血细胞化学染色.ppt

第三章血细胞化学染色,一、概述（一）研究对象外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质：酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等,（二）临床应用,1.鉴别各类血细胞2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断3.观察疾病疗效和判断预后,二、常用细胞化学染色方法,过氧化物酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色过碘酸-雪夫反应-醋酸萘酚酯酶染色铁染色,过氧化物酶染色（peroxidase,POX）,POX,新生态氧O,过氧化氢（基质中）,四甲基联苯胺（无色）,联苯胺蓝（蓝色）,亚硝基铁氰化钠,蓝色颗粒（浆内酶部位）,粒、单核细胞胞浆,【原理】,【结果判断】-、+、+、+、+弱阳性颗粒小，分布稀疏阳性颗粒稍粗，分布较密集强阳性颗粒粗大，密布于整个胞浆,【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统POX主要存在于粒系细胞中。分化差的原粒细胞阴性;分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成熟逐渐增强。,2.单核细胞系统阴性或弱阳性3.淋巴细胞系统红细胞系统巨核细胞系统阴性浆细胞组织细胞,【临床评价】,急性髓细胞白血病急性淋巴细胞白血病,鉴别,1.急性髓细胞白血病（1）急性粒细胞白血病阳性反应（2）急性单核细胞白血病弱阳性反应,2.急性淋巴细胞白血病阴性反应或阳性率3%(残留原粒细胞),中性粒细胞碱性磷酸酶染色（neutrophilicalkalinephosphatase，NAP）,磷酸萘酚钠（基质中）,中性粒细胞胞浆中NAP,磷酸钠,-萘酚,重氮盐（坚牢蓝盐RR）,紫黑色偶氮染料（胞浆中）,水解,【原理】Kaplow偶氮偶联法,【结果判断】胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+）,【正常血细胞染色反应】,1.中性成熟粒细胞阳性反应其他细胞呈阴性反应,2.NAP积分值计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：,(-)0分(+)1分(+)2分(+)3分(+)4分阳性率全部阳性反应细胞之和积分值各种阳性程度细胞的分值之和,3.参考值积分值35-70分(各实验室参考值不同),【临床评价】（1）细菌性感染与病毒性感染（尤其是化脓性感染）明显增加无明显变化,(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病明显增加明显下降且常为零分，缓解时又上升到正常,过碘酸-雪夫反应(糖原染色)（periodicacid-Schiffreaction，PAS）,双醛基,过碘酸,雪夫试剂中的无色品红,紫红色化合物(附于含多糖类的胞浆内),乙二醇基(多糖类物质含有),氧化,【原理】,【结果判断】,阳性胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗粒状或块状。阴性胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。,【正常血细胞染色反应】,1.粒细胞系统分化差的原粒细胞为阴性；分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞各阶段均呈阳性反应，阳性程度随细胞的成熟逐渐增强。阳性物呈细颗粒、均匀红色。,2.红细胞系统阴性3.单核细胞系统绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。,4.淋巴细胞系统大多数淋巴细胞呈阴性；少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。5.巨核细胞系统呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。,【临床评价】,1.红血病或红白血病幼红细胞阳性巨幼细胞性贫血幼红细胞阴性,3.鉴别急性白血病类型,（1）急性淋巴细胞白血病阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状。,（2）急性粒细胞白血病少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。（3）急性单核细胞白血病可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。,-醋酸萘酚酯酶染色（-naphtholacetateesterase，-NAE）,-醋酸萘酚酯酶（细胞内）,-醋酸萘酚（基质液中）,-萘酚,重氮盐（坚牢蓝B）,胞浆不溶性灰黑色或棕黑色沉淀,水解,【原理】,【结果判断】胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。,氟化钠抑制试验在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。,氟化钠抑制率=,抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分,抑制前阳性率或阳性积分,100%,【正常血细胞染色反应】,1.单核细胞系统原始单核细胞分化差阴性分化好阳性幼稚及成熟单核细胞阳性,被氟化钠抑制,2.粒细胞系统原粒细胞阴性或弱阳性以下阶段为弱阳性3.淋巴细胞系统多数阴性，少数弱阳性,不被氟化钠抑制,【临床评价】,急单急粒急性早幼粒急粒单急淋-NAE+或-或+阳性-+弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制,主要用于鉴别急性白血病类型,铁染色（ferricstain）,亚铁氰化钾,亚铁氰化铁(蓝色沉淀在含Fe部位),铁,酸性环境,普鲁士蓝反应,骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁）骨髓中贮存铁幼红细胞内的Fe（细胞内铁）,原理,【结果判断】幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。,细胞外铁低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团块状。,再用油镜判断阳性程度，根据铁量多少分五级:（-）（+）（+）（+）（+）,细胞内铁存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中的铁。油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。,根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为四型:型型型型,细胞内铁,1.细胞外铁+，约2/3人为+，约1/3人为+。2.细胞内铁阳性率19%44%型为主，少数为型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）,【参考值】,【临床评价】1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗细胞内、外铁明显减低甚