（临床检验诊断学专业论文）xiap及xaf1在急性淋巴细胞白血病中表达意义.pdf

目录 ! l i i ii it llll t li ii i i iiii y 18 9 3 3 0 6 一、摘要 ， 中文论著摘要1 英文论著摘要3 二、英文缩略语o 5 三、论文 前言6刖舌6 材料与方法6 结果8 讨论”1 0 结论11 四、本研究创新性的自我评价1 2 五、参考文献13 六、附录 综盍盎”1 4 在学期间科研成绩2 3 致 射”2 4 个人简介2 5 中文论著摘要 x i a p 及x a f i 在急性淋巴细胞白血病中表达意义 目的 探讨x 染色体连锁凋亡抑制蛋白( x c h r o m o s o m e 1 i n k e di n h i b i t o ro f a p o p t o s i s p r o t e i n , x i a p ) 及其相关因子l ( x i a p a s s o c i a t e d f a c t o r l ，x a f l ) 在急性淋巴细 胞白血病( a c u t el y m p h o c y t i cl e u k e m i a ，a l l ) 中m r n a 的表达及其临床意义，并分 析x i a p 、x a f l 及x i a p x a f l 比值，在a l l 分型、疾病分期、临床治疗前后的 差异及应用价值，以及在疾病发生、发展中的作用。 方法 采用病例对照研究，选取8 5 例急性淋巴细胞白血病患者，均为2 0 0 9 年2 月 2 0 1 0 年3 月来院就诊的住院和门诊随访的患者，其中初诊未治5 3 例( 男性2 9 例， 女性2 4 例；b 系a l l4 l 例，t 系a l l1 2 例；成人2 2 例，儿童3 1 例) 初诊组；治 疗后完全缓解期( c o m p l e t er e m i s s i o n ，c r ) 患者2 1 例c r 组，复发患者1 1 例复 发组，并设2 2 例非恶性血液病患者为对照组。应用实时荧光定量聚合酶链反应 ( r q - p c r ) 检测a l l 患者骨髓标本中x i a p 及x a f l 的m r n a 相对表达水平并计 算x i a p x a f l 比值，各组疾病诊断及疗效标准均按照f a b 分型标准及参照血 液病诊断及疗效标准( 第三版) 进行判定。 硅里 ；日7 卜 a l l 各组x i a pm r n a 表达水平均高于对照组( p o 0 5 ) ，初诊a l l 组x i a p m r n a 表达水平高于c r 组( p o 0 5 ) ，而低于复发组( p o 0 5 ) ，c r 组表达水平高于 对照组( p 0 0 5 ) ；x a f i 在a l l 时呈低表达或不表达，初诊组和复发组的表达 水平低于对照组( p o 0 5 ) ，缓解组表达高于a l l 其它组( p 0 0 5 ) 。x i a p x a f l 比值在a l l 患者中初诊组和复发组明显 高于对照组和缓解组( p 0 0 5 ) ；男女性别之间表达水平差异无统计学 意义( p = o 0 5 ) 。 结论皇口，匕 a l l 患者x i a p 基因呈高表达，而x a f l 基因呈低表达或不表达，并且与疾病 进展有关，提示x i a p 可能通过抑制白血病细胞凋亡参与了a l l 的发生发展，与 预后不良及对治疗反应差相关。x i a p x a f l 比值在a l l 患者中明显高于对照组 ( p 0 0 5 ) ，而在缓解时有所下降但仍高于对照组( p o 0 5 ) ，说明了在a l l 时x i a p 与x a f l 表达水平的不平衡，可能是a l l 预后不良及复发的一项重要因素之一。 在a l l 时t 、b 两系、成人与儿童以及男女性别表达差异均无统计学意义，说明 x i a p 与x a f l 可能共同参与了a l l 的疾病的形成和发展，与年龄、性别及分型 无关。通过抑制x i a p 及上调x a f l 基因表达来治疗a l l ，将为a l l 的基因治 疗提供新思路。 关键词 急性淋巴细胞自血病( a l l ) ；x 连锁凋亡抑制蛋白c x l a p ) ；x t a p 相关因子 1 ( x a f d ；实时荧光定量聚合酶链反应( r q - p c r ) 2 英文论著摘要 e x a n dc l i n i c a l g n i f i c a nqo fx i a pa ndexdressiona n dc l i n i c a ls i g n i i i c a n c exa n d x a f1i na c u t e l y m p h o c y t i cl e u k e m i a o b j e c t i v e t o i n v e s t i g a t e t h em r n a e x p r e s s i o n a n dc l i n i c a l s i g n i f i c a n c e o f x - c h r o m o s o m e - l i n k e di n h i b i t o ro fa p o p t o s i sp r o t e i n ( m a p ) a n dx i a pa s s o c i a t e d f a c t o r l 斛1 ) i na c u t el y m p h o c y t i cl e u k e m i a ( a l l ) ，a n dt oa s s e s st h ev a l u eo fx i a p a n dx a f li ni m m u n o p h e n o t y p e ，c l i n i c a lt h e r a p e u t i ce f f i c i e n c y , s t a g i n go fd i s e a s ea n d p r o g n o s i s ，a sw e l la sa n a l y z et h er o l ei na l lo c c u r r e n c ea n dd e v e l o p m e n t t h e e x p r e s s i o nr a t i o so fx i a p x a f 1w a sa l s oe v a l u a t e d m e t h o d s u s i n gc a s ec o n t r o ls t u d y , 8 5f o l l o w e du pi n p a t i e n ta n do u t p a t i e n tw i t ha c u t e l y m p h o c y t i cl e u k e m i aw h ow e r ea d m i t t e dt os j - h o s p i t a ld u r i n gf e b r u a r y2 0 0 9 m a r c h2 0 10 i nw h i c h , 5 3p a t i e n t sn e w l yd i a g n o s e dw e r eu n t r e a t e d ( 2 9m a l e s ，2 4 f e m a l e s ；i n c l u d i n g4 1b a l l ，1 2t - a l l ；2 2a d u l t s ，31c h i l d r e n ) i nn e w l yd i a g n o s e d a l lg r o u p ；21p a t i e n t sa c h i e v e dc o m p l e t er e m i s s i o na f t e rt r e a t m e n ti nc rg r o u p ，11 p a t i e n t sr e l a p s e di nr e l a p s eg r o u p t h ec o n t r o lg r o u pi n c l u d e d2 2p a t i e n t sw i t h o u t m a l i g n a n th e m a t o l o g i c a ld i s e a s e s u s i n g r e a lt i m ef l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ( r q p e r ) t od e t e c tx i a pa n dx a f lm r n ae x p r e s s i o n l e v e li nm a r r o ws p e c i m e n so fa l l p a t i e n t sa n dc a l c u l a t e dt h ex i a p x a f ir a t i o d i a g n o s t i c s t a n d a r da n de f f i c a c ys t a n d a r da r ei na c c o r d a n c ew i t l lt h ef a b c l a s s i f i c a t i o nc r i t e r i aa n dr e f e rt o d i a g n o s i sa n dt r e a t m e n ts t a n d a r do fb l o o dd i s e a s e s t h et h i r de d i t i o n r e s u l t t h ee x p r e s s i o nl e v e lo fx i a pm r n ai nn e w l yd i a g n o s e da l lg r o u pw a s s i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nw h i c hi nc o m p l e t er e m i s s i o n ( c r ) a n dc o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) ， w h i l el o w e rt h a nt h er e l a p s eg r o u p ( p 0 0 5 ) t h ex i a pm r n a e x p r e s s i o nl e v e lo fc r g r o u pi sh i g h e rt h a nc o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) b e t w e e nt a l l a n db - a l l ，a d u l ta n dc h i l d r e n , m a l ea n df e m a l ei nt h e l e v e lo f 脚a n dx a f1 e x p r e s s i o n t h em r n ar a t i oo fx i a p x a f 1w a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e ri nn e w l y d i a g n o s e da n dr e l a p s ea l lg r o u pt h a ni nc o n t r o lg r o u pa n dc rg r o u p ( p 0 0 5 ) ，a n d c rg r o u ph i g h e rt h a nc o n t r o lg r o u p ( p o 0 5 ) c o n c l u s i o n u g he x p r e s s i o no fx i a p , w h i l el o wo rn oe x p r e s s i o no fx a f 1 g e n e ，a n d a s s o c i a t e d 诵t l ld i s e a s e p r o g r e s s i o n , i n d i c a t e dt h a tx i a pm a yi n v o l v e i nt h e o c e u l t e n c ea n dd e v e l o p m e n to fa l lt h r o u g hi n h i b i t i n ga p o p t o s i so fl e u k e m i ac e l l s ， a n dr e l a t e dt ot h ep o o rp r o g n o s i sa n dr e s p o n s et ot r e a t m e n t t h ex i a p x a f1 e x p r e s s i o nr a t i o i na l lp a t i e n t si s h i g h e rt h a nc o n t r o l g r o u p ( p 0 0 5 ) ，t h er a t i ow a sl o w e rw h e ng e t t i n gr e m i s s i o nb u t s t i l lh i g h e rt h a n c o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) ，w ec o u l dd e t e r m i n et h a ta ni m b a l a n c ei nx i a p x a f1m r n a e x p r e s s i o nl e v e l sc o r r e l a t e dt oo v e r a l lp a t i e n ts u r v i v a la n dr e l a p s e ，a n dt h a th i g hx i a p l e v e lw a sap o o rp r o g n o s t i cf a c t o r i n h i b i t i n gt h ee x p r e s s i o no fx i a pa n di n c r e a s i n g t h ee x p r e s s i o no fx a f1w i l lp r o v i d ean o v e ls t r a t e g yf o rg e n et h e r a p yo f a l l k e y w o r d s a c u t el y m p h o c y t i cl e u k e m i a ( a l l ) ；x c h r o m o s o m e - l i n k e di n h i b i t o ro fa p o p t o s i s p r o t e i n 础) ；x i a pa s s o c i a t e df a c t o r1 ( x a f1 ) ；m a lt i m ef l u o r e s c e n c eq u a n t i t a t i v e p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ( r q - p c r ) 4 英文缩略语 5 论文 x i a p 及x a f l 在急性淋巴细胞白血病中表达意义 刖吾 白血病是一类异质性的造血干细胞的恶性克隆性疾病，白血病细胞存在增殖 失控、分化障碍及凋亡受阻等生物学特点。细胞凋亡受抑在肿瘤发生与发展中起 重要作用，凋亡受抑是急性白血病发生、发展及化疗耐药、治疗失败的主要原因之 一。x 连锁凋亡抑制蛋白( x - c h r o m o s o m e 1 i n k e di n h i b i t o ro fa p o p t o s i s p r o t e i n , x i a p ) 在i a p s 家族中抑制c a s p a s e s 活性最强，作用范围最广，且与细胞凋 亡和信号转导密切相关【1 。2 1 。x i a p 相关因子i ( x i a pa s s o c i a t e df a c t o r l ，x a f l ) 为x i a p 负向调节因子，可直接结合x i a p 并拮抗其对c 唧嬲e 3 凋亡的抑制作用， x a f l 在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失。x a f l 过度表达可诱导 凋亡，抑制肿瘤生长。因此，x a f l 是一个新的肿瘤抑制基因，有可能成为肿瘤 治疗的新靶向基因。急性淋巴细胞白血病是淋巴前体细胞异常引起的恶性疾病， 儿童和成人均可发生。近年来分子生物学的发展不但丰富了对a l l 发病机制的理 解，也为发展新的靶向治疗提供了契机。本研究利用实时荧光定量聚合酶链反应 ( r q p c r ) 技术检测了x i a p 、x a f l 在a l l 骨髓标本中的表达水平，并计算 x i a p x a f l 比值，分析x i a p 、x a f l 及x i a p x a f l 比值，在a l l 分型、疾病 分期、临床治疗前后的差异及应用价值，以及在疾病发生、发展中的作用。 材料与方法 一、研究对象 8 5 例急性淋巴细胞白血病患者均为2 0 0 9 年2 月 一2 0 1 0 年3 月来院就诊的住 院和门诊随访的患者，其中初诊未治5 3 例( 男性2 9 例，女性2 4 例；b 系a l l 4 1 例，t 系a l l1 2 例；成人2 2 例，儿童3 1 例) 为初诊组；治疗后完全缓解( c o m p l e t e r e m i s s i o n ，c r ) 患者2 l 例为c r 组，复发患者1 l 例为复发组；年龄5 月 6 8 岁， 中位年龄1 5 岁；并设2 2 例非恶性血液病患者为对照组。各组疾病诊断及疗效标 6 准均参照f a b 分型标准及血液病诊断及疗效标准( 第三版) 。 二、方法 l 、单个核细胞分离及细胞总r n a 提取 抽取对照组及急性白血病患者骨髓2 - - - 3 m l ，用e d t a k 2 抗凝，用淋巴细胞 分离液( f i e o l l 分离液) ，按说明书操作，分离单个核细胞( m n c ) 。采用t r i z o l 抽提细胞总r n a ，经紫外分光光度计测定a 2 6 0 n m a 2 8 0 n m 比值，鉴定r n a 纯 度，a 2 6 0 a 2 8 0 值在1 8 以上者，8 0 c 冰箱冻存备用。 2 、c d n a 合成 逆转录反应体系2 0 1 x l ( 大连宝生物公司) ，5 x 逆转录反应缓冲液4 0 9 l ，1 0 0 u m 随 机六聚引物1 0 u l ，5 0 u mo l i g od t 引物1 0 u l ，逆转录酶m i x1 0 u l ，t o t a lr n a3 0 u l ， 余用d e p c 水补充至2 0 u l 。在3 7 中反应4 5 m i n ，8 5 反应5 m i n 灭活逆录转酶 后终止反应。 3 、引物设计及p c r 扩增 根据人x i a p 及x a f l 序列，用p r e m i e r 5 软件设计引物，以g a p d h 为内参照， 引物由大连宝生物技术有限公司合成。 p c r 扩增体系2 0 山，内含2 x s y b rp r e m i xe xt a q 聚合酶1 0 0 p l ，上下游引 物( 1 0 u m ) 各0 4 9 l ，c d n a 2 0 u l ，r o xr e f e r e n c ed y e ( 5 0 x ) 参比荧光校正0 4 u l ， 余用d e p c 水补足。反应在p c r 扩增仪上进行两步法扩增，第一步9 5 变性 3 0 s e e ，第二步扩增条件为9 5 变性5 s e e ，6 0 c 退火3 4 s e e ，7 2 延伸l m i n ，共循 环4 0 次。基因的引物序列见表1 。 表1 ，目的基因及内参对照引物序列 7 4 、p c r 产物分析及统计学处理 以目的基因与g a p d h 的拷贝值之比做为x i a p 和x a f l 表达水平的相对定 量指标进行计算。采用s p s s l l 5 统计软件，计数资料采用矛检验，x i a p 和x a f l 表达数据结果为计量资料，呈偏态分布，组间比较采用k r u s k a lw a l l i s 秩和检验及 配对样本的秩和检验，p 0 0 5 为有统计学意义。 结果 一、x i a p 在对照组及a l l 各组中的m r n a 表达 a l l 各组x i a pm r n a 呈高表达，表达水平高于对照组，p 0 0 5 ；初诊a l l 组x i a pm r n a 表达水平高于c r 组( p o 0 5 ) ，而低于复发组( p 0 0 5 ；男女性别之间差异无统 计学意义，p 0 0 5 ；其相对表达水平见表3 。 二、心1 在对照组及a l l 各组的m r n a 表达 x a f l 在a l l 各组呈低表达或不表达，初治组与复发组之间差异无统计学意 义，p 0 0 5 ；c r 组高于a l l 其它各组，p 0 0 5 ；见表2 。成人组与儿童组差异无统计学意义，p 0 0 5 ；t - a l l 与b a l l 差异无统计学意义，p 0 0 5 ；男女之间差异无统计学意义，p 0 0 5 ；其相对表达水平 见表3 。 三、x l a 眺f l 比值 复发组高于a l l 其它各组，p 0 0 5 ；初治组高于缓解组和对照组，p 0 0 5 ；缓解 组仍高于对照组。p 0 0 5 ；见表2 。 表2 ，a l l 各组x i a p 与x a f lm r n a 相对表达水平 注：与对照组比较，p 0 0 5 。 8 表3 ，x i a p 及x a f l 基因在不同年龄、性别及分型间m r n a 相对表达水平 的比较 四、对治疗反应 对1 8 例初诊患者化疗前后二基因表达水平进行比较见下表4 。 表4 ，化疗前后x i a p 与x a f l 相对表达水平的比较分析 五、疗效评估 初诊a l l 的患者中有4 6 例可进行随访及疗效评价，参照文献3 1 ，x i a p 高表 达组的缓解率为5 4 1 0 ，x i a p 低表达组缓解率8 1 8 0 ，后者对治疗的反应好于 前者，z - 3 9 9 ，p 0 0 5 。x a f l 高表达组患者c r 率为8 4 6 ，x a f l 低表达组 c r 率为5 5 o 矛= 4 8 9 ，p 0 0 5 ，见表5 。 表5 ，4 6 例进行随访及疗效评价 9 讨论 细胞凋亡的紊乱与肿瘤的发生、发展有着密切关系，凋亡受抑可能是白血病 发生、发展及治疗失败主要原因之一。凋亡的主要执行者是c a s p a s e s 家族成员， 受到多种凋亡抑制分子调控，其中最强的内源性凋亡抑制分子是l a p 家族成员， 目前发现人类的凋亡基因有8 个成员b i r c l b i r c 8 ，编码一组结构相关的蛋白， 分别是h i a p 1 c l a p 1 ，h i a p 2 c l a p 2 、x i a p 、m l i a p l i v i n k i a p 、s u r v i v i n ( 生 存蛋f 1 ) 、i l p 一2 t s i a p 、n i a p ( n e u r o n a la p o p t o s i si n h i b i t o r yp r o t e i n ) 、b r u c e ( b i r r e p e a tc o n t a i n i n gu b i q u i t i n c o n j u g a t i n ge n z y m e ) a p o l l o n ，x i a p 是l a p 家族中最有效 力的c a s p a s e 抑制物 4 1 ，或称m i h a h l l p b i r c 4 ，定位于x q 2 5 ，这一家族是细胞 内一类重要的凋亡抑制因子，研究证实其可参与细胞凋亡受体介导途径和线粒体 途径。除抑制细胞凋亡外，x i a p 还与细胞信号转导、细胞分裂、蛋白泛素化、铜 代谢有关；大量研究发现x i a p 在多种恶性肿瘤组织或细胞系中高表达【5 。且x i a p 的表达和活性异常可能作用于肿瘤细胞拮抗化疗药物诱导的凋亡，导致肿瘤耐药 嘲。急性白血病存在x i a pm r n a 表达增高的现象，且x i a pm r n a 表达增高与急 性白血病发生发展具有明显的相关性，提示x i a p 有可能成为白血病治疗的重要靶 基因之一网。随着分子生物学研究的进展，可以预见以x i a p 为靶标的药物不久将 会用于肿瘤病人的治疗。本研究证实x i a p 在急性淋巴细胞白血病呈高表达，各组 表达水平均高于对照组，缓解组表达水平低于初诊组和复发组，且x i a p 低表达组 的治疗缓解率明显高于x i a p 高表达组的患者，提示x i a p 可能通过抑制白血病细 胞凋亡参与了a l l 的发生发展，与治疗状态及预后相关。 x i a p 相关因子i ( x a f l ) 是一个新近发现可以拮抗x i a p 抗凋亡作用的蛋白， 可以逆转x i a p 对细胞的保护作用。x a f l 在所有胚胎组织及成人正常组织中广 泛表达，但是在肿瘤细胞株和肿瘤组织中低表达甚至不表达，这表明：缺乏x a f l 的表达导致凋亡异常可能是恶性肿瘤存活的重要机制。f o n g 等【l o 】用微卫星方法分 析了美国癌症研究所的6 0 种肿瘤细胞系，发现普遍存在x a f l 等位基因的缺失， 肿瘤细胞系x a f l 的m r n a 的表达明显低于正常人，而x i a p 的m r n a 表达增 高，提示x i a p 相对于x a f l 的高表达使x i a p 的抗凋亡功能增加，呈转录抑制 状态，为肿瘤细胞提供了生长优势。x a f l 对x i a p 蛋白因子的拮抗作用使其可 1 0 能成为一个新的、潜在的肿瘤抑制因子。 基于x a f l 具有拮抗x i a p 凋亡抑制作用和肿瘤抑制基因特性，恢复x a f l 的表达和功能，有可能成为恶性肿瘤基因治疗新靶标【1 1 】。x a f l 的低表达或不表 达还与肿瘤的分期、分级密切相关1 2 1 。有研究提示，x a f l 的低表达可能是恶性 肿瘤细胞对凋亡耐受而存活的关键原因。本研究中x a f l 在急性淋巴细胞白血病 呈现低表达或不表达，缓解组表达高于a l l 其它各组而与对照组差别无统计学意 义，初治a l l 患者x a f l 高表达组的治疗缓解率明显高于低表达组，说明x a f l 在急性淋巴细胞白血病时具有促进白血病细胞凋亡的功能，是重要的肿瘤抑制基 因之一。 在本研究中x i a p 与x a f l 二基因表达水平在t 、b 两系，成人与儿童以及 男女性别间的差异无统计学意义，而在治疗前后二基因表达水平有差异，说明 x i a p 与x a f l 共同参与了a l l 的疾病的形成，二者与疾病的发生、进展及治疗 状态有关，而与年龄、性别、及分型无关。t 、b 两系，成人及儿童之间预后差 异还可能与其它因素参与有关，也可能与样本的抽样误差有关，有待进一步研究。 x i a p 高表达及x a f l 的异常低表达或不表达，可能是a l l 患者预后不良的 高危因素之一；x i a p x a f l 比值在a l l 患者中明显高于对照组( p o 0 5 ) ，而在 缓解时有所下降但仍高于对照组( p o 0 5 ) ，也说明了在a l l 时x i a p 及x a f l 表达水平的不平衡，白血病细胞有存活优势，可能是a l l 预后不良及复发的一项 重要因素之一。 结论 a l l 患者x i a p 基因高表达。而x a f l 基因呈低表达或不表达，提示x i a p 可 能通过抑制白血病细胞凋亡参与了a l l 的发生发展，与预后不良及对治疗反应差 相关。在a l l 时x i a p 及x a f l 表达水平的不平衡，可能是a l l 预后不良及复 发的一项重要因素之一。x i a p 与x a f l 共同参与了a l l 的疾病的形成和进展， 与年龄、性别及疾病分型无关。抑制x i a p 及上调x a f l 基因表达来治疗a l l ， 将为a l l 的基因治疗提供新思路。 本研究创新性的自我评价 在本研究中通过实时荧光定量p c r 技术( r q p c r ) ，检测在a l l 患者的骨 髓细胞中的x i a p 和x a f lm r n a 表达，比较分析了a l l 疾病各阶段及在临床治 疗前后的表达水平的差异，验证了二基因共同参与了a l l 的发生和发展，其表达 水平与年龄、性别、及疾病分型无关。并利用x i a p x a f l 比值验证了a l l 时同 样存在促凋亡基因与凋亡抑制基因的表达不平衡现象，可能是a l l 预后不良及复 发的一项重要因素之一。提示可以通过抑制x i a p 及上调x a f l 基因的表达治疗 剐也，为a l l 的基因治疗提供了新思路。 1 2 参考文献 ls h r i k h a n d es v ，k l e e f f j ，k a y e dh ，e t a 1 s i l e n c i n go f x - l i n k e di n h i b i t o ro f a p o p t o s i s ( x i a p ) d e c r e a s e sg e m c i t a b i n er e s i s t a n c eo f p a n c r e a t i cc a n c e rc e l l s j a n t i c a n c e rr e s ，2 0 0 6 ，2 6 ( 5 a ) ： 3 2 6 5 。 2l im ，s o n gt ，y i nz f ，e ta x i a pa sap r o g n o s t i cm a r k e ro fe a r l yr c c u t e n c eo f n o n m u s c u l a ri n v a s i v eb l a d d e rc a n c e r j c h i nm e dj ，2 0 0 7 ， 1 2 0 ( 6 ) ：4 6 9 3 张之南，沈悌血液病诊断及疗效标准【m 】3 版北京：科学出版社，2 0 0 7 ：1 3 2 4 李佩玲，杨帆，于海微x i a p 与肿瘤化疗耐药关系的研究进展【j 】国际遗传学杂志， 2 0 0 7 , 3 0 ( 1 ) ：6 1 - 6 3 5 n a g ic ，x i a oo q ，l ige ta 1 i m m u n o h i s t o c h e m i c a ld e t e c t i o no fx l i n k e di n h i b i t o ro f a p o p t o s i s i nh e a da n d n e 虻k s q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a 忉a n nd i a g np a t h o l , 2 0 0 7 ，1 1 ( 回：4 0 2 - 4 0 6 6b u r s t e i nd e ，i d r e e sm t ，l ige ta 1 i m m u n o h i s t o c h e m i c a l d e t e c t i o no ft h ex - l i n k e di n h i b i t o r o fa p o p t o s i sp r o t e i n ( x l a p ) i nc e r v i c a ls q u a m o u si n t r a e p i t h e l i a ln e o p l a s i aa n ds q u a m o u s c a r c i n o m a 阴a n nd i a g np a t h o l2 0 0 8 ，12 ( 2 ) ：8 5 - 8 9 7w um ，o r t al g i lj ，e ta 1 i m m u n o h i s t o c h e m i c a ld e t e c t i o n o fx i a pa n dp 6 3i na d e n o m a t o u s h y p e r p l a s i a , a t y p i c a l a d e n o m a t o u s h y p e r p l a s i a , b r o n c h i o l o a l v e o l a rc a r c i n o m aa n d w e l l d i f f e r e n t i a t e da d e n o c a r c i n o m a 【j 】m o dp a t h o l ，2 0 0 8 ，21 ( 5 ) ：5 5 3 5 5 8 8h a n n u n y a a p o p t o s i sa n d t h ed i l e m m ao f c a n c e rc h e m o t h e r a p y j b l o o d ，1 9 9 7 ，8 9 ( 6 ) ： 1 8 4 5 1 8 5 3 9 张丽娜，魏旭东，李玉富，等x 染色体相关凋亡抑制蛋白在8 6 例急性白血病中的表达叨 肿瘤学杂志，2 0 0 9 ，1 5 ( 2 ) ：1 2 0 1 2 2 1 0 f o n gw a , l i s t o np ，r a j c a n s e p a r o v i ce ，e ta e x p r e s s i o na n dg e n e t i ca n a l y s i so f x i a p - a s s o c i a t e df a c t o r1 ( x a f l ) i nc a n c e rc e l ll i n e s j g e n o m i c s ，2 0 0 0 ，7 0 ( 1 ) ：113 - 12 2 1 l 11s a k e m ir ，y a n oh ，o g a s a w a r as ，e ta 1 x l i n k e di n h i b i t o ro fa p o p t o s i s ( x i a p ) a n d x i a p - a s u ) c i a t e df a c t o r - i e x p r e s s i o n sa n dt h e i rr e l a t i o n s h i p t o a p o p t o s i si n h u m a n h e p a t o c e l l u a rc a r c i n o m aa n dl l o n c a n c e r o u sl i v e rt i s s u e s o n c o lr e p ，2 0 0 7 18 ：6 5 - 7 0 1 2 b y u nd s ，c h okr y ub k e ta 1 h y p e r m e t h y l a t i o no fx i a p a s s o c i a t e df a c t o rl ，ap u t a t i v e t u m o rs u p p r e s s o rg e n ef r o m t h e1 7 p 1 3 2l o c u s ，i nh u m a ng a s t r i ca d e n o c a r c i n o m a s 【j 】c a n c e r r e s , 2 0 0 3 ，6 3 ( 21 ) ：7 0 6 8 - 7 0 7 5 综述 x 染色体连锁凋亡抑制蛋白x i a p 及其相关因子x a f l 的研究现状及进展 摘要x 染色体连锁凋亡抑制蛋白( x i a p ) 是效力最强的内源性凋亡抑制蛋 白，众多研究结果表明x i a p 在多数癌细胞系中表达显著增高，通过c a s p a s e 凋亡 途经及参与其它途径来抑制凋亡。x i a p 相关因子1 ( x ma s s o c i a t e df a c t o r l ， x a f l ) 为x i a p 负向调节因子，可直接结合x i a p 并拮抗其对c a s p a s e 3 凋亡的抑制 作用，x a f l 在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失。x a f l 的基因沉默 与其启动子高甲基化明显相关。x a f l 过度表达可诱导凋亡，抑制肿瘤生长。因 此，x a f l 是一个新的肿瘤抑制基因，有可能成为肿瘤治疗的新靶向基因。x i a p 在白血病的发生及耐药中具有重要作用，而且可能与白血病的预后有关，以x i a p 为靶分子有希望为白血病的治疗及耐药逆转提供一条新的途径。目前针对x i a p 的反义核酸和a p 小分子抑制剂已经进入临床和临床前实验阶段，同时人们正尝 试通过a p 特异的s i r n a ( s m a l li n t e r f e r i n gr n a ) 等其他手段来治疗肿瘤。 关键词x i a p ；x a f l ：凋亡；进展；现状 引言 凋亡( a p o p t o s i s ) 也称程序化细胞死亡( p r o g r a m m e dc e l ld e a t h ) ，是一种高控制 性、细胞生理性死亡过程，对机体发育、内环境稳定和免疫防御起重要作用。 细胞凋亡的紊乱与肿瘤的发生、发展有着密切关系，具有重要的生理和病理 意义。凋亡异常，则会导致机体发生免疫系统疾病和或肿瘤【l 】。细胞凋亡受到 多种因素的调控，凋亡的主要执行者是一组半胱氨酸蛋白酶( c a s p a s e ) 。目前在哺 乳动物中已发现1 4 种c a s p a s e ，在细胞凋亡中具有重要作用。c 唧a s e 分为启动酶和效 应酶。启动酶包括c 硒p a s e 2 、8 、9 、1 0 ，效应酶包括c a s p a s e 3 、6 、7 ，效应酶执行 凋亡的功能。c a s p a s e 均以前体的形式合成和表达，其中c 缎p a s e 3 是凋亡的真正执 行者，通过级联的蛋白水解被激活。 1 4 研究中发现一类具有明显抑制细胞凋亡作用的蛋白因子，被称为凋亡抑制蛋 白家族( i n h i b i t o ro fa p o p t o s i sp r o t e i n s ，l a p s ) 【2 】。具有抑制细胞凋亡作用，目 前发现人类的凋亡基因有8 个成员b i r c l b i r c 8 ，编码的一组结构相关的蛋白， 分别是h i a p 1 c l a p 1 ，h i a p 2 c i a p 2 、x i a p 、m l i a p l i v i n k i a p 、s u r v i v i n ( 生 存蛋白) 、i l p 2 t s l a p 、n i a p ( n e u r o n a la p o p t o s i si n h i b i t o r yp r o t e i n ) 、b r u c e ( b i r 咧c 0 n t a i n i n gu b i q u i t i n - e o n j u g a t i n ge n z y m e ) a p o