（植物学专业论文）沙棘中α葡萄糖苷酶抑制剂的筛选.pdf

沙棘仅一葡萄糖苷酶抑制剂的筛选中文摘要实验选用中国沙棘( h i p p o p h a er h a mn o i d e sl s u b s p c h i n e n s i sr o u s i ) 枝叶为研究材料，利片j 酶一抑制剂筛选模型、对沙棘中的活性部位进行a ( ；i 筛选，选择高活性的a g i部位，进行体外酶学动力学研究、体内小鼠耐糖量模型和糖尿病小鼠模型实验研究，探索高活性的a g i 部位对血糖的影响及其作用机理。现将主要的研究内容和结果详细介绍如f ：1 依次用极性不同的溶剂乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水从沙棘粗粉中提取，得到三个不同提取部位；用乙醇回流热水浸法提取，s e v a g e 法除蛋白，得到沙棘粗多糖。乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水和沙棘粗多糖提取得率分别为1 5 2 、1 7 1 、2 4 1 和2 7 9 。2 利用a g i 的筛选模型，分别对四个不同提取部位进行a g i 活性筛选。结果：乙酸乙酯、甲醇、蒸馏水和沙棘粗多糖抑制活性分别为2 0 3 4 、1 3 4 3 、7 1 2 8 和9 0 4 3 。3 选择高活性的沙棘粗多糖提取部位，采用硫酸一苯酚法测得沙棘粗多糖的含糖量为2 8 5 2 。并对沙棘粗多糖进行理化性质和体外酶学动力学研究，结果：沙棘粗多糖浓度在0 0 0 9 8m g m l 一0 6 2 5 m g m l 之间时，酶的抑制率随着浓度的增大而升高，i c s o为0 01 9 1 2 m g m l ，浓度为0 6 2 5 m g m l 时抑制率达9 2 5 2 ，且与酶结合迅速，酸碱范围广，热稳定性好，沙棘粗多糖是一种高活性的竞争可逆性a g i ，抑制常数k i = 5 2 6 m g m l 。4 采用小鼠耐糖量模型，以沙棘粗多糖为实验药物，观察沙棘粗多糖对蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、淀粉负荷剂量后的正常小鼠血糖影响，结果：与对照组比较，淀粉组血糖值降低较为明显( p ( o 0 1 ) ，蔗糖组次之( p ( o 0 5 ) 。表明沙棘粗多糖能够提高正常小鼠的耐糖量；通过抑制肠道内的a g 而发挥作用，体内降血糖作用与阿卡波糖相似。5 用四氧嘧啶糖尿病小鼠动物模型，观察沙棘粗多糖对高血糖小鼠的影响，结果：与模型组比较，给药2 周和4 周后，沙棘粗多糖高剂量组对高血糖小鼠降糖作用明显( p ( o 0 1 ，p ( o 0 5 ) ，降糖率分别为3 1 7 2 和4 5 7 0 ，沙棘粗多糖低剂量组降糖作用次之( 尺0 0 5 ，p ( o 0 5 ) ，降糖率分别为2 8 0 2 和3 9 3 8 。表明沙棘粗多糖对四氧嘧啶致高血糖小鼠具有良好的降血糖作用，且作用强度与剂量呈相关性。6 用链脲佐菌素糖尿病小鼠动物模型，观察沙棘粗多糖对高血糖小鼠的影响，结果：与模型组比较，给药2 周和4 周后，沙棘粗多糖高剂量组对高血糖小鼠降糖作用明显( p ( o 0 1 ，p o 0 1 ) ，降糖率分别为3 3 1 4 和4 3 7 8 ，沙棘粗多糖低剂量组降糖作用次之( p ( o 0 5 ，p ( o 0 5 ) ，降糖率分别为2 7 0 7 和3 6 4 3 。表明沙棘粗多糖对链脲佐菌素致高血糖小鼠具有良好的降血糖作用，且作用强度与剂量呈相关性。关键词：旷葡萄糖苷酶抑制剂，中国沙棘，小鼠，耐糖量，糖尿病动物模型na l p h a - g l u c o s i d a s ee n z y m ei n h i b i t o r ss c r e e n i n gf r o mhip p o p h a er h a mn o i d e sl a b s t r a c tt h ee s s a ya d o p t sb r a n c h e sa n dl e a v e so fc h i n e s eh r h a mn o i d e sa sa ne x p e r i m e n t a lo b j e c ta n du s e se n z y m ei n h i b i t o r ss c r e e n i n gm o d e lt om a k ea g ie x t r a c t i o no ft h ea c t i v es u b s t a n c e ，s e l e c ta g ip o s i t i o no fh i g l la c t i v i t y i ta l s om a k e st h ee x t e r n a lk i n e t i cs t u d yo fe n z y m o l o g y , t h em o d e ls t u d yo f r a t s i n t e r n a ls u g a rt o l e r a n c ea n dt h et e s tr e s e a r c ho f d mr a t s t h ea i mi st oe x p l o r et h ee f f e c