（外科学专业论文）stat3与survivin及vegf在胃癌组织中的表达及意义.pdf

!iiifljll ii i i f j j l l1fi l ll lj f l l l l y 17 6 9 0 5 8 目录 一、摘要 中文论著摘要1 英文论著摘要2 二、英文缩略语一4 三、论文 前言”5 刖吾”) 材料与方法6 结果8 讨论1 2 结论15 四、本研究创新性的自我评价1 6 五、参考文献1 7 六、附录 综j 盔19 在校期间科研成绩3 0 致谢31 个人简介3 2 中文论著摘要 s t a t 3 与s u r v i v i n 及v e g f 在胃癌组织中的 表达及意义 目的 探讨信号传导及转录活化因子3 ( s t a t 3 ) 、生存素( s u r v i v i n ) 及血管内 皮生长因子( v e g f ) 在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。 方法 采用免疫组织化学s p 法检测5 6 例胃癌组织及其癌旁正常组织中s t a t 3 和s u r v i v i n 及v e g f 的表达情况。 结果 l 、s t a t 3 与s u r v i v i n 及v e g f 三者在5 6 例胃癌组织中的表达阳性率分别 为7 5 0 、7 1 4 及7 6 8 ，均明显高于三者在癌旁正常组织中的表达率( x 2 = 1 7 7 5 - - - 2 5 8 4 ，p 0 0 1 ) ； 2 、三者在i 、期胃癌中的表达水平明显高于i 、i i 期胃癌( p o 0 0 1 ) ， 胃 壁浆膜受侵及、淋巴结有转移及低、未分化的胃癌中三者表达水平高于浆膜未侵 及、淋巴结无转移及高、中分化的胃癌( p o 0 5 ) ； 3 、s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 在胃癌组织的表达两两之间均表现出正相关关 系。 结论 s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 的过度表达与胃癌的发生发展密切相关，s t a t 3 的 活化导致其下游靶基因s u r v i v i n 及v e g f 的表达明显升高，促使肿瘤迅速增长、浸 润及转移。 关键词 胃肿瘤；信号传导及转录活化因子3 ；生存素；血管内皮生长因子；免疫组织化学 英文论著摘要 e a n ds i g n i f i c a n c eo fs t a t 3 、s u r v i v i nandxdressiona nna n 0 i3lal 、 v e g fi ng a s t r i cc a n c e rt i s s u e s o b j e c t i v e t oi n v e s t i g a t et h ee x p r e s s i o no fs i g n a lt r a n s d u c e r sa n da c t i v a t o r so ft r a n s c r i p t i o n ( s t a t 3 ) ，s u r v i v i na n dv a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ( v e g f ) i ng a s t r i cc a r c i n o m a a n dt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nc l i n i c o p a t h o l o g i c a lf e a t u r e s m e t h o d s i m m t m o h i s t o c h e m i s t r ys pm e t h o dw a su s e dt od e t e c tt h ee x p r e s s i o no fs t a t 3 、 s u r v i v i na n dv e g fi n5 6c a s e so fg a s t r i cc a r c i n o m aa n da d j a c e n tn o r m a lt i s s u e r e s u l t s 1 t h ee x p r e s s i o nr a t eo fs t a t 3 、s u r v i v i na n dv e g fi n5 6c a s e so fg a s t r i cc a n c e r t i s s u ew e r e7 5 0 7 1 4 a n d7 6 8 r e s p e c t i v e l y m u c hh i g h e rt h a nt h a tc a n c e ra r o u n d t i s s u e = 1 7 7 5 - - 2 5 8 4 ，p 0 0 1 ) ； 2 t h ee x p r e s s i o nr a t ei np h a s eh ia n di vo fg a s t