（外科学专业论文）rassf1基因在胃癌中的表达及临床意义.pdf

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g ) 。但其中的三个主要的剪接体，即黜峪s 眦、 r a s s f i b 和r a s 5 f 1 c ，由6 个外显子顺序拼接而成。这三个剪接体均共用3 石 外显子，编码r a s 相关区域。 研究目的：1 主要通过观察r a s s f l 基因三个剪接体( a b ，c ) 在胃癌 组织和胃癌细胞系中的表达水平，初步探讨其在胃癌发生发展中的作用；2 进 一步研究r a s s f l b 基因在肿瘤细胞中的表达及其克隆与序列分析，为深入研 究r a s s f l b 基因的生物学功能及作用机制奠定基础。 研究方法：1 利用半定量r t - p c r 检测m 峪s f l 基因的三种剪接体在胃癌细 胞系b g c 8 2 3 和s g c 7 9 0 1 ，以及胃癌组织和癌旁组织中的表达水平；2 利用半 定量r t - p c r 检测黜峪s f l b 基因在胃腺癌( a g s ) 、高转移肺癌( 9 5 d ) 、肺腺癌 ( l t e p a - 2 ) 、肝癌0 - i e p g 2 ) 和白血病细胞( u 9 3 7 ) 中的表达水平，并k a 6 s 中 克隆r a s s f l b 基因，运用生物信息学方法对其进行序列分析。 研究结果：1 r a s s f l 基因三个剪接体( a b ，c ) 在b g c 8 2 3 细胞中相对表 达量分别为0 2 7 、o 9 6 、0 7 9 ，在s g c 7 9 0 1 细胞中相对表达量分别为0 6 2 、0 8 5 、 0 9 8 。2 在6 0 例胃癌组织中r a s s f l a ，r a s s f l b 表达缺失率分别为 6 0 2 ( 3 7 6 0 ) ，2 5 ( 1 5 6 0 ) ，r a s s f l c 基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近 约为8 6 7 ( 5 5 6 0 ) 。3 r a s s f l b 基因在肺腺癌细胞株l t e p a - 2 和白血病细胞株 r a s s f l 基因在胃癌中的表达及临床意义 u 9 3 7 中表达量较高，序列分析显示该基因含有一个r a s 结合区域。 研究结论：1 r a s s f l 基因三种剪接体在胃癌不同分化程度的细胞系 b g - c 8 2 3 和s g c 7 9 0 1 细胞中均有表达，且r a s s f l a 基因在低分化的b g c 8 2 3 细胞中的表达量明显低于中分化的s c , - c 7 9 0 1 细胞；2 通过对6 0 例胃癌患者及 癌旁正常组织中3 种不同剪接体的表达研究发现，r a s s f l 基因三种剪接体在胃 癌组织中表达均下调，r a s s f l b 和r a s s f l c 在胃癌中的表达差异无显著 性，r a s s f l c 无论在癌抑或癌旁正常组织中均全部表达，因此r a s s f l c 不是胃 癌的抑癌基因，而与其来自同一d n a 因不同剪接所产生的r a s s f l a ，在胃癌 组织及癌旁正常组织中的表达则有显著性差异，癌旁正常组织几乎全部表达，而 相匹配的癌组织中却存在较高的r a s s f l am r n a 的表达缺失。进一步支持了 r a s s f l a 基因作为胃癌候选抑癌基因的论断。3 发现在不同的癌变细胞系 中，r a s s f l b 基因虽都有表达，但表达量存在明显的差异，在提示r a s s f l b 基因可能与肿瘤的类型有关，并在不同种类的癌变细胞中所起的作用可能不 同，r a s s f l b 的表达还可能与细胞的分化程度有关。 