（农药学专业论文）几种杀菌剂与iba混配对烟草青枯病的控制作用研究.pdf

m a s t e rd i s s e r t a t i o n s t u d y o nt h ee f f e c t so fs e v e r a lb a c t e r i c i d e s a n di b a b l e b d i n ga g a i n s t t o b a c c o b a c t e r i a lw i l t m a j o r ：p e s t i c i d es c i e n c e f i e l d ：n a t u r a lp r o d u c t sp e s t i c i d e s u p e r v i s o r ：p r o f d i n gw e e r v l s o r ：r om gw e l 。 m a s t e rc a n d i d a t e ：d ug e n - p i n g s o u t h w e s tu n i v e r s i t y , c h o n g q i n g ，p r c h i n a m a r c h ，2 0 1 1 h 独创性声明 一_ 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加 了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同 仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ， ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：醉保密， 口保密期限至年月止) 。 学位论文作槲：彳币q 导懒： 签字日期：山t7 年为 日 签字日期：细r 年6 月岁日 夕 3 小结与讨论2 0 第三章农用硫酸链霉素与乙蒜素的联合毒力测定2 l l 材料与方法j 2 l 1 1 供试材料。21 1 2 试验方法二2 2 2 结果与分析2 3 2 1 各单剂室内药效测定。2 3 2 2 农用硫酸链霉素与乙蒜素混配药效测定2 3 2 3i b a 、农用硫酸链霉素、乙蒜素三元混配药效测定2 4 3 小结与讨论：2 5 第四章三元复配杀菌颗粒剂的研制。2 7 1 材料与方法。2 7 1 1 试验药剂二2 7 1 2 试验仪器。2 7 1 3 方法2 7 2 结果与分析。2 9 2 1 粘结剂对颗粒剂造粒效果的影响：2 9 2 2 粘结剂不同用量对颗粒剂效果的影响。2 9 2 3 吸附剂用量对颗粒剂破碎率的影响3 0 2 4 最佳配方的确定3 0 2 5 颗粒剂质量指标的测定31 3 小结与讨论3 1 第五章农用硫酸链霉素、乙蒜素、i b a 混配及其颗粒剂对青枯病的室内药效测定3 3 l 材料与方法。3 3 1 1 供试药剂3 3 1 2 试验方法：3 5 1 3 调查内容与方法3 5 1 4 数据处理3 6 2 结果与分析3 6 2 1 不同药剂处理对烟草青枯病发病率的影响。3 6 2 2 不同药剂处理对烟草青枯病防治效果的比较3 6 3 小结与讨论3 7 第六章农用硫酸链霉素、乙蒜素、m a 混配及其颗粒剂对青枯病的田间药效3 9 1 材料与方法3 9 1 1 试验基本情况。3 9 1 2 供试品种。3 9 1 3 试验处理3 9 1 4 调查方法4 0 2 结果分析4 0 o l 不同处理对烟草青枯病病株率的影响。二：4 0 2 2 不同处理对烟草青枯病防治效果的影响4 2 i i 2 3 不同处理对烟草其他病害的影响4 3 2 4 不同处理对烟草农艺性状的影响4 5 3 小结与讨论4 6 第七章结论与讨论，4 9 1 主要结论4 9 ：! 讨论：4 9 2 1 不同药剂对烟草青枯菌室内活性测定。4 9 2 2 最佳配比的筛选4 9 2 3 复配颗粒剂的初步加工4 9 2 4 混配药剂、颗粒剂对青枯病的室内药效测定：5 0 2 5 混配药剂、颗粒剂对青枯病的田间试验5 0 2 6 对烟草青枯病防治的一些看法。5 1 参考文献5 3 致谢5 9 中文摘要 几种杀菌剂与i b a 混配对烟草 青枯病的控制作用研究 农药学硕士研究生杜根平 指导教师丁伟教授 中文摘要 由于烟草种植地块的连作，加之品种单一，导致烟草青枯病危害逐渐严重，严重影响了 烟叶生产的可持续发展。为有效控制烟草青枯病的发生危害，本项研究对重庆黔江区烟草青 枯病病株进行了采集、分离与鉴定；并对防控药剂进行了筛选；将筛选出的药剂与吲哚丁酸 ( i b a ) 进行复配；并研究了具有缓释性能的农用硫酸链霉素、乙蒜素、吲哚丁酸三元颗粒 剂；将复配配方及自制颗粒剂进行了室内盆栽试验及田间药效试验，主要结果如下： l 、将发病株分离到的青枯菌( r a l s t o n i as o l a n n a c e a r u m ) 进行培养扩繁，并保存在无菌 水中，并采用订c 平板法及离体叶片法鉴定青枯菌的致病性，结果表明所分离出的青枯菌具 较强的致病性。 