r i cc a n c e rw a sm u c hh i g h e rt h a n t h a to fc a n c e rp h a s eia n di i ( p o 01 ) t h ee x p r e s s i o nr a t ei ns e r o u sm e m b r a n e i n v a s i o no f g a s t t i cw a l l ，l y m p hn o d e sm e t a s t a s i s ，p o o r l y d i f f e r e n t i a t e da n d u n d i f f e r e n t i a t e d g a s t r i cc a n c e rw e r eh i g h e rt h a nt h a to fn om e m b r a n ei n v a s i o n ，n o m e t a s t a s i sa n d m o d e r a t e l ya n dw e l l d i f f e r e n t i a t e dg a s t r i cc a n c e r ( p 0 0 5 ) 3 p o s i t i v ec o r r e l a t i o nw a sf o t m db e t w e e nt h ee x p r e s s i o no fs t a t 3 、s u r v i v i n a n dv e g f c o n c l u s i o n s t a t 3 ，s u r v i v i na n dv e g fo v e r - e x p r e s s i o ni sc l o s e l yr e l a t e dt ot h eg e n e s i sa n d d e v e l o p m e n to fg a s t r i cc a n c e r ，s t a t 3a c t i v a t i o nl e a d st od o w n s t r e a mt a r g e tg e n e so f s u r v i v i na n dv e g fe x p r e s s i o nw a ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ，p r o m p t i n gt h er a p i dt u m o r g r o w t h ，i n v a s i o na n dm e t a s t a s i s k e vw o r d s 2 g a s t r i cn e o p l a s m s ；s i g n a lt r a n s d u c e r sa n da c t i v a t o r so ft r a n s c r i p t i o n3 ：v e g f ； i m m u n o h i s t o c h e m i t r y 3 英文缩略语 4 论文 s t a t 3 与s u r v i v i n 及v e g f 在胃癌组织中的 表达及意义 - - j _ - 刖舌 胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在我国胃癌发病率和死亡率多年来一 直呈上升趋势，严重影响着人民的健康。细胞的异常增殖和凋亡障碍是肿瘤发生、 发展的根本原因，因此寻找与胃癌肿瘤细胞发生、发展相关的生物标记是胃癌临 床研究的重要课题之一。信号转导及转录活化因子s t a t s ( s i g n a l t r a n s d u c e r s a n da c t i v a t o r s o f t r a n s c r i p t i o n ) 是一类脱氧核糖核苷酸( d n a ) 结合蛋白。该 家族是一种存在于细胞浆并在激活后能够转入核内与d n a 结合的独特的蛋白家 族，它与酪氨酸磷酸化信号通道偶联，发挥信号转导和转录调控的作用。其中 s t a t 3 是家族中的重要一员，通过调控下游靶基因的转录，参与肿瘤的发生和发 剧。s t a t 3 广泛表达于不同类型的细胞和组织中，参与细胞生长、恶性转化、 凋亡等生理功能的调控【2 】。酪氨酸磷酸化是s t a t 3 的活化形式，s t a t 3 活化后诱 导多种与细胞增殖、分化以及凋亡等生物学行为密切相关的下游靶基因的表达， 如b c l 一2 、c y c l i n d 1 、s u r v i v i n 、和v e g f 等，进而调节细胞的生长、分化、生存 和凋亡。持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化，在肿瘤中的作用越来越受到 重视。生存素( s u r v i v i n ) 是近来发现的凋亡抑制蛋白家族成员之一，其特点为选 择性表达于恶性肿瘤组织，其表达水平常与肿瘤的侵袭、不良预后及肿瘤细胞的 耐药相关1 3 j ，而癌旁正常组织多不表达。