关键词：抑癌基因；r a s s f l 基因；胃癌；r t - p c r a b s t r a c t g a s t r i cc a r c i n o m ai so n eo ft h em o s tc o m m o nt u m o r 8i nc h m 钆w h i c hi st h e f i r s to n ea m o n ga l lk i n d so ft u m o r s g a s t r i cc a r c i n o m ac o m e sf r o me p i t h e l i a lt u m o r t i s s u e s t h e s t u d yo fg e n ei ng a s t r i c c a r c i n o m ai so n eo ft h ed u ew a y st o d i a g n o s i s ，t r e a ta n dp r e v e n tt u m o r s s of a rg a s t r i cc a r c i n o m ah a sb e e nf o u n dt h a ta g r e a tn u m b e ro fo n c o g e n e sa n ds u p p r e s s o rg e n e sd i r e c t l ya f f e c tb o mo c c u r r e n c ea n d d e v e l o p m e n to ft u m o r s c u r r e n t l yi t i sd e m o n s t r a t e dt h a ti ng a s t r i cc a r c i n o m a s ， h e r i t a b l el o s so fg e n e sf u n c t i o ni sm e d i a t e da so f t e nb ye p i g e n e t i c 勰b yg e n e t i c a l t e r a t i o n s r a s s f lg e n ei san e wc a n d i d a t et u m o rs u p p r e s s o rg e n ec l o n e df r o ms m a l la r m o f 加m o s o m e3 p 2 1 , w h i c hw a sr e p o r t e di n2 0 0 0 i ti ss on a m e d 弱i t se x p r e s s i o n c o n t a i n sr e l e v a n tr e g i o nt or a sp r o t e i ns t r u c t u r e i ti si n d i c a t e db yr e s e a r c h e st h a t r a s s f lh a sd i f f e r e n t t r a n s c r i p t s s u c ha s r a s s s f i a , r a s s f l ba n d r a s s f l c , w h i c hh a v et h e i re x p r e s s i o n si nd i f f e r e n td e 伊e e si nm u l t i f o r mc a n o e r s t h e t h r e e t r a n s c r i p t sh a v e3 - 6e x o n sa n dc o d i n gr a sr e g i o n o b j e c t i v e ：1 s t u d yt h ee x p r e s s i o no ft h r e et r a n s c r i p t s ( a - b ，- c ) i nt h et u m o r c e l l sa n dg a s t r i cc a r c i n o m at i s s u e st of i n do u tt h ef u n c t i o ni nt h ed e v e l o p m e n to ft h e g a s t r i cc a r c i n o m a s ot h a ti t c a no f f e rt h es t r o n ge v i d e n c et od i a g n o s i sa n dt r e a t g a s t r i cc a r c i n o m a 2 c l o n er a s s f l bg e n ea n do b s e r v ei t ss e q u e n c ei no r d e rt ol e a r n i t sb i o l o g i c a lf u n c t i o n m e t h o d s ：1 t od e t e c tt h ee x p r e s s i o no ft h r e et r a n s c r i p t so fr a s s f