（人体解剖与组织胚胎学专业论文）samp8小鼠快速老化前期行为与形态学变化特征的研究.pdf

目录 中文摘要l 英文摘要4 研究论文s a m p 8 小鼠快速老化前期行为与形态学变化特征的研究 前言l0刖舌l 材料与方法1 1 结果l6 附图2 0 附表。3 8 讨论4 2 结论4 6 参考文献4 7 综述轻度认知功能障碍的研究现状5 0 致谢。6 5 个人简历6 6 中文摘要 s a m p 8 小鼠快速老化前期行为与形态学变化特征的研究 摘要 目的：应用s a m p 8 小鼠为研究对象，联合使用老化度评分、行为学 实验、病理形态学和免疫组织化学等方法，观察其在快速老化前期行为学 及其海马c a l 区形态学的变化特征，为轻度认知功能障碍( m c i ) 的研 究提供实验基础。 方法：选取健康雄性3 、4 、5 、6 、7 月龄快速老化s a m p 8 小鼠各8 只作为实验组( 简称p 8 组、p 8 组、p 8 组、p 8 组、p 8 组) 。选取 健康雄性3 、4 、5 、6 、7 月龄s a m r l 小鼠各8 只作为同源正常对照组( 简 称r 1 组、r 1 组、r 1 组、r 1 组、r 1 组) 。 1 老化度评分：采用日本京都大学竹田俊男和细川昌则教授制定的老 化度评分标准，将外在形体及行为的老化改变从反应性、被动性逃避反应、 皮毛光泽、皮毛粗糙程度、脱毛程度、皮肤溃病、眼周损害、角膜混浊、 角膜溃疡、白内障、脊柱后凸等l l 项进行观察，再根据程度不同，将每 项指标划分为0 - - 4 级不等，标定分值。根据这个评分标准客观评分，积 分越高则老化度越严重。 2 m o r r i s 水迷宫实验：将各组小鼠于迷宫实验室环境下饲养2 d 。训 练在每天上午8 ：0 0 - 1 2 ：0 0 进行。定位航行实验：将m o r r i s 水迷宫均分为 4 个象限，平台放入第象限中。小鼠分别自4 个象限面向池壁入水，视 频采集系统跟踪并记录找到平台所需时间，实验进行5 天。空间探索实验： 第6 天，撤掉平台，记录小鼠1 2 0 s 内跨越平台的次数。 3 组织切片制备及染色观察：每组均取8 只小鼠，4 水合氯醛腹腔注 射麻醉，暴露胸腔，将输液针刺入左心室，同时剪开右心耳，用生理盐水 快速冲洗，4 多聚甲醛灌注。自上丘至视交叉节段取脑组织，用刀片把脑 组织从正中矢状位分为左右两半，一半用于g o l g i 染色，一半制备成石蜡 切片，分别用于n i s s l 染色和抗a p 免疫组化染色。 结果： 1 老化度评分结果：s a m p 8 小鼠和s a m r l 小鼠的老化度评分均随 月龄的增长而增加，但是增加程度不同。s a m p 8 小鼠从5 月龄开始老化 中文摘要 度评分随月龄增长明显增加，s a m r l 小鼠随月龄增长老化度评分略微增 加。其中p 8 组与p 8 组相比，老化度评分值差异无统计学意义 ( 尸 o 0 5 ) ，略高于同月龄s a m r l 小鼠的评分值( p 0 0 5 ) ；p 8 组评分值 明显高于p 8 组和r 1 组( p 0 0 5 ) ，但 是明显高于r 1 组( p 0 0 5 ) ，与同龄对照组r 1 组和r l 组相 比，逃避潜伏期和跨越平台次数差异无显著性( p 0 0 5 ) ；p 8 组与p 8 组和r l 组相比，逃避潜伏期均明显延长( p 0 0 1 ) ，跨越平台次数明显 减少( p 0 0 5 ) ，但是p 8 组与r 1 组相比差异有统计学意义 ( p 0 0 1 ) ；p 8 组逃避潜伏期显著长于p 8 组和r 1 组( p 0 0 5 ) ；p 8 组树突棘个数明显减少，与p 8 组 和r 1 组相比差异均具有统计学意义( p 0 0 5 ) ，但是与r 1 组相比，个数显 著减少( p 0 0 5 ) ；p 8 组海马神经元胞浆内尼氏 体稀疏，神经元出现丢失现象，与p 8 组和r 1 组相比差异均具有统计 学意义p 0 0 5 ) ，但是与r 1 组相比，个数显著减少( p 0 0 1 ) ；p 8 组海马c a l 区神经元较多核固缩，胞浆内尼氏体减少，部分消失，细胞数量明显减少， 与p 8 组和r 1 组相比差异均具有统计学意义( p 0 0 1 ) 。 5 抗a p 免疫组化结果：p 8 组和p 8 组之间a p 阳性细胞数目及 中文摘要 吸光度差异均无统计学意义( 胗o 0 5 ) ，与同龄对照组相比差异亦无统计学 意义( 尸加0 5 ) ；p 8 组阳性细胞个数和吸光度与p 8 组和r 1 组相比差 异均具有统计学意义( p 0 0 5 ) ，但是与r 1 组相比，差异具有统计 学意义( p 0 0 1 ) ；p 8 组a d 阳性细胞数目及吸光度显著大于p 8 组和 r 1 组( 尸 o 0 1 ) 。 结论： 1 s a m p 8 小鼠从5 月龄开始出现衰老征象，表现为空间学习记忆的 获得和储存能力下降，提示该鼠步入老化前期，7 月龄时则表现出明显的 老化体征，学习记忆能力显著下降，进入快速衰老期。 2 5 、6 月龄s a m p 8 小鼠出现海马c a l 区神经元的丢失和树突棘数 目的显著减少，与学习记忆能力开始明显下降的时间一致。 