（外科学专业论文）125Ⅰ粒子抑制小鼠移植lewis肺癌成瘤作用的研究.pdf

目录 f i i ii ii lll l i ii i iii ij if 18 0 0 0 5 0 中文摘要1 英文摘要4 研究论文1 2 5 i 粒子抑制小鼠移植l e w i s 肺癌成瘤作用的研究 前言9 9刖舌。 材料与方法9 结果18 附图2 l 附表2 4 讨论2 6 参考文献3 0 综j 苤3 4 致 射4 2 个人简历4 3 中文摘要 1 2 5l 粒子抑制小鼠移植l e w is 肺癌成瘤作用的研究 摘要 肺癌是一种常见的肺部恶性肿瘤，其死亡率已占癌症死亡率之首。近 5 0 年来，全世界肺癌的发病率明显增高。据统计，在欧美某些国家和我 国大城市中，肿痛的发病率己居男性各种肿瘤的首位。近年来，随着吸烟 和各种环境闪素的影响，世界各国特别是工业发达国家，肺癌的发病率和 病死率均迅速上升。 1 2 5 i 粒子组织间近距离治疗肿瘤是一种低剂量率、持续性的电离辐射 治疗方法。法治疗方法具有对肿瘤组织杀伤力强，对周围正常组织损伤小， 操作简单便，创伤小的优点，在肿瘤临床治疗中得到广泛应用。但是关 于粒子治矿，活度和总剂量的研究甚少。事实上，每一种种植技术的处方剂 量、靶区实际获得剂量和肿瘤根除剂量之间的关系尚不清楚，并且粒子在 抑制肿瘤复发方面的研究也鲜有报道。本实验在此方面进行了探讨。 目的：通过动物实验，研究靶区实际受量与处方剂量之间的关系，观 察放射性粒子对肿瘤生长的抑制效果，明确放射性粒子在抑制肿瘤生长方 面的作用。以期对临床工作给予理论支持。 方法：本研究分两部分进行。 第一部分：组织实际累积受量的测量。将c 5 7 b l 6 j 健康小鼠6 0 只随 机分成两纰，腋下皮下植入不同活度的粒子。距粒子0 5 c m 处皮下植入热 释光剂量计( t h e r m ol u m i n e s c e n td o s i m e t e r , t l d ) 进行组织累积受量的测 量。于3 天、6 天、9 天、1 2 天、l5 天分别随机抽取6 只小鼠取材。将实 验后的t l d 送省疾控中心测量。软件分析得出组织实际累积受量随时间 变化曲线，求出组织累积受量达5 g y 、1 0 g y 时所需时间。并与美国医学 物理师协会( a m e r i c a n a s s o c i a t i o no f p h y s i c i s t si nm e d i c i n e ，a a p m ) 规定 的公式所计算的理论时间数值进行比较。 第二部分：挖5 i 粒子对肿瘤组织的抑制效果。按照随机对照原则，将 c 5 7 b l 6 j 小鼠4 8 只，随机分为两组：0 5 m c i 和0 8 m c i 的粒子组。各组 再平分为对照组和实验组。分别于小鼠腋下皮下接种0 2 m ll e w i s 肺癌单 细胞悬液( 5 1 0 6 个m 1 ) ，同时距0 5 c m 处皮下植入0 5 ( o 8 或空) m c i l 2 5 i 中文摘要 粒子。在第一部分测得的组织累积受量达至i l5 g y 和1 0 g y 的时间每组分别 随机处死6 只小鼠，测量肿瘤大小，计算抑瘤率。在距离粒子o 5 c m 位置 取材，通过病理切片观察肿瘤组织形态学变化；t u n e l 染色观察细胞凋亡 情况，计算凋亡指数。 结果： 1 组织累积受量测量结果通过热释光剂量计所测得0 5 m c i 组3 天、 6 天、9 天、1 2 天、1 5 天各时间点组织累积受量分别为：1 3 0 4 + 8 8 、 2 6 4 4 + 1 8 1 、3 9 1 6 4 - 2 0 1 、5 1 8 1 4 - 2 7 1 、6 6 9 2 4 - 3 2 4 ：0 8 m c i 组：2 1 2 8 4 - 1 0 3 、 4 0 7 4 - 18 7 、6 0 8 3 4 - 2 4 2 、814 5 4 - 3 4 5 、10 0 2 2 4 - 6 6 5 。将上述数据拟合曲线。 2 组织累积受量达到5 g y 、1 0 g y 的时间根据曲线得出距0 5 m c i 粒 子0 5 c m 处组织累积受量达到5 g y 、1 0 g y 的时间是1 l 天、2 4 天，距0 8 m c i 粒子0 5 c m 处组织累积受量在达到5 g y 、1 0 g y 的时间是7 天、1 4 5 天。 根据a a p m 公式计算距0 5 m c i 粒子0 5 c m 处组织累积受量达到5 g y 、 1 0 g y 的时间是l o 1 天、2 1 6 天，距o 8 m c i 粒子o 5 c m 处组织累积受量 达到5 g y 、1 0 g y 的时间是6 2 天、1 2 9 天。