lg e n ei n g a s t r i c c a n c e rt i s s u e s ，n o r m a lt i s s u e sa n dt w og a s t r i cc a n c e rc e l ll i n e ss u c ha s b g c 一8 2 3a n ds g c 一7 9 0 1b ys e m i - q u a n t i t a t i v er t - p c r 2 t h er a s s f lg e n ew a s c l o n e di ng a s t r i cc a n c e rc e l la g s ，l i v e rc a n c e rc e l lh e p g 2 ，h i g h l ym e t a s t a t i cl u n g c a n c e r9 5 d ，l u n ga d e n o c a r c i n o m ac e l ll t e p - a - 2 ，l e u k e m i ac e i lu 9 3 7b yr t - p c r ，i t s s e q u e n c ew a sa n a l i z e db yb i o l o g i c a li n f o r m a t i o nm e t h o d r e s u l t s ：1 mr e l a t i v ee x p r e s s i o nv a l u eo ft r a n s c r i p t s ( - a , 一b ，一c ) i nb g c 一8 2 3i s d i s t i n c t l y0 2 7 、0 9 6 、0 7 9 ，a n di ns g c - 7 9 0 1t h ev a l u ei s 0 6 2 、0 8 5 、0 9 8 。2 i tw a s s h o w nb yt h ef i n d i n g st h a tt h er a t e so fe x p r e s s i o nl o s sb e t w e e nr a s s f l aa n d r a s s f l bw a sr e s p e c t i v e l y6 0 2 ( 3 7 6 0 ) ，2 5 ( 1 5 6 0 ) ，1 1 l er a t eo fe x p r e s s i o no f r a s s f i cg e n ew a sn e a r l ys a m e ，a b o u t8 6 7 ( 5 5 6 0 ) i ng a s t r i cc a n c e rt i s s u e sa n d n o r m a lt i s s u e s t h er a s s f l bg e n ee x p r e s s e di na l lt e s t e dt u m o rc e l l s ar a sp r o t e i n r a s s f l 基因在胃癌中的表达及临床意义 b i n d i n gd o m a i nw a so b s e r v e di nt h er a s s f l bg e n e c o n c l u s i o n s ：1 t h ee x p r e s s i o no ft h e t h r e er a s s f lg e n et r a n s c r i p t sw a s d e t e c t e di nt h et w og a s t r i cc a n c e rc e l ll i n e si so b v i o u s ，a n dt h el e v e lo ft h ee x p r e s s i o n o fr a s s f l ai nb g c - 8 2 3i sl o w e rt h a ni ns g c - 7 9 0 1 2 t h ee x p r e s s i o no fr a s s f l g e n ei s o f o r m si sd o w n - r e g u l a t e di ng a s t r i cc a n c e rt i s s u e s , w h i c hi sn e g a t i v ec o r r e l a t i o n t oc a n c e r t h e r ei sn od i f f e r e n c