3 5 、6 月龄s a m p 8 小鼠海马c a l 区a 3 阳性神经元显著增多，提 示a 3 的神经毒性作用可能是神经元丢失和树突棘数目减少的原因。 4 s a m p 8 小鼠7 月龄开始进入快速老化期( 即痴呆期) 前的5 、6 月 龄，与同龄正常对照组相比，己表现出行为和形态学上的明显变化，提示 该鼠此阶段已进入轻度认知功能障碍阶段，即m c i 。 关键词：s a m p 8 小鼠；老化；学习记忆；海马c a l 区；淀粉样蛋白 ( a p ) ；轻度认知功能障碍 英文摘要 一_ _ _ t h er e s e a r c ho f c h a n g e so fb e h a v i o ra n dm o r p h o l o g y i ns e n e s c e n c ea c c e l e r a t e dm o u s e p r o n es t r a i n 8 ( s a m p 8 ) b e f o r er a p i da g i n g a b s t r a c t o b j e c t i v e ：t h ec o m b i n a t i o no fg r a d i n gs c o r es y s t e mf o ra g i n g ，b e h a v i o a l s t u d i e s ，p a t h o m o r p h o l o g ya n di m m u n o h i s t o c h e m i s t r y , t oo b s e r v et h ec h a n g e s o fb e h a v i o ra n dm o r p h o l o g yo fh i p p o c a m p a lc a 1r e g i o no ft h es e n e s c e n c e a c c e l e r a t e d m o u s e - p r o n e 8 ( s a m p 8 ) b e f o r er a p i da g i n g ，a n d p r o v i d e e x p e r i m e n t a lb a s i sf o rt h er e s e a r c ho fm i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t m e t h o d s ：h e a l t h ym a l es a m p 8a tf i v ea g e sw h i c hw a si n3 , 4 ，5 ，6 ，7 m o n t h o l d ( s h o r tf o rp 8 g r o u p ，p 8 g r o u p ，p 8 g r o u p ，p 8 g r o u p ，p 8 g r o u p ，w i t h8m i c ei ne a c hg r o u p ) w e r eu s e da se x p e r i m e n t a lg r o u p s a n d c h o o s et h es a m em o n t hh e a l t h ym a l es a m r l ( s h o r tf o rr 1 g r o u p ，r1 g r o u p ，r 1 g r o u p ，r 1 g r o u p ，r 1 g r o u p ，w i t h8m i c ei ne a c hg r o u p ) a s h o m o l o g o u sn o r m a lc o n t r o lg r o u p s a l lm i c ew e r ek e p tu n d e rn o r m a lc o n d i t i o n s 1 s e n e s c e n c es c o r e s ：s e n e s c e n c es c o r e sw e r ee v a l u a t e du s i n gag r a d i n g s c o r es y s t e mw h i c hw a sd e s i g n e db y p r o f e s s o rt a k e d at o s h i oa n dh o s o k a w a m a s a n o r if r o mk y o t o u n i v e r s i t y , j a p a n ，a c c o r d i n gt oc h a n g e si nt h eb e h a v i o r a n da p p e a r a n c eo ft h em i c e t h i ss y s t e mi s c o m p o s e do fe l e v e nc a t e g o r i e s i n c l u d i n gr e a c t i v i t y , p a s s i v i t y , g l o s s i n e s s ，c o a r s e n e s s ，h a i rl o s s ，u l c e r , p r i o p h t h a l r n i cl e s i o