（有机化学专业论文）蒙椴树叶化学成分的研究.pdf

内蒙古大学硕士学位论文 蒙椴树叶化学成分的研究 摘要 蒙椴( t i l i am o n g o l i c am a x i m ) 为椴树科( t i l i a c e a e ) 椴树属( t i l i al 1 中生落叶乔木，是内蒙古地区典型树种。椴 树花、皮和树叶具有抗病毒和抗菌活性，经研究发现蒙椴具 有抑制光肩星天牛的作用。为了寻找蒙椴树皮中抗天牛的活 性成分，本文对蒙椴树叶的化学成分进行了研究。 本文对蒙椴树叶进行室温浸泡提取，对提取物利用常规 硅胶柱层析、制备薄层层析、萃取、重结晶、高效液相色谱 等技术进行分离纯化，从中分离得到了5 个化合物，通过理 化常数、红外光谱、核磁共振氢谱、碳谱和二维核磁的d e p t 、 h m q c 、h m b c 和- h ，h c o s y 等数据并结合文献分析鉴定 其结构：分别为8 香树脂醇乙酸酯( i ) 、2 8 a 同b 香树脂 醇乙酸酯( i i ) 、b - 香树脂醇( i i i ) 、b 谷甾醇( 1 v ) 、棕榈酸 ( v ) 。化合物i i 和v 为首次从本属植物中分离的化合物，其 中化合物i i 是一个新化合物。 关键词：蒙椴，化学成分，三萜 蒙椴树叶化学成分的研究 s t u d y o n t h ec h e m i c a lc o n s t 【t u e n t so f 1 1 l i am o n g o l i c al e a 、，但s a b s t r a c t t i l i a m o n g o l i c a m a x i m i s o n eo ft h em e m b e r so f t i l i a c e a ef a m i l y i t sb a r k s ，l e a v e sa n df l o w e r sc a nb eu t i l i z e df o rt h e t r e a t m e n to fm a n yd i s e a s e s i tw a sr e p o r t e dt h a tzm o n g o l i c ah a d i n h i b i t i n ge f f e c to na n o p l o p h o r ag l a b r i p e n n i s i np r e s e n tr e s e a r c h e s b ye x t r a c t i n gt h el e a v e so fzm o n g o h c au s i n g as e r i e so fo r g a n i cs o l v e n t sr e s p e c t i v e l y ，d i f f e r e n tk i n d so fe x t r a c t sw e r e o b t a i n e d f i v ec o m p o u n d sw e r ei s o l a t e df r o mt h ee x t r a c t sb yu t i l i z i n g c o l u m nc h r o m a t o g r a p h y , p r e p a r a t i v et h i nl a y e rc h r o m a t o g r a p h y ( t l c ) ， r e c r y s t a l l i z a t i o na n dh i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) t e c h n i q u e s t h ec o m p l e t es t r u c t u r e so fc o m p o u n d sw e r ei d e n t i f i e db yi r ， 1 da n d2 dn m r ( 1 hn m r ，1 3 cn m r ，d e p t , h m q c ，h m b c ， 1 h , 1 h c o s y ) d a t aa n dl i t e r a t u r e s t h e ya r eb - a m y r i na c e t a t e ( i ) ， 2 8 a h o m o b e t a a m y r i na c e t a t e ( i i ) ，b - a m y r i n ( i i i ) ， 