具要清洁。 在这次实训期间自身的能力有了全面的提高。不仅对理论知识有了进一步的了解更重要的事在实际操作过程中自己的动手操作能力得到了显著的提高。同时也了解到了微生物实验与我们的生活密切相关。又是实验还会涉及到人们的安全性问题，这更要求我们在操作过程要持着严 谨认真准确的态度来对待 .。 通过本次实验 食品卫生综合检验试验总结 食品质量 091 金秀建 2016016521 为期五天的食品卫生综合检测实 验已经告一段落了，在这一周的微生物实验主要包括牛奶中大肠菌群的计数、鸡蛋中沙门氏菌的检验和牛奶中金黄色葡萄球菌的检验三个实验，经过三个综合实验的课程，能让我更能理解试验时要掌握的细节，也要保持头脑的时刻清醒。同时让我对这三种微生物有14 / 18 了更进一步的认识，同时让我也对实验也更加熟悉了。 首先我们做的是大肠菌群的计数，它是采用 MPN 的计数来测定的。大肠菌群的特性为：在 37 ， 24 小时内能发酵乳糖，产酸、 产气，好氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。其检测原理为细菌在样品内的分布是随机的，所以检测细菌时，可按概率理论计算菌数。大肠菌群 MPN 计数的检验程序为样品的稀释、初发酵试验、复发酵试验和最后的大肠菌群最可能数 (MPN)的报告。那么在第一天的上午，老师基本给我们讲了实验的原理和步骤，以及一些需要注意的地方，我们便开始计算自己需要配制的实验试剂的量，并且称取试剂的量和清洗所要用的实验器皿，首先配置的是生理盐水和 LST 肉汤，并且把生 理盐水和LST 肉汤分装到试管内，盖好盖子包扎好进行灭菌，灭完菌也就到了吃饭时间，等下午来接种培养了。 牛奶样品与生理盐水以 1:9 的比例进行混合，摇匀后做 10倍系列的稀释，做了 3 个稀释度。随后将三个稀释度的样品匀液以每个稀释度 3 支试管接种到内装小导管的含 LST 肉汤的试管中，最后放入恒温培养箱中培养 24h。在经过 24h 的培养后，所有的试管内均产生气体，而后我们要将培养后的15 / 18 有菌落的 LST肉汤接种到 BGLB肉汤试管中进行培养 24-48h，观察后发现所有的 BGLB 管都产气，颜色也有原来的绿色变成暗黄色，证明也产生了酸，所以记为所有产气管为大肠菌群阳性管。最后查 MPN表可得出每毫升样品中大肠菌群的 MPN为大于等于 1100ml/MPN。 我们小组在做大肠菌群测定还是很顺利的，中途没有出现什么错误，实验很顺利，小组成员的配合和分工也都很好。 第二个实验是鸡蛋中的沙门氏菌的检测，他的特性是：沙门氏菌需氧或兼性 厌氧， 10-42 都可生长，最适温度为 37 ，大部分可发酵葡萄糖，产酸产气，是革兰氏阴性的无芽孢杆菌。在营养琼脂平板上生长产生光滑，湿润，半透明，边缘整齐的菌落。在血平 板上产生透明溶血环，形成大小中等的灰白色菌落。实验过程可分为前增菌、选择性增菌、选择性平板分离、生物化学筛选四个阶段。 实验首先配制 BPW 溶液，进行分装和高压灭菌，在无菌条件下，移取 5ml 鸡蛋液样品于盛有 45mlBPW 的组织培养瓶中，混匀，放置于 361 的恒温培养箱中培养 24h2h ，观16 / 18 察生长现象。接下来的增菌阶段，需要配制 TTB 增菌液和 SC增菌液，移取 1ml 的前增菌液接种到 10mlTTB 增 菌液内，在恒温培养箱内培养 18h 24h， SC 增菌液过程与 TTB 一样。接下来需要制备 BS 平板和 HE 平板，等平板凝固后便可以开始接种了，是采用平板分多区划线的方法，然后放在 37 度温箱培养 1824h。最后要进行生化实验，要先配制三糖铁琼脂，从培养皿的平板上挑取可疑菌落，接种到三糖铁琼脂，先与底层穿刺，再在斜面划线。同时把菌落接种到各种生化试剂里，封口后一起放入恒温培养箱培养 18h。取出培养皿和生化小试管观察结果，记录。 第三个实验是金黄色葡萄球菌