已有研究表明，s u r v i v i n 通过直接抑制凋 亡因子c a s p s e a mc a s p s e 7 的活性而抑制细胞凋亡【4 】，促进细胞的恶性转化，可 能是某些恶性肿瘤发生的重要因素之一。血管内皮生长因子( v e g f ) 被认为是作 用最强、特异性最高的血管生成调控因子，在许多肿瘤新生血管的形成中起关键 作用，并可刺激内皮细胞上调s u r v i v i n 表达而与肿瘤的浸润、转移有关。本研究联 合检测胃癌组织中s t a t 3 、s u r v i v i n 、v e g f 的表达情况，并分析三者的表达与 5 胃癌的临床病理生物学行为的关系，旨在探讨三者在胃癌的发生发展及侵袭转移 中可能发挥的作用、机制及其相互关系，试为胃癌的进一步治疗提供一定线索。 资料与方法 一、标本来源 收集中国医科大学附属盛京医院2 0 0 8 年2 月 2 0 0 8 年6 月间手术切除并经 病理证实为胃癌的标本5 6 例，其中男性3 0 例，女性2 6 例，年龄4 0 , - - - - 7 8 岁，中 位年龄5 7 5 岁，全部病例术前均未接受过放疗和化疗。组织学分型：高、中分化 腺癌1 1 例，低、未分化腺癌3 9 例，黏液腺癌3 例，印戒细胞癌3 例；浸润深度： 黏膜及黏膜下层5 例，肌层及浆膜下1 0 例，达到或穿透浆膜3 3 例，侵及临近组 织8 例；有淋巴结转移3 6 例，无淋巴结转移2 0 例；t n m 分期( 1 9 9 7 年u i c c 第5 版) ：i 期7 例，i i 期1 3 例，i 期2 8 例，期8 例。 二、试剂及相关设备 兔抗人s t a t 3 多克隆抗体、兔抗人s u r v i v i n 多克隆抗体购自武汉博士德生 物技术有限公司； 兔抗人v e g f 多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 s p 试剂盒及d a b 显色试剂盒购自福州市迈新生物技术开发公司。 免疫组化染色所需的常规试剂：枸橼酸盐缓冲液( o 0 1 m o l lp h6 o ) 、磷酸氢 二钠、氯化钠、二甲苯、乙醇、过氧化氢、苏木素等，普通实验室冰箱、切片机、 烤片机、高压锅、温育箱、湿盒恒温振荡器、o l y m p u sb x 4 1 显微镜、显微数码照 相机o l y m p u s b x 4 0f 4 等，均由中国医科大学附属盛京医院病理科提供。 三、实验步骤 免疫组织化学技术采用s p 法。 实验步骤如下： ( 1 ) 石蜡切片：在手术标本的癌灶中心切取胃癌组织，以距肿瘤边缘大于5 c m 的癌旁组织切取的正常胃黏膜作为对照，所有标本均经1 0 甲醛固定，石蜡包 埋，4 u m 连续切片。 ( 2 ) 切片脱蜡：将石蜡切片放在烘箱内6 0 。c ，8 小时。烘干后的石蜡切片浸 6 入二甲苯中脱蜡3 次，每次3 0 分钟。切片浸入梯度酒精( 1 0 0 _ 1 0 0 - 9 5 一9 5 _ 8 5 _ 7 5 ) 各1 5 分钟，双蒸水浸泡l o 分钟水化。 ( 3 ) 抗原热修复：将切片浸入0 0 1 mp h 6 0 构椽酸盐缓冲液中，微波炉中火 加热9 2 9 8 2 0 分钟，自然冷却至室温。 ( 4 ) 蒸馏水冲洗，p b s 浸泡5 分钟宰3 次。 ( 5 ) 滴加新鲜配制的3 双氧水，室温孵育1 0 分钟，灭活内源性过氧化物酶。 ( 6 ) 滴加山羊血清工作液，室温孵育1 5 分钟，甩去多余液体，不洗。 ( 7 ) 滴加1 ：1 0 0 稀释的一抗，4 。c 过夜。 ( 8 ) p b s 液冲洗，5 分钟木3 次。 ( 9 ) 滴加生物素标记的二抗，3 7 孵育1 5 分钟，p b s 冲洗，5 分钟幸3 次。 ( 1 0 ) 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，3 7 。c 孵育1 5 分钟，p b s 冲洗，5 分钟木3 次。 ( 1 1 ) d a b 显色：取0 8 m l 双蒸水，加试剂盒中的a 、b 、c 试剂各1 滴，混匀 后加至玻片上，室温显色，光镜下控制反应时间，蒸馏水终止。 ( 1 2 ) 自来水充分冲冼后，苏木素复染约3 0 秒，冲洗，l o 分钟反蓝。 ( 1 3 ) 切片经梯度酒精( 7 5 一8 5 _ 9 5 - 1 0 0 _ 1 0 0 ) 各5 分钟脱水， 二甲苯透明1 0 分钟，中性树胶封片保存。 ( 1 4 ) 阴性对照：采用p b s 液代替一抗工作液，其余实验步骤同上。 四、结果判断 s t a t 3 以胞浆或胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞；s u r v i v i n 、v e g f 阳性 染色位于细胞浆内，亦呈棕黄色颗粒。采用双人盲法观片，每张切片均随机观察 1 0 个高倍视野( x 4 0 0 ) ，每个视野中1 0 0 个细胞被计数，阳性细胞数1 0 为 阳性，计算平均阳性率。 五、统计学分析 用s p s s l 0 0 统计软件统计数据，各组间行x 2 检验，当p 0 0 5 时认为差 异具有显著性。水准取双侧p 0 0 5 。