（微生物学专业论文）干型半干型茯苓酒发酵工艺研究及相关检测.pdf

河北大学 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书 所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确 的说明并表示了致谢。 作i 者签幺i , - - i ：lh 1 k 学位论文使用授权声明 本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布 论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 本学位论文属于 l 、保密彳，在碰2年笸月里日解密后适用本授权声明。 2 、不保密口。 ( 请在以上相应方格内打“4 ) 保护知识产权声明 本人为申请河北大学学位所提交的题目为 论文，是我个人在导师砂汰) 。磁黼位 k a 稚蒯炭钐卅 川悍性 指导并与导师合作下取得的研究成果，研究工作及取得 的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成的。本人完全 了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定的各项法律、行政法规以及河北 大学的相关规定。 本人声明如下：本论文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大学的书 面同意和授权，本人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反 本声明，本人愿意承担相应法律责任。 声明人：鑫盈k 日期：丝丝年月 望日 作者签名：么受逸 导师签名： 日期：趔爱年月丝日 日期：乞吐乏月卫日 摘要 摘要 本论文研究茯苓菌摇瓶发酵终点为1 9 6 h 。菌丝体鲜重为3 0 9 l o o m l 、发酵液还原糖 含量0 0 5 9 l 、发酵液的终点p h 2 5 、发酵液总糖含量2 o g l 。 运用物理方法浸提处理茯苓发酵醪液：以超声波法所得的茯苓多糖浓度最高，且显 著高于其它各组。然后依次是高压法，高温高压法，恒温水浴法和匀浆法。其中匀浆法 效果最差，但是也显著高于对照组。超声波浸提法的最佳参数为：超声波处理时间6 m i n 、 水浴时间1 5 h 、水浴温度7 0 。多糖含量达到4 9 8 9 l 。 研究酒精发酵实验时，以茯苓发酵醪液、蔗糖为主要原料，用发酵法生产茯苓酒。 通过单因素实验确定最佳酿酒酵母菌株为s - 7 ，糖添加量为2 2 ，干型酒糖添加量为2 1 至2 2 ，半干型酒糖添加量为2 2 ，但低于2 4 。适宜发酵温度为3 0 ，适宜酵母接种 量为1 0 ，适宜起始p h 为3 5 ，发酵周期以8 8 至9 6 h 。复合酵母发酵中，酵母菌株s - 7 ，和s - o 的复合比例为：1 0 ：4 ，得到的发酵酒体酒度高，酒香醇。制得的茯苓酒中酒 精含量1 1 ，总糖6 3 0 9 l ，还原糖2 4 2 9 l ，总酸3 4 7 9 l ，可溶性固形物7 ，游离 氨基氮8 1 9 m g l ，该茯苓酒色泽金黄，酒香纯正，卫生指标符合国家相关标准。 在澄清实验中，采用澄清剂蛋清、琼脂、明胶、皂土和皂土辅以壳聚糖对干型茯苓 酒进行澄清研究。结果表明，皂土辅以壳聚糖的澄清效果明显好于其它澄清剂，酒体的 澄清率达到9 8 ，还原糖保存率为9 7 ，总酸保存率9 5 ，其用量分别为0 1 6 的皂土辅 以0 0 8 的壳聚糖，澄清后的酒体稳定性增加，洒体清澈透亮，呈现诱人的金黄色。茯 苓酒成品经抽滤、澄清、陈酿、灭菌后酒体澄清透亮，呈蜂蜜色，酒香纯正，微带有茯 苓发酵液的酸味。 对干型茯苓酒产品进行动物功能学检测，表明茯苓酒具有一定的抗衰老作用。果蝇 三个剂量组的平均寿命、半数死亡时间和最高寿命都有所延长，虽然高剂量对抗衰老作 用不明显，但中低剂量对其延缓衰老有极显著的作用。干型茯苓酒实验组的小鼠腹腔巨 噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数和吞噬率均显著的高于对照组( f y f o 0 5 ) ，表明茯苓酒 具有一定的增强免疫力功效。 