n s ，c a t a r a c t ，c o r n e a lu l c e r , c o r n e a lo p a c i t ya n dl o r d o k y p h o s i s i n g e n e r a l ，e a c hc a t e g o r yi sd i v i d e di n t o0t o4g r a d e c o r r e s p o n d i n gt ot h ei n t e n s 时o ft h ec h a n g e s w eg a v ec e r t a i ns c o r et oe a c hg r a d e ，a n dg a v et h em i c e o b j e c t i v es c o r ea c c o r d i n gt ot h eu n i f i e ds c o r e ，t h eh i g h e rt h es c o r e s ，t h em o r e s e r i o u st h ed e g r e eo fa g i n g 2 m o r r i sw a t e rm a z e ( m w m ) t e s t ：t h es a mm i c ew e r er a i s e d2d a y s u n d e rt h ee n v i r o n m e n to fl a b y r i n t hl a b o r a t o r yf i r s t t r a i n i n gw a sp r o g r e s s e d f r o mt h et h i r dd a ya n di n e v e r ym o r n i n gb e t w e e n8 ：0 0 12 ：0 0 t h ef i x e d 英文摘要 p o s i t i o nl o c a t i o nu n d e r w a yt r i a l s ：t h em w m w a sd i v i d i n ge q u a l l yf o r4 q u a d r - a n t s ，t h ep l a tw a sp u ti n t ot h ef o u r t hq u a d r a n t t h em o u s ew e n ti n t ow a t e r f r o mt h e4 q u a d r a n t sm i d p o i n tt o w a r d st h ew a l li np o n d ，a n dt h ev i d e of r e q u e n c ya c q u i s i t i o ns y s t e mt r a c k e na n dr e c o r d e de s c a p el a t e n c y ( s ) t h i st e s tc o n t i n u e d5d a y s s p a c ee x p l o r i n gt r i a l ：t h es i x t hd a y , r e m o v e dt h ep l a ta n dt a k e n n o t e st h et i m e st h a tt h em o u s e a c r o s s i n gs p a nf l a tr o o f i n12 0 s 3 t i s s u ep r e p a r a t i o na n ds t a i n i n go b s e r v a t i o n ：8m i c eo fe v e r yg r o u p w e r et a k e no u t ，i n j e c t e d4 c h l o r a lh y d r a t et oa b d o m i n a l ，a n e s t h e s i a e dt h em i c e ，b r o k e nf i g h ta u r i c l ea n dp e r f u s e dq u i c k l yw i t hn o r m a ls a l i n ea n ds u b s e q u e n t l yf i x e dw i t h4 p a r a f o r mv i al e f tv e n t r i c l e f r o ms u p e r i o rc o l l i c u l u st oo p t i cc h i a s m as e g m e n t ，t h eb r a i nm a d et h es a m et w op a r t st h r o u g hm i d d l es a g i t t a l v i e w i n gb yr a z o rb l a d e o n ew a sm a d eu s ef o rg o l g is t a i n i n g ，t h eo t h e rw a s m a d eo f p a r a f f i ns e c t i o n su s i n gf o rn i s s