eb e t w e e nt h e e x p r e s s i o n o fr a s s f l ba n d r a s s f l c t h ec o m p a r i s o no ft h eo t h e rt w og e n ei sd i f f e r e n t , w h i c hh a ss t a t i s t i c s s i g n i f i c a n c e t h ee x p r e s s i o no ft h r e er a s s f lg e n et r a n s c r i p t si ng a s t r i cc a r c i n o m a s t i s s u e sw a se x a m i n e db yr t - p c r 丽ma n c h o r e dp r i m e r s r a s s f l cg e n ee x i s t si nt h e n o r m a lt i s s u e sa n dt u m o rt i s s u e s ，8 0t h a tr a s s f l cg e n ei sn o tt h ec a n d i d a t eg e n ef o r i n h i b i t i n gc a n c e r s i ti sd i f f e r e n tt h a tt h ee x p r e s s i o no fr a s s f l ag e n ei nt h en o r m a l t i s s u e sa n dt u m o rt i s s u e s ，a n di ti ss u g g e s t e dt h a tt r a n s c r i p tam a yb ec a n d i d a t eg e n e f o r i n h i b i t i n g c a n c e r s 3 r a s s f l b g e n e e x i t si nd i f f e r e n tt u m o rc e l l s , b u tt h e e x p r e s s i o n l e v e lh a so b v i o u sd i f f e r e n c e s i ti n d i c a t e st h a tr a s s f l bg e n eh a s r e l a t i o n s h i p si nd i f f e r e n tt u m o rc e l l s t h ei m p o r t a n c eo fr a s s f i bg e n em a yb en o t t h eg a m ei nd i f f e r e n tc e l l s t h er a s s f l bg e n ei sc i o n e ds u c c e s s f u l l yi ng a s t r i c c a r c i n o m ac e l la g s ，h e p a t o m ac a r c i n o m ac e l l s ar a sp r o t e i nb i n d i n gd o m a i ne x i t si n r a s s f l b g e n es e q u e n c e k e yw o r d s ：t u n l o rs u p p r e s s o rg e n e ；r a s s f lg e n e ；g a s t r i cc a r c i n o m a ；r t - p c r 缩写与符号 目录 第一章绪论 v l 1 1 胃癌简介及研究现状1 1 1 1胃癌疾病概述1 1 1 2胃癌的病因及相关致病因子2 1 1 3 胃癌基因研究的最新进展。3 1 2 峪s f l 基因的研究进展5 1 2 1r a s s f l 基因的结构及生化特性5 1 2 2 黜峪s f l 基因的功能5 1 2 3r a s s f l 基因失活的机制6 1 3 本课题的研究目的与意义以及研究内容与设计。7 1 3 1 研究目的7 1 3 2 研究意义7 1 3 3 研究内容。7 1 3 4 实验技术8 1 3 5 实验设计。8 第二章r a s s f l 基因在胃癌组织和细胞中的表达。一。一1 0 2 1 实验材料1 0 2 1 1 细胞株及组织标本1 0 2 1 2 主要材料1 0 2 1 3 主要仪器。