2 、采用牛津杯法测定农用硫酸链霉素、乙蒜素、中生菌素、代森锰锌等药剂对青枯菌的 抑菌效果，通过抑菌圈、透明度、联合作用的筛选，筛选出农用硫酸链霉素、乙蒜素具有较 好的抑菌作用，经测定这两种药剂的e c 5 0 分别为8 5 1 0m g l 、4 2 2 3m g l ：将农用硫酸链霉 素、乙蒜素组成二元复配物，再用按比例混合法测定复配剂药效，同时确定复配组合对烟草 青枯菌的联合毒力，结果表明，在农用硫酸链霉素：乙蒜素l ：1 混配时的抑菌率最大，增效 3 2 】3 。 3 、选用农用硫酸链霉素与乙蒜素有效成份比为l 1 的配比，同时加入i b a 使其含量为 1 0m g k g ，用硅藻土为载体，白炭黑为吸附剂，尿素为分散剂，聚乙烯醇作为粘结剂，农用 硫酸链霉素7 ；乙蒜素7 ；白炭黑1 0 ；尿素5 ；粘结剂5 ；吲哚丁酸( m a ) 0 1 ； 硅藻土约6 6 ，通过优化工艺加工成具有缓释作用的颗粒剂。 a b s t r a c t s t u d y o ns e v e r a lb a c t e r i c i d e sa n di b a e f f e c to nt o b a c c ob a c t e r i a lw i l t m a s t e rc a n d i d a t e ：d ug e n - p i n g s u p e r v i s o r ：p r o f e s s o rd i n gw e i a b s t r a c t a sc o n t i n u o u sc r o p p i n go nt o b a c c og r o w i n gi n c r e a s e sy e a rb yy e a r , a d d i t i o n a l l ys p e c i e sb e i n g s i n g l e ，h a r m f u lb a c t e r i a lw i l to ft o b a c c og r o w s ，w h i c hc a u s e dt h eg e n e r a li n c i d e n c er a t eo f10 t o 3 0 o r7 0 t o8 0 w h e ns e r i o u s i n2 0 0 9 ，a p p r o x i m a t e l y4 8 9 8a c r e sh a db e e nd a m a g e db y t o b a c c ob a c t e r i a lw i i t , s oh a d5 ，14 5 ，3 0 0 蚝i no u t p u ta n d10 5 5 2 21m i l l i o ny u a ni no u t p u tv a l u e i n a p r i l2 0 1 0t oa u g u s t , a c c o r d i n gt ot h ec o l l e c t i o n , i s o l a t i o na n di d e n t i f i c a t i o no f t h et o b a c c oh a v i n g b e e ni n f e c t e db yt o b a c c ob a c t e r i a lw i l ti nq i a n j i a n gd i s t r i c to fc h o n g q i n g , t h eh a r d e s th i to f t o b a c c ow i i t , a n dt h ea n t i b a c t e r i a lt e s to l ls i n g l ed o s ea n dm i x t u r e so fp e s t i c i d e so nt o b a c c o b a c t e r i a lw i i t , t h em a i nr e s u l t sa r ea sf o l l o w s ： 1 p s e u d o m o n a s s o l a n a c e a r u m ( r a l s t o n i as o l a n n a c e a r u m ) i s o l a t i o n , c u l t u r e a n d i d e n t i f i c a