ls t a i n i n g ，a n t i - a 1 3i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n ga n dn e g a t i v ec o n t r 0 1 r e s u l t s ： 1 b yu s i n gt h eg r a d i n gs c o r es y s t e mt oe v a l u a t es e n e s c e n c es c o r e s ，w e f o u n ds e n e s c e n c es c o r e si n c r e a s e dw i t ha d v a n c i n ga g ei nb o t hs a m p 8a n d s a m r 1 ，h o w e v e r , t h ed e g r e e sw e r ed i f f e r e n t am o r em a r k e di n c r e a s ei n s e n e s c e n c es c o r e sw i t ha d v a n c i n ga g ea f t e r 5m o n t h so fa g ei ns a m p 8 c o m p a r e dt oam i n o ri n c r e a s ei ns a m r l t h e r ew a sl i t t l ed i f f e r e n c ei ns c o r e b e t w e e np 8 g r o u pa n dp 8 g r o u p ( 胗o 0 5 ) ，a n dw h i c hw a ss l i g h t l y h i g h e rt h a nt h es a m em o n t h - o l ds a m r1 ( 扮o 0 5 ) t h es c o r eo fp 8 g r o u p w a so b v i o u s l yh i g h e rt h a nt h a to fp 8 g r o u pa n dr 1 g r o u p ( p o 0 5 ) ，t h o u g ht h es c o r eo fp 8 g r o u pw a sh i g h e rt h a n t h a to fp 8 g r o u p ，h o w e v e r ，o b v i o u s l y h i g h e rt h a n t h a to fr 1 g r o u p ( p 0 0 5 ) ，a n dt h e r ew a s n ts i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h ee s c a p el a t e n c ya n dt h et i m e s 5 英文摘要 o fs p a nf l a tr o o fc o m p a r i n gw i t hr 1 g r o u pa n dr 1 g r o u p ( p o 0 5 ) t h e e s c a p el a t e n c yo fp 8 g r o u pw a so b v i o u s l yl o n g e rt h a nt h a ti np 8 g r o u p a n dr 1 g r o u p ( p 0 01 ) ，t h et i m e so fs p a nf l a tr o o fa l s oo b v i o u s l y d e c r e a s e d ( p 0 0 5 ) ， h o w e v e r , t h ee s c a p el a t e n c yo fp 8 g r o u pw a so b v i o u s l yl o n g e rt h a nt h a ti n r 1 g r o u p ( p 0 01 ) ，t h et i m e so fs p a n f l a tr o o fo b v i o u s l yd e c r e a s e d t o o ( p 0 01 ) t h ee s c a p el a t e n c yo fp 8 ( z ) g r o u pw a ss i g n i f i c a n t l yl o n g e rt h a n t h a ti np 8 g r o u pa n dr 1 g r o u p ( p 0 0 5 ) t h en u m b e ro fd e n d r i t i cs p i n e so fp 8 g r o u pd e c r e a s e do b v i o u s l yc o m p a r i n gw i t ht h a to fp 8 g r o u pa n dr 1 g r o u p ( p o 0 5 ) ， b u tw i t hs i g n i f i c a n td i f f e r e n c ec o m p a r i n gw i t ht h a to fr 