to fa g ip o s i t i o nu p o nh i 曲a c t i v i t ya n di t sf u n c t i o n a lo r g a n i s m n o wt h em a i nc o n t e n t sa n dr e s u l t so ft h i sr e s e a r c ha r ea sf o l l o w s ：1 o b t a i n3d i f f e r e n te x t r a c t i o n s ：e t h y la c e t a t e ，m e t h a n o l ，a n dd i s t i l l e dw a t e rb yu s i n gd i f f e r e n ts o l v e n t sl i k ee t h y la c e t a t e ，m e t h a n o l ，a n dd i s t i l l e dw a t e rt og e tt h r e ed i f f e r e n te x t r a c t i o n sf r o mt h er o u g hp o w d e r t h e n ，p o l y s a c c h a r i d es u b s t a n c e sa r cd r a w nb yu s i n ga l c o h o lr e f l u xh o tw a t e re x t r a c t i o nm e t h o da n ds e v a g et op u r i f yp o l y s a c c h a r i d e t h er a t eo fe x t r a c t i o n sf r o me t h y la c e t a t e ，m e t h a n o l ，d i s t i l l e d w a t e ra n dp o l y s a c c h a r i d ei sr e s p e c t i v e l y1 5 2 ，1 7 l ，2 4 1a n d2 7 9 2 u s es c r e e n i n gm o d e lo fa g it or e s p e c t i v e l ys c r e e nt h ea g ia c t i v i t yo fd i f f e r e n te x t r a c t i o n s t h er e s u l t ：t h ei n h i b i t i n ga c t i v i t yo fe t h y la c e t a t e ，m e t h a n o l ，d i s t i l l e dw a t e ra n dp o l y s a c c h a r i d ei sr e s p e c t i v e l y2 0 3 4 ，1 3 4 3 ，7 1 2 8 a n d9 0 4 3 3 s e l e c tp o l y s a c c h a r i d ee x t r a c t i o n so fh i g ha c t i v i t y , a n dg e tt h es u g a rc o n t e n to f2 8 5 2 m a k es t u d yo ft h ep h y s i c o c h e m i c a lp r o p e r t ya n dt h ee x t e r n a lk i n e t i co fe n z y m o l o g yo fp u r i f i e dp o l y s a c c h a r i d e ，a n dr e s u l ti sw h e nt h ev i s c o s i t yo fp o l y s a c c h a r i d ei sb e t w e e n0 0 0 9 8 m g m l 一0 6 2 5 m g m l ，t h ei n h i b i t i n gr a t eo fe n z y m eg o e su pw i t ht h ei n c r e a s eo fv i s c o s i t y ；i c 5 0 = 0 01912 m g m l ，w h e nt h ev i s c o s i t yi s0 6 2 5 m g m l ，t h ei n h i b i t i n gr a t ei s9 2 。