t i o n c u l t u r et h ep s e u d o m o n a ss o l a n a c e a r u mi s o l a t e df r o mt h ed i s e a s es t r a i n st ot h e m u l t i p l i c a t i o no fp s e u d o m o n a ss o l a n a c e a r u m a n dk e e pi t i ns t e r i l ew a t e r t h e nu s e ”陀p l a t e m e t h o da n dl e a v e si nv i t r om e t h o dt oi d e n t i f yt h ep s e u d o m o n a ss o l a n a c e a r u m 童p a t h o g e n i c i t y t h e r e s u l t ss h o wt h a tt h ei s o l a t e dp s e u d o m o n a ss o l a n a c e a r u mi sw i t i ls t r o n gp a t h o g e n i c i t y 2 t h ei n d o o rv i r u l e n c eo fs i n g l ed o s ea n dm i x t u r e so fp e s t i c i d e st o w a r d sp s e u d o m o n a s s o l a n a e e a r u m u s e dt h eo x f o r dc u pm e t h o dt ot e s tt h eb a c t e r i o s t a t i ce f f i c a c yo fa g r o s t r e p t o m y c i n , e t h y l i c i n , z h o n g s h e n g m y c i n , m a n c o z e ba n do t h e r15a g e n t so l lt h ep s e u d o m o n a ss o l a n a c e a r u m a n dt h e nt h r o u g hs e l e c t i o no ft h ei n h i b i t i o nz o n ea n dt r a n s p a r e n c y , s c r e e nt h e p r o p e r a g r o s t r e p t o m y c i na n de t h y l i c i n s i m u l t a n e o u s l y , d e t e r m i n e dt h ee c 5 0o ft h e s et w oa g e n t s ，w h i c h w a s8 5 1 0m e d l ，4 2 2 3m g l ，r e s p e c t i v e l y b e s i d e s ，u s e dt h em i x i n gp r o p o r t i o nm e t h o dt o d e t e r m i n ee f f i c a c yo ft h em i x t u r e sm i x e db yt h ep r o p e ra g r o s t r e p t o m y c i na n de t h y l i c i n a tt h e 鬟b n l et i m ed e t e r m i n e dt h el a r g e s tt o b a c c ob a c t e r i a lw i l tv i r u l e n c eo ft h em i x t u r e s t h er e s u l t s m ( m a ) i r r i g a t i n gt r e a t m e n ts h o w st h eb e s tc o n t r o le f f e c to f8 2 8 6 ，w h i l e14 1 a g r o s t r e p t o m y e i n , e t h y l i c i na n di n d o l eb u t y r i ca c i d ( m a ) g r a n u l e sa t1 5g s t r a i ns h o wt h ec o n t r o le f f i c i e n c yo f 7 4 2 9 a n dt h e r ew a sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h ec o n t r o le f f e c to f1 5g s t r a i na n d1 0 g s t r a i nw h i c hc o n t r o le f f e c tw a s7 1 4 3 w i t ht h ei n c r e a s i n ga m o u n to fg r a n u l e s ，t h ec o n t r o l e f f e c t0 nt o b a c c ob a c t e r i a l w i l tg r a d u a l l yi n c r e a s e d w h a t sm o r e ，t h ec o n t r o le f f e c to f a g r o s t r e p t o m y c i n , e t h y l i c i na n di n d o l eb u t y r i ca c i d ( i b a ) i r r i g a t i n gt r e a t m e n tw a sb e t t e rt h a n i v v v i 第一章文献综述 曼曼曼曼鼍曼曼曼曼曼曼曼曼舅曼曼量皇量曼曼曼曼曼量曼量璺葛量璺曼量曼量量曼曼曼鼍曼曼皇曼毫曼曼曼鼍量皇量量量皇曼曼皇量鼍虽皇蔓皇量曼曼曼舅曼蔓曼曼曼曼鲁 第一章文献综述 烟草青枯病又称烟瘟、半边疯、格兰维尔萎蔫病( g r a n v i l l ew i t t ) ，是由足s o l a n n a c e a r w n 引起的细菌性土传病害，1 8 8 0 年首次发现于美国北卡罗来纳 n ( n o r t h c a r o l i n a ) j ，现在该病 广泛分布于的热带、亚热带和一些温暖的地区1 2 】。 在中国，烟草青枯病主要发生在长江流域及其以南烟区，其中广东、福建、四川及贵州 烟区危害严重，但是该病目前已经扩散至东北地区，陈瑞泰等报道对中国1 6 个烟草种植省、 市、自治区( 台湾省除外) 的调查显示，仅吉林省和黑龙江省暂无烟草青枯病的分布p j 。刘 勇等在2 0 0 4 年至2 0 0 6 年对云南省烟草青枯病的发生进行了调查，发现茎下部黑色坏死病株 8 6 3 感染青枯病，并对采集到2 5 8 个的烟草茎下部黑色坏死症状标本进行病原菌分离，分 离到青枯雷尔氏菌株2 1 9 个 4 1 。 烟草青枯病是典型的维管束细菌病害，植株感病属系统性侵染，防治十分困难。人们对 烟草青枯病的防治进行了大量的研究，并且也提出了一些措施，主要包括选种抗病品种、农 业措施、药剂防治以及生物防治。1 ) 选种抗病品种：可选用k 3 4 6 、r g i l 、g 1 4 0 、v a 7 0 7 、 “青梗”等具有一定抗病性的品种1 5 】；2 ) 农业措施：包括水旱轮作、撒施石灰调节土壤p h 值、平衡施肥适当增施磷钾肥、搞好田间卫生等措施1 6 ；3 ) 药剂防治：主要包括化学药剂 和生物药剂防治，目前还没有防效特别好的药剂，所使用的大部分的药剂仅仅起一个辅助的 作用，推迟发病期、减轻危害。化学药剂防治主要是在移栽期及发病初期施用青枯诤、灭菌 净、乙霜清、敌克松等【7 】o 生物药剂目前筛选出的主要有：爱克菌素、农用链霉素、乙蒜素 等。使用药剂防治特别是施用化学农药对环境存在着很大的潜在压力，并且青枯病菌在农药 的选择作用下，非常容易产生抗药性，从而导致药剂失效，进而导致生产成本的增加；4 ) 生 物防治：目前登记的主要是荧光假单胞菌。另外，选育新品种方面也面临着巨大的困难，往 往由于不合理的种植而导致抗病性的衰退，生物防治的效果一直不理想，防治成本较高，且 防效也易受环境的影响。 针对上述问题，现就烟草青枯病的特点、生产中的综合防治措施及防治方法做一综述。 l 烟草青枯病的研究概况： 1 1 病害症状及诊断 烟草青枯病属于细菌性病害；是典型的维管束病害，根、茎、叶均可受害，最典型的症 状是叶片枯萎，烟株感病后，叶片迅速枯萎，但仍保持绿色，故称青枯病。烟草青枯病苗期 和大田期均可发病，苗期发病，常导致成片枯死，引起大量缺苗，严重时发病株率高达8 0 以上【8 】。一旦发病，蔓延迅速，很难治疗。大田成株期发病，发病初期，在晴天中午烈日下， 可见烟株一侧l 或2 片叶凋萎下垂，夜间恢复，萎蔫一侧的茎上出现褪绿条斑，但叶片仍为 青绿色，而无病的一侧叶片正常生长。发病中前期，烟株一直表现一侧叶片枯萎，另一侧叶 片比较正常，表现所谓的“半边疯”症状，这时拔出根部，可见发病一侧许多侧根变黑腐烂， 但另一侧比较正常。随着病情加重，褪绿条斑变为黑色条斑，可达烟株顶部。