1 0 2 1 4 细胞培养1 1 2 2 实验方法1 1 2 2 1 胃癌组织及细胞总r n a 提取。1 1 2 2 2r t - p c r 。1 1 2 2 3 数据处理方法1 2 2 3 统计学分析。1 2 2 4 实验结果与分析1 3 2 4 1 r a s s f l 基因三种剪接体在胃癌细胞中的表达1 3 2 4 2r a s s f l 基因三种剪接体在胃癌及癌旁组织中的表达1 4 2 5 讨论1 5 v r a s s f l 基因在胃癌中的表达及临床意义 第三章r a s s f l b 基因的克隆与序列分析 1 7 3 1 实验材料。1 7 3 1 1 试验细胞1 7 3 1 2 细胞培养1 7 3 1 3 常用缓冲液1 7 3 1 4 主要材料1 8 3 1 5 主要仪器设备1 9 3 2 实验方法1 9 3 2 1 引物设计与合成1 9 3 2 2 五种肿瘤细胞总r n a 的提取及e d n a 第一链的合成2 0 3 2 3r a s s f l b 基因在五种肿瘤细胞中的p c r 扩增2 0 3 2 4 胶回收2 0 3 2 5 连接反应2 1 3 2 6 感受态细胞制备2 l 3 2 7 质粒d n a 转化2 2 3 2 8s d s 碱裂解法小量抽取质粒d n a 2 2 3 2 9 质粒d n a 酶切鉴定2 3 3 2 1 0 测序。2 3 3 2 1 1 对r a s s f i b 基因序列进行分析2 3 3 3 实验结果与分析2 4 3 3 15 株肿瘤细胞总r n a 的提取结果。2 4 3 3 2r a s s f l b 基因在5 种肿瘤细胞中的表达2 4 3 3 3r a s s f i b 基因的克隆2 5 3 3 4r a s s f l b 基因序列分析2 5 3 4 讨论：1 6 第四章结论及工作展望 4 1 主要结论2 8 4 2 工作展望2 8 参考文献 在学期间发表论文 致谢 v i 3 0 3 9 4 0 江苏大学硕士学位论文 缩写与符号 英文缩写英文全称 中文全称 3 p s h o r t 觚no fc h r o m o s o m e 33 号染色体短臂 c p gc p g i s l a n d胞嘧啶鸟嘌呤岛 d e p c d i e t h y p y r o c a r b o n a t e 焦碳酸二乙酯 g c g a s t r i cc a n c e r 胃癌 l o hl o s so f h e t e r o z y g o s i t y 杂合性丢失 p b s p h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n e 磷酸盐缓冲液 r a s s f lr a s - a s s o c i a t i o nd o m a i nf a m i l y l r a s 相关区域家族1 基因 r a s s f l ar a s a s s o c i a t i o nd o m a i nf a m i l y l ar a s 相关区域家族1 a r a s s f l br a s a s s o c i a t i o nd o m a i nf a m i l y l br a s 相关区域家族1 b i u 峪s f l cr a s - a s s o c i a t i o nd o m a i nf a m i l y l cr a s 相关区域家族1 c r n a s er i b o n u c l e a s e核糖核酸酶 t gt u m o rg e n e s肿瘤基因 t s gt u m o rs u p p r e s s o rg e n e s肿瘤抑制基因 i h c cu n i o nf o ri n t e r n a t i o n a lc a n c e rc o n t r o l 国际抗癌联盟 v 癌发 我国 性肿 瘤死亡的2 3 2 ，占恶性肿瘤死亡的第一位1 2 1 。( 男性是女性的1 9 倍) 。我国胃癌 发病有明显的地区差异和城乡差别【3 】。 胃癌的病理大体分型分为早期胃癌和进展期胃癌，胃癌好发部位以胃窦部为 主，占一半以上，其次是胃底贲门部，胃体较少见】。根据世界卫生组织1 9 7 9 年提出的国际分类法【q ，将胃癌组织学分为普通型和特殊型，普通型有：乳头 状腺癌；管状腺癌；低分化腺癌；粘液腺癌；印戒细胞癌。特殊型癌主 要有：腺鳞癌、鳞状细胞癌、类癌、未分化癌等。