内蒙古大学硕士学位论文 3 - s i t o s t e r o l ( i v ) ，p a l m i t i ca c i d ( v ) a m o n gt h e m , c o m p o u n di ia n d va r ei s o l a t e df r o mt h eg e n u sf o r t h ef i r s tt i m e ，a n di ii sa n o v e lc o m p o u n d k e y w o r d s ：z am o n g o l i c a ，c h e m i c a lc o n s t i t u e n t s ，t e r p e n o i d s m 原创性声明 本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。除本文已经注明引用的内容外，葩文丰不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也 不包含为获得内鏊直太竺及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同 志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。 。 学位论文作者签名： 丞喀 指导教师签名： 1 5 t 期：照1 2 z ：堕 1 3期： 在学期间研究成果使用承诺书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，印：内蒙古大学有权将 学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允 许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存，汇编学位论文。 为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后 使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期闻导师的同意；若用 于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。 学位论文作者签名：鱼亟痉 指导教师签名； 日 期：坦z ，i e l 期： 内蒙古人学硕士学位论文 第一章前言 ( 一) 研究背景 椴树科( t i l i a c e a e ) 植物属双子叶植物，共有4 5 0 余种，隶属于5 0 属( t i l i a ) ， 稀为草本，多具星状或毛状茸毛。椴树科( t i l i a c e a e ) 植物分布大多数局限 在热带。而在热带地区以外，最重要的是椴树属植物，其主要分布在北半球 的温带地区，南半球有少量分布。该属植物被认为是以中国及朝鲜半岛为起 源中心，在中国分布广泛一在我国分布有1 2 属9 4 种，主要为黄麻属 ( c o r c h o r u s ) ，扁担杆属( g r e w i a ) ，椴树属( t i l i a ) 等，它们在各省都有 分布，主要是西南地区，其次是内蒙古、辽宁、甘肃、山西、河北。在内蒙 古主要有1 属3 种，即：蒙椴( t i l i am o n g o l i am a x i m ) 、糠椴( t i l i am a n d s h u r i c a r u p r ) 、紫椴( t i l i a a m u r e n s i sr u p r ) 。 蒙椴是椴树科( t i l i a c e a e ) 椴树属( t i l i al ) 植物，别名小叶椴，是内蒙古 地区典型树种，为落叶乔木，高达1 0 米以上，胸径3 0 厘米，树皮灰褐色光滑， 老时纵裂，有皮孔；叶互生，近圆形或宽卵形，长4 5 厘米；花黄色，果实椭 圆形或卵形。在内蒙古地区散生于山地杂木林及山坡，产自大青山、乌拉 山、蛮汉山等地。 从远古时期人们就把椴树的各部位用于治疗各种疾病。椴树花具有发 汗、镇静、解热之功效，抗动脉硬化、狭心、心肌梗塞和恢复疲劳、减轻消 化系统压力的作用1 1 ，2 1 ，此外还能抗蛋白凝固、抗缺氧、抗血糖过低，促进伤 口愈合、抗过敏和抗炎症【3 - 6 1 ，其提取物经常被用作化妆品以抗皮肤衰老。椴 树皮能治疗肾结石、痛风、冠心病，它还具护肝、抗菌之功效【7 朋。欧洲各地 普遍认为椴树叶提炼而成的补剂能全面维持身体健剧”。这显示椴树具有抗菌、 抗病毒的活性。 