s t a t 3 和s u r v i v i n 及v e g f 各指标间 的相关性研究采用s p e a r m a n 等级相关进行分析( a = 0 0 5 ) 。 7 结果 一、s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 在胃癌组织中的表达 s t a t 3 阳性信号主要分布在细胞浆中，部分在细胞核中有表达( 见图1 a 、b ) 。 胃癌组织中s t a t 3 阳性表达率为7 5 0 ( 4 2 5 6 ) ，癌旁正常胃黏膜组织中s t a t 3 阳性表达率为1 0 7 ( 6 5 6 ) ，两者比较差异有显著性窿= 2 3 6 3 ，p 0 0 1 ) 。 s u r v i v i n 、v e g f 阳性染色位于细胞浆内( 见图2 、3 ) ，胃癌组织中s u r v i v i n 阳 性表达率为7 1 4 ( 4 0 5 6 ) ，癌旁正常胃黏膜组织中s u r v i v i n 阳性表达率为5 4 ( 3 5 6 ) ，两者比较差异有显著性( x 2 = 2 5 8 4 ，p 0 0 1 ) 。胃癌组织中v e g f 阳性 表达率为7 6 8 ( 4 3 5 6 ) ，癌旁正常胃黏膜组织中v e g f 阳性表达率为1 9 6 ( 11 5 6 ) ，两者比较差异有显著性( x 2 = 1 7 7 5 ，p 0 0 1 ) 。 二、s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 的表达与胃癌临床病理特征的关 系 s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 三者在i 、期胃癌中的表达水平明显高于i 、 n 期胃癌( p 0 0 1 ) ，胃壁浆膜受侵及、淋巴结有转移及低、未分化的胃癌中三者 表达水平高于浆膜未侵及、淋巴结无转移及高、中分化的胃癌( p o 0 5 ) ；但三 者表达水平与肿瘤大小、年龄、性别等未见有明显相关，详见表1 。 三、胃癌组织中s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 表达之间的关系 在s t a t 3 阳性表达的4 2 例胃癌中，s u r v i v i n 阳性表达者3 3 例( 7 8 5 7 ) ， s t a t 3 表达与s u r v i v i n 表达呈正相关( r = 0 2 7 4 ，p 0 0 5 ) ；在s t a t 3 阳性表 达的4 2 例胃癌中，v e g f 阳性表达3 6 例( 8 5 7 1 ) ，s t a t 3 表达与v e g f 表 达呈正相关( r = 0 3 6 6 ，p 0 0 51 88p 0 0 5 年龄 5 5 岁 3 3 2 21 1p 0 0 52 31 0p 0 0 5 2 49 p 0 0 5 肿瘤大小 5 e r a2 62 06p 0 0 5 1 97p 0 0 52 15p 0 0 5 t n m 分期 i 2 0 1 01 0 x2 = 1 0 3 781 2x2 = 1 5 0 61 19 x2 = 8 2 8 3 63 24p 0 0 1 3 24p 0 0 13 24p 0 0 1 浸润程度 未及浆膜 1 587x2 = 5 1 3 78x2 ：6 7 669x2 = 1 5 5 侵及浆膜 4 13 47p 0 0 53 38p 0 0 1 3 74p 0 0 5 分化程度 高、中分化 1 147x2 = 1 0 8 9 856 x2 = 4 5 2 556x2 = 7 5 3 9 低、未分化 4 53 8 7p 0 0 13 51 0p 0 0 53 87 p 0 0 5 淋巴结转移 有3 6 3 l5x2 6 3 72 97 x2 = 4 1 13 15x2 = 4 9 2 无 2 01 19p 0 0 5 1 19p 0 0 51 28 p 0 0 5 讨论 一、s t a t 3 的作用机制及表达 信号传导及转录活化因子s t a t s ( s i g n a l t r a n s d u c e r sa n da c t i v a t o r so f t r a n s c r i p t i o n ) 是一类脱氧核糖核苷酸( d n a ) 结合蛋白。s t a t s 家族是一种存在 于细胞浆并在激活后能够转入核内与d n a 结合的独特的蛋白家族，它与酪氨酸 磷酸化信号通道偶联，发挥信号转导和转录调控的作用。信号传导及转录活化因 子3 ( s t a t 3 ) 是s t a t s 家族的重要成员，其所参与的信号传导通路与细胞的增殖、 分化及凋亡密切相关，该通路持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化【5 】。s t a t 3 的酪氨酸磷酸化，即信号依赖的活化形式，在多种肿瘤中普遍存在，并在某些肿 瘤中发挥重要作。其活化过程主要包括j a k s t a t s 信号转导途径和 e g f 刚s t a t 3 信号转导途径。