s p s s l 3 0 统计软件进行两条 回归直线的比较，两条直线有差别( p 0 0 5 ) ，组织实际累积受量低于 a a p m 公式理论处方剂量。 3 肿瘤体积变化对照组：小鼠在接种肿瘤后，4 6 天后局部皮下可 触及粟粒大小的瘤结节；l o 1 4 天时瘤结节直径约1 o c m ；1 9 天时，肿瘤 增大包裹右前肢，小鼠行动不便。0 5 m c i 实验组：6 天时未触及肿瘤，1 0 天时可触及肿瘤结节，1 5 天时肿瘤直径0 6 c m 左右。0 8 m c i 实验组：6 天时未触及肿瘤，1 0 天时可触及肿瘤结节，1 5 天时肿瘤直径0 3 c m 左右； 与对照组比较，明显小于对照组。 4 抑瘤率0 5 m c i 组中实验组在5 g y 、1 0 g y 时肿瘤重量：0 6 5 4 - 0 2 4 9 、 0 9 8 4 - 0 3 5 9 ，抑瘤率分别为：7 2 3 4 、8 5 4 3 ，抑瘤率差别明显，有统计 学意义( p 0 0 1 ) 。0 8 m c i 组中实验组在5 g y 、1 0 g y 时的肿瘤重量： 0 5 2 4 - 0 15 9 、0 6 2 4 - 0 2 6 9 ，抑瘤率分别为：7 5 3 9 、8 7 0 3 ，抑瘤率差别 明显，有统计学意义( p o 0 5 ) 。 5 形态学观察( 光镜下) 对照组：肿瘤组织内可见到广泛的炎细胞 浸润，罕见细胞凋亡表现。实验组：肿瘤组织可见到广泛的炎细胞浸润， 中文摘要 大面积凋亡现象，表现为核膜皱缩，细胞核浓缩，染色质凝集成新月体， 部分有碎裂，形成凋亡小体，胞质内空泡增多。 6t u n e i 染色结果阳性标记的细胞核呈棕黄色或棕褐色，标记细胞除 见于核固缩、核碎裂外，也见于一些无明显固缩的细胞核，而对照组则 很少有凋亡细胞出现。实验组与对照组比较，凋亡率大于对照组，且有 统计学意义( p o 0 1 ) ，即放射性粒子可引起细胞凋亡的增加。 结论： 1 组织实际累积受量低于a a p m 公式的理论处方剂量。 21 2 5 i 粒子组织间近距离治疗能有效抑制肿瘤生长。并且随时间延长， 或粒子活度的适度增加，抑瘤效果明显提高。 3 病理学分析粒子所在部位肿瘤组织见炎性改变及细胞凋亡。说明粒 子植入后，放射线导致细胞凋亡而抑制肿瘤生长。 4t u n e l 染色进一步证实粒子照射后肿瘤细胞凋亡，1 2 5 i 粒子能有效抑 制肿瘤增殖，生长。凋亡是肿瘤杀伤途径之一。 关键词：1 2 5 i 粒子：热释光剂量计；近距离治疗；l e w i s ；凋亡；t u n e l 英文摘要 r e s e a r c ho f1 2 5 is u p p r e s s i n gf u n c t i o ni nt u m o r i g e n e s i so ft h e l e w i sl u n gc a n c e rt r a n s p l a n t e di nt h e ，m o u s e a b s t r a c t l u n g c a n c e ri sac o m m o nm a l i g n a n tt u m o r , w h i c hi so nt h et o po ft h e m o r t a l i t yr a t ea m o n ga l lt u m o r s i nt h er e c e n t5 0y e a r s ，t h ei n c i d e n c eo fl u n g c a n c e ri n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya l lo v e rt h ew o r l d s t a t i s t i c ss h o wt h a tt h e i n c i d e n c eo fl u n gc a n c e rh a sb e e no nt o po fa l lo t h e rt u m o r so fm a l ei ns o m e b i g c i t i e so f b o t hc h i n aa n do t h e rc o u n t r i e si ne u r o p ea n da m e r i c a a sar e s u l t o fs m o k i n ga n dv a r i o u so fe n v i r o n m e n t a lf a c t o r s ，t h ei n c i d e n c ea n dm o r t a l i t y r a t eo fl u n gc a n c e ra r er i s i n gr a p i d l ya r o u n dt h ew o r l di nr e c e n ty