蒙椴树叶化学成分的研究 ( 二) 研究意义 我国西北地区是天牛虫害的重灾区，几十种树种受到天牛的危害。在上 世纪九十年代，天牛在内蒙古、辽宁、甘肃、陕西、山西等各省肆虐，灾情 严重，仅山西平壤县一个县被害面积就达0 7 万亩【9 】。光肩星天牛 ( a n o p l o p h o r ag l a b r i p c n n i s ) 是我国的主要蛀干害虫，主要危害杨( p o p u l u ss p ) 、 柳( s a l i xs p ) 、榆( u l m u ss p ) 、槭( a c e rs p ) 等多种阔叶树，在西北、华北及 中原地区普遍发生，其中内蒙古地区是重灾区之一。光肩星天牛猖獗成灾，农 田林网由于天牛的危害，损失惨重，有近5 0 万亩受害林木亟待救治，近1 0 0 0 万亩杨树人工林及广大的山杨、白桦次生林正受到该虫害严重威胁，给林业 生产和城市绿化带来巨大损失。因此如何早日治理光肩星天牛成为广大林业和 化学工作者急需攻克的重要课题。 国内外有大量科研工作者从事天牛的防治及相关的研究，并且取得了一 定的成绩。一般是以化学方法防治、毒杀( 如：喷洒农药乐果、甲胺磷等1 1 0 1 ) 和驱避为主，少部分则用诱杀法，如：日本学者合成a n o p l o p h o r a ，m a l a s i a c a 的 雌性激素1 5 一甲基三十烷和4 一甲基二十八烷来诱杀天牛1 1 1 j 、通过制备4 一正 庚氧基丁醛和4 一正庚氧基丁醇来诱杀亚洲光肩星天牛【1 2 1 。美国学者试图开发多 功能和具有抗信息素的聚集的药物，进而研制出能控制树皮甲壳虫的药物【1 3 】。 除此之外还有很少量的科研工作是从天然树种中寻求抗天牛的活性化 学成分，其中贡献比较突出的是： 赵一宇、曹兵等【1 4 d 8 l 多年来一直从事抗天牛树种及其抗虫机制的研究， 从天牛驱避树种对天牛的作用，及臭椿、苦楝树的活性化学成分对天牛的毒 杀作用等方面进行了较为系统的研究，并得出臭椿树皮粉、苦楝树叶对天牛 有较强的毒杀作用的结论，但却未能得到任何有抗天牛活性的纯化合物。除 此之外。也有小组对绿叶植物中的挥发性成分进行了分析，发现其中的成分如 醛及其衍生物酯等含有与寄生甲壳虫的信息素相同的成分1 1 。 b 从9 8 年开始，内蒙古的科研工作者发现椴树属的蒙椴( t i l i am o n g o l i a m a x i m ) 、籽椴( t i l i aa m u n e n s i s ) 等树种具有引诱天牛成虫取食、产卵，却 又对其卵、幼虫存活有显著的抑制作用，这一作用既能引诱又能杀死天牛， 立刻引起了林业防治研究人员的密切的关注，并在随后进行了大量的抗虫实 2 内蒙古大学硕上学位论文 验 z o 彩l 。 在椴树的抗天牛初步试验发现，把蒙椴树皮提取物或蒙椴树叶提取物加 入人工食物中会导致天牛幼虫生长减慢，不能正常发育，最终导致死亡【搏2 6 1 。 可见蒙椴提取物中的化学活性成分是其具有抑虫功效的主要原因。因此对蒙 椴等椴树树种化学成分及其对天牛作用机制的研究将具有很高的应用价值， 可以为我区及我国广大西北地区( 天牛虫害地区) 的林农业发展做出重要贡 献。同时为研究高活性低污染的抗天牛药物及拓展对椴树药物活性的应用都 具有重要意义。 2 0 0 2 年1 月，内蒙古大学化学化工学院田福利教授等人申请立项得到了 国家自然科学基金资助，进行蒙椴活性化学成分对天牛的作用机制研究。希 望通过对蒙椴提取物化合物结构、抗虫机制等的研究，为寻求高活性低污染 的抗天牛药物开拓新的道路，在已研究毒杀及驱避为主的防治方法基础上找 到新的防治手段。无疑该项目的成功实施将为研究开发出以椴树作为活性成 分的“绿色”抗天牛药物奠定基础。此外本课题的成功实施，将为内蒙古地 区乃至全国的典型林木防治和彻底根治天牛提供新的实用、高效、低毒、无 污染的手段。从长远来看，必将为治理西部日渐恶化的生态环境作出贡献， 最终为西部大开发创造良好的自然环境并推动西部地区的经济发展。 1 化学成分 ( 三) 研究进展 对椴树属植物化学成分的研究始于上世纪七十年代末，其中大部分是 关于欧美品种的花、叶中的挥发油、黄酮等成分为主的研究报道，在我国， 除本课题组外，尚未有椴树属植物化学成分的研究开展。椴树属植物中已 发现了1 0 0 多种化合物，主要包括黄酮类、萜类、苯丙素类、挥发油、生 物碱、糖类和直链烷烃类等，也有少量关于脂肪酸、色素和氨基酸等的报 道。下面就近二十多年来椴树属植物化学成分及生物活性研究所取得的进 展进行综述。 