发病中期枯萎 科数百种植物，其中许多是具有重要经济价值的作物，如马铃薯、花生、番茄和烟草等，给 生产造成巨大的经济损失，但不危害禾本科及麻类植物【1 0 , 1 7 1 1 。 1 4 致病机制 1 4 1 青枯菌对植物的侵染过程 在自然条件下，主要通过根和茎的伤口或次生根的根冠进入植物体，青枯菌侵入皮层后 在细胞间隙里生长，然后再侵入邻近的、已经死亡的皮层细胞。青枯菌先破坏细胞间的中胶 层，导致细胞壁解体，质壁分离，细胞器变形，形成空腔。青枯菌还可以从植物的受伤部位， 侵染寄主的木质部，在导管中生长产生大量胞外多糖，胞外多糖影响和阻碍植物体内的水分 2 第一章文献综述 运输，引起植株的萎蔫。同时，青枯菌还可分泌多种细胞壁降解酶，这些酶可能破坏导管组 织引起植株枯萎，最终导致植物死亡【1 8 ，1 9 2 们。 1 4 2 青枯菌致病性的生化基础 早在5 0 年代认为就认为胞外多糖是青枯茵的致病因子，进行了大量的研究。研究发现一 个称为e p si 的胞外多糖可能与青枯菌的致病性最为相关【2 1 1 。另外，青枯菌有5 种类型的蛋 白分泌系统( p r o t e i ns e c r e t i o ns y s t e m ) ，即i v 型。其中，t 3 s ( t y p ei i is e c r e t i o ns y s t e m s ) 、 t 2 s ( t y p ei is e c r e t i o ns y s t e m s ) 与致病性密切相关可以【2 2 l 。青枯菌主要是通过t 3 s 分泌各种毒 性蛋白，t 3 s 由h r p ( h y p e r s e n s i t i v er e s p o n s ea n dp a t h o g e n i c i t y ) 基因编码，h r p 基因位于一个大 质粒上，其h r p 基因簇成线形排列，同源性高且涉及全长的大部分序列。t 3 s 的h r p 基因发 生突变会引起青枯菌在寄主体内增殖和定殖能力降低，从而丧失致病力【2 3 】。青枯菌能过t 2 s 分泌多种胞外毒性蛋白，如胞外酶、蛋白酶、毒素和毒性因子，这些胞外蛋白能破坏寄主细 胞，引起组织坏死，是导致寄主植物萎蔫的重要因素i 2 4 1 。除t 3 s 和t 2 s 相关的毒性因子外， 还有多种因素可影响青枯菌的致病力，如a e r a 和d i n f 基因片段以及植物胞间的叶酸浓度等 【2 5 1 。 1 5 发病规律 1 5 1 病害循环 青枯菌主要在土壤及遗落在土壤中的病株残体上越冬，也能在活的其他寄主上越冬。种 子一般不带菌，因此青枯病的初侵染源是土壤、病残体和带菌肥料。病菌靠流水、灌溉水、 带菌肥料、病苗或附在幼苗上的病土、人畜及生产工具带菌传播。人事操作和害虫为害，常 使青枯病传播和侵入同时完成。带菌土壤是最重要的初侵染来源。研究表明只有当烟株根系 中病原菌达到一定数量且积累到定时期后，植株才会表现出症状，且烟株的发病程度与根 系土壤中病原菌数量呈正相关【2 6 】。病田流水是病害再侵染和传播的重要方式。青枯菌侵入后 导致烟株枯萎，腐烂后，病菌遗留在土壤或粪肥中越冬，从而成为下年的初侵染源【1o 1 1 l 。 1 5 2 病害发生的季节性变化 一在气温高、湿度大时，烟苗在猫耳期就明显发病，至成苗期时烟苗大片死亡。但是全国 大部分地区育苗阶段气温比较低，虽然能够侵染但是不能表现症状，主要是在大田发病。大 田发病一般在团棵期出现症状，旺长期出现高峰，成熟期仍可发病【1 1 1 。 1 5 3 病害流行的影响因素 1 5 3 1 气象因素 烟草青枯病是高温高湿型病害，低温高湿或高温干旱都不能使病害发生和流行。发病的 最适温度为3 0 - - , 3 5 ，相对湿度在9 0 以上适宜病菌发育，烟株根系层的土壤充分湿润时， 病菌即可侵入为害。吴建华等根据1 9 9 3 1 9 9 4 年的田间系统调查，并结合因子分析，表明： 在江西中部6 月份的平均温度、雨量与烟草青枯病的发生有密切关系。当日均温在2 4 以 上时开始发病，随着温度升高，出现大降水后，必有次发病高峰【2 7 1 。刘旭等在对i t ) l l 省烟 3 西南大学硕七学位论文 草青枯病的调查显示：茁期均无青枯病的发生，在宜宾地区一般在5 月中下旬始见病株，6 月份病情较稳定，7 8 月份为发病高峰期和病害流行期，因为，此时正值多雨时删2 8 1 。总之， 在病害始发后，湿度将成为影响病害流行的主导因子，雨量多、湿度高，病害发展快、为害 重：反之雨量少、湿度低，病害发展受抑制，为害轻，若遇暴风雨或暴风雨后又遇上久旱不 雨或时晴时雨将使病情加重，罹病植株很快凋萎死亡，从而造成该病的大发生。实际生产中， 高温高湿季节，烟株处在旺长期或成熟期，生长较快，抗病性亦降低，+ 从而利于病菌的扩繁， 造成植株快速死亡i l 。 