s t a t 3 的激活途径主要是j a k s 途径，包括c k 受体( 如i l 2 、i l - 4 、i l 5 、i l 6 和l e p t i n ) 、酪氨酸蛋白激酶( 如集落刺激因子 1 ) 、血管紧张素i i 等【1 9 1 在内的多种配体都可以通过j a k s 途径激活s t a t 3 。 e g f 刚s t a t 3 信号转导途径是s t a t 3 发挥作用的另一重要途径，e g f r ( e p i d e r m a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r ，上皮生长因子受体) 与其相应的配体相结合成 二聚体，激活其固有的酪氨酸激酶活性，使自身的酪氨酸残基磷酸化而成为活化 的e g f r ，从而激活与其相互作用的下游信号转因子( 这些蛋白都具有s h 2 和 p t b 区) ，启动相应的信号转导通路，如r a s m a p k 、p 1 3 、p l c - ) , 、和s t a t s 等转导通路口o l 。由于e g f r 具酪氨酸激酶活性，因此其可不依赖j a k 直接活化 s t a t s ；e g f rc 末端区的多个酪氨酸残基参与其对s t a t 3 的结合和活化2 1 捌。 s t a t 3 活化后识别特定的受体s h 2 结构域，形成同源或异源二聚体，激活的二 聚体从受体上解离并转入细胞核内，识别并结合到靶基因d n a 特异的反应元件， 诱导多种与细胞增殖、分化以及凋亡等生物学行为密切相关的下游靶基因的表达， 如b c l - x l 、b c l - 2 、c y c l i n - d 1 、c m y c 、c j u n 、f a s 、s u r v i v i n 、和v e g f 等【6 7 】， 进而调节细胞的生长、分化、生存和凋亡。近年来的研究报道表明s t a t 3 信号 传导途径的异常在胃癌中也具有十分重要的作用引。俞丽芬等【9 】研究提示正常胃黏 膜上皮细胞以及人胃癌高、中、低分化和腹水转移型细胞株中都有不同程度的 s t a t 3 组成性激活。现针对s t a t 3 靶点治疗胃癌的研究也在尝试并取得了初步 1 2 成效。本研究检测了5 6 例胃癌组织中s t a t 3 的表达情况，并以癌旁正常胃组织 作为对照，结果显示，胃癌组织中s t a t 3 的阳性表达率明显高于正常胃黏膜组 织，说明s n 盯3 的过度表达与胃癌的发生发展应有密切的关系，过表达的s t a t 3 通过促进其下游基因的转录和表达，进而促进胃黏膜细胞过度增殖和恶性转化。 对s t a t 3 的表达情况与胃癌临床病理特征的关系进行分析，发现s t a t 3 的表 达与胃癌分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移及t n m 分期有显著相关性，提 示s t a t 3 过表达可能与胃癌恶性度高和预后不良相关，这与梁斌等【lo 】的报道基 本相符。 二、s u r v i v i n 的作用机制及表达 s u r v i v i n 是凋亡抑制蛋白( i n h i b i t o ro f a p o p t o s i sp r o t e i n ，i a p ) 家族成员之一， 通过直接抑制凋亡因子的活性而抑制细胞凋亡，促进细胞的恶性转化，可能是某 些恶性肿瘤发生的重要因素之一。s u r v i v i n 可对抗g 2 1 m 期凋亡的诱导，在癌组织 中过度表达可克服凋亡的检查点，允许变异细胞通过有丝分裂异常增殖【1 1 1 ，可见 s u n i v i n 的过度表达，造成细胞增殖增加，凋亡减少，细胞增殖与凋亡平衡被打破， 导致癌症发生、发展。s u r v i v i n 具有肿瘤特异性，在人类许多肿瘤中呈高表达， 其表达水平常与肿瘤的侵袭、不良预后相关，因此s u r v i v i n 被认为是肿瘤治疗的 理想靶点之一。有实验证实，抑制s u r v i v i n 基因表达可以诱导多种肿瘤细胞凋亡， 并且在实验动物体内能抑制肿瘤生长【1 2 】。本研究的5 6 例患者中，s u r v i v i n 呈高表 达状态，并且显示与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、t n m 分期等均有 显著性关系，与俞继卫等【1 3 】的研究相符，提示其与肿瘤的浸润、转移相关。 三、g f 的作用机制及表达 血管内皮细胞生长因子( v e g f ) 又称血管通透因子( v a s c u l a rp e a m e a b i l i t y f a c t o r ，v p f ) ，是一种高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素，主要的功能是选择性 增强血管内皮细胞有丝分裂、刺激内皮细胞增殖并促进血管形成【1 4 1 。v e g f 在肿 瘤中的作用可能是促进肿瘤血管生成使肿瘤组织血管数目增多，血管通透性增加， 血管内物质渗出增多，使肿瘤细胞得到更多的氧和营养物质，增生加快，肿瘤血 管的大量形成也增加了肿瘤细胞进入循环系统发生转移的可能性【1 5 】。胃癌等实体 癌的发生发展同样离不开新生血管。目前研究表明v e g f 是刺激肿瘤血管生成最 1 3 主要的因子，在肿瘤的发生、发展、浸润及转移中发挥重要的作用。本研究结果 显示胃癌组织中v e g f 的表达较正常胃组织组明显升高，这与文献报道一致，再 一次证实了v e g f 参与了胃癌发生发展的过程，提示胃癌组织通过产生大量的 v e g f 促进血管的生成，提供胃癌细胞生长需要的营养，促使肿瘤的不断生长。 本研究同时显示v e g f 的表达与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、t n m 分 期等均有明显关系，提示v e g f 与胃癌的转移密切相关。 四、胃癌组织中s t a t 3 、s u r v i v i n 及g f 三者表达之间的关系 在本研究中，s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 在胃癌组织的表达两两之间均表现 出了正相关关系。查阅国内外相关研究结果，g r i t s k o 等【l6 】运用微阵列研究分析乳 腺癌细胞，认为s u r v i v i n 是s t a t 3 调节的靶基因之一，其作用机制是s t a t 3 直 接与s u r v i v i n 启动子结合并调节其转录。k a n d a 掣1 。7 j 就s t a t 3 信号传导途径 在胃癌中对于细胞凋亡和增殖方面进行研究，发现s t a t 3 在多种胃癌细胞系中 处于活化状态，s t a t 3 的活化导致其下游靶基因s u r v i v i n 的表达明显升高，使胃 癌细胞表现出明显的抗凋亡作用，而这种现象可以被s t a t 3 显性负性蛋白及 j a k 激酶制剂所阻断而使癌细胞发生凋亡。n i u 等用显性阴性的蛋白及s t a t 3 反 义寡核苷酸阻断s t a t 3 的信号转导，均可下调v e g f 的表达，同时通过染色质免 疫沉淀检测，发现s t a t 3 蛋白在体内结合于v e g f 的启动子，且v e g f 启动子 上s t a t 3 结合位点的突变会使v s r c 介导的v e g f 启动子的活性丧失，因此他们 认为v e g f 基因是直接通过s t a t 3 蛋白来调节的，并且认为s t a t 3 在阻断由多 种信号途径介导的肿瘤血管生成策略中是一个共同的分子靶【7 j ；也有研究显示 s u r v i v i n 的表达下降能抑制体内肿瘤血管的发生，v e g f 可呈浓度依赖方式显著 诱导s u r v i v i n 的表达：转染s u r v i v i n 反义寡核苷酸后血管内皮细胞可完全消除 v e g f 对肿瘤坏死因子或神经酰胺诱导的细胞凋亡的抵抗作用【1 8 1 ；认为v e g f 的 主要抗凋亡活性是通过内皮组织内s u r v i v i n 的诱导产生的。 综上所述，结合我们的研究结果，我们认为s u r v i v i n 及v e g f 可能均为受 s t a t 3 调节的靶基因，s t a t 3 的活化导致其下游靶基因s u r v i v i n 及v e g f 的表 达明显升高，s u r v i v i n 的表达上调抑制血管内皮细胞的凋亡，使v e g f 大量表达， 促使癌组织内血管大量生成，提供肿瘤迅速增长、浸润及转移所需的营养物质供 1 4 应；同时v e g f 的表达上调可诱导s u r v i v i n 基因表达同步上升，使细胞凋亡进 一步被抑制，肿瘤生长更趋深入；而s t a t 3 对于s u r v i v i n 及v e g f 的正性调控 作用提示我们可将其作为参与由多种信号途径介导、多种原因促使的肿瘤形成中 的一个共同的分子靶而加以阻断，从而为胃癌治疗提供一种可能的办法及尝试。 结论 l 、s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织， 三者的过度表达与胃癌的发生发展密切相关； 2 、s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 三者在、期胃癌中的表达水平明显高 于i 、期胃癌，胃壁浆膜受侵及、淋巴结有转移及低、未分化的胃癌中三者 表达水平高于浆膜未侵及、淋巴结无转移及高、中分化的胃癌；但三者表达水平 与肿瘤大小、年龄、性别等未见有明显相关。 3 、s t a t 3 、s u r v i v i n 及v e g f 在胃癌组织的表达两两之间均表现出了明显 的正相关关系，s t a t 3 的活化导致其下游靶基因s u r v i v i n 及v e g f 的表达明显 升高，促使肿瘤迅速增长、浸润及转移；s t a t 3 对于s u r v i v i n 及v e g f 的正性 调控作用提示我们可将其作为参与由多种信号途径介导、多种原因促使的肿瘤形 成中的一个共同的分子靶而加以阻断，从而为胃癌治疗提供一种可能的办法及尝 试。 