关键词茯苓多糖提取酒精发酵澄清抗衰老增强免疫 a b s t r a c t a b s 仃a c t s t u d i e so nt h ef e r m e n t a t i o nc u l t u r eo fp o r i ac o c o ss h o w e dt h a tt h eb i o r n a s sa m o u n t r e a c h e do v e r3 0 9 l o o m l ( f r e s hw e i g h t ) a t1 9 6 hf e r m e n t e d ；t h er e s i d u a ls u g a rc o n t e n to ft h e f e r m e n t a t i o nl i q u o rw a sa b o u t0 o s g l 、t h ew h o l es u g a rw a s2 9 la n dt h ee n dp o i n to fp hw a s 2 5 。 u s i n g d i f f e r e n t p h y s i c a l m e t h o d st od e t e c tt h e o p t i m u me x t r a c t i o nc o n d i t i o n so f p o l y s a c c h a r i d e sf r o mp o r i ac o c o sf e r m e n t a t i o nb r o t h , t h er e s u l t ss h o w e dt h a tu l t r a s o n i c e x t r a c t i o nm e t h o dc o u l dg e tm o r ep o l y s a c c h a r i d e st h a nt h eo t h e rm e t h o d s t h es e c o n dw a s t h eh i g hp r e s s u r em e t h o d ；a n dt h e nw a sh i g hp r e s s u r ea n dh i g ht e m p e r a t u r em e t h o d , h o tw a t e r m e t h o d ，t h el a s tw a sh o m o g e n a t em e t h o d a l lo ft h em e t h o d s ，a l t h o u g ht h eh o m o g e n a t e m e t h o dw a st h el a s to n e ，w e r ea l lh i g h e rt h a nt h eb l a n ko n e t h ei n d i xo ft h eu l t r a s o n i c 9 e x 眦t i 。nm 删s h o w ：蛳t h e 。& h u m gc o n d i t i o nw 弱u l 她。l l i cb r o k e n l l 6 r a i n 、w a t e rt i m e1 5 ha n dt e m p e r a t u r e7 0 c a f t e ru l t r a s o n i ce x t r a c t i n g ，t h ea m o u n to f p o l y s a c c h a r i d e sr e a c h e d4 9 8 9 li np o r i a c o c o sf e r m e n t a t i o nl i q u o r c o m b i n i n gt h ep o r i ac o c o sf e r m e n t a t i o nb r o t ha n ds u g a rt op r o d u c ep o r i ac o c o s f e r m e n t e dw i n e ，t h es i n g l ef a c t o rt e s ti n d i c a t e dt h a tt h eb e s ty e a s tw a ss 一7 ；t h es u g a ra d d i n g c o n t e n tw a s2 2 ，d r yw i n ew a s21t o2 2p e r c e n t ；t h es e m i - d r yw i n ew a s2 2 ，b u tl e s st h a n2 4 p e r c e n t ；f e r m e n t a t i o nt e m p e r a t u r ew a s3 0 ；y e a s tl i q u i ds t r a i nq u a n t i t yo fi n o c u l a t i o nw a s l0 ；i n i t i a lp hw a s3 5 ，a n df e r m e n t a t i o nt i m ew a s8 8 9 6 h i nt h ec o m b i n ef e r m e n t a t i o n , t h e r a t eo fy e a s ts - 7a n ds - ow a sl0 ：4 t h i so b t a i n e dw i n ec o n t a i n s11 a l c o h o l ，6 3g lt o t a l a c i d ，s o l u b l es a l t so l d i e s 之7 ，a n d81 9m g lt h ef r e ea m i n on i t r o g e n , i sw i t hg o l d e nc o l o r a n d ：e sp u 北mq 嘲时i s 二c o r d 谢：彻t i 。n a l 咖d a r d i nt h ec l a r i f y i n ge x p e r i m e n t s ，c l a r i f i e r si n c l u d i n ge g gw h i t e ，a g a r , g e l a t i n , a n db e n t o n i t e ， a n dc o m p o s i t ec l a r i f i e r sb e n t o n i t ea n dc h i t o s a nw e r eu s e dr e s p e c t i v e l yt oc l a r i f yp o r i ac o c o s f e r m e n t a t i o nw i n ea n dt h e i rc l a r i f y i n ge f f e c t sw e r ec o m p a r e d t h er e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h e u s eo fb e n t o n i t ea n dc h i t o s a nc o u l da c h i e v eb e t t e rc l a r i f y i n ge f f e c t st h a nt h eu s eo fs i n g l e c l a r i f i e r t h er e l a t i v ep a r a m e t e r sw e r e 鹤f o l l o w s ：9 8 l i g h tt r a n s m i t t a n c eo ff e r m e n t e dw i n e ， a b s t r a c t r e s i d u a ls u g a rp r e s e r v a t i o nr a t e sa s9 7 ，a n dt o t a la c i dp r e s e r v a t i o nr a t ea s9 5 t h ep r o p e r u s el e v e lo fb e n t o n i t ea n dc h i t o s a nw o r e0 16 a n d0 0 8 r e s p e c t i v e l y b e s i d e s ，t h es t a b i l i t y o fw i n eb o d yw a si m p r o v e da f t e rc l a r i f i c a t i o n p o r i ac o c o sw i n ei sc r y s t a ld e a r , w i t h a t t r a c t i v eg o l d e nc o l o r t h o u g hv a c u u mf i l t e r , c l a r i f i c a t i o n , a g i n ga n ds t e r i l i z a t i o n , t h ep o r i a c o c o sw i n ew a st r a n s l u c e n t ，h o n e yc o l o r , p u r e 、i 也s o u r n e s so ft h ep o r i ac o c o sf e r m e n t a t i o n b r o t h t h ea n i m a li n v e s t i g a t i o ns h o w e dt h a tt h eh a l ft i m eo fl i f e s p a n , s u p r e m el i f e s p a na n d a v e r a g eo fl i f e s p a no ff r u i tf l yw e r ea l lp r o l o n g e dw i t ht h ed r yp o r i ac o c o sw i n et ot h e c o n t r a s t e d , s ot h ea n d - a g e i n ge f f i c i e n c yc o u l db ec o n f i r m e d t h ed r yp o r i ac o c o sw i n ew a s g i v e nd a i l yt om i c e3 0d a y si no r d e rt om e a s u r et h ep h a g o c y t i ci n d e xa n dp h a g o c y t i cr a t eo f t h em a e r o p h a g eo fm i c e t h eo b v i o u se n h a n c e m e n to fi m m u n i t yc o u l db ec o n f i r m e di nt h e u s e dg r o u pc o m p a r e dw i t ht h eb l a n k ( f f o 0 5 ) b o t ht h ea n t i a g e i n ge f f i c i e n c ya n d e n h a n c e m e n to fi m m u n i t y 僦e n h a n c e dw i mt h ei n c r e m e n to f t h ew i n e k e yw o r d s ：p o r i ac o c o s ；e x t r a c t i o no f p o l y s a c c h a r i d e s ；a l c o h o lf e r m e n t a t i o n ；c l a r i f y ； a n t i a g e i n ge f f i c i e n c y ；e n h a n c e m e n to fi m m u n i t y m 目录 目录 第1 章绪论1 1 1 弓i 言1 1 2 茯苓的简介2 1 2 1 茯苓的主要化学成分3 1 2 2 茯苓的医用价值。5 1 2 3 食药用真菌食品的开发7 1 3 茯苓产品的开发8 1 4 本论文的目的、意义及内容8 1 5 创新点9 第2 章茯苓液体发酵最佳时间的确定1 0 2 1 实验材料。l o 2 1 1 菌种l0 2 1 2 培养基1 0 2 1 3 主要试剂1 0 2 1 4 仪器设备1 0 2 2 分析方法l l 2 2 1 总糖的测定方法1 1 2 2 2 还原糖的测定方法。1 2 2 2 3 茯苓生物量鲜重的测定方法。1 3 2 2 4 发酵液p h 的测定方法1 3 2 3 实验方法1 3 2 4 实验结果与分析1 3 2 4 1 发酵过程中茯苓菌丝体生物量的变化1 3 2 4 2 发酵过程中茯苓发酵液中还原糖的变化1 4 2 4 3 发酵过程中茯苓发酵液中p h 的变化1 4 2 5d 、结。1 5 i v 目录 第3 章茯苓发酵醪液多糖提取工艺研究。1 6 3 1 实验材料1 6 3 1 1 供试物品1 6 3 1 2 主要试剂1 6 3 1 3 主要仪器设备1 6 3 2 分析方法1 6 3 3 实验方法1 6 3 3 1 茯苓发酵醪液的组织处理。1 6 3 3 2 不同提取方法对比实验。1 6 3 4 实验结果与分析：18 3 4 1 机械破碎实验结果1 8 3 4 2 热水恒温浸提法各参数对多糖提取的影响。1 8 3 4 3 超声波法实验结果分析1 8 3 4 4 高压法各参数对多糖提取的影响。1 9 3 4 5 高温高压法各参数对多糖提取的影响2 0 3 4 6 不同方法的对比实验结果多重比较分析。2 l 3 5d 、结。2 1 第4 章酒精发酵条件的优化2 2 4 1 实验材料2 2 4 1 1 菌种2 2 4 1 2 培养基2 2 4 1 3 主要仪器及设备2 2 4 2 分析方法2 2 4 2 1 酒精度测定2 2 4 2 2 可溶性固形物含量测定2 3 4 2 3 还原糖含量测定2 3 4 3 实验方法2 3 4 3 1 酵母活化2 3 4 3 2 菌株的扩大培养2 3 v 目录 4 3 3 酒精发酵基质制备。2 3 4 3 4 酵母菌株的选择实验2 3 o 4 3 5 适宜糖添加量选择实验2 3 4 3 6 干型半干型茯苓酒糖添加量选择实验2 4 4 3 7 适宜发酵温度选择实验2 4 4 3 8 适宜接种量选择实验2 4 4 3 9 适宜起始p h 选择实验2 4 4 3 1 0 发酵周期的测定2 4 4 3 1 l 发酵工艺正交选择实验2 4 4 3 1 2 复合酵母菌株发酵优化实验2 5 4 4 结果与分析2 5 4 4 1 五种酵母菌株对酒精发酵的影响2 5 4 4 2 初始糖添加量对酒精发酵的影响2 7 4 4 3 干型半干型茯苓酒糖添加量选择实验2 8 4 4 4 温度对酒精发酵的影响2 9 4 4 5 接种量对酒精发酵的影响3 0 4 4 6 起始p t - z 对酒精发酵的影响3l 4 4 7 时间对酒精发酵的影响3 3 4 4 8 发酵条件正交实验结果分析3 4 4 4 9 复合酵母菌株发酵实验结果分析3 5 4 5 刀、结。3 6 第5 章发酵酒体的后处理研究3 8 5 l 实验材料3 8 5 1 1 菌种及试剂3 8 5 1 2 主要仪器及设备3 8 5 2 分析方法。3 8 5 2 1 总糖含量的测定3 8 5 2 2 还原糖含量的测定3 8 5 2 3 酒精含量的测定3 8 v i 目录 5 2 4 可溶性固形物含量的测定3 8 5 2 5 透光率的测定3 8 5 3 实验方法3 9 5 3 1 真空过滤处理酒体。3 9 5 - 3 2 对酒体进行澄清处理o 3 9 5 3 3 微波处理酒体后熟实验4 0 5 3 4 对酒体进行灭菌处理。4 0 5 4 实验结果与分析4 0 5 4 1 真空抽滤实验结果。4 0 5 4 2 澄清剂的澄清结果。4 l 5 4 3 皂土辅以壳聚糖澄清结果4 l 5 4 4 最佳澄清试剂对原酒成分影响结果_ 4 2 5 4 5 对酒体进行陈酿后熟实验结果4 3 5 4 6 对酒体进行包装灭菌实验结果4 3 5 5d 、结4 3 第6 章产品相关指标检测4 4 6 1 实验材料4 4 6 1 1 待测样品“ 6 1 2 实验动物4 4 6 1 3 仪器设备。“ 6 1 4 实验药品及制备“ 6 2 实验方法一4 5 6 2 1 样品质量指标检测4 5 6 2 2 样品果蝇延缓衰老检测4 6 6 2 3 样品增强小鼠免疫力功能检测4 7 6 3 实验结果与分析4 8 6 3 1 质量指标4 8 6 3 2 果蝇延缓衰老实验结果与分析4 8 6 3 3 小鼠增强免疫力实验结果与分析4 9 v n 目录 6 4 小结5 0 第7 章结论5 2 参考文献5 3 致谢5 6 v i l i 第l 章绪论 第1 章绪论 课题来源：保定市食用菌产业技术创新研究中心建设项目深加工子课题( 0 6 n 一0 2 2 ) 1 1 引言 、 食药用真菌是一种重要的生物资源，其种源十分丰富，我国是世界上食药用真菌资 源较为丰富的国家，也是世界上最早利用食药用真菌资源的国家n 】。随着改革开放的深 入，人们生活质量正在逐步提高，人们对功能性食品的需求也日益加大。