e a r s ， p a r t i c u l a r l yi ni n d u s t r i a lc o u n t r i e s t h em e t h o do f 1 2 5 ip a r t i c l e si n t e r s t i t i a lb r a c h y t h e r a p yt ot u m o ri sa l o w d o s e - r a t eb u tc o n t i n u i n gi o n i z i n gr a d i a t i o nt r e a t m e n t t h i sm e t h o di s w i d e l yu s e dt ot r e a tt h et u m o rb e c a u s ei ti sm e r i t so f e f f e c t i v eo nt h et u m o r d e s t r u c t i o n ，s m a l ld a m a g et os u r r o u n d i n gn o r m a lt i s s u e ，s i m p l eo p e r a t i o na n d l i g h tt r a u m a h o w e v e r , t h e r ea r ef e wr e s e a r c h e sa b o u tt h ep a r t i c l ea c t i v i t ya n d t h et o t a ld o s eo ft h ep a r t i c l eo ft r e a t m e n t a sam a t t e ro ff a c t ，t h er e l a t i o n s h i p a m o n gt h ep r e s c r i p t i o nd o s e ，t h ea c t u a ld o s eo ft a r g e tv o l u m eo b t a i n e da n d t h e d o s eo ft u m o re r a d i c a t i o ni ss t i l lu n c l e a r a l s o ，f e wr e s e a r c ha b o u tt u m o r r e c u r r e n c ea f t e rt h i sk i n do ft r e a t m e n th a v eb e e nr e p o r t e d i nt h i ss t u d y , a r e s e a r c hh a sd o n ei nt h i sc o n t e x t o b j e c t i v e ：t h r o u g ha n i m a le x p e r i m e n t s ，t h er e l a t i o n s h i p b e t w e e n p r e s c r i p t i o nd o s ea n dt h ea c t u a lc u m u l a t i v ed o s eo ft h et a r g e ta r e aa r es t u d i e d a s l ot h ei n h i b i t o r ye f f e c to ft h er a d i o a c t i v ep a r t i c l e so nt u m o rg r o w t hi s o b s e r v e d ，a n dt h ee f f i c a c yo fr a d i o a c t i v ep a r t i c l e si n h i b i tt u m o rr e c u r r e n c ei s c l e a r e d i th o p e st h a ts o m et h e o r e t i c a ls u p p o r t sc a nb eg i v e nt oc l i n i c a lw o r k m e t h o d s ： t h i se x p e r i m e n t a t i o ni sd i v i d e di n t ot w o p a r t s p a r tl ：t h et i s s u ea c t u a lc u m u l a t i v ed o s es h o u l db ec a r r i e do u t 6 0 4 a n da ne x p e r i m e n tg r o u p 0 2 m ll e w i sl u n gc a n c e rs i n g l