1 g r o u p ( 尸 o 0 5 ) ；n e u r o n a ln i s s l b o d i e si np 8 g r o u pb e c a m es p a r s e ，a n dt h en u m b e ro fn e u r o n sd e c r e a s e d t o o ，a n dw i t hs i g n i f i c a n t l ys t a t i s t i c a ld i f f e r e n c ec o m p a r e dw i t hp 8 g r o u p a n dr 1 g r o u p ( p o 0 5 ) ，w h i l e 6 英文摘要 一一 c o m p a r e dw i t hr1 g r o u p ，t h en e u r o nn u m b e ri np 8 g r o u pd e c r e a s e d o b v i o u s l y ( p o 0 5 ) ： c o m p a r i n gw i t hp 8 g r o u pa n dr 1 g r o u p ，t h en u m b e ra n dt h eo p t i c a l d e n s i t yo fa 1 3 i m m u n ep o s i t i v en e u r o n si np 8 g r o u pw e r em a r k e d l v h i g h e r ( p 0 0 5 ) ；p 8 g r o u pa n dp 8 g r o u ph a v en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e i nt h en u m b e ra n dt h e o p t i c a ld e n s i t yo fa 1 3 i m m u n ep o s i t i v en e u r o n s ( 胗o 0 5 ) ，w h i l ec o m p a r i n gw i t hr 1 g r o u p ，t h o s ei np 8 g r o u pi n c r e a s e d o b v i o u s l y ( p 0 01 ) ；t h en u m b e ra n dt h eo p t i c a ld e n s i t yo f a 1 3 i m m u n ep o s i t i v e n e u r o n si np 8 g r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h o s ei np 8 g r o u p a n d r 1 g r o u p ( p 0 0 1 ) c o n c l u s i o n s ： 1 t h es a m p 8m o u s e b e g a nt oa p p e a rs i g n so fa g i n gf r o m5m o n t h so l d ， s h o w i n gt h a tt h ea b i l i t yo fs p a t i a ll e a r n i n ga n dm e m o r ya c q u i s i t i o na n d s t o r a g ed e c l i n e d ，t h e s es u g g e s t e dt h a tt h em o u s ee n t e r e dt h ea g i n g p e r i o d ；i n7 m o n t h so l d ，t h em o u s ed i s p l a y e do b v i o u ss i g n so fa g i n g ，a n dt h ea b i l i t yo f l e a r n i n ga n dm e m o r yd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y , s u g g e s t i n gt h a tt h em o u s e g o t i n t ot h ep e r i o do f r a p i da g i n g 2 t h es a m p 8m o u s e p r e s e n t e dt h el o s so ft h en u m b e ro fn e u r o n sa n d t h es i g n i f i c a n tr e d u c t i o no ft h en u m b e ro fd e n d r i t i c s p i n e si nh i p p o c a m p a l c a1r e g i o ni n5 a n d6m o n t h so l d ，w h i c hw a sc o n s i s t e n tw i t ht h et i m eo f t h e d e c l i n eo f l e a r n i n ga n dm e m o r