功能性食品将 是未来食品界发展的一个新的经济增长点。菌类食品将在功能性食品中发挥重要作用。 目前，对于菌类食品的深度开发正蓬勃兴起，例如采用金针菇子实体干品为主要原 料，配以茯苓、山楂、蜂蜜、乳酸锌以及鸡、蛇提取液等原料精制而成的一休菇增智营 养液、金菇儿童口服液等，对儿童具有增智、增高及健脾开胃的功效，并有提高机体免 疫力功能和增强记忆力作用船1 。 菌类食品在人们日常食品开发中也有一席之地，如草菇老抽，香菇肉酱等。另外， 菌菇还可以加工成蜜饯类食品、休闲类食品，如平菇蜜饯、五香金针菇等；把菌菇烘干 加工成菇粉掺入糕点及糖果中，可以制成菌菇糕点、茵菇糖果，如茯苓糕、香菇软糖等； 也可以把食用菌接种到米粒和麦粒中，生产出菌菇米面，如香菇面粉、金针菇米粉等口1 。 近年来国内外对疗效或功能饮料的开发正在蓬勃兴起，还可以用菌菇的子实体或其深层 发酵液生产成大众化的食用菌饮料。可以说，菌类食品有着广泛的开发前景。 食药用真菌液体发酵前景广阔。食药用真菌在液体培养过程中，菌丝体的营养成分 和生理功效与子实体十分接近。在液体培养过程中，除菌丝体大量增殖外，还会在发酵 液中产生多糖、多肽、生物碱、萜类化合物、酚类、甾醇、酶、核酸、氨基酸、维生素 等多种生理活性物质。这些物质对人体器官具有防病治病作用，并有抗炎、抗菌、抗癌、 抗衰老、抗溃疡、提高免疫力及防辐射等医疗功效。因此，人们进行食药用真菌的液体 发酵，以获取上述具有活性的次生代谢产物。在这一方面，以活性多糖的研究最多。我 国发现的有价值的真菌多糖2 8 种，其中化学结构清楚的有1 5 种h 】。国内正式批准生产 的真菌多糖商品包括：香菇多糖、云芝多糖、灵芝多糖、猪苓多糖、银耳多糖、多糖蛋 白片、裂褶菌多糖和茯苓多糖等啼1 。采用液体发酵技术生产菌丝体，周期短、成本低、 产量大、产品标准一致，很好地解决了由于产地不同产品质量存在差异的问题，有广阔 河北大学理学硕士学位论文 的工业化生产前景。国家卫生部1 9 9 8 年批准功能性食品中，调节免疫力产品位于第一 位，调节血脂和抗疲劳产品分别于第二位和第三位。食用菌在功能性食品中发挥重要作 昙篡裟：一嚣鲠揽月雌脯端 食品开发将有着广阔的应用前景和经济、社会价值p 。 菌类食品集营养性、功能性、美味性、安全性于一身，被营养学家推荐为十大健康 食品之一。菌类食品作为功能性食品有着巨大开发潜力。展望2 l 世纪，菌类食品将会 为人类的生命健康发挥重大的作用。 1 2 茯苓的简介 茯苓是一类十分重要的大型高等真菌，它属于担子菌们、担子菌纲、多孔菌目、多 孔菌科、茯苓属，代表种有茯苓( 肠确删妇c o c o s ) 和长白山茯苓( r e o t f i t , o r i ac a r t i l a g i n e a ) 茯苓是一种重要的药用菌，被誉为中药“八珍 之一，在中国已有几千年的历史茯 苓主要分布在中国、日本、美国，还有其它国家。茯苓的菌核幼小时为棕黄色或紫红色， 形状近似球形、扁圆形或不规则的块状等，大小不一菌核鲜时软，干后硬，有深褐色 多皱的皮壳，内层粉粒状，白或淡浅粉色，贮藏有大量营养物质。子实体平状，形似蜂 窝，厚3 - 5 m m ，白色，老或干后浅褐色，常附生于暴露在空气中的菌核或松木表面【8 】。 茯苓生态习性p 1 特殊，需生于松树根部，故不易发现，采集困难。在松树中，以马 尾松和赤松根部最爱生长。一般根据松树的生长年龄、长势好坏以及地表土质的变化来 观察地下有无茯苓。自然界野生的茯苓，一般直径只有l o - 2 0 c m ，而经人工栽培的可达 3 0 - - 5 0 c m 或更大，重量最大者近百斤。不少地区由于松林被砍伐，破坏了生态平衡，生 长茯苓受到影响。 中药学应用u ：茯苓淡而能渗，甘而能补，能泻能补，两得其宜之药也。利水湿以 治水肿小便不利，化痰饮以治咳嗽、痰湿入络之症，健脾胃而能止泻止带，宁心神治惊 悸失眠。药性平和，无伤正气之弊，以其既能扶正，又能祛邪，故脾虚湿盛，正虚邪实 之症尤为适宜。 通过对5 个茯苓菌株进行深层发酵培养，比较胞内外多糖含量，筛选出s x 为优良 菌株，并对s x 菌株最佳碳、氮源进行筛选，得出s x 最适碳源为葡萄糖，氮源为蛋白 胨【l l l 。对茯苓菌株进行发酵罐深层液体培养1 2 0 h 后可达到3 0 9 o om l ( 鲜重) ，发酵液 中含有包括十六烷酸和十八烷酸等有机酸，氨基酸含量大于4 8 0 m g l o o m l 1 2 l 。 2 第1 章绪论 1 2 1 茯苓的主要化学成分 1 2 1 1 茯苓多糖类 茯苓中主要成分为b 一茯苓聚糖( b - p a c h y m a n ) ，由于产地差异，含量在8 0 一9 4 之 间不等。此外还含有茯苓次聚糖，木聚糖。另外还有i i 一茯苓多糖f ( 1 i - p a c h y m a nf ) ， 茯苓多糖h ，h 1 2 h 2 ( p a c h y m a nh ，h 。2 ，h ：) ，( 1 ，3 ) 一( 1 ，6 ) 一b d 一葡聚糖 ( 1 ，3 ) - ( i ，6 ) 一b d - g l u c a n ，羧甲基茯苓多糖( c a r b o x y m e t h y lp a c h y m a n ，c m p a ) 等【1 3 1 。 提取实验室培养的茯苓菌丝体多糖发现，四种编号为p c m l ，p c m 2 ，p c m 3 和p c m 4 的多 糖中p c m i ，p c m 2 为酸性杂多糖由d - 鼠李糖、d - 木糖、d _ 甘露糖、d - 半乳糖、d - 葡萄糖及 葡萄糖醛酸组成。p c m 3 主要为线型1 3 一( 1 3 ) 一d _ 葡聚糖，其产率占茯苓菌丝体总量的 5 5 8 。p c m 4 由d 一葡萄糖和葡萄糖醛酸组成。茯苓菌丝体化学组成和结构基本同于茯苓 菌核多糖，随提取过程进行葡萄糖含量逐渐增加的变化规律也相同【1 4 1 从茯苓鲜品中用不同的方法分离到六种聚糖，即用0 d n a c l 提取的p c s l ，热水提取 p c s 2 ，0 5 mn a o h 提取p c s 3 - i 和p c s 3 - i i ，用8 8 甲酸提取p c s 4 一i 和p c s 4 - i i 。前三种异型 聚糖由d 一葡萄糖、d 一半乳糖、d - 果糖和d _ 木糖组成，p c s 4 - i 和p c s 4 - i i 主要为线型 b 一( 1 3 ) 一d - 葡聚糖并包含葡萄糖分枝【1 5 1 。 1 2 1 2 茯苓三萜类 到目前为止国内外学者已从茯苓菌核和菌丝中得到三萜类物质3 9 个。根据化学结构 差异可分为以下几种类型，即羊毛甾- 8 - 烯型三萜、羊毛甾一7 ，9 ( 1 1 ) 一二烯型三萜、3 ，4 一 开环一羊毛甾一7 ，9 ( 1 1 ) 一二烯型三萜、3 ，4 一开环一羊毛甾一8 一烯型三萜、三环二萜类【1 6 1 。 此外从茯苓的乙醚、乙醇萃取物中分得8 个化合物【1 7 1 ，通过理化性质和光谱分析，i 分别鉴定为3b 一羟基- 1 6a 一乙酰氧基一羊毛淄一7 ，9 ( 1 1 ) ，2 4 - 三烯一2 1 - - 酸( i ) ，卜乙酰 茯苓酸( 1 i ) ，3b 一羟基一羊毛淄一7 ，9 ( 1 1 ) ，2 4 - 三烯- 2 1 - 酸( 1 1 1 ) ，b 一香树脂醇乙酸醋 ( ) ，o _ 乙酰茯苓酸- 2 5 醇( v ) ，o - 乙酰茯苓酸甲醋( ) ，茯苓酸甲醋( ) ，灵芝酸( v 1 ) 和系首次从茯苓中分得，和系首次从天然产物中分得，i 和v 为2 种新化合物。 还有从茯苓分离到一种新型三萜类，根据光谱法和化学法确定它的结构为31 3 一羟基 苯甲酰脱氢姜黄酮酸，这种酸对由1 2 一o - 十四烷酰( 醇) 醋酸酯( t p a ) 和花生四烯酸诱导的 小鼠儿炎症反应有明显的抑制作用，该酸对二者的半抑制剂量分别为0 2 7 m g ，1 2 5 m g ， 可作为一种新药源进行广泛的开发【1 8 】。 3 河北大学理学硕士学位论文 1 2 1 3 茯苓氨基酸 将茯苓发酵醪液，经细胞破壁处理，低温提取、减压浓缩，复配及稳定处理等工艺 竺获得营养浓缩登采昱昙竺三竺挈基酸鳓分析伽惋氨基酸糊燥基酸总 量4 8 0 m g l o o m l ，其中4 4 为必需氨基酸【z o j 。 1 2 1 4 茯苓微量元素 近年来，在中药药理活性物质的深入研究中，微量元素重金属的含量及其存在状态 日益受到人们的重视，因为很多对人体极为重要的酶，实际尚是络合物，它们的中心离 子都是金属离子，如锰、镁是已糖酶的激活剂；铁存在人体输送氧气的血红蛋白中；在 人体中已发现二十多种含锌酶。因此金属离子含量虽少，但缺少或过多都可能导致疾病。 