植物组织中可溶性糖与淀粉的测定.doc

植物组织中可溶性糖与淀粉的测定一、蒽酮法测定可溶性糖【仪器与用具】 分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。【试剂】 1蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。2浓硫酸（比重1.84）。【方法】 1标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支，从010分别编号，按表24-1加入溶液和水。表1 各试管加溶液和水的量管 号012345678910100g/ml蔗糖液(ml)00.20.40.60.81.0水(ml)2.01.81.61.41.21.0蔗糖量(g)020406080100然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。2可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.100.30g，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入510ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。3显色测定 吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。4计算可溶性糖的含量可溶性糖含量(mg/g)=式中 C标准方程求得糖量(g)； a吸取样品液体积(ml)； V提取液量(ml)； n 稀释倍数； W组织重量（g）。四、淀粉含量的测定【仪器与用具】电子天平；容量瓶：100ml4，50ml2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml1，2.0ml3，5ml4；分光光度计；记号笔。【试剂】 （1）浓硫酸（比重1.84）；（2）9.2mol/L HClO4；（3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）；（4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加6070ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100g的标准液。【方法】 1标准曲线制作取小试管11支从010编号，按表2加入溶液和蒸馏水。以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，绘制相应的标准曲线。表2 各试管加入标准液和蒸馏水量管 号012345678910淀粉标准液(ml)00.40.81.21.62.0蒸 馏 水（ml）2.01.61.20.80.40淀粉含量（mg）04080120160200 2样品提取将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。3测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。淀粉含量（%）=式中 C标准曲线查得的淀粉含量（g）；V提取液总量（ml）；a显色时取液量（ml）；W样品重（g）。注：淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残