y 3 t h en u m b e ro fa 1 3 i m m u n ep o s i t i v en e u r o n so fh i p p o c a m p a lc a 1 r e g i o ni ns a m p 8m o u s eo f5a n d6m o n t h so l di n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y s u g g e s t i n gt h a tt h en e u r o t o x i ce f f e c t so fa pm a yb et h ec a u s e so ft h el o s so f 一 7 英文摘要 t h en u m b e ro fn e u r o n sa n dt h er e d u c t i o no ft h en u m b e ro fd e n d r i t i cs p i n e s 4 b e f o r et h es a m p 8m o u s ee n t e r e dr a p i da g i n g ( a l s oc a l l e dd e m e n t i a ) f r o m7m o n t h so l d ，d u r i n g5a n d6m o n t h so l d ，t h em o u s eh a v ed e m o n s t r a t e d o b v i o u sc h a n g e si nb e h a v i o ra n dm o r p h o l o g y , s u g g e s t i n gt h a ts a m p 8 m o u s e i n5a n d6m o n t h so l dw e r ea l r e a d yi nt h es t a g eo f m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t ( m c i ) k e yw o r d s ：s a m p 8m o u s e ；a g i n g ； c a1r e g i o n ；a m y l o i dp r o t e i nb e t a ( a p ) ； l e a r n i n ga n dm e m o r y ；h i p p o c a m p a l m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t ( m c i ) 英文缩写 英文缩写 a d ( a l z h e i m e r sd i s e a s e ) m c i ( m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t ) c n s ( c e n t r a ln e r v o u ss y s t e m ) s a m ( s e n e s c e n c ea c c e l e r a t e dm o u s e ) s a m r ( s e n e s c e n c ea c c e l e r a t e dr e s i s t a n tm o u s e ) s a m p ( s e n e s c e n c e a c c e l e r a t e dp r o n em o u s e ) m w m ( m o m s w a t e rm a z e ) c a l ( c o r n u a m m o n1 1 d e n d r i t i cs p i n e a 1 3 ( a m y l o i dp r o t e i nb e t a ) 阿尔茨海默病 轻度认知功能障碍 中枢神经系统 快速老化模型小鼠 抗快速老化小鼠 快速老化小鼠 m o m s 水迷宫 海马c a l 区 树突棘 p 一淀粉样蛋白 一_ 一 9 研究论文 s a m p 8 小鼠快速老化前期行为与形态学变化特征的研究 盟! 量 莉青 阿尔茨海默病( a l z h e i m e r sd i s e a s e ，a d ) ，是发生在老年期或老年前 期的一种慢性中枢神经系统退行性疾病。随着世界人口老龄化的加快， 老年性痴呆的患病率逐年增加，已经成为严重威胁老年人生命健康的主 要疾病之一。由于老年性痴呆症发病机理复杂，目前全世界尚未在治 疗上取得突破性进展，所以采取早期预防、早期诊断、早期干预治疗 对策是延缓老年性痴呆发病时间以及减缓病情最为有效的措施。 轻度认知功能障碍( m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t ，m c i ) ，是指个体与 年龄和文化程度相匹配的对照组相比存在显著的记忆或和其他认知功能 的损害，但日常生活能力正常，尚达不到痴呆的诊断标准，即介于正常人 与痴呆病人之间的过渡状态。痴呆最常见的类型是a d ，研究表明6 5 岁 以上的老年人m c i 患病率约为1 5 ，且m c i 患者中有l o 1 5 在1 年内、4 0 在2 年内、2 0 - 5 3 在3 年内、5 5 在4 一- , 5 年内进展为a d ， 而相应年龄的正常人群每年a d 的发病率仅约1 2 【l 一1 。