1 5 3 2 品种抗性差异 烟草品种间对青枯病的抗性又较大的差异，目前在生产上种植的绝大多数为感病品种。 广西1 9 9 0 年以来的调查结果显示，仅k 3 2 6 为抗性品种，发病期也推迟，c o k e r l 7 6 是抗性很 强的品种【1 1 1 。杨友才等对5 7 个烟草品种抗青枯病进行了鉴定，结果表明：高抗的品种只有3 个，为t i 4 4 8 a 、d 1 0 1 、g s 0 ，中抗的品种有n c 8 2 、中烟9 0 、k 3 4 6 、富锦大叶、吉永l 号、 r g h 5 1 等1 7 个，大部分品种表现感病，其中云烟8 5 、红花大金元、9 8 0 3 、翠碧1 号等1 3 个表现为高感1 2 9 】。日本育种家还试图通过与中抗品种杂交积累抗性，如a w a 和o d a r u m a ，但 至今没有一个品种检测到青枯病免疫。另外，对野生烟属种中也进行了鉴定但是并未检出抗 病性1 3 0 。 品种的抗病性受多个方面的影响，在品种推广的过程中，刚刚种植时，往往表现出较高 的抗性，但随着时间推移、种植不当、病原菌变异，其抗性也会或快或慢的消失。另外，一 些品种在一些地方表现抗性，但是在其他的地方的种植也许表现为感病。 1 5 3 3 土壤因素 不同土壤类型青枯病的发病程度有较大的差异，一般低洼渍水、土壤湿度大、土质黏重 板结的地区发病严重。徐国群对黎川地区青枯病的发生原因进行调查，发现沙性土壤种植的 烟草易发病且为害较重。2 0 0 7 年发生青枯病的地块中，沙性土壤占6 7 5 ，病情指数高达6 6 ， 主要原因是：沙性土壤前期土温上升较快，有利于青枯菌的繁殖：沙性土壤保水保肥能力差 对烟草生长不利：沙性土壤后期易缺肥，影响烟草后期的生长，导致烟株抗性降低，易发病 1 3 l 】。一般来说，在有敏感寄主存在的条件下，土壤带菌量和青枯病的发生成简单的正相关， 即含菌量大的土壤一般青枯病发生严重。青枯病的发生还与土壤的通气，p h 等因素有关，在 偏酸性的土壤中易发病，而在c a c 0 3 含量在2 以上，p h 值7 2 以上则具有一定的抑菌性1 3 羽。 1 5 3 4 耕作栽培因素 青枯病菌在土壤中越冬，因此前作也会影响青枯病的发病。如果前一年流行青枯病的地 再种植烟草，则发病率和病情指数就会大大增加；前作若是茄科或花生等作物且发生了青枯 病，也会造成烟草的发病；前作若是红苕、玉米或水稻，则很少有青枯病发生。四川省德阳 地区种植晒烟几乎1 0 0 是与水稻轮作，尽管这里的番茄青枯病较重，但在晒烟上却看不到 青枯病，水旱轮作可以有效控制青枯病的发生。此外，由于病原菌主要通过雨水传播，坡上 和坎上发病的田块，在当年或翌年常常会造成下方田块的发病【2 3 】。 移栽期对青枯病的发生也有一定的影响，一般移栽期早可使成熟采收期避开发病盛期， 从而降低损失，中耕除草、打顶抹芽、收摘烟叶等农事操作可能造成一些伤口从而有利于病 菌传播，加重发病。 4 第一章文献综述 另外土壤肥力和施用肥料种类、数量等都会对青枯病的发生有一定的影响。偏施氮肥， 可能造成烟株旺长，贪青晚熟，从而易于病菌的侵入，利于病害发生，而增施磷钾肥可以提 高烟株的抗病性力。硝态氮对烟草生长有利，而铵态氮对生长不利，施用铵态氮的地块发病 较重。土壤缺硼，会导致维管束发育不良，顶芽萎缩、植株不壮，易于发病。 1 5 3 5 其他因素 ： 土壤中的其他微生物也与青枯病的发生有关，若有益微生物多，可部分的抑制病害发生。 施用有机肥可以，提高土壤中的有益微生物数量，从而降低发病程度。蔡燕飞等报道连作地 番茄青枯病发病率为1 0 0 ，而施用生态有机肥后，青枯病发病率降低至4 9 8 6 i j 引。地下害 虫和线虫多时，易破坏烟株的根系，造成伤口，增加病菌侵入，利于发病。 2 烟草青枯病的综合防治 2 1 提高抗性 2 1 1 诱导烟草的抗性 诱导抗性是指经外界因子诱导后，植物体内产生的对有害病原菌的抗性现象，主要是利 用生物、物理、化学的方法诱导植株产生抗性【3 4 1 。张正光等对棉疫病菌( p h y t o p h t h o r a b o e h m e r i a e ) 培养滤液中提纯获得的9 0k d 胞外蛋白激发子诱发烟草系统获得抗性进行了研 究，结果表明对多种病害都有一定的抗性【3 5 1 。张正坤等明确了植物源抗病毒化合物鸦胆子素 d ( b r u e e i n ed ) 的抗性，检测到在施用b r u e e i n ed 后，对烟草体内过氧化物酶( p o d ) 、多 酚氧化酶( p p o ) 、苯丙氨酸解氨酶( p a l ) 以及超氧化物歧化酶( s o d ) 活性的变化p o j 。 2 1 2 营养抗性 在烟草个体发育过程中，营养至关重要，如果每棵烟株如能得到全面的营养，并且在每 个发育阶段中稳定均匀地供给所需要的营养，烟株生长健壮都具有抵抗病害的能力，称为营 养抗病性【1 3 1 。合理施肥有利于提高烟草营养抗病性。聂新柏等进行了大田烤烟钙镁肥、锰肥 和硼肥用量试验，结果表明在钙镁、锰、硼有效含量缺乏的烟田中，增施适量的微肥，能够 促进烟株的营养平衡，能够促进生长，从而提高植株的抗病性1 3 7 1 。李晔等研究了不同锌营养 对烟草可溶性糖含量、游离脯氨酸含量、丙二醛含量、可溶性蛋白含量、外渗电导率和根系 活力等相关抗性生理生化指标的变化情况。结果表明，锌离子浓度为o 1m g l 处理后烟株长 势较好，并且其外渗电导率、游离脯氨酸含量及丙二醛含量均低于其他处理，而可溶性糖、 可溶性蛋白含量及根系活力均高于其他处理，表明锌营养对于维持自身生理代谢，提高植物 抗性，减少青枯病的发生有一定的促进作用【3 8 】。此外，增施钾肥也可以提高烟株的抗病性， 还可以促使烟叶成熟，利于避开病害的发生高峰期。 2 2 选种抗病品种 种植抗病品种是防治青枯病最经济有效、简单易行的方法，在病区种植抗病品种，可以 有效地减轻病害发生。多年来，人们对抗病品种的筛选做着不懈的努力，虽然取得了一些成 就，但世界范围内长期以来的观察研究均表明，农作物的抗病性往往与其产量水平、品质相 5 西南大学硕十学位论文 矛盾【3 9 1 。 目前生产上种植的烟草品种大多数是不抗青枯病的，但是k 3 2 6 、r g l l 、r g l 7 等表现为 中抗程度。随着这些抗病品种推广年限的增加，其抗性也有所衰退，新的抗病品种也在陆陆 续续的报道，云烟9 7 在2 0 0 5 年8 月通过全国烟草品种审定委员会农业审定，抗青枯病，其 抗病性与k 3 2 6 相当，云烟2 0 3 在2 0 0 7 年1 0 月通过审定，其抗病性优于硒2 6 。t 一 早在2 0 世纪3 0 年代，美国烟草育种学家就已经意识到了种质资源对抗病性的重要性， 便开始了种质资源的收集工作。在1 9 3 7 年收集到的种质资源数目达到1 1 6 0 份，目前已达2 1 7 4 份。美国是烟草育种研究最早的国家，早在1 9 6 3 年c h a p l i n 和g r a h a m 依据b e i n h a r t l 00 0 1 与g o l d e n w i l t ，4 0 0 杂交后代分离结果，证明抗性是由显性单基因控制。1 9 7 1 年c h a p l i n 转育 成p d l 2 1 ，1 9 7 5 年s t a v e l y 研究指出b 品系等抗性是数量遗传或多基因遗传。1 9 7 6 年l a p h a 转育成抗病品种b a n k e t a 1 【加】。优质、适产、抗病一直是育种的目标。金叶种子公司( g o l dl e a f s e e d ) 推出了g l 3 5 0 、n c 7 1 、n c 7 2 、n c 2 9 7 、g l 9 3 9 、g l 9 7 3 、n c l 0 2 以及2 0 0 7 年推广得 的高抗青枯病的n c 4 7 1 ；布菲金种子公司( p r o f ig e n ) 推出了p v h 0 3 、p v h 0 9 、p v h l 9 、p 2 0 、 p v h 5 0 、p v h 5 1 、p v h l 5 6 、n c l 0 0 、r g h 0 4 、k 3 2 6 p v y 、p v h 2 11 0 ，其中新近培育的p v h 2 11 0 高产优质，中抗青枯病，平均产量比k 3 2 6 提高1 0 一1 5 ，并且不影响品质，是替代传统 k 3 2 6 的较佳的品种：斯拜特种子公司( s p e i g h ts e e df a r m ) 推出的s p e i g h t 2 3 4 高抗青枯病， 在2 0 0 5 年试验中产量与k 3 4 6 相当；f w r i c k a r d 种子公司( f w r i c k a r ds e e d ) 推出的r x l1 8 高抗青枯病，其产量也高于平均水平。自2 0 世纪6 0 年代以来，美国育出了大批的烟草抗病 品种，对美国乃至世界的烟草生产起了重要的作用1 4 l j 。 虽然我国的绝大多数抗病品种都是从国外引进的，但是对于烟草育种，专家做着不懈的 努力。早在2 0 世纪5 0 年代就进行了一次大规模的品种资源的收集，共收集到3 0 0 0 多份资源， 到目前为止已收集到4 0 4 2 份，为育种工作提供了丰富的遗传材料【4 2 】。选育种专家要把重点 放在充分挖掘利用高抗品种资源上，一些高抗亲本可用来不断改良现有主栽品种的抗病性， 某些抗病性较好的品种不仅生产上可用，育种上也应反复利用。杨友才等为探明烟草青枯病 抗性的遗传规律，选用高感青枯病品种红花大金元作母本与高抗青枯病品种t i 4 4 8 a 作父本 进行杂交，对两亲本及其杂交后代f 1 、f 2 、b c l p l 代采用温室苗期叶片人工注射接种法进行 了青枯病抗性的鉴定。结果表明，抗病亲本材料t i 4 4 8 a 的抗病性由一对显性基因控制1 4 3 1 s u n 等利用r - - 6 g 处理烤烟品种硒2 6 原生质体然后与n i c o t i a n a r e p a n d a 烟草原生质体融合， 改变了烟草雄性不育系的胞质来源单一状况m l 。潘建菁等对8 5 份烟草种质及4 6 份烤烟f 1 组合进行的青枯病抗性鉴定，未发现免疫或高抗品种，不同材料对青枯病的抗性不同。从8 5 份种质中筛选出了o x 2 0 2 8 、r g l 7 、k 3 5 8 等抗病种质及岩烟9 7 、r g l l 、o x 9 4 0 等中抗青枯 病种质。杂交组合的抗病性总体上优于烟草种质，以抗或中抗为主，但没有明显的优势，因 为其抗性多偏向于抗病性弱的亲本1 4 5 】。 随着人们对太空的探索，空间育种培育出了具有优良性状的烟草品系 4 6 1 。贵州省烟科所 于2 0 0 2 年3 月通过“神州3 号”飞船搭载了5 6 9 烤烟种子，经两年的栽培试验，发现第1 代就表现出明显的变异，1 3 个烤烟品种中，种子发芽率8 个品种表现为下降，5 个品种表现 升高【4 7 】；第2 代表现更加明显，其中k 3 4 6 品种叶片极度收缩，植株明显高于其他品种，春 蕾3 号的抗坏血酸含量明显高于对照，叶片变绿、株形紧凑、皱缩程度大、生育期推迟近6 0 d 6 第一章文献综述 ii i,i,- - 曼量曼曼詈曼曼曼詈晕曼曼曼曼曼曼暑曼詈詈曼曼曼曼詈量! 曼曼曼! ! 曼! 詈詈! ! ! 曼暑量詈詈鼍曼! 詈! 詈詈詈鼍鼍! 曼曼! 詈置詈詈曼! ! ! ! 曼曼鼍詈鼍 等，搭载种子后代的抗病性显著提高，为以后的育种提供了重要的材料1 4 引。 品种的抗性强弱是受多方面因素影响的，一个抗病品种往往在最初推广中表现抗病，但 随着种植年限增长，病菌致病力改变，抗性将或快或慢地丧失。此外，有的品种在甲地表现 抗病，或许在乙地则表现感病，如g 2 8 ，t 1 4 4 8 a 在国外被认为对烟草青枯病抗性较强，但在 国内则属感病型，因此各地区要根据自己的生态条件选育或引种适宜各地的抗此病的品种 p 6 1 。 2 3 加强栽培管理 2 3 1 合理轮作 轮作是作物耕种制度中重要的农艺措施，也是最具经济效益的措施。合理轮作不仅能协 调土壤养分、改良土壤理化性质，而且还能增强烟草的自身抵抗力、消除土壤中的有毒物质， 增加作物产量和提高品质，同时又是促进农业可持续发展不可缺少的传统防治手段。针对青 枯菌为好气性细菌，且不危害禾本科植物的特点，可实行“稻稻烟”的轮作制。早地烟的 轮作间隔年限至少要在3 年以上，要与非感病作物如绿豆、豇豆、大豆及禾本科作物轮作， 但应避免与马铃薯、番茄、辣椒等茄科作物轮作。轮作方式务必采用大面积的连片种植，因 为流水是青枯病的主要传播防式，小面积的达不到防病的效果。何念杰等经过4 年研究表明： 烟稻轮作能有效地控制烟草青枯病的发生1 4 9 1 。关国经等通过选择不同烟地进行发病史、品种 和轮作年数组合试验，将3 种因素进行量化，得到的结果显示：在烟地发病史划分为4 档即 0 、5 、1 0 和之3 0 时，当烟地发病史为5 时如果为k 3 2 6 及抗性类似品种就必须轮作，另 外显示轮作玉米多年后种植k 3 2 6 之类品种，青枯病明显或严重危害的风险仍然耐5 0 】。轮作 还可以降低土壤中病菌的存活量，防止其毒性定向选择和连续性变异，将优势菌系的毒力水 平保持在较低的水平，可以延长烟草抗病品种的种植年限1 5 1 1 。 2 3 2 培育无病壮苗 随着烟草生产的发展，烟草育苗集约化、工厂化的速度不断加快，托盘育苗和漂浮育苗 技术得到推广，当然两者都存在着不足，托盘育苗没有达到无土化，且用工量大；漂浮育苗 成本高，不易管理。高正良等通过对烟草托盘育苗技术的改进，发现采用侧孔托盘、营养液 作为培养液、托盘灌水深度为1 2 盘高时育得的苗根系发达，显著优于般托盘育苗【5 2 1 。邓 海滨等研究了漂浮育苗中不同配比基质对烟苗生长的影响，显示在南雄，基质中以v ( 泥炭) ： v ( 炭化谷壳) ：v ( 膨化珍珠岩) = 3 ：4 ：3 或v ( 泥炭) ：v ( 炭化谷壳) ：v ( 膨化珍珠岩) = 3 ：5 ：2 为宜，可培育壮苗 5 3 】。晋艳等选取全国1 0 个产烟省的2 8 家基质厂家生产的基质样进行检测 和育苗试验，研究了烟草漂浮育苗中腐殖酸含量对育苗的影响，结果显示：腐殖酸含量育烟 苗长势有一定的正相关性，但当含i 6 0 时在一定程度上影响出苗率及烟草长势唧】。另外 在育苗过程中加入一些生长调