ec e l ls u s p e n s i o n ( 5 10 6 ) i si m p l a n t e di ns u b c u t a n e o u so fm i c ea r m p i t ，a tt h es a m et i m e ，0 5 ( 0 8 o re m p t y ) m c i 眩5 ip a r t i c l e si si m p l a n t e d0 5 c ma w a yf r o mt h ec e l l s i m p l a n t a t i o np o i n t s i xm i c e a r er a n d o m l ys a m p l i n ge a c hg r o u pw h e nt h ed a y w eg o tf r o mt h ef i r s tp a r tw h e nt h et i s s u ec u m u l a t i v ed o s er e a c h e d5 g ya n d lo g y , t h e nt u m o rs i z ei sm e a s u r e d ，t u m o ri n h i b i t i o nr a t e i sc a l c u l a t e d s a m p i n g a to 5 c ma w a yf r o mp a r t i c l e ，t h ec h a n g eo ft u m o rh i s t o m o r p h o l o g y b ym i c r o t o m es e c t i o no fp a t h o l o g y i so b s e r v e d ；a p o p t o s i sr a t ei sa n a l y z e db y t u n e l ，a p o p t o t i ci n d e xi sc a l c u l a t e d r e s u l t s ： 1t h et i s s u e c u m u l a t i v ed o s e ：t h e0 5 m c ig r o u pt i s s u e c u m u l a t i v ed o s e o f 3 md ，6 t hd ，9 md ，1 2 t hd1 5 mdw h i c hi sm e a s u r e db yt l da r e1 3 0 4 + 8 8 ， 2 6 4 4 + 18 1 ，3 91 6 士2 0 1 ，518 1 士2 7 1 ，6 6 9 2 + 3 2 4 t h e0 8 m c ig r o u pt i s s u e c u m u l a t i v ed o s eo f3 md ，6 md ，9 md ，1 2 md15 hdw h i c hi sm e a s u r e db yt l d a r e2 1 2 8 + 1 0 3 、4 0 7 + 1 8 7 、6 0 8 3 士2 4 2 、8 1 4 5 + 3 4 5 、1 0 0 2 2 土6 6 5 t h e ni t s f i r e dc u r v ew i t ht h ed a t e 2t h ed a yw h e nt h et i s s u e c u m u l a t i v ed o s er e a c h e d5 g y ，10 g y ： a c c o r d i n gt om e a s u r e m e n t sa n df i t t i n gc u r v e s ，w ec a nc a l c u l a t et h ed a y w h e n 5 英文摘要 t h et i s s u e0 5 c ma w a yf r o m0 5 m c ip a r t i c l ec u m u l a t i v ed o s er e a c h e d5 g y ， 10 g yi s11 md ，2 4 5 mdr e s p e c t i v e l y , a n dt h ed a yt h ed a yw h e nt h et i s s u e 0 5 c ma w a yf r o m0 8 m c ip a r t i c l ec u m u l a t i v ed o s er e a c h e d5 g y ，10 g y i s7 md ， l4 5 mdr e s p e c t i v e l y c a l c u l a t e da c c o r d i n gt oa a p mf o r m u l at h ed a yw h e n