5 2 w eg e tt h er e s u l tt h a tp o l y s a c c h a r i d ei sah i g l la c t i v en o n - c o m p e t i t i v ea g ib yi t si n s t a n tc o l l i q u e f a c t i o nw i t he n z y m e ，e x t e n s i v ea c i db a s er a n g ea n dg o o dt h e r m a ls t a b i l i t y i t si n h i b i t i n gi n d e xk i = 5 2 6 m g m l 4 a d o p tn o r m a lr a t s s u g a rt o l e r a n c em o d e la n du s ep o l y s a c c h a r i d e ( p u r i f i e d ) a st e s tm e d i c i n et oo b s e r v ep o l y s a c c h a r i d e e f f e c tu p o nt h en o r m a lr a t sw i t ht h el o a d i n gd o s eo fs u c r o s e ，g l u c o s e ，m a l t o s ea n ds t a r c h t h er e s u l ti sc o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u p ，s u c r o s eg r o u ps h o wt h eo b v i o u sd i f f e r e n c ep o 0 5 ) ，g l u c o s eg r o u pa n ds t a r c hg r o u ps h o wm o v eo b v i o u sd i f f e r e n c e ( p o o1 ) t h em a l t o s ea n ds t a r c hg r o u ps h o wa no b v i o u sr e d u c t i o no fb l o o dv a l u e ，a n dn e x ti ss u c r o s eg r o u p w eo b s e r v ep o l y s a c c h a r i d ec a l li n c r e a s et h es u g a rt o l e r a n c eo ft h en o r m a lr a t sa n dp o l y s a c c h a r i d ef u n c t i o n sb yi n h i b i t i n gi n t e s t i n a la qw h o s ei i is u g a rr e d u c t i o ni ss i m i l a rt oa c a r b o s e 。s，5 a d o p ta l l o x a nd i a b e t i cr a tm o d e lt oo b s e r v ep o l y s a e c h a r i d e se f f e c tu p o nh i g hb l o o ds u g a rr a t s t h er e s u l ti st h a tc o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u p ，a m o n gp o l y s a e c h a r i d eh i g hd o s eg r o u p ，t h eb l o o ds u g a rv a l u eo fr a t s ，a f t e r2a n d4w e e k s a d m i n i s t r a t i o n ，s h o w st h i sg r o u ph a sa no b v i o u se f f e c tu p o ns u g a rr e d u c t i o no fh i g hb l o o dr a t s ( p 0 0 1 ，p 0 0 5 ) w i t ht h es u g a rr e d u c t i o nr a t eo f31 7 2 a n d4 5 7 0 r e s p e c t i v e l y o n l yn e x tt ot h i sg r o u pi st h ep o l y s a c c h a r i d el o wd o s eg r o u p ( p o 0 5 ，p 0 0 5 ) ，w i t ht h es u g a rr e d u c t i o nr a t eo f2 8 0 2 a n d3 9 3 8 t h i ss h o w st h a tp o l y s a c c h a r i d eh a sa9 0 0 de f f e c tu p o nh y p o g l y c e m i cr a t s ，m o d e l e db ya l l o x a n ，s h o w i n gt h er e l e v a n c et oi n t e n s i t ya n dd o s eo fi t s e l f 6 a d o p ts t zd i a b e t i cr a tm o d e lt oo b s e r v ep o l y s a c c h a r i d e se f f e c tu p o nh i g hb l o o ds u g a rr a t s t h er e s u l ti st h a tc o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u p ，t h ep o l