1 5 本研究创新性的自我评价 本实验采用免疫组织化学方法联合检测胃癌组织中s t a t 3 、s u r v i v i n 、v e g f 的表达情况，并分析三者的表达与胃癌的临床病理生物学行为的关系，探讨三者 在胃癌的发生发展及侵袭转移中可能发挥的作用、机制及其相互关系，试为胃癌 的进一步治疗提供一定线索。 1 6 参考文献 lh a u r ae b ，t u r k s o nj ，j o v e m e c h a n i s m so fd i e a s e ：i n - s i g h t si n t ot h ee m e r g i n gr o l eo fs i g n a l t l 删u c e r sa n da c t i v a t o r so ft r a n s c r i p t i o ni n c a n c e r j n a tc l i np r a c to n c o l ，2 0 0 5 ， 2 ( 6 ) ：315 - 3 2 4 2 h o e yt ，g r u s b ymj s t a t s 嬲m e d i a t o r so fc y t o k i n e - i n d u c e dr e s p o n s e j a d v i n u n a n o i ，1 9 9 8 ，7 1 ( 1 ) ：1 4 5 1 6 0 3l ub ，m uy ，c a oc ，e ta 1 s u r v i v i n 豁at h e r a p e u t i ct a r g e tf o rr a d i a t i o ns e n s i t i z a t i o ni nl u n g c , a n c e r 【j 】c a n c e rr e s ，2 0 0 4 ，6 4 ：2 8 4 0 2 2 8 4 5 4 s u n gb j ，c h oy s ，k i mil l ，e ta 1 a na n t i 2 a p o p t o t i cpr o t e i n ，h u m a ns u r v i v i ni sad i r e c t i n h i b i t o ro f c a s p a s e 2 3a n dc a s p a s e2 7 【j 】b i o c h e m i s tr y ，2 0 0 1 ，4 0 ( 4 ) ：111 7 2 11 2 3 5 h o e yt ，g r u s b y m j s t a t sa sm e d i a t o r so f c y t o k i n e 2 i n d u c e dr e s p o n s e j a d v l m m u m o l ，1 9 9 9 ；7 1 ：1 4 5 - 6 2 6m ax t w a n gs ，y ey j ，e ta 1 c o n s t i t u t i v ea c t i v a t i o no fs t a t 3s i g n a l i n gp a t h w a yi nh u m a n c o l o r e c t a lc a r c i n o m a j w o r l djg a s t r o e n t e r o l ，2 0 0 4 ，1 0 ( 11 ) ：1 5 6 9 1 5 7 3 7n i ug ，w r i g h tk l ，h u a n gm ，e ta 1 c o n s t i t u t i v es t a t 3a c t i v i t yu p r e g u l a t e sv e g fe x p r e s s i o n a n dt u m o ra n g i o g e n e s i s j o n c o g e n e ，2 0 0 2 ，2 1 ( 1 3 ) ：2 0 0 0 - 2 0 0 8 8y a k a t a y , n a k a y a m at ，y o s h i z a k ia ，e ta 1 e x p r e s s i o n o fp s t a t 3i nh u m a ng a s t r i c c a r c i n o m a ：s i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o ni nt u m o u ri n v a s i o na n dp r o g n o s i s j i n t e m a t i o n a lj o u r n a lo f o n c o l o g y ，2 0 0 7 ，3 0 ( 2 ) ，4 3 7 - 4 2 9俞丽芬，朱延波，乔敏敏，等s t a t 3 在人胃癌细胞株和组织中的组成性激活 及其临床意义明中华医学杂志，2 0 0 4 ，8 4 ( 2 4 ) ：2 0 6 4 - 2 0 6 9 1 0 梁斌，王杉，祝学光，等转录信号传导子和激活子3 在人胃癌组织中的表达及意义【j 】中 华实验外科杂志，2 0 0 1 ，1 8 ( 4 ) ：3 1 3 31 