淋巴转移时胃癌的主要转移途 径，进展期胃癌的淋巴转移率高达7 0 左右，早期胃癌也可有淋巴转移，胃癌的 淋巴转移率与癌灶的浸润深度呈正相关，胃癌的淋巴结转移通常是循序逐步转 移，但也可发生跳跃式淋巴转移1 7 - 9 1 。国际抗癌联盟( c c ) 1 9 8 7 年公布的胃癌 t n m 分期法，其分期的病理依据主要是肿瘤浸润深度、淋巴结以及远处转移情 况，不同类型不同分期的胃癌的治疗方案存在差别【1 0 l 。 手术在胃癌的治疗中占主导地位，根治性手术是能够达到治愈目的的重要方 法，胃癌切除术后，根据病变侵犯深度及有否淋巴结转移，或术中所见肿瘤情况， 决定术后是否进行辅助化疗，病变局限于黏膜或黏膜下层且淋巴结无转移者，术 后定期观察，不作化疗；病变侵及肌层或肌层以外，术后常规辅助化疗；无论病 变侵及深度，凡有淋巴结转移的，术后常规行辅助化疗；尽管已行根治术，但有 潜在转移可能者，术后需行辅助化疗【1 1 - 1 2 1 。术后化疗是胃癌最常用的综合治疗方 法。因此根治性手术的术前、术中和术后辅以化疗可以延长生存期，晚期胃癌病 人采用适量化疗，能减缓肿瘤的发展速度，改善症状，有一定的近期效果【1 3 1 。 对失去手术机会、化疗不敏感的胃癌，抗血管生成治疗显示出良好的前景。 对胃癌血管生成有显著抑制作用的药物有内皮抑素、血管抑素、生长抑素、组织 r a s s f l 基因在胃癌中的表达及临床意义 金属蛋白酶抑制因子、抗血管生成的基因治疗与传统的放疗、化疗联合应用可提 高其疗，效【1 4 1 。 胃癌的基因治疗一般是指将限定的遗传物质转入病人特定的胃癌靶细胞，以 达到预防或治疗疾病的目标的方法【1 5 】。肿瘤基因治疗是用正常或野生型基因矫正 或置换致病基因或引入有治疗价植的其它来源基因的一种治疗方法。基因治疗主 要包括自杀基因治疗、反义基因治疗、抑癌基因治疗、免疫基因治疗及抗血管生 成基因治疗，但目前安全问题及转染效率低下等是制约其推广应用的瓶颈【1 6 1 。 1 9 9 0 年，r o s e n b e r g 等人 1 7 - 1 9 】首次在晚期癌症病人中利用逆转录病毒载体基因转 移技术，将转导了编码肿瘤坏死因子的肿瘤浸润淋巴细胞用于治疗晚期癌症。随 着人们对肿瘤免疫、肿瘤病因及分子机制等各个领域研究的深入，肿瘤基因治疗 获得了突飞猛进的发展，并且会逐渐走向成熟，批准进入临床试验的基因药物逐 年增多。目前免疫基因治疗、转导抑癌基因治疗、反义癌基因治疗以及靶向化疗 等肿瘤基因治疗研究的开展已成为目前攻克和治愈肿瘤最具希望的途径之一刚。 1 1 2 胃癌的病因及相关致病因子 胃癌可发生于任何年龄，以4 0 - - 6 0 岁多见，其发病原因不明，可能与多种因 素有关：1 地域环境及饮食生活因素，胃癌发病有明显的地域性差别，在我国 的西北与东部沿海地区胃癌发病率比南方地区明显增高。2 幽门螺杆菌感染也 是引发胃癌的主要因素之一【2 1 】。大量流行病学和病理组织学资料表明，h p 感染 与胃癌的发生关系密切。胃癌高发地区的人群h p 感染率明显高于低发地区人 群；社会经济状况低的人群h p 感染率较高，发生胃癌的机率也高。我国胃癌 高发区成人h p 感染率明显要高，地区差异显著。但是关于幽门螺杆菌在胃癌 发生中的作用机制不是很清楚，其癌变的过程目前被大家接受的模式如下 2 2 - 2 3 1 ： 正常胃黏膜一慢性活动性胃炎_ 慢性萎缩性胃炎_ 肠上皮化生_ 不典型增生一 癌变，该模式已被大部分研究人员认同，其具体的可能机制有p q ：( 1 ) 细菌代 谢产物直接转化粘膜；( 2 ) 类同于病毒的致病机制，h p 的d n a 某些片段转移 入宿主细胞，引起转化；( 3 ) u p 引起炎症反应，其本身具有基因毒性作用。 h p 感染可能是胃癌发生的一种始动因素，也可能同时是一种促进因素。有研究 指出h p 感染的胃黏膜病理形态层改变不仅与h p 的直接作用及粘膜对细菌的代 谢产物反应有关，还与h p 所致粘膜障碍、粘膜屏障破坏、外来抗原侵入过多 2 江苏大学硕士学位论文 有关，h p 控制h p 感染在胃癌防治中的作用已经受到高度重视【2 5 1 。3 癌前病变， 胃的癌前病变条件是指一些使胃癌发病危险性增高的良性胃疾病和病理改变。 易发生胃癌的胃疾病包括胃息肉、慢性萎缩性胃炎及胃部分切除后的残胃，这 些病变都可能伴有不同程度的慢性炎症过程、胃粘膜肠上皮化生或非典型增生， 时间长久有可能转变为癌。