安徽省岳西县的家种茯苓，对其中钾、钠、钙、镁、铁、锌等几种微量金属元素进行了 测定，为茯苓的药理活性研究以及茯苓种植质量提供参考依据【2 。无机元素包括钙、镁、 铁、钾、钠、磷、硫、硅及氯等【2 2 1 。 l 2 l 5 茯苓其它 茯苓含有脂肪酸，包括辛酸、十一酸、月桂酸、棕桐酸，以及茯苓酸、土牧酸等。 此外，还含有麦角甾醇，树胶，甲壳质，脂肪，甾醇，卵磷脂，右旋葡萄糖，腺嘌呤， 组氨酸，胆碱，a _ 茯苓聚糖酶，微量蛋白酶等十几种成分。对茯苓发酵液的有机酸分析 表明，其含有乙酸、草酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、二十烷酸等，另外其中， 2 7 4 峰处检测到软脂酸十六烷酸，3 5 1 峰处检测到硬脂酸十八烷酸，二者均是亚油酸和亚 麻酸的重要合成前体，哺乳动物是不能自身合成这些生物膜的重要组成成分的f 搠。经研 究发现脱水羟基烯醇酮酸利用c a s p a s e 一3 途径选择性抑制h _ r a s 转化的r a t 2 细胞的生长 并诱导作用于染色体d n a 片断、c a s p a s e 一3 活性、p a r p 的降解及l a m i n a c 的降解的细胞程 序性死亡：1 2 3 】。 4 第1 章绪论 1 2 2 茯苓的医用价值 1 2 2 1 抗肿瘤作用 将1 日龄从雏鸡经腹腔注射马立克氏病病毒( m d v ) 强毒株( 0 2 m l 只) ，并从当日开 始给试验组雏鸡以3 个剂量连续肌肉注射茯苓多糖一周，分别于7 、1 4 、2 8 、4 2 、5 6 日 龄取脾组织，制备脾细胞悬液，用e l i s a 法检测了雏鸡淋巴细胞转化率、n k 细胞活性及 m 巾活性，并与对照组比较。结果表明，3 个剂量均可显著提高雏鸡的淋巴细胞转化率、 n k 细胞活性及m 由活性，且中剂量组效果优于其它2 个剂量组。证实茯苓多糖能提高m d v 强毒株感染雏鸡的细胞免疫活性，并具有抗肿瘤作用【2 4 】 经研究化学修饰的茯苓多糖具有抗肿瘤的效应，将硫酸酯化的茯苓多糖随机分组， 5 一f u 阳性对照组和p b s 缓冲溶液阴性对照组，5 一f u 的肿瘤抑制率为4 6 ，经过化学修饰 的茯苓多糖的抑制率为3 8 3 9 。经组织学观察显示：化学修饰的茯苓多糖对小鼠 s a r c o m a l 8 0 肿瘤细胞有杀伤和诱导凋亡的作用，并对机体免疫力有增强作用【2 5 1 。 羧甲基茯苓多糖也具有抗肿瘤作用嘲。采用选择性氧化茯苓菌发酵液得羧甲基茯苓 多糖，三个剂量的羧甲基茯苓多糖( 2 m g m l 、4 m g m l 、6 m g m l ) 均可提高荷瘤小鼠的淋巴 细胞转化率和n k 细胞杀伤活性，且可提高荷瘤小鼠血清中t n f - a 的含量，表明羧甲基 茯苓多糖可改善荷瘤小鼠的免疫功能，具有抗肿瘤作用，且功效与作用剂量间有一定的 关系，在最佳剂量时活性最耐2 7 1 。 1 2 2 2 免疫调节作用 茯苓多糖具有增强免疫系统功能的作用，既增强细胞免疫，又增强体液免疫，有实 验表明：羧甲基茯苓多糖能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，还能刺激t 淋巴细 胞与b 淋巴细胞，且其免疫机制活跃：茯苓多糖在一定程度上加快造血机能的恢复，也 可改善老年人的免疫功能增强体质，保护骨髓，减轻和预防化疗的毒副反应，达到扶正 固本、健脾补中的作用【2 8 】。 利用茯苓多糖提取液进行体内体外试验发现，其多糖提取液具有显著抑制人的 h e p g 2 和s 一1 8 0 肿瘤细胞的增殖。说明菌丝体多糖可以作为潜在抑制肿瘤制剂，应用前 景广阔【2 9 】。 1 2 2 3 抗衰老作用 采用正常小鼠和老龄大鼠为试验动物，观察茯苓多糖对丙二醛( m d a ) 含量、超氧化 河北大学理学硕+ 学位论文 物歧化酶( s o d ) 和单胺氧化酶( m a o ) 活性和对动物抗寒和抗疲劳实验的影响。结果表明茯 苓多糖能不同程度增加血清中t ：s o d 和c u ：s o d 活性，降低m d a 含量，并且还能延缓小鼠 游泳死亡时间，说明茯苓多糖有较好的抗动物衰老作用嗍。 1 2 2 4 临床辅助治疗价值 加入不同剂量茯苓多糖的k 5 6 2 白血病细胞在6 0 c oy 射线1 5 g y 照射后，立即收集上 清