4 1 l l k e g u c h im ，u e t at ，y a m a n ey e ta 1 i n d u c i b l em i t r i co x i d es y n t h a s ea n ds u r v i v i nm e s s n g e r r n a e x p r e s s i o ni nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a 【j 】c l i nc a n c e rr e s ，2 0 0 2 ，8 ( 10 ) ：313l 1 2s u ny l i n 心d a ij ，e ta 1 s u p p r e s s i o no ft u m o rg r o w t h u s i n ga n t i s e n s eo l i g o n u c l e o t i d ea g a i n s t s u r v i v i ni na no r t h o t o p i ct r a n s p i a n tm o d e lo fh u m a nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m ai nn u d em i c e j o l i g o n u c l e o t i d e s ，2 0 0 6 ，1 6 ( 4 ) ：3 6 5 3 7 4 1 3 俞继卫，姜波健，倪晓春，等联合评估s u r v i v i n 和p 5 3 在胃癌组织中表达的临床意 义及对预后的影响 j 】国际外科学杂志，2 0 0 7 ，3 4 ( 1 3 ) ：1 5 6 1 6 0 1 4 郑江华血液中血管内皮生长因子和肿瘤的研究进展阴中国普通外科杂志，2 0 0 4 ，1 3 ( 1 ) ：5 0 - 5 1 1 5 王安华s u r v i v i n 和v e g f 在胃癌的表达及其意义【j 】临床医学杂志，2 0 0 6 ，2 6 ( 2 ) ：7 7 7 9 16g r i t s k ot w i l l i a m sa ，t u r k s o nj ，e ta 1 p e r s i s t e n ta c t i v a t i o no fs t a t 3s i g n a l i n gi n d u c e ss u r v i v i n g e n ee x p r e s s i o na n dc o n f e r sr e s i s t a n c et oa p o p t o s i si nh u m a nb r e a s tc a n c e rc e l l s j c l i n c a n c e rr e s ，2 0 0 6 ，1 2 ( 1 ) ：11 1 9 17k a n d an ，s e n oh ，k o n d ay ，e ta 1 s t a t 3i sc o n s t i t u t i v e l ya c t i v a t e da n ds u p p o r t sc e l ls u r v i v a l i na s s o c i a t i o nw i t hs u r v i v i n e x p r e s s i o n i n g a s t r i c c a n c e r c e l l s 【j 】o n c o g e n e ，2 0 0 4 ， 2 3 ( 2 8 ) ：4 9 21 - 4 9 2 9 18m e s r im , m o r a l e sr u i zm ，a c k k e r m a n ne ，e ta 1 s u p r e s s i o no fv a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t h f a c t o rm e d i a t e de n d o t h e l i a lc e e lp r o t e c t i o nb ys u r v i v i nt a r g e t i n g a m j 】p a t h o l ，2 0 01 ，15 8 ( 5 ) ：1 7 5 7 - 1 7 6 5 1 1 9t a k e d al ( c l a u s e nb e ，k a i s h ot ，e ta 1 e n h a n c e dt h la c t i v i t ya n dd e v e l o p m e n to fc h r o n i c e n t e r o e o l i t i si nm i c ed e v o i do fs t a t 3i nm a c r o p h a g e sa n dn e u t r o p h i l s j i m m u n i t y ，1 9 9 9 ，1 0 ( 1 ) ：3 9 - 4 9 2 0f 0 mac ，g r a n d i s ，jr t a r g e t i n ge p i