蒙椴树叶化学成分的研究 1 1 黄酮类化合物 已从椴树属植物中发现的黄酮类化合物有1 2 种，主要存在于花和 叶中，基本母核均为山奈酚( k a e m p f e r 0 1 ) 和槲皮素( q u e r c e t i n ) 。化 合物及来源植物见表1 1 ，化合物结构如图1 1 所示。 表1 1 椴树属植物中已分离出的黄酮类化合物 t a b l e1 1f l a v o n o i d si s o l a t c df r o m 冗妇g e n u s + 注：t a ：t d aa r g e n t e a ，t c ：而铀c o r d a t a , t p ：i l a 咖班砷y 如st tt i l i a t o m e n t o s am o e n c h 其中t h i at o m e n t o s am o e n e h 同t i l i aa r g e n t e a ，又名 s i l v e rl i n d e n 。 4 内蒙古大学硕士学位论文 o ho o h r 3 1 r 1 = r 2 = r 3 = h 2r 1 - b - d g i c 。r 2 = r 3 = h 3r 1 = b d - g i c ，r 2 = a - l - r h a r a = h 4r 1 = a l - r h a ，r 2 = r 3 = h 5r 1 = r 2 = a l - r h a ，r 3 = h 6r i = r 2 = h r 3 = o h 7r 1 = b d g i c ，r 2 = h ，r 3 = o h 8r 1 = b - d g i c ，r 2 = a - l - r h a ，r a = o h 图i 1椴树属植物中分离出的黄酮类化合物的结构 f i g1 1 s t u c t u r eo ff l a v o n o i d si s o l a t e df r o mt i l i ag e n u s 1 2 萜类化合物 目前从椴树属植物中分离出的萜类化合物为数不多，有待进一步开展 这方面的研究。1 9 8 3 年r a y m o n ds 等【3 3 l 首先从欧洲产椴树( t i l i ae u r o p e a ) 中 分离并鉴定了一种植物抗毒素7 - 羟基菖蒲烯( ( - ) - 7 一h y d r o x y c a l a m e n e n e ) ，2 0 0 2 年e c k h a r dm e l c h e r 等【3 4 l 又从一未知品种椴树( t i l i as p p ) 的木质部中鉴定出其异 构体5 一羟基菖蒲烯( ( 一) 一5 一h y d r o x y c a l a m e n e n e ) ，并且通过扫描电镜系统研究发 现羟基菖蒲烯是椴树创口抗真菌感染的活性物质。迄今为止，椴树属植物中分离 的三萜类化合物有白桦酯醇( b e t u l i n ) 、粘霉烯醇( g l u t i n 0 1 ) 、粘霉烯酮 ( g l u t i n o n e ) 、蒲公英赛醇( t a r a x e r 0 1 ) 1 2 4 1 、蒲公英赛醇乙酯( t a r a x e r y la c e t a t e ) 、 木栓酮( f r i e d e l i n ) 、1 3 - 香树脂醇( 8 - a m y r i n ) 、b 一香树脂醇乙酸酯( b a m y r i n a c e t a t e ) 捌、a 香树脂醇( a - a m y r i n ) 2 6 1 、表木栓醇( e p i f r i e d e l a n 0 1 ) 【3 5 1 。化合 物结构见图1 2 。 5 蒙椴树叶化学成分的研究 0 l 八八 t a r a x e r y l a c c t a t e r f f i h ：8 - a m , f i n f d e d e l i n e 一f r i e d e l a n o l r = a c o ：8 a m y d na c e t a t e a - a m y r j r l 图1 2 椴树属植物中已分离出的三萜类化合物的结构 f i g1 2s t r u c t u r eo ft e r p e n o i d si s o l a t e df r o m t i l i ag e n u s ， 马云翔从蒙椴树叶中分离出得到的蒲公英萜醇二十八碳酸酯( t a r a x e r y l o c t a c o s a n o i ