（内科学专业论文）notch14及jagged1在肝细胞肝癌组织的表达.pdf

jj 11 中文 英文 研究 材料与方法8 结果1 0 附图1 4 附表1 9 讨论3 3 结论3 8 参考文献3 9 综述n o t c h 信号通路在肝细胞肝癌的研究现状；4 5 致谢5 8 个人简历5 9 中文摘要 n o t c h l 4 及j a g g e d l 在肝细胞肝癌组织的表达 摘要 目的：n o t c h 信号通路是一个在进化中高度保守的反映细胞间通讯机 制的通路，它调控细胞的增殖、分化和凋亡，在胚胎发育和细胞命运的决 定中发挥重要作用。n o t c h 信号通路在不同组织细胞中作用不同，甚至在 同一组织细胞的不同发展阶段作用也不同，这种生理作用依赖于细胞所处 的环境。n o t c h 信号不仅对正常细胞分化起重要作用，在肿瘤的形成中所 起的重要作用已成为近年来研究的热点问题，但n o t c h 信号在肝癌形成过 程的机制，目前尚不十分清楚。本实验研究n o t c h 信号配体分子n o t c h l 4 和j a g g e d l 在肝细胞癌、癌旁硬化肝组织及正常肝组织中的表达特点，并 分析其与肝癌临床病理学参数的相关性，探讨这五种蛋白间的相关性。 方法：1 研究对象：5 0 例肝细胞癌癌组织、相对应5 0 例癌旁硬化肝 组织及1 2 例肝血管瘤周边正常肝组织均来自河北医科大学第四医院肝胆 外科2 0 0 8 年5 月- 2 0 0 9 年4 月手术切除标本。所有组织类型均经河北医 科大学第四医院病理科确诊。所有患者术前均未进行任何形式的治疗。 2 研究方法：组织切除后经1 0 中性甲醛固定后石蜡包埋备用。应用 免疫组织化学技术检测n o t c h l 、n o t c h 2 、n o t c h 3 、n o t c h 4 及j a g g e d l 在肝 细胞癌癌组织、癌旁硬化肝组织及正常肝组织中的表达情况，分析染色强 度在这三种肝组织的表达差异及其在临床病理学参数不同分组之间的差 别。 结果：l 免疫组化结果显示所检测的n o t c h l 分子在各组肝组织均有 表达，n o t c h l 表现为细胞浆黄染。n o t c h l 在肝癌组织的表达显著高于癌 旁硬化肝组织和正常肝组织( z r _ 4 0 0 4 ，p = - 0 0 0 0 和z r - 3 3 5 5 ，p = - 0 0 0 1 ) ， 癌旁硬化肝组织表达和正常肝组织表达无统计学差异。n o t c h l 在肝癌组 织的表达与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、a f p 、h b s a g 、h b e a g 阴阳性、肿瘤包膜是否完整、瘤栓有无均无关；在肝癌病理分级高分化的 癌组织中n o t c h l 的表达强于低分化者( x 2 = 6 9 3 8 ，p = - 0 0 31 ；严0 3 7 6 ， p = - 0 0 0 7 ) ；而n o t c h l 的表达与肝癌临床分期无关。 2n o t c h 2 在各组肝组织均有表达，表现为细胞浆黄染。n o t c h 2 在肝 中文摘要 癌组织、癌旁硬化肝组织、正常肝组织，这三者之间的表达无统计学差异。 n o t c h 2 在肝癌组织的表达与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、a f p 、 h b s a g 、h b e a g 阴阳性、肿瘤包膜是否完整、瘤栓有无、肝癌临床分期 及病理分级均无关。 3n o t c h 3 在各组肝组织均有表达，表现为细胞浆黄染。n o t c h 3 在肝 癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组织( z 兰2 5 5 1 ， p - - 0 0 11 和z - 2 4 3 6 ，p = - 0 0 1 5 ) ，在癌旁硬化肝组织表达和正常肝组织表 达无统计学差异。n o t c h 3 在肝癌组织的表达与患者性别、年龄、癌灶数 目、肿瘤大小、a f p 、h b s a g 、h b e a g 阴阳性、肿瘤包膜是否完整、瘤 栓有无均无关；在肝癌临床分期较晚的癌组织n o t c h 3 的表达强于分期较 早者( z e = 1 0 8 7 2 ，p = 0 0 2 8 ；r = 0 3 5 9 ，p = 0 0 1 0 ) ；而n o t c h 3 的表达程度与 肝癌病理分级无关。 4n o t c h 4 在各组肝组织均有表达，表现为细胞浆黄染。n 0 t c h 4 在肝 癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组织( z _ 2 9 0 6 ， p = - 0 0 0 4 和z 2 9 8 5 ，p = 0 0 0 3 ) ，癌旁硬化肝组织表达和正常肝组织表达 无统计学差异。n o t c h 4 在肝癌组织的表达与患者性别、年龄、癌灶数目、 肿瘤大小、a f p 、h b s a g 、h b e a g 阴阳性、肿瘤包膜是否完整、瘤栓有 无、肝癌临床分期及病理分级均无关。 5j a g g e d l 在各组肝组织均有表达，表现为细胞浆黄染。j a g g e d l 在肝 癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组织( z _ - 2 7 4 7 ， p = - 0 0 0 6 和z | - 2 2 4 9 ，p = - 0 0 2 5 ) ，癌旁硬化肝组织表达和正常肝组织表达 无统计学差异。j a g g e d l 在肝癌组织的表达与患者性别、年龄、癌灶数目、 肿瘤大小、a f p 、h b s a g 、h b e a g 阴阳性、肿瘤包膜是否完整、瘤栓有 无、肝癌临床分期及病理分级均无关。 6 肝癌组织中n o t c h l 、n o t c h 2 、n o t c h 3 、n o t c h 4 与j a g g e d l 表达情况 的相关性：肝癌组织中n o t c h l 与n o t c h 2 的表达无相关性( 产0 0 0 3 ， p - - - - o 9 8 1 ) ，与n o t c h 3 的表达无相关性( 尸o 1 6 6 ，p - - - 0 2 4 9 ) 与n o t c h 4 的 表达无相关性( r - - 0 1 8 4 ，p = - 0 2 0 0 ) ，与j a g g e d l 的表达无相关性( r - - - - 0 2 4 8 ， p = 0 0 8 2 ) ，n o t c h 2 与n o t c h 3 的表达无相关性( 产0 0 5 4 ，p = 0 7 0 9 ) ，与 n o t c h 4 的表达无相关性( 间1 3 7 ，p = 0 3 4 4 ) 与j a g g e d l 的表达无相关性 ( r - - - 0 1 4 4 ，p - - 0 3 1 7 ) ，n o t c h 3 与n o t c h 4 的表达无相关性( 间1 3 8 ， 中文摘要 p = 0 3 3 9 ) ，与j a g g e d l 的表达无相关性( 产o 1 6 6 ，p = 0 2 4 9 ) ，n o t c h 4 与 j a g g e d l 的表达无相关性( 严o 2 4 5 ，p = 0 0 8 6 ) 结论：1n o t c h l 、n o t c h 3 、n o t c h 4 及j a g g e d l 在肝细胞肝癌组织中的 表达较癌旁硬化肝组织和正常肝组织升高，而在癌旁硬化肝组织和正常肝 组织的表达无显著性差异。 2n o t c h l 在肝癌病理分级高分化的癌组织中的表达较低分化者升高； n o t c h 3 在肝癌临床分期较晚的癌组织的表达较分期较早者升高，提示 n o t c h 信号通路的异常激活可能与肝癌的发生发展有关。 关键词：肝细胞癌；n o t c h l ；n o t c h 2 ；n o t c h 3 n o t c h 4 ；j a g g e d l 英文摘要 e x p r e s s i o no fn o t c h l - 4a n dj a g g e d l i nh u m a n h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a a b s t r a c t o b j e c t i v e ：n o t c hs i g n a l i n gp a t h w a yi sa ne v o l u t i o n a r i l yh i g h l yc o n s e r v - e dm e c h a n i s mf o rc e l l c e l lc o m m u n i c a t i o n ，w h i c hc o n t r o l sc e l lp r o l i f e r a t i o n ， d i f f e r e n t i a t i o n ，a p o p t o s i s ，a n dp l a y sa l li m p o r t a n tr o l e i ne m b r y o g e n e s i sa n d m a n yt y p e so fc e l lf a t ed e t e r m i n a t i o n n o t c hs i g n a l i n gp a t h w a yh a sd i f f e r e n t f u n c t i o ni nd i f f e r e n tt i s s u ec e l l sa n dh a sd i f f e r e n tf u n c t i o na td i s t i n c ts t a g e so f t h es a m et i s s u ec e l l s t h eb i o l o g i c a lf u n c t i o no ft h i sp a t h w a yi s c r i t i c a l l y c o n t e x td e p e n d e n t r e p o r t sh a ds h o w e dt h a tn o t c hs i g n a l i n gp a t h w a yi sn o t o n l yi n v o l v e di nt h ed e v e l o p m e n to fn o r m a lc e l l sb u ta l s oi nc a n c e l c e l l s u n t i l n o w , t h er o l eo fn o t c hs i g n a l i n gi nh c ca n di t su n d e r l y i n gm e c h a n i s ma r es t i l l u n k n o w n t oi n v e s t i g a t et h ee x p r e s s i o no fn o t c h1 - 4a n dj a g g e dli nh u m a n h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a ( h c c ) ，a d j a c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i c t i s s u ea n dn o r m a lh e p a t i c t i s s u e ，w ea n a l y z e dt h ea s s o c i a t i o n o ft h e i r e x p r e s s i o nw i t hc l i n i c o p a t h o l o g i c a lp a r a m e t e r sa n dt h ec o r r e l a t i o na m o n g n o t c h l - 4a n dj a g g e d l m e t h o d s ：1s a m p l e sc o l l e c t i o nf o l l o wu p ：5 0s p e c i m e n so fh c c ，5 0 s p e c i m e n so fa d ja c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n d12s p e c i m e n s o fn o r m a lh e p a t i ct i s s u ew e r eo b t a i n e df r o mt h ef o u r t hh o s p i t a lo fh e b e i m e d i c a lu n i v e r s i t y , w h i c hw e r en o tt r e a t e db e f o r eo p e r a t i o n 2i m u n o s t a i n i n g ：t h es a m p l e sw e r ef i x e db y10 f o r m a l d e h y d e ，e m b e d e d i np a r a f f i na r e re x c i s i o n i m m u n o h i s t c h e m i c a ls t a i n i n gw a su s e dt om e a s u r e n o t c h l - - 4a n dj a g g e d li nh c ct i s s u e sa n da d j a c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i c h e p a t i ct i s s u e sa n d n o r m a lh e p a t i ct i s s u e s ，t h ed i f f e r e n c e so fc l i n i c o p a t h o l o g i c a lg r o u p sf o ri m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n gw e r ea n a l y z e db ys t a t i s t i c a l m e t h o d s r e s l u t s ：1n o t c h lw a s e x p r e s s e d i nh c c t i s s u e s ，a d j a c e n tn o n c a n c e r - o u sc i r r h o t i c h e p a t i ct i s s u e s ，a n d n o r m a l h e p a t i ct i s s u e s ，w h i c hm o s t l y 4 英文摘要 e x p r e s s e di nc y t o p l a s m n o t c h le x p r e s s i o ni nh c ct i s s u ew a sm u c hs t r o n g e r t h a nt h a ti na d ja c e n tn o n - c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di nn o r m a l h e p a t i ct i s s u e ( z = - 4 0 0 4 户0 0 0 0a n dz r - - 3 3 5 5 产0 o o1 ) ，t h e r e w a sn o s t a t i s t i c a ld i f f e r e n c ee x i s t e db e t w e e ni n a d ja c e n t n o n c a n c e r o u sc i r r h o t i c h e p a t i ct i s s u ea n di nn o r m a lh e p a t i ct i s s u e n o t c h le x p r e s s i o nw a ss i g n i f i c a n t s t r o n g e ri nb e t t e r d i f f e r e n t i a t i o nt h a nt h a ti np o o r e rd i f f e r e n t i a t i o no fh c c t i s s u e s = 6 9 3 8 产0 0 3l ，产- 0 3 7 6 户0 0 0 7 ) n o t c hle x p r e s s i o n i nh c c t i s s u e sh a ds h o w e dn od i f f e r e n c ei nd i f f e r e n tc l i n i c a l s t a g e t h e n o t c hl e x p r e s s i o nh a dn od i f f e r e n c er e f e r e dt os e x ，a g e ，t h en u m b e ro ft u m o rf o c i ，s i z e o ft u m o r , a f p , h b s a g ，h b e a g ，t h ei n t e g r i t yo ft h et u m o r se n v e l o p ea n dt h e p o r t a lv e i nt u m o r t h r o m b o s i si nh c ct i s s u e sb a s e do no u rs t a t i s t i c a la n a l y s i s 2n o t c h 2w a se x p r e s s e di nh c ct i s s u e s ，a d ja c e n tn o n c a n c e r o u s c i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u e sa n dn o r m a lh e p a t i ct i s s u e s ，w h i c hm o s t l ye x p r e s s e di n c y t o p l a s m n o t c h 2e x p r e s s i o nh a d n os t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e a m o n gh c c t i s s u e ，a d j a c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n dn o r m a lh e p a t i c t i s s u e t h en o t c h 2 e x p r e s s i o nh a dn od i f f e r e n c e r e f e r e dt o s e x ，a g e ，t h e n u m b e ro ft u m o rf o c i ，s i z eo ft u m o r , a f p , h b s a g ，h b e a g ，t h ei n t e g r i t yo ft h e t u m o r s e n v e l o p e ，t h ep o r t a l v e i nt u m o r t h r o m b o s i s ，c l i n i c a ls t a g e ，t h e p a t h o l o g i c a lc l a s s i f i c a t i o ni nh c c b a s e do no u rs t a t i s t i c a la n a l y s i s 3n o t c h 3w a se x p r e s s e di nh c c t i s s u e s ，a d ja c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i c h e p a t i c t i s s u e sa n dn o r m a l h e p a t i ct i s s u e s ，w h i c hm o s t l ye x p r e s s e d i n c y t o p l a s m n o t c h 3e x p r e s s i o ni nh c ct i s s u ew a sm u c hs t r o n g e rt h a nt h a ti n a d j a c e n tn o n - c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di nn o r m a lh e p a t i ct i s s u e ( z ，_ 一2 5 51 产0 01la n dz r _ 一2 4 3 6 ，p = - 0 0l5 ) ，t h e r ew a sn os t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e e x i s t e db e t w e e ni na d ja c e n tn o n - c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di n n o r m a lh e p a t i ct i s s u e n o t c h 3 e x p r e s s i o nw a ss i g n i f i c a n ts t r o n g e ri n l a t e r c l i n i c a ls t a g eo fh c ct h a ne a r l i e rs t a g eo fh c c ( 矿= i o 8 7 2 , p = 0 0 2 8 ，r = 0 3 5 9 ， 芦o 0 1 0 ) ，n o t c h 3e x p r e s s i o ns h o w e dn od i f f e r e n c ei nd i f f e r e n tp a t h o l o g i c a l c l a s s i f i c a t i o no fh c c t h en o t c h 3e x p r e s s i o nh a dn od i f f e r e n c er e f e r e dt o s e x ，a g e ，t h e n u m b e ro ft u m o rf o c i ，s i z eo ft u m o r , a f p , h b s a g ，h b e a g ，t h e i n t e g r i t yo ft h et u m o r se n v e l o p ea n dt h ep o r t a lv e i nt u m o rt h r o m b o s i si nh c c 5 英文摘要 b a s e do no u rs t a t i s t i c a la n a l y s i s 4n o t c h 4w a se x p r e s s e d i nh c ct i s s u e s ，a d j a c e n tn o n c a n c e r o u s c i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u e sa n dn o r m a lh e p a t i ct i s s u e s ，w h i c hm o s t l ye x p r e s s e di n c y t o p l a s m n o t c h 4e x p r e s s i o ni nh c c t i s s u ew a sm u c hs t r o n g e rt h a nt h a ti n a d ja c e n tn o n - c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di nn o r m a lh e p a t i ct i s s u e ( z | - 一2 9 0 6 ，p = - 0 0 0 4a n dz r - 一2 9 8 5 产0 0 0 3 ) ，t h e r ew a sn os t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e e x i s t e db e t w e e ni na d ja c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di n n o r m a lh e p a t i ct i s s u e t h en o t c h 4e x p r e s s i o nh a dn od i f f e r e n c er e f e r e dt o s e x ，a g e ，t h e n u m b e ro ft u m o rf o c i ，s i z eo ft u m o r , a f p , h b s a g ，h b e a g ，t h e i n t e g r i t yo ft h et u m o r se n v e l o p e ，t h ep o r t a lv e i nt u m o rt h r o m b o s i s ，c l i n i c a l s t a g e , t h ep a t h o l o g i c a lc l a s s i f i c a t i o ni nh c c b a s e do no u rs t a t i s t i c a la n a l y s i s 5j a g g e dlw a se x p r e s s e d i nh c ct i s s u e s ，a d ja c e n tn o n c a n c e r o u s c i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u e sa n dn o r m a lh e p a t i ct i s s u e s ，w h i c hm o s t l ye x p r e s s e di n c y t o p l a s m j a g g e d l e x p r e s s i o ni nh c c t i s s u ew a sm u c hs t r o n g e rt h a nt h a ti n a d ja c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di nn o r m a lh e p a t i ct i s s u e ( z 三一2 7 4 7 产0 0 0 6a n dz ，_ 一2 2 4 9 产0 0 2 5 ) ，t h e r ew a sn os t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e e x i s t e db e t w e e ni na d ja c e n tn o n - c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di n n o r m a lh e p a t i ct i s s u e t h ej a g g e dl e x p r e s s i o nh a dn od i f f e r e n c er e f e r e dt o s e x ，a g e ，t h e n u m b e ro ft u m o rf o c i ，s i z eo ft u m o r , a f p , h b s a g ，h b e a g ，t h e i n t e g r i t yo ft h et u m o r se n v e l o p e ，t h ep o r t a lv e i nt u m o rt h r o m b o s i s ，c l i n i c a l s t a g e ，t h ep a t h o l o g i c a lc l a s s i f i c a t i o ni nh c c b a s e do no u rs t a t i s t i c a la n a l y s i s 6t h ec o r r e l a t i o nb e t w e e nn o t c h l ，n o t c h 2 ，n o t c h 3 ，n o t c h 4a n dj a g g e dl e x p r e s s i o n i nh c c ：n o t c hl e x p r e s s i o n h a dn oc o r r e l a t i o nw i t hn o t c h 2 e x p r e s s i o nl e v e li nh c c ( r = - 0 0 0 3 , p - - 0 9 8i ) ，n o t c h le x p r e s s i o nl e v e lh a dn o c o r r e l a t i o nw i t hn o t c h 3 e x p r e s s i o n i n h c c ( r = o 16 6 产0 2 4 9 ) ，n o t c hl e x p r e s s i o nh a dn oc o r r e l a t i o nw i t hn o t c h 4e x p r e s s i o nl e v e l i nh c c ( r - - o 18 4 ，p - - 0 2 0 0 ) ，n o t c h l e x p r e s s i o nh a dn o c o r r e l a t i o nw i t h j a g g e d l e x p r e s s i o ni nh c c ( r = 一0 2 4 8 产0 0 8 2 ) ，n o t h 2e x p r e s s i o nh a dn oc o r r e l a t i o n w i t hn o t c h 3e x p r e s s i o ni nh c c ( 产一0 0 5 4 ，p = - 0 7 0 9 ) ，n o t c h 2e x p r e s s i o nh a d n oc o r r e l a t i o nw i t hn o t c h 4e x p r e s s i o ni nh c c ( 间1 3 7 , p = 0 3 4 4 ) , n o t c h 2 e x p r e s s i o nh a dn oc o r r e l a t i o nw i t hj a g g e d le x p r e s s i o n i nh c c ( r - - - 0 1 4 4 ， 6 英文摘要 卢o 317 ) ，n o t h 3e x p r e s s i o n a ll e v e lh a dn oc o r r e l a t i o nw i t hn o t c h 4e x p r e s s i o n i nh c c ( r = 0 1 3 8 产o 3 3 9 ) ，n o t h 3e x p r e s s i o nh a dn oc o r r e l a t i o nw i t hj a g g e d l e x p r e s s i o ni nh c c ( 瑚16 6 ，= o 2 4 9 ) ，n o t h c 4e x p r e s s i o nh a dn oc o r r e l a t i o n w i t hj a g g e dle x p r e s s i o ni nh c c ( 严o 2 4 5 ，p = - 0 0 8 6 ) c o n c l u s i o n s ：1n o t c h l ，n o t c h 3 ，n o t c h 4a n dj a g g e dle x p r e s s i o nl e v e li n h c ct i s s u ew a sm u c hh i g h e rt h a nt h a ti na d j a c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i c h e p a t i ct i s s u ea n di nn o r m a lh e p a t i ct i s s u e ，b u th a dn os t a t i s t i c a ld if f e r e n c e e x i s t e db e t w e e ni n a d ja c e n tn o n c a n c e r o u sc i r r h o t i ch e p a t i ct i s s u ea n di n n o r m a lh e p a t i ct i s s u e 2n o t c hl e x p r e s s i o n l e v e lw a s s i g n i f i c a n t l yh i g h e r i n b e t t e r d i f f e r e n t i a t i o nt h a np o o r e rd i f f e r e n t i a t i o no fh c ct i s s u e s ，n o t c h 3e x p r e s s i o n l e v e lw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e ri nl a t e rc l i n i c a l s t a g eo fh c ct h a ne a r l i e r s t a g e ，w h i c hs h o w e dt h a tt h ea b n o r m a la c t i v i t i o no fn o t c hs i g n a l i n gp a t h w a y m i g h tt a k ee f f e c t so nt h ep r o g r e s so fh c c k e yw o r d s ：h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a ( h c c ) ；n o t c h 1 ；n o t c h 2 ；n o t c h 3 ； n o t c h 4 ；j a g g e dl 7 研究论文 n o t c h l 4 及j a g g e d l 在肝细胞肝癌组织的表达 - ! 釜 刖瞢 肝细胞肝癌( h e p a t o c e l l u a rc a r c i n o m a ，h c c ) 是肝细胞发生的癌，简 称肝癌，占原发性肝癌( p r i m a r yh e p a t i cc a r c i n o m a ，p h c ) 的8 0 9 0 ， 是最常见的、恶性程度最高的肿瘤之一，大部分病人确诊时已属晚期，且 肝癌对放化疗均不敏感，因此患者的预后很差，这就迫切要求我们进一步 研究肝癌发生、发展的机制，对肝癌患者早发现、早诊断、早治疗尤为重 煎 j 写o 细胞内各种信号转导途径互相作用，形成复杂的信号途径网络，精密 调节各种生理过程。因此，细胞信号转导通路中任何组分的改变都会导致 细胞增殖、凋亡的失控，发生癌变。其中n o t c h 信号通路与细胞的分化、 增殖、凋亡、黏附及表皮细胞向间充质细胞的转化有密切联系，在不同的 细胞类型中，n o t c h 信号可促进或抑制细胞增殖、分化和凋亡，在不同组 织细胞中作用不同，甚至在同一组织细胞的不同发展阶段作用也不同， n o t c h 信号不仅对正常细胞分化起重要作用，在肿瘤的形成中所起的重要 作用已成为近年来研究的热点问题，已有大量研究表明，n o t c h 信号通路 在肝脏疾病的发展中起到重要作用。有研究发现大鼠肝癌前病变中n o t c h 信号系统被异常激活，但n o t c h 信号通路在肝癌发生发展中的具体作用机 制尚不清楚，因此，本实验观察肝癌患者肝癌组织、癌旁硬化肝组织及肝 血管瘤周边正常肝组织n o t c h l 4 及j a g g e d l 的表达，探讨各指标之间的相 互关系及临床意义，为肝癌的早期发现、早期诊断、个体化治疗方案的建 立及评价预后提供新的指导依据。 材料与方法 1 分级、分期标准与标本 1 1 对肝细胞癌组织进行病理分级 分级标准：e d m o n d s o n ( 1 9 5 4 ) 依据肿瘤细胞的不同分化，将肝癌分 为4 级【l 】：i 、i i 、i 、级。 研究论文 通常把e d m o n d s o n4 级分法归纳为3 个等级：高分化( i 级) 、中分 化( i i 、i i i 级) 、低分化( i v 级) 。i 、级较少见，i i 、i i i 级较多见。多 数肝癌只表现一种分化，但有些病例，在同一肿瘤的不同区域可有多种分 化。 1 2 对肝细胞癌组织进行临床分期 临床分期标准：2 0 0 1 年9 月中国抗癌协会肝癌专业委员会提出ia 、 ib 、i ia 、i ib 、i i i a 、i i i b 期的“原发性肝癌临床诊断与分期标准【2 】。 1 3 标本来源、处理及相关临床资料 1 3 15 0 例原发性肝细胞癌组织、5 0 例癌旁硬化肝组织及1 2 例肝血管瘤 周边正常肝组织( 作为对照) 均来自河北医科大学第四医院肝胆外科2 0 0 8 年5 月- 2 0 0 9 年5 月手术切除标本。肝细胞肝癌组织取白手术中切取的， 临近包膜部位的，生长活跃的肿瘤组织；癌旁硬化组织为肿瘤周边2 c m 以外的无癌硬化组织；正常组织取自手术中切取的肝血管瘤周边2 c m 外 的无瘤正常肝组织。标本取出后，立即投入中性福尔马林中固定，梯度乙 醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋，连续切片4 9 m 厚，以备染色。所 有组织类型均经河北医科大学第四医院病理科确诊。所有患者术前均未进 行任何形式的治疗。 1 3 2 本实验5 0 例肝细胞癌患者临床资料如下t ( 1 ) 男性4 l 例，女性9 例；( 2 ) 年龄大于或等于5 0 岁者3 3 例，年龄小于5 0 岁者1 7 例；( 3 ) 肿 瘤小于5 c m 者1 4 例，肿瘤大于或等于5 c m 者3 6 例：( 4 ) 单个癌灶者3 9 例，癌灶大于或等于2 个者1l 例；( 5 ) 伴门脉瘤栓者7 例，不伴门脉瘤 栓者4 3 例；( 6 ) a f p 小于4 0 0 “g l 者2 4 例，a f p 大于或等于4 0 0 1 x g l 者 2 6 例；( 7 ) h b s a g 阴性者9 例，h b s a g 阳性者4 l 例；h b e a g 阴性者4 2 例，h b e a g 阳性者8 例；( 8 ) 包膜完整者2 6 例，包膜不完整者2 4 例；( 9 ) 病理分级高分化者9 例，中分化者2 5 例，低分化者1 6 例；( 1 0 ) ia 期 者3 例、ib 期者1 1 例、i ia 期者18 例、i ib 期者1 6 例、i i i a 期者2 例， 无i i i b 期者； 2 试验方法 2 1 主要试剂及来源 n o t c h l 、j a g g e d l 羊抗人多克隆抗体、n o t c h 2 、n o t c h 3 、n o t c h 4 兔抗 人多克隆抗体均购于s a n t ac r u z 公司，p v 法免疫组化检测试剂盒购 研究论文 于上海基因公司。 2 2 免疫组织化学法步骤 p v 法：石蜡切片常规脱蜡，3 h 2 0 2 甲醇溶液室温下3 0 m i n 以阻断 内源性过氧化物酶，p b s 洗涤5 m i n x 2 遍后，分别加入n o t c h l 、n o t c h 2 、 n o t c h 3 、n o t c h 4 、j a g g e d l 抗体，4 孵育过夜，此后步骤及显色按二步法 试剂盒说明进行，苏木素复染，常规乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封 片保存。以不加一抗作为阴性对照，以p b s 代替一抗作为空白对照。抗 体稀释度分别为：n o t c h l 、n o t c h 3 、n o t c h 4 及j a g g e d l 抗体均为l ：5 0 0 ， n o t c h 2 抗体为l ：2 0 0 。 3 结果判定 由两位病理学医师在不知临床病理资料的情况下对免疫组化的结果 进行评估，评价参照文献