4 遗传和基因遗传与分子生物学研究表明 2 肛2 7 1 胃癌 的发生与抑癌基因p 5 3 ，a p c 、d c c 杂合性丢失和突变有关，胃癌组织中p 5 3 杂合性缺失率高达6 3 ，而癌旁异型增生的粘膜中未见p 5 3 基因缺失。有研究 显示 2 8 - 2 9 胃癌组织中癌基因c - m 巩k - r a s 有明显扩增和过度表达；而胃癌的侵袭 性和转移则与c d 4 4 v 基因的异常表达有关。目前资料表明胃癌的癌变是一个多 因素、多步骤、多阶段发展过程，涉及癌基因、抑癌基因、凋亡相关基因与转 移相关基因等的改变，而基因改变的形势也是多种多样的。 1 1 3 胃癌基因研究的最新进展 胃癌的基因研究是诊断、治疗及防治胃癌发生和转移的基本途径之一嗍。 现代分子生物学的进展表明：胃癌和其他人类恶性肿瘤一样，都是多基因病变， 其发生和发展不仅与刺激细胞异常增殖的肿瘤基因变异及高表达有关，也直接 和细胞中的抑制细胞突变和异常增殖的抑癌基因( t u m o rs u p p r e s s o rg e n e ，t s g ) 功能失活相随p 。 与胃癌发生关系最密切的癌基因是c - m e t 癌基因1 3 2 】。在胃癌发生发展进程 中经常见到c - m e t 基因扩增。一种与胃癌相关转录产物6 0 k bc - m e t m r n a 常表 达于胃癌组织或胃癌细胞系，而不表达于正常胃黏膜组织。进一步研究表明 p s - s 卯，c - m e t6 0 k b 转录物表达水平高低与胃癌淋巴结转移之间有明显相关性。 而野生型p 5 3 基因是一种抑癌基因 3 6 1 ，其所表达的p 5 3 蛋白属于d n a 结合蛋 白家族，是细胞周期g 期检查点的关键成分，对d n a 的复制起到监视作用， 对d n a 的复制起到关键作用，当p 5 3 基因突变时，其球形构象易发生改变， 失去与细胞结合的特异位点，细胞即失去自身监视作用，因此突变型p 5 3 基因 可抑制细胞凋亡的发生，为恶性细胞的形成提供良机 3 7 - 3 s 1 。同时p 5 3 基因还是 关卡基因，能在细胞周期的g 1 s 交界处起监测作用，以防止过多细胞或d n a 有损伤的细胞进入s 期。p 5 3 基因一旦发生突变，p 5 3 蛋白不仅丧失上述功能， 且能与野生型p 5 3 蛋白结合，使其丧失抑癌功能 s g l 。p 5 3 基因突变在胃黏膜病 3 r a s s f l 基因在胃癌中的表达及临床意义 变由肠上皮化生一异型增生一胃癌的发展过程中呈渐进性增加趋势，提示p 5 3 基因在胃癌多阶段发生过程中起主要作用，且在癌前病变中可发现p 5 3 突变， 提示其可能是胃黏膜细胞癌变的早期事件。胃癌发生凋亡还可由f a s f a s l 相结 合而介导，患者机体内被激活的t c 细胞表面迅速表达f a s l , 其与靶细胞表面f a s 结合，产生的效应可破坏d n a 完整性，干扰细胞周期正常运行，破坏细胞结 构，最终导致典型细胞凋亡形态学改变嗍。 c - m y c 基因位于第8 号染色体( 8 q 2 4 ) ，是一种控制细胞增殖和凋亡的双重 作用，促进增殖和凋亡的c - m y c 蛋白功能在同一区，并且c - m y c 基因表达只提 供一个启动细胞增殖和凋亡的信号【4 1 】。因此当某些抑癌因素存在或生长因子缺 乏时，c - m y c 蛋白可以促进细胞的凋亡，当致癌因素存在时，则可促进细胞增 殖，引起肿瘤的发生发展【4 2 】。 l i v i n 是新近发现的一个凋亡抑制蛋白( m ) 家族成员。有研究表明l i v i n 是凋亡抑制因子，在消化系统肿瘤中研究较少，尤其与胃癌的关系则更为少见， l i v i n 的异常表达在肿瘤的发生过程中可能起着重要作用1 4 3 l 。y a n g h a s h i 等用嗍 荧光定量r t - p c r 检测多种消化道肿瘤细胞系，发现l i v i n 基因在胰腺癌细胞系 a 及结肠癌细胞系h t 2 2 9 中过度表达，证明胃肠道肿瘤中确实存在l i v i n 的异 常表达，用e l i s a 法检测数十名胃肠道肿瘤患者血清，发现其中超过半数病例 中l i v i n 抗体呈阳性反应，较抗s 抗体在胃肠道肿瘤中的阳性率为高，由此推 断l i v i n 可能作为一个新的肿瘤抗原来检测胃肠道肿瘤，胃肠癌患者血清中存 在抗l i v i n 抗体可作为一种新的诊断标志脚删。 h e r 2 基因亦称c c r b b - 2 基因，其表达的蛋白产物为人表皮生长因子受体 2 ，后者的高表达可活化细胞信号转导系统，从而导致细胞转化、增殖m 。