赖氨酸盐酸盐测定.pdf

Feb. 2017 CHINA FOOD SAFETY 67 分析与检测 目前，赖氨酸的国家检测标准为 N Y 3 9 - 1 9 8 7和 G B 1 9 0 3 . 1 - 2 0 1 5 ， 所 采用的方法是价格昂贵的非水滴定法， 笔者探索出两种普通滴定的方法 凯氏定氮法和甲醛加入滴定方法，与 两种标准方法相比，该方法具有操作 简单、无腐蚀、成本低廉的特点。 赖氨酸是人体及动物必需氨基酸 之一，无法在体内合成。目前，赖氨 酸的国家检测标准为 N Y 3 9 - 1 9 8 7 和 G B 1 9 0 3 . 1 - 2 0 1 5 ，所采用的方法是价格昂 贵的非水滴定法。此方法是通过采用强 烈腐蚀性质冰乙酸为介质、高氯酸作标 准滴定液、进口试剂 -萘酚苯基甲醇 作为指示剂，终点颜色变化不明显，影 响观察与终点判定， 从而影响检测结果。 笔者在检测过程中曾经出现 1 0 % 3 0 % 的偏差。因此，应选用一种既经济实惠 又安全准确的新方法。笔者根据长期实 践，利用它本身含有氮元素的特点， 探索出用凯氏定氮法和加入甲醛滴定 的方法来检测赖氨酸。 原理 凯氏定氮法 L -赖 氨 酸 盐 酸 盐 分 子 式 是 C 6H1 4N2O2H C l ，它是一种非常容易分 解有机物，在高温的浓硫酸溶液中， 易生成 ( N H 4)2S O4，然后用已经知道浓度 的盐酸标准溶液滴定。 甲醛加入滴定法 赖氨酸盐酸盐类似氨基酸的酸碱 两种性质，将其溶解定容，用氢氧化 钠滴定到中性之后加入定量甲醛，用 氢氧化钠标准溶液滴定就可以测定赖 氨酸盐酸盐的含量。 硫酸铜催化定氮法 检测步骤 准确称取试样1 g（精确到0 . 0 0 0 2 g ) ， 放入2 0 0 m L 烧杯中， 加水7 5 m L ， 搅匀。 置于电炉上加热煮沸 3 0 m i n ，期间应 不断搅拌，并补加热水以保持水溶液 体积不少于 7 5 m L 。将煮过的试样溶液 稍冷，慢慢滴加 2 m L 氢氧化钠溶液， 边加边缓慢搅拌， 使试样溶液呈碱性， 然后慢慢滴加 5 m L 硫酸铜溶液，边加 边缓慢搅拌。重复上述操作 3 次，每 次加入氢氧化钠溶液 6 m L ，硫酸铜溶 液 5 m L 。静置 2 h 以上或过夜。 吸取滤液 2 5 m L 在 2 5 0 m L 凯氏长 颈烧瓶，放入四粒玻璃珠，再分别加 入分析纯的硫酸钾 5 . 0 g 和分析纯的硫 酸铜 0 . 5 g 混匀，再加入 1 8 m L 分析 纯的硫酸在 2 5 0 m L 凯氏长颈烧瓶中， 混匀后放入通风橱，用可调电炉小心 加热。等凯氏定氮瓶物体由黑色变成 蓝色澄清液体后，加大火力继续消化 2 h 左右，大约 0 . 5 1 h 后冷却至常 温，在 2 0 0 m L 容量瓶中加上一个小漏 斗，用玻棒慢慢将澄清液体转移到容 量瓶中，然后用洗瓶加入少量蒸馏水 分 5 6 次小心慢慢转移至 2 0 0 m L 容 量瓶中 , 冷却 0 . 5 1 h ，定容至刻度， 混匀。吸取 2 0 m L 容量瓶液体从上面 的小玻璃杯进入凯氏定氮蒸馏仪之中， 加入 1 8 m L 4 0 % 氢氧化钠溶液，再用 1 5 m L 蒸馏水分两次清洗小玻璃杯， 用少量的蒸馏水密封进样口，打开水 龙头让冷凝水冷却冷凝管，用电炉加 热蒸馏，在蛇形冷凝管凝结成液体用 装有 2 % 的硼酸吸收液的 1 5 0 m L 烧杯 溶解吸收 （如果冷凝管管口长度不够， 可以用乳胶管代替，直到管口能够进 入烧杯吸收液体下面为止），待烧杯 之内液体变成蓝色立即准确计时，然 后蒸馏 6 m i n 后使冷却管尖端再继续 蒸馏 0 . 5 m i n ，并用蒸馏水清洗冷凝 管下端口。在玻璃棒搅拌的同时，用 0 . 1 m o l / L 的盐酸标准溶液进行用滴定， 待吸收液变成紫红色后为终点，记录 其消耗体积记录其体积为 V 2。 赖氨酸盐酸盐结果计算 10 1 ()0.014 6.52 100 20 200 VVC X m = 公式中，X 1样品中赖氨酸盐酸盐 的含量，% ；0 . 0 1 4 氮的摩尔质量； V 1样品吸收液消耗盐酸标液体积， m L ；V 0样品空白消耗盐酸标液体积， m L ；2 0 0 试样消化冷却后容量瓶定容 体积， m L ；2 0 从容量瓶吸收液体体积， m L ；m 样品质量，g ；6 . 5 2 氮换算 成赖氨酸盐酸盐的系数。 甲醛加入滴定法 检测步骤 称取已粉碎的样品 0 . 5 1 g （精 确至 0 . 0 0 0 2 g ）放在 2 5 0 m L 烧杯中， 加水 1 0 0 m L ，用玻棒搅拌 2 5 m i n 后 转移至 2 0 0 m L 容量瓶中，定容至刻度， 过滤烧杯。吸取滤液 2 5 m L ，加入磁 力搅拌棍（如果没有磁力搅拌棍或者 损坏，可以用已经用完的大号签字笔 塑料管，里面包裹一截铁丝，然后用 打火机把两个端头烧焦密封，用蒸馏 水洗净），用 0 . 0 5 m o l / L 氢氧化钠标 准溶液滴定，在磁力搅拌器的作用下 滴至酸度计指示 p H = 8 . 2 （如果没有酸 度计，可以酚酞指示剂滴定至微红色 3 0 s 不退）。接着，准确加入 1 0 . 0 m L 4 0 % 甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标 准滴定溶液继续滴定至 p H = 9 . 2 （如果 没有酸度计， 可以用百里香酚酞代替） ， 记下此时消耗氢氧化钠标准滴定溶液 的毫升数 V 2。同时取 5 0 m L 水，按照 相同步骤做空白试验 V 0。 结果计算 20 2 2 ()0.014 100 20 200 VVC X m = 公式中，X2样品中氨基酸含量 ( 以氮计 ) ，% ；m2样品的质量，g ； V2样品消耗的氢氧化钠标准溶液的 体积，m L ；V0空白消耗的氢氧化钠 标 准 溶 液 的 体 积，m L ；0 . 0 1 4 1 . 0 0 m L 氢氧化钠标准滴定溶液c ( N a O H ) = 1 . 0 0 0 m o l / L 相当于氮的质量，g ； C 2氢氧化钠