t h et i s s u e0 5 c ma w a yf r o m0 5 m c ip a r t i c l ec u m u l a t i v ed o s er e a c h e d5 g y ， 1 0 g yi s 1 0 1 md ，2 1 6 mdr e s p e c t i v e l y ，a n dt h ed a yw h e nt h et i s s u eo 5 c m a w a yf r o mo 8 m c ip a r t i c l ec u m u l a t i v ed o s er e a c h e d5 g y ，10 g y i s6 2 md ， l2 9 mdr e s p e c t i v e l y 3c h a n g eo ft u m o rs i z e ：c o n t r o lg r o u p ：m i c ea r ep l a n t e dw i t ht u m o r c e l l s m i l i a r ys i z e dt u m o rn o d u l e sc a l lb et o u c h e di nt h el o c a ls u b c u t a n e o u sa t t h e4 6 md a y ；t u m o rn o d u l e s d i a m e t e rr e a c h e d1 0 c ma tt h e1o 一14 t hd a yl a t e r , t h et u m o rp a c k a g e dt h ef o r e l i m bo ft h em o u s ea tt h e19 md a yl a t e r ，a n di ti s d i f f i c u l tf o rt l l em i c et ow a l k t h e0 5 m c ir a d i o a c t i v ep a r t i c l e se x p e r i m e n t g r o u p ：t h e r ea r en ot u m o rn o d u l e st h a tc a nb et o u c h e da tt h e6 md a y t u m o r n o d u l e sc a nb et o u c h e du n d e rt h el o c a ls u b c u t a n e o u sa tt h e10 md a y ，a n d d i a m e t e rr e a c h e d0 6 c ma tt h e15 md a y c o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u p ，t h e t u m o ri s s i g n i f i c a n ts m a l l e r r a d i o a c t i v ep a r t i c l eh a v es i g n i f i c a n te f f e c t f o r i n h i b i tt u m o r i g e n e s i si nm i c e t h e0 8 m c ir a d i o a c t i v ep a r t i c l e se x p e r i m e n t g r o u p ：t h e r ea r en ot u m o rn o d u l e st h a tc a nb et o u c h e d a tt h e6 md a y t u m o r n o d u l e sc a l lb et o u c h e du n d e rt h el o c a ls u b c u t a n e o u sa tt h el0 md a y ，a n d d i a m e t e rr e a c h e d0 3 c ma tt h e15 md a y c o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u p ，t h e t u m o ri ss i g n i f i c a n ts m a l l e r 4i n h i b i t i o nr a t e ：t h e w i g h to f5 g y , 10 g yi n 0 5 m c i g r o u p i s ： o 6 5 ：k - 0 2 4 9 ，o 9 8 士0 3 5 9 ，i n h i b i t i o n r a t ei s7 2 3 4 ，8 5 4 3 ，w h i c hi s s t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p 0 0 5 ) ；t h ew i g h to f5 g y , 10 g y i no 5 m c ig r o u pi s ： o 5 2 ：k - 0 15 9 ，0 6 2 士0 2 6 9 ，i n h i b i t i o nr a t e i s 7 5 3 9 ，8 7 0 3 ，w h i c h i s s t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p o 0 5 ) 5e x p r e s s i o no nm o r p h o l o g y ( 1 i g h tm i c r o s c o p e ) c o n t r o lg r o u p ：i tc a n b es e e naw i d er a n g eo fi n f l a m m a t o r ye e l l i n f i l t r a t e di nt h et u m o rt i s s u e ，a n da 6 英文摘要 r a r eo fa p o p t o s i sc e l l e x p r e s s e d e x p e r i m e n tg r o u p ：aw i d er a n g eo f i n f l a m m a t o r yc e l li n f i l t r a t i o n ，m a s s i v ea p o p t o s i s ，w h i c hm a n i f e s t e da sn u c l e a r m e m b r a n e s h r i n k a g e ，c o n d e n s 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i s c o n c l u s i o n ： 1t i s s u ea c t u a lc u m u l a t i v ed o s ei sb e l o wt h ea a p m p r e s c r i p t i o nd o s e 2m i c ea let r e a t e db y 12 3 i b r a c h y t h e r a p y , a n dt u m o r i g e n e s i sc o u l db e i n h i b i t e dt u m o rg r o w t h ；a st i m ep r o l o n g e d ，p a r t i c l e sa c t i v i t yi n c r e a s e d ，t h e e f f e c to fi n h i b i tt u m o rg r o w t hi m p r o v e d 3p a t h o l o g yr e s u l t s ：n e c r o s i se x i s t e da tt h es i t e so f t u m o r , a p o p t o s i sc o u l d b ef o u n da r o u n dn e c r o s i s t h et u m o ri si n h i b i t e dg r o w t hb e c a u s et h er a d i a t i o n c a u s e sa p o p t o s i so ft u m o ra f t e ri m p l a n t a t i o n 4t u n e ls t a i n i n gc o n f i r m e da p o p t o s i so ft u m o rc e l l sa f t e r p a r t i c l e i r r a d i a t i o n1 2 5 ip a r t i c l e sc a ne f f e c t i v e l yi n h i b i tt u m o rv a l u ef r o mp r o l i f e r a t i n g a n dg r o w i n g k e y w o r d s ：12 5 ip a r t i c l e s ；t l d ，b r a c h y t h e r a p y ；l e w i s ；a p o p t o s i s ；t u n e l 7 英文缩写 a b b r a a p m a p o i i b n s c l c p c d t p s v a t s c d c t u d r t o g 英文缩写 f u l le n g l i s hn a m e t h ea m e r i c a na s s o c i a t i o no f p h y s i c i s t si nm e d i c i n e a p o p t o t i ci n d e x i n t e r s t i t i a lb r a c h y t h e r a p y n o n es m a l lc e l ll u n gc a n c e r p r o g r a m m e dc e l ld e a t h t h e r a p yp l a n n i n gs y s t e r m v id e oa s s i s t e dt h o r a c o p i cs u r g e r y c e n t e r sf o rd i s e a s ec o n t r o l t h e r m o1 u m i n e s c e n td o s i m e t e r r a d i a t i o nt h e r a p yo n c o l o g yg r o u p 中文 美国医学物理师协会 凋亡指数 组织间近距离治疗 非小细胞肺癌 细胞凋亡 治疗计划系统 电视辅助胸腔镜手术 疾病控制中心 热释光剂量计 急性放射损伤评级标准 8 研究论文 1 2 5i 粒子抑制小鼠移植l e w is 肺癌成瘤作用的研究 鱼 刖罱 1 2 5 i 粒子组织间植入近距离照射是一种恶性肿瘤治疗手段。它是一种 低能量放射性核素，通过放射源发出持续、短距离的放射线，可给予靶组 织较高的剂量，最大限度消灭肿瘤细胞；而正常组织不损伤或仅有微小损 伤f 。 肺切除术是肺癌有效治疗手段之一，但如何提高治疗水平防止复发是 临床重要的课题。肺癌术后放疗是目前防止肿瘤局部复发的手段，但其有 放射治疗损伤大，适形性差的特点。需要一种有效治疗手段来预防肿瘤复 发。手术切除肿瘤后，坦5 i 粒子组织间近距离治疗抑制局部肿瘤复发效果 临床已有报道，显示其具有一定的优越性。 1 2 5 i 粒子治疗肺癌效果较外放射明显，但治疗剂量仍为a a p m 的理论 处方剂量，而相应活度的粒子组织实际累积受量测量还未有相关报道。 本研究首先以小鼠为载体，植入粒子同时植入热释光剂量计，测量 不同活度粒子，组织实际累积受量。随后，选取c 5 7 b l 6 j 小鼠，观察小 鼠在同时植入l e w i s 肺癌细胞和2 5 i 粒子后，肺癌成瘤情况，为临床应用 1 2 5 i 粒子预防肿瘤局部复发提供依据。 材料与方法 l 材料 1 11 2 5 i 粒子( 6 7 1l 型) 1 2 5 i 放射性密封籽源的外形为圆柱形( 见f i g 1 ) ，包壳为电子束或激 光焊封的高纯钛管，长度为4 5 m m ，直径为0 8 m m ，钛厚度为0 0 5 m m 。 源芯为含放射性核素银丝，长度为3 0 m m ，直径为o 5 m m 。主要发射 3 5 5 k e v 的丫射线，组织穿透能力1 7 c m ，半衰期5 9 4 3 天，剂量率常数 o 8 8 c g y h r u ，r b e1 4 ，衰变模型e 。电子俘获，空气比释动能转换 1 2 7 0 u m c i 。对铅的半价层是0 0 2 5 m m ，对细胞组织的半价层为2 0 m m 。 由北京原子高科有限公司提供o 5m c i 、o 8 m c i 粒子各4 2 颗，空粒子2 4 研究论文 颗。2 戊二醛浸泡3 0 分钟，无菌生理盐水冲洗后使用。放射性粒子出厂 前经过检漏实验、活度测量。 1 2 实验动物及细胞 c 5 7 b l 6 j 小鼠，体重1 8 - - 2 0 9 ，雄性，1 0 8 只，购自中国医学科学院 实验动物学部( 合格证号：0 1 3 9 8 4 0 ) ；河北省人民医院临床研究中心动 物饲养室饲养。 瘤株：l e w i s 肺癌细胞，购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资 源中心，河北省人民医院临床研究中心传代培养。 1 3 主要仪器、设备 粒子植入针北京赫之源有限公司 通用型热释光剂量读出器北京博创特 热释光剂量计( l i f ：m g ，c u ，p ) 宰 北京博创特 鍪翌竺防芝兰苎二算衣、铅眼镜、 北京原子高科有限公司 铅围脖、铅手套等。 。 l e i c at p1 0 5 0 全密闭自动脱水机德国l e i c a 公司 l e i c ae g11 6 0 石蜡包埋机德国l e i c a 公司 l e i c a2 0 3 5 石蜡切片机德国l e i c a 公司 m e t a m o r p h 专业生物图像分析处美 国 u n i v e r s a l i m a g i n g 理软件 一 c o r p o r a t i o n 流式细胞仪( f a c s 4 2 0 型)美国b e c t o nc o u l t e r 公司 生物安全柜( 超净工作台)上海力新实业有限公司 二氧化碳孵育箱( m c o 1 5 a c 型)日本s a n y o 公司 倒置显微镜( p m 1 0 a d s 型)日本o l y m p u s 公司 蒸汽消毒器山东新华医疗器械有限公司 电子天平( h r 2 0 0 型)日本l i m i t e d 公司 恒温水浴箱北京医疗设备厂 电热恒温干燥箱( 2 0 2 型)山东潍坊 台式离心机( d 3 7 5 2 0 型)德国h e r a e u s 公司 超低温冰箱德国h e r a e u s 公司 游标卡尺北京计量器械厂 宰该仪器为白色圆柱状( 见f i g 2 ) ，状如粒子，直径0 8 m m ，可通过 研究论文 粒子植入针榄入。 1 4 主要药；记、试剂 4 多聚 p 醛 7 0 酒精、7 5 酒精、8 5 酒 精、9 5 0 c g q 精、无水酒精 d m e m 高糖培养基 新生牛赢清 胰蛋白酶i ：2 5 0 青霉素、链霉素 台盼蓝 2 戊二麟 2 实验方法 2 1 粒子消巍 上海化学试剂公司 上海化学试剂公司 美国g i b c o 公司 杭州四季青生物工程材料公司 美国s i g m a 公司 华北制药股份公司 美国s i g m a 公司 上海医南药业公司 在保护辫f 将蛇5 i 粒子放入全封闭防辐射植入器内。连同植入针应用 2 戊二醛溶液浸泡消毒6 小时，粒子、植入针及手术器械消毒后备用。 2 2 小鼠麻晰玎法 6 7 m g m i 戊巴比妥钠，0 0 1 m l g 小鼠体重腹腔注射麻醉。 2 3 主要实驺用制剂的配制 2 3 1d m e m 墙养基的处理 于超净，i ：作台上，取d m e m 高糖培养基4 5 0 m l ，加少，青霉素及链霉 素各4 万单位，加新生牛血清( n e w - b o r nc a l f s e r u m ，n b c s ) 5 0 m l ，轻晃混 匀；分装，4 保存，检查无菌后待用。 2 3 24 多聚 。f j 醛固定液配制 干净三角瓶一个，加入1 0 0 0 m l 蒸馏水，称磷酸氢二钠 ( n a 2 h p 0 4 1 2 h 2 0 ) 3 6 9 ，多聚甲醛干粉4 0 9 加入瓶中，磁力搅拌器上加 热搅拌直至先全溶解，随即加入磷酸二氢钠( n 。h 2 p 0 4 1 2 h 2 0 ) 3 9 ，直至 溶解，从磁力搅拌器上取下，测p h 7 0 7 5 ，密封放入4 冰箱备用( 储 存时间不宜过长，最好是现配现用) 。 2 3 3 磷酸盐缓冲液( p b s ) 的配制 在8 0 0 m l 蒸馏水中溶解8 9 n a c l 、2 9 k c l 、1 4 4 9n a 2 h p 0 4 和 0 2 4 9 k h 2 p 0 4 ，用h c i 调节溶液的p h 值至7 4 ，加蒸馏水定容至1 l ，在 研究论文 1 0 3 4 1 0 5 p a 高压下蒸汽灭菌2 0 分钟，保存于室温。 2 3 4 冻存液的配置 于超净1 二作台上，取8 毫升d m e m 培养基，加入l m l 新鲜小牛血清， 加入l m l 二甲基亚砜，混匀，1 8 m 1 分装于冻存管，于2 0 保存。 2 4 组织累积受量的测量 2 4 1 实验动物分组 将6 0j 小鼠随机分为两组：0 5 m c i 组和0 8 m c i 组。 2 4 2 粒予植入 无菌条件下，操作人员穿铅衣，戴防护眼镜、手套。将小鼠固定， 碘伏消毒前肢腋下皮肤较富裕、整齐部位1 5 c m 范围的皮肤3 遍。用植入 针远离选定点l c m 处穿破皮肤，皮下潜行进入选定组织中心，退出针芯， 将粒子装入植入针内，用针芯轻柔地将粒子推入预定点位置。拔出穿刺 针，距离上汐：穿刺点0 5 c m 再次进针，潜行至粒子旁o 5 c m 处，退出针芯， 将热释光剂趋计装入植入针内，用针芯轻柔地推入预定点位置，该仪器 与粒子平行，距离用游标卡尺测量固定为0 5 c m 。植入成功后，待小鼠苏 醒，送返动物饲养室继续饲养。留取4 个热释光剂量计作为白底，放于 小鼠饲养环境中( 远离小鼠) 。 2 4 3 测量仪的取出 在植入粒子后的第3 天，0 5 m c i 和o 8 m c i 各组随机抽取6 只老鼠， 给予腹腔戊巴比妥钠麻醉，切开腋下皮肤，取出粒子放置于铅罐中封存 并处理；取出热释光剂量计，标记并隔离于铅罐中防止二次照射。6 天、 9 天、1 2 天、l5 天时同样取材。 2 4 4 测量仪的测定 分别测定白底及实验用热释光剂量计，记录数据。 2 4 5 将获得的吸收剂量用软件拟合