据相 关研究结果显示h e r 2 基因扩增发生率与胃癌淋巴结转移呈正相关【锚】。 因此对胃癌细胞凋亡的相关基因和诱导凋亡因素的研究必须深入，胃癌的 整个进程中涉及多基因参与其中，癌或抑癌基因的过度表达或表达缺失将推动 胃癌的发生与发展【4 9 l ，同时针对基因的分子水平研究也将为其将为基因治疗胃 癌的成功提供科学依据，并可为发掘新的抗癌药物拓宽研究领域，终将为胃癌 的治疗带来光明的前景。 4 1 2r a s s f l 基因的研究进展 1 2 1r a s s f l 基因的结构及生化特性 2 0 0 0 年d a m m a r m 等用酵母双杂交筛选方法在3 号染色体短臂( 3 p 2 1 3 ) ： 克隆出一个抑癌基因，由于其核苷酸序列的碳端( c t e r m i n u s ) 与小鼠r a g 相关区 域家族1 ( r a sa s s o c i a t i o nd o m a i nf a m i l y1 ) 及小鼠r a s 效应蛋白n o r e l 高度 同源，遂命名为r a s 相关区域家族1 ，即r a s s f l 基因例。研究发现，黜峪s f l 能直接参与细胞周期的调控，在体内和体外能抑制细胞生长，并参与诱导细胞 凋亡【2 】。由于选择性剪切和不同启动子的使用，r a s s f l 基因至少存在7 个不同 的剪接体( 剪接体a - g ) 。但其中的三个主要的剪接体，即r a s s f i a 基因、 r a s s f i b 基因和r a s 5 f 1 c 基因，由6 个外显子顺序拼接而成，这三个剪接体 均共用3 _ _ 6 外显子，编码r a s 相关区域i s l 】。r a s s f i a 依次为l u 、2 a 1 3 和外显 子3 一_ 6 ，e d n a 全长为1 8 7 3 b p ，包含一个编码3 4 0 个氨基酸的开放阅读框、蛋 白的分子量为3 8 8 k d a 。r a s s f l b 基因依次为1 1 3 、2 a 1 3 和外显子3 - _ 6 的e d n a 全长为1 6 6 4 b p ，包含外显子铆和外显子3 _ _ 6 ，只编码r a s 相关区域。r a s s f l c 的e d n a 全长为1 7 0 0 b p ，包含外显子针和外显子3 _ - 6 ，编码2 7 0 个氨基酸， 蛋白的分子量为3 1 2 l d ，编码两个结构域【5 2 】。 1 2 2 鼬峪s f l 基因的功能 有研究学者【5 3 1 用n o r t h e r n 印迹杂交探查r a s s f l 基因在肾癌a d 2 9 3 、肝癌 h e p g 2 、结肠腺癌h t - 2 9 等肿瘤细胞系中的表达，结果显示r a s s f l a 在所有 正常组织表达，在绝大多数恶性肿瘤组织表达沉默。黜峪s n b 主要在造血系统 细胞中表达，其在正常组织和肿瘤组织中表达相近。r a s s f l c 在所有的细胞中 表达【5 4 1 。 目前普遍的观点认为，r a s s f l a 基因( r a sa s s o c i a t i o nd o m a i nf a m i l y1 a g e n e ) 是一种新的肿瘤抑制基因，它的高表达与失活与多种人类肿瘤发生有关， 在肿瘤发生早期失活，参与恶性肿瘤的发生。r a s s f l b 基因只编码r a s 关联结 构域，以g t p 依赖的方式直接与h a r a s 相结合，没有特殊的生物学功能。 r a s 5 f 1 c 在正常组织中表达明显，在恶性肿瘤组织表达信号微弱。r a s s f l c 的主要功能以g t p 依赖方式诱导细胞凋亡，该功能受r a s 基因活化的调节【5 5 巧6 】。 5 r a s s f l 基因在胃癌中的表达及临床意义 1 2 3r a s s f l 基因失活的机制 结合目前的国内外的实验研究来看，研究的最多的是r a s s f l a 基因失活 机制，目前认为r a s s f i a 基因表达失活主要与启动子区特异的高甲基化、杂 合性丢失及染色体缺失有关阿。d n a 甲基化是脊椎动物d n a 的自然化学修饰 方式，由d n a 甲基化转移酶介导，将胞嘧啶转变为5 甲基胞嘧啶，主要发生 在胞嘧啶鸟嘌呤的c p g 二核苷酸中的胞嘧啶碱基上。c p g 岛位于基因的启动 子和第一个外显子区，它富含c p g 二核苷酸，因此称为“c p g 岛形8 】。d n a 的 甲基化可以改变染色体的结构，d n a 甲基化可使基因表达水平下调，在正常组 织中，散在的c p g 通常