y s a c c h a r i d eh i 曲d o s eg r o u p ，a f t e r2a n d4w e e k s a d m i n i s t r a t i o n ，s h o w sa no b v i o u se f f e c tu p o ns u g a rr e d u c t i o no fl l i 曲b l o o dr a t sq 0 0 1 ，p 0 0 5 ) ，w i t ht h es u g a rr e d u c t i o nr a t eo f3 3 1 4 a n d4 3 7 8 r e s p e c t i v e l y o n l yn e x tt ot h i sg r o u pi st h ep o l y s a c c h a r i d el o wd o s eg r o u p ( p 0 0 5 ，p 0 0 5 ) ，w i t ht h es u g a rr e d u c t i o nr a t eo f2 8 0 7 a n d3 6 4 3 t h i ss h o w st h a tp o l y s a c c h a r i d eh a sag o o de f f e c tu p o nh y p o g l y c e m i cr a t s ，m o d e l e db ys t z ，s h o w i n gt h er e l e v a n c et oi n t e n s i t ya n dd o s eo f i t s e l f k e yw o r d s ：a l p h a - g l u c o s i d a s ee n z y m ei n h i b i t o r , h r h a mn o i d e sl - ，r a t ，b l o o ds u g a rt o l e r a n c e ，d i a b e t i cr a tm o d e l目录中文摘要iia b s t r a c t ，。j iii符号说明：i x序言1文献综述一2第一章a 一葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展21 1a 一葡萄糖苷酶抑制剂的来源21 1 1国内外从天然产物中筛选q 一葡萄糖苷酶抑制剂的研究21 1 2a 一葡萄糖苷酶抑制剂化合物的分类一61 1 3a 一葡萄糖苷酶抑制剂的作用机理71 2a 一葡萄糖苷酶抑制剂的药理作用91 2 1a 一葡萄糖苷酶抑制剂与糖尿病91 2 2a 一葡萄糖苷酶抑制剂与病毒感染91 2 3a 一葡萄糖苷酶抑制剂与肿瘤1 01 2 40 一葡萄糖苷酶抑制剂与心血管疾病111 3q 一葡萄糖苷酶抑制剂的临床运用1 2已用于临床的q 一葡萄糖苷酶抑制剂的理化特性1 2三种a 一葡萄糖苷酶抑制剂的临床药效学特征比较1 3a 一葡萄糖苷酶抑制剂的临床治疗作用1 50 一葡萄糖苷酶抑制剂的不良反应1 5其它：1 6第二章治疗糖尿病药物的研究进展1 72 1 胰岛素和胰岛素类似物1 72 1 1 胰岛素( r e g u i a rin s u li nr i ) 172 1 2 胰岛素类似物1 82 2 促胰岛素分泌的药物1 82 2 1 磺酰脲( s u l f o n y i u r e a ss u r ) 类胰岛素促泌剂1 82 2 2 非磺酰脲类胰岛素促泌剂1 92 2 3 胰高血糖素样肽一1 ( g l u c a g o n s i k e - p e p t i d e - ! g l p _ 1 ) 1 9v1234533333ili-r2 3 胰岛素增敏剂一。2 02 3 1 双胍类降糖药：2 02 3 2 噻唑烷二酮类药物( t d z ) 2 02 4 抑制碳水化合物吸收的药物2 12 4 1q 一葡萄糖苷酶抑制2 4 2 淀粉不溶素( p r a m li2 5 糖异生抑制剂。2 6 胰岛素降解抑制剂2 7 醛糖还原酶( a r ) 抑制剂2 8 葡萄糖激酶( g k ) 激活剂2 9o c 。一肾上腺素受体拮抗剂。2 1 0 其它2 11 结语剂2 1n ti d e ) 2 12 lj 2 2，2 2j 2 22 22 3第三章糖尿病模型的研究进展2 43 1 酶一抑3 1 13 1 2制剂模型：一2 4 硝基酚一a d - 吡喃葡萄糖苷为底物的酶一抑制剂筛选模型2 4以淀粉、蔗糖、麦芽糖为底物的酶一抑制剂筛选模型2 43 2 建立糖尿病动物模型的研究：2 53 2 1 化学物质诱导性模型3 2 2 自发性或遗传性动物模型3 2 3 胰腺部分切除模型3 2 4 转基因糖尿病模型( t r a n s g e n j cd i a b e t e sm o d e l ) 2 52 62 72 7第四章高原药用植物沙棘的研究进展2 84 1 高原植物沙棘的生物学特点2 84 2 有关沙棘的本草记载2 8，4 3 沙棘植物的现代研究状况2 9。4 3 1 沙棘含有生物活性物质的种类2 94 3 2 沙棘在植物资源学方面的研究以及其产品应用开发现状3 04 4 沙棘的药理作用研究及临床运用3 14 4 1 对心、脑血管系统疾病的作用：3 14 4 2 对免疫系统的作用和抗肿瘤、抗氧化、抗辐射作甩3 24 4 3 对消化系统疾病的作用：3 24 4 4 抗炎及促进组织再生作用3 24 4 5 抗衰老作用：3 24 4 6 对肝脏的保护作用3 34 4 7 沙棘对血糖的影响3 3实验部分3 4第一章沙棘不同活性部位的提取3 41 1 材料和仪器3 41 1 1 材料3 41 1 2 试剂3 41 2 3 仪器3 41 2 提取方法j 3 41 2 1 按照溶剂极性不同进行各化学部位的提取3 41 2 2 沙棘粗多糖的提取和除蛋白3 51 3 结果与分析0 3 6第二章沙棘中抑制a 一葡萄糖苷酶活性部位的筛选3 82 1 材料与仪器一3 82 1 1 材料：3 82 1 2 试剂3 82 2 3 仪器3 82 2 实验方法3 82 2 1 试剂的配制3 82 2 2 酶抑制活性测定方法的建立3 92 2 3 精密度( p r e c is i o n ) 实验3 92 2 4 重复性实验4 02 2 5a 一葡萄糖苷酶标准曲线的制作4 02 2 6 样品对酶抑制活性的测定4 02 3 结果与分析j 4 02 3 1 精密度实验：4 02 3 2 重复性实验4 02 3 3c l 一葡萄糖苷酶标准曲线4 02 3 4 样品对酶抑制活性的测定。4 1第三章沙棘粗多糖含量测定和酶学动力学研究- 4 2文1 材料和仪器：4 23 2 实验方法4 2v l i3 2 1 相关溶液和试剂的配制4 2。3 2 2 酶活性的测定方法4 33 3 沙棘粗多糖定性定量试验j 4 33 3 1 沙棘粗多糖的定性试验4 33 3 2 用苯酚一硫酸法测定沙棘粗多糖中总糖含量4 33 3 3 结果与分析：_ 4 43 4 沙棘粗多糖酶学动力学实验一4 53 4 13 4 23 4 33 4 43 4 二53 4 63 4 7沙棘粗多糖不同浓度对酶的抑制活性4 5沙棘粗多糖与酶的反应时间对酶的抑制活性4 6沙棘粗多糖在不同的p h 条件下对酶的抑制活性4 6沙棘粗多糖在不同水浴温度下对酶的抑制活性4 6沙棘粗多糖对酶抑制可逆与不可逆类型的测定4 6沙棘粗多糖对a 一葡萄糖苷酶抑制作用类型的测定4 6结果与分析4 6第四章沙棘粗多糖对小鼠血糖影响的研究5 04 1 动物和试药5 04 2 。1沙棘粗多糖对小鼠耐糖量影响5 04 2 3 沙棘粗多糖对四氧嘧啶造模小鼠血糖影响5 14 2 4 沙棘粗多糖对链脲佐菌素造模小鼠血糖影响5 14 3 结果与分析5 24 3 1沙棘粗多糖对小鼠耐糖量的影响5 24 3 2 沙棘粗多糖对四氧嘧啶造模小鼠血糖影响一5 34 3 3 沙棘粗多糖对链脲佐菌素造模小鼠血糖影响o 5 3结论5 5参考文献5 6致谢6 4作者简历6 5在读学位期间发表论文情况6 6v i l l000s55物一一动药一用用一验验一实实激，2方验，实4424a g ia gt f hc a m ps o dg s hm d ad mi d d mn i d d mg d ms u rn s u ri gdi ll g l p 1p p a rp p a r y认i g f b p ip n p g肺a l cp b gi p hd n jd g j +b v d vh c v、符号说明。a l p h a g l u c o s i d a s ei n h i b i t o r sa 一葡萄糖苷酶抑制剂a l p h a - g l u c o s i d a s e仅一葡萄糖苷酶t o t a lf l a v o n e so f h i p p o p h a er h a n m o i d e sl 沙棘黄酮c y c l i ca d e n o s i n em o n o p h 9 s p h a t e环化腺苷酸s u p e r o x i d ed i s m u t 缸e超氧化物歧化酶g l u t a t h i o n e谷胱甘肽m a l e i cd i a l d e h y d丙二醛d i a b e t e sm e l l i t u s糖尿病i n s u l i n - d e p e n d e n td i a b e t e sm e l l i t u si 型糖尿病胰岛素依赖型糖尿病n o n i n s u l i n d e p e n d e md i a b e t e sm e l l i t u s i i 型糖尿病非胰岛素依赖型糖尿病g e s t a t i o n a ld i a b e t e sm e l l i t u s妊娠期糖尿病r e g u l a ri n s u l i n胰岛素s u l f o n y l u r e a s磺酰脲n o n s u l f o n y l u r e a s非磺酰脲i n s u l i ng l a r g i n e甘精胰岛素i n s u l i n d e t e r m i r地特胰素i n s u l i u l i s p r o赖脯胰岛素i n s u l i n a s p a r t门冬胰岛素g l u c a g o n s 1 i k e p e p t i d e 1胰高血糖素样肽一1p e r o x i s o m ep r o l i f e r a t o r - a v t i v a t e dr e c e p t o r 过氧化物酶增值因子活化受体p e r o x i s o m ep r o l i f e r a t o r - a v t i v a t e d 7过氧化物酶增值因子活化受体yi s l e ta m v l i o d胰岛淀粉样蛋白沉积i n s u l i n l i k eg r o w t hf a c t o rb i n d i n gp r o t e i n s人血清中胰岛素样生长因子结合蛋白一l4 - n i t r o p h e n y l a d g l a c o p y r a n o s i d e4 一硝基苯一u 一0 - - p 比喃葡萄糖苷g l y c o s y l a t e dh e m o g l o b i na l c糖化血红蛋白p o s t p r a n d i a lb l o o dg l u c o s e餐后血糖p o s t p r a n d i a lh y p e r g l y c e m i a餐后高血糖d e o x y n o j i r i m y c i n脱氧野尻霉素d e o x y g a l a c t o n o j i r i m y c i n脱氧半乳糖野尻霉素b o v i n ed i a r r h e av i r u s 病毒一牛腹泻病毒h e p a t i t i sv i r u s丙型肝炎病毒i x7、p a i lp l a s m i n o g e na c t i v a t o r纤溶酶原激活物一ln f k bn u c l e a rf a c t o r - k b核转录因子一k bs t zs t r e p t o z o t o c i n链脲佐菌素c f af r e u n d sc o m p l e t ea d j u v a n t弗氏完全佐剂i c 5 0t h eh a l f m a x i m a li n h i b i t o r yc o n c e n t r a t i o n半数抑制浓度a i d sa c q u i r e di m m u n ed e f i c i e n c ys y n d r o m e艾滋病g kg l u c o k i n a s e葡萄糖激酶g k ag l u c o k i n a s ea c t i v a t o r葡萄糖激酶抑制剂a r d a l d o s er e d u c t a s ei n h i b i t o r s醛糖还原酶抑制剂a ra l d o s er e d u c t a s e醛糖还原酶g l ug l u t a m i ea c i d甘氨酸a s pa s p a r t a t ea c i d天冬氨酸i gi n t r a g a s t r i ca d m i n i s t r a t i o n灌胃i pi n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o n腹腔注射hh o u r小时dd a y，天m i nm i n u t e分钟r p mr o u n dp e rm i n u t e每分钟转数i ri n s u l i n r e c e p t o r受体i r si n s u l i n r e c e p t o r s u b s t r a t e受体底物g s k - 3g l y c o g e ns y n t h a s ek i n a s e - 3糖原合成酶激酶g l u t 4g l u c o s e t r a n s p o r t e r葡萄糖转运载体p 1 3 kp h o s p h o t i d v l i n o s i 3 k i n a s e磷酸化的受体底物d m d p6 一( 0 l ，仅- d i p h e n y l a c e t y l p i p e r a z i n y l ) p h e n y l 一5 一m e t h y l - 4 ，5 d i h y d r o 一3 一( 2 h ) - p y r i d a z i n o n e6 一( a ，伍一二苯基乙酰哌嗪基苯基) - 4 ，5 - - - 氢- 5 - 甲基- 3 - ( 2 h ) 一哒嗪酮x沙棘中a 一葡萄糖苷酶抑制剂的筛选序言、，糖尿病( d i a b e t e sm e l l i t u sd m ) 是一种因胰岛索分泌绝对或相对不足，导致以高血糖为特征的内分泌代谢性疾病。若机体长期处于高血糖状态，可导致失明、肾功能衰竭、神经病变、心脑血管疾病、肢体坏疽等多种并发症。现已成为继心脑血管、癌症之后严重危害人类健康的第三大疾病。世界卫生组织预计，至1 2 0 1 0 年，全球糖尿病患者将达到2 2 亿人。据中国糖尿病协会报告，我图目前已成为世界糖尿病第三大国，患者超过5 0 0 0力j 人，且呈上升趋势，并迅速向低龄人群扩散f l 。因此，有效防治糖尿病己成为全球性卫生健康问题。i 型( i n s u l i n d e p e n d e n td i a b e t e sm e l l i m si d d m ) 糖尿病的治疗，主要采用有效的胰岛素制剂及代用品。