由此可见， m c i 患者处于a d 的早期阶段，是a d 的高危人群【4 5 1 。对m c i 进行早期 诊断，可有助于识别痴呆高危个体，并对探索有效干预途径有着重要的意 义。但是到目前为止对m c i 的研究还没有统一的评价体系。 快速老化模型小鼠( s e n e s c e n c ea c c e l e r a t e dm o u s e ，s a m ) 是一种近 交系衰老模型鼠，具备均一的遗传背景和稳定的老化病态特征，根据老化 速度和特征分为s a m r 和s a m p 两种系。s a m r 系为抗快速老化系，其 各项生理指标及平均生存期限均与正常动物相似，常作为s a m p 系的同 源正常对照。s a m p 系为快速老化系，其中s a m p 8 小鼠是s a m p 系中的 一个亚系，平均寿命为1 2 1 个月，在过了4 6 月龄生长期后，表现为随 年龄增长而发生的快速老化和学习记忆力减退、认知功能障碍及与a d 患 者类似的脑部病理改变。现己从多方面证实了s a m p 8 小鼠是研究a d 较 理想的自然发病模型 6 , 7 1 。 在我们的研究观察和现有的研究报道中发现，s a m p 8 小鼠在最终进 展为学习认知障碍与a d 患者类似的脑部改变之前与s a m r l 小鼠相比， 研究论文 其行为学、形态学、神经生化、多种酶类和蛋白质均出现异常。这提示 s a m p 8 小鼠在生长期存在着向a d 转变的过渡状态，具有m c i 期的特征 性变化，为后续研究m c i 的相关因素以及m c i 进展为痴呆的危险因素， 寻找可干预的治疗方法提供帮助。 1 材料 1 1 主要仪器 m o r r i s 水迷宫 材料与方法 冰箱 电子分析天平b s 2 1 0 s 型 恒温箱 r m 2 1 4 5 型组织切片机 恒温水浴箱 光学显微镜 微量移液器 h p i a s 1 0 0 0 高清晰度彩色病理图文 分析系统 1 2 主要试剂和药品 水合氯醛 氯化钠 磷酸氢二钠 磷酸二氢钠 多聚甲醛 重铬酸钾 3 9 甲醛 5 0 戊二醛溶液 二甲基亚砜 硝酸银 安徽淮北正华生物仪器设备 有限公司 中国海尔集团公司 德国赛多利斯公司 广州东之旭试验设备有限公司 德国l e i c a 公司 北京医疗设备总厂 日本n i k o n 公司 广州丹利科技有限公司 西安华海医疗信息技术股份有限公 司 中国医药集团上海试剂公司 天津市永大化学试剂开发中心 天津市永大化学试剂开发中心 天津市永大化学试剂开发中心 天津市永大化学试剂开发中心 中国医药集团上海试剂公司 张家口市化学试剂厂 广州化学试剂厂 本溪创科医药化工有限公司 苏州市万隆化学试剂有限公司 研究论文 甲苯胺蓝中国医药集团上海试剂公司 多聚赖氨酸s i g m a 公司 氯化钾天津市永大化学试剂开发中心 磷酸氢二钾天津市永大化学试剂开发中心 柠檬酸天津市永大化学试剂开发中心 柠檬酸钠天津市永大化学试剂开发中心 氢氧化钠天津市永大化学试剂开发中心 3 过氧化氢石家庄市卫民消毒制品有限公司 兔抗鼠a 1 3 抗体 武汉博士德生物技术有限公司 s p 免疫组化试剂盒北京正四柏生物金桥技术有限公司 2 主要溶液的配置 2 14 多聚甲醛的配置 2 1 1 储备液的配置 2 1 1 1o 2ma 液的配置 磷酸二氢钠 6 2 4 0 4 9 蒸馏水 1 0 0 0 m l 用磁力搅拌器加热搅拌均匀，直至溶解，澄清。 2 1 1 2o 2mb 液的配置 磷酸氢二钠 7 1 6 2 8 9 蒸馏水 1 0 0 0 m l 用磁力搅拌器加热搅拌均匀，直至溶解，澄清。 2 1 20 1 m p b ( p h 7 2 - 7 4 ) 的配置 o 2ma 液9 5 m l o 2mb 液4 0 5 m l 加蒸馏水至终容积为1 0 0 0 m l 。 2 1 3 多聚甲醛4 0 9 ，直接加入o 1 mp b1 0 0 0 m l ，用磁力搅拌器加热搅拌 均匀，直至溶解，澄清。冷却后过滤( 滤纸) 并补加双蒸水至终容积为 1 0 0 0 m l ( 4 冰箱保存) ，即配成4 多聚甲醛。操作过程中注意通风。 2 2o 0 1 mp b s ( p h 7 2 7 4 、) 的配置 氯化钠1 7 9 氯化钾0 4 9 研究论文 磷酸氢二钠 5 7 9 磷酸氢二钾0 5 4 9 加双蒸水至2 0 0 0 m l ，此液适用于免疫组织化学切片的清洗。 2 3 高尔基染色媒染液的配置 重铬酸钾5 9 ，2 5 戊二醛1 0 m l ，3 9 甲醛1 0 m l ，二甲基亚砜5 - 9 滴， 加蒸馏水至1 0 0 m l 即得，现用现配。 2 41 5 硝酸银 1 0 0 m l 三蒸水+ 1 5 9 硝酸银即配成1 5 硝酸银溶液，室温中保存在棕色 瓶内。 2 51 甲苯胺蓝的配置 甲苯胺蓝4 9 ，直接加入蒸馏水4 0 0 m l ，混合均匀，配置后放置在阴凉 处。 2 6 枸橼酸盐缓冲液的配置 2 6 1 储备液 2 6 1 1o 1m 枸橼酸溶液 枸橼酸 2 1 0 1 9 双蒸水1 0 0 0 m l 2 6 1 20 1m