而i i ( n o n i n s u l i n d e p e n d e n td i a b e t e sm e l l i t u sn i d d m ) 型糖尿病的治疗，则主要是依靠现有的口服降糖药物。a o i ( a l p h a - g l u c o s i d a s ei n h i b i t o r s ) 是上世纪7 0年代开发研制的一类新型1 3 服降血糖药物，能竞争性抑制小肠内a g ( a l p h a - g l u c o s i d a s e )的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道吸收，有效降低餐后高血糖和控制糖尿病及其并发症的发生。目前，已广泛用于临床的三种人工合成的a g i 阿卡波糖( 拜糖平，a c a t h o s e ) 、伏格列波糖( 倍欣，v o g l i b o s e ) 和米格列醇( m i g l i t 0 1 ) ，均具有较好的疗效。a g 广泛分布于生物体中，在机体的代谢过程中起着非常重要的作用，参与食物消化、糖蛋白合成、多糖及糖复合物合成与分解代谢等许多生物过程。如果影响了a g 的活力，体内的正常代谢就会遭到破坏。糖尿病、肥胖症、高血脂、炎症、癌变、免疫反应和病毒感染等都和细胞表面的复合糖质有密切关系，而复合糖质的形成又和a g 有一定的联系。研究表明a g i 可以抑制蛋白糖基化和脂类糖基化过程，因而还具有抗癌、抗病毒、免疫刺激活性和抗动脉粥样硬化等作用1 2 削。由于a g i 具有多方面的生物活性，引起了国内外学者极大的兴趣，国外研究主要是天然植物、微生物代谢产物和化学合成等方面进行筛选，国内研究主要是依据传统中医药学治疗糖尿病积累的二千多年的经验，从丰富的天然资源中筛选a g i 类药物。因此，开发出高活性的a g i 类药物，调节a g的活性，可以治疗很多疾病，具有广阔的应用前景。沙棘作为一种十分珍贵的药用植物，现代研究对其化学成分、药理学研究较多，目前已开发出多种药品和功能性食品。而对a g i 研究，国内外文献中并无人涉及，本论文依据前期对高寒植物中a g i 进行高通量筛选的基础上，首次发现沙棘枝叶提取物具有体外抑$ t j a g 活性和降低小鼠体内餐后血糖活性，提出沙棘具有抑制a g 活性，因此，对中国沙棘植物进行a g 抑制活性的筛选，对其进行体外酶学动力学和体内降血糖的药理作用机理的研究，为拓宽沙棘资源的开发和利用提供理论依据。青海师范人学硕十学位论文文献综述、第一章仅一葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展a 一葡萄糖苷酶( a g l u c o s i d a s ea g ) 是一类能够从含有o 【一葡萄糖苷键底物的非还原端催化水解a 二葡萄糖基酶的总称【5 1 。包括麦芽糖酶、异麦芽糖酶、蔗糖酶和海藻糖酶等。该酶能从淀粉分子链非还原性末端依次切开0 【一l ，4 苷键，并能缓慢水解a l ，6 苷键将淀粉转化为葡萄糖，易于人体吸收【9 1 。1 1 伐一葡萄糖苷酶抑制剂的来源随着科学技术突飞猛进发展，生命科学领域中的分子生化药理学和病因学也迅速发展，在分子水平上人们能够研究疾病发生、发展的生化过程，掌握了参与这些生化反应过程的各类分子，因此能够选择这些参与生化过程的分子作为研究药物作用的靶部位，即建立定一靶筛选方法。a g i 是一种新型治疗糖尿病的药物，通过与a g 发生竞争性竞争性抑制作用，达到餐后降血糖的目的，目前国内外以天然植物和药物为来源的a g i 研究比较多，并发现许多有价值的活性成分，现分别综述如下。1 1 1 国内外从天然产物中筛选伍一葡萄糖苷酶抑制剂的研究a g i 类为第四类治疗糖尿病的药物，已被认为是i i 型糖尿病的首选药和i 型糖尿病胰岛素治疗的辅助药物【1 0 1 。但是，因其价格高，且存在一些胃肠道的诸多不良反应，因而从天然植物中寻找低毒、高效的a g i 一直是国内外学者的研究热点。1 1 1 1 国外从天然植物中n 一葡萄糖苷酶抑制剂的筛选研究早在2 0 世纪7 0 年代，a g i 就引起了国外药学家们的极大兴趣，开始从天然植物中寻找a g i ，发现了许多有价值的化合物。a s a n o 等【1 1 】改变桑( m o r u s a l b a l ) 根皮的提取纯化工艺，分离出1 8 种生物碱，其中1 a ，21 3 ，3 a ，41 3 一四羟基一去甲莨菪烷( 去甲莨菪碱) 和1 a ，21 3 ，3 a ，41 3 ，6 a 一五羟基一去甲莨菪对小鼠消化道中的葡萄糖苷酶的抑制作用很强。i t 0 等【1 2 1 以对硝基苯基一旷d 一葡萄糖吡哺糖苷或麦芽糖为底物，研究了1 6 种黄酮类化合物对酵母a g 的抑制作用。结果表明，浓度为0 1 m m o l l 时，槲皮素、杨梅酮、非瑟酮和栎素对a g 有很强的抑制作用，i c 5 0 值分别为8 ，4 ，8 ，2 0l m o l l 。j u n 等【1 3 1 从杜仲( e u c o m m i au l m o i d e so l i v ) 茶中分离得到槲皮素，并表明槲皮素对酵母a g 具有抑制作用，k i 为8 5 1 0 咱m o l l ：对小鼠小肠蔗糖酶也具有抑制作用，i c 5 0 ( 半数抑制浓度) 为2 9 1 0 m o l l 。从杜仲茶中还分离出儿茶素一( 7 ，8 - b ，c ) 一4 a - ( 3 ，4 - - 沙棘中q 一葡萄糖苷酶抑制剂的筛选羟苯基) 一2 ( 3 h ) 一吡喃糖和儿茶素一( 7 ，8 - b ，c ) 一41 3 - ( 3 ，4 一二羟苯基) 一2 ( 3 1 - 1 ) 一吡哺糖，并发现了这2 种化合物对酵母a g 有抑制作用，k i 均为2 5 1 0 m o l l 。k i m 等【1 4 j 发现木犀草素对酵母a g 有抑制作用，当浓度为0 5 m g m l 时，抑制率为3 6 。且木犀草素抑制作用比阿卡波糖强，前者的i c s o 为5 m g m 1 ，后者的i c s o 为o 5m g m l 。m a t s u u r a 等f l5 】从海索草( h y s s o p u so f f i c i n a l i s ) 的干燥叶子中分离提取出有效成分( 7 s ，8 s ) 一s y - r i n g o y l g l y c e r o l 9o ( 6 0 - - 苯乙烯醛基) 一p d 一葡萄糖吡喃糖苷( i ) 和( 7 s ，8 s ) 一s y r i n g o y l g l y c e r o l 9od d 一葡萄糖吡喃糖苷( i i ) ，对a g 有抑制作用，当化合物( i ) 和化合物( i i ) 的浓度为3 x1 0 弓m o l l 时，对小鼠小肠的a g 的活性抑制率分别为5 3 和5 4 。海索草已经被证实是一种安全的食用植物，将它同日常饮食结合，可增加它对a g 的抑制作用。t o d a 1 6 】从丁香( s y r i n g ao b l a t e ) 子中提出鞣花单宁和多桔酰一葡萄糖，能够抑制小鼠小肠中的葡萄糖苷酶，并且抑制活性随桔酰单元的增多而增大。y o s h i k a w a 1 7 l 从巴西传统药物m y r c i am u l t f l o r ad c 的叶子中提取到5 种黄烷酮类物。，质能够通过抑制葡萄糖苷酶抑制血浆中葡萄糖的升高。y o s h i k a w a t 博】从斯里兰卡和印度的药物s a l a c i a 呦c u l a t a 根和茎中提取了复杂的内，盐锍一硫结构的物质，而这种植物正是印度传统的治疗糖尿病的药物。、日本的坪井洋，池上秀二，纪再思等( 19 】制备莲( s e m e nn e l u m b i n i s ) 提取物，使其与a g 和作为其底物的蔗糖反应，并计算莲提取物添加对酶反应的影响时，明确了莲提取物具有a g 抑制剂活性。进而将莲提取物和蔗糖给予小鼠测定血糖值时，证实了莲提取吖物导致血糖值降低。迂田隆广，高久武司【2 0 】利用乙醇或含水乙醇溶液从栗子( r o s ag r a c i l i f l o r ar e h d e tw i l s ) 的涩皮中提取糖酶抑制剂有效预防或缓解糖尿病或预防肥胖，其发明还提供了含有该糖酶抑制剂的食品、饮料和药物。迂田隆广，高久武司【2 i 】还从壳i 卜( f a g a c e o u s ) 中提取糖酶抑制剂，可将其添加至食物组合物或药物组合物中作为活性成分，用于延迟糖类消化或吸收，抑制饭后血糖水平升高，或预防肥胖。印度的贾纳斯维梅，马杜苏德纳等1 2 2 】从p i p a t a l i n e 、芝麻素、派立托胺、g u i n e e n s i n e和b r a c h y s t a m i d e - b 中提取一种a g i ，对糖尿病、癌症、诸如乙型肝炎和丙型肝炎、h i v等病毒性疾病以及a i d s 等具有治疗效果。1 1 1 2 国内从天然产物中旷葡萄糖苷酶抑制剂的筛选研究目前，国内许多学者主要是依扔：传统中医药学治疗糖尿病积累的两千多年的经验，从丰富的天然资源中筛选a g i 类药物。李英、张兰等f 4 】以中药知母( r h i z o m a a n e m a r r h e n a e ) 等1 6 味中药为研究材料，用浸一青海师范人学硕十学位论文提、超滤、c m c 柱层析等方法，分离得到a g i 。初步研究表明，该成分为大分子糖苷类物质，具有较好的热稳定性，在p h = 2 2 - 1 3 0 范围内稳定，其抑制作用类型为竞争性抑制，与药物拜糖平类同。高小平、张蔚瑜等【2 3 】采用a g 、淀粉酶以及蔗糖酶活性测定方法，对1 2 6 种常用中药经水煮醇沉提取，进行a g 抑制活性筛选。结果大黄( r a d i xe tr h f z o m ar h e i ) 、山茱萸( 砌c t u sc o r n i ) 、赤芍( r a d i xp a e o n i a e ) 、五倍子( g a l l ac h i n e n s i s ) 中的提取物对a g 、旷淀粉酶以及转化酶活性均有抑制作用，与阳性药物拜糖平比较，这5 种中药抑制旷淀粉酶的活性较低，但抑制a g 和转化酶的活性明显强于拜糖平。顾江萍等l ”】通过建立酶抑制剂模型，对人参( r a d i xg i n s e n g ) 、黄芪( r a d i xa s t r a g a h ) 、大黄和水蛭( h i r u d o ) 临床常用于治疗糖尿病肾病的中药进行了a g 抑制活性的筛选，结果显示大黄和黄芪具有较好的a g 抑制作用，且抑制类型为非竞争性抑制。林玉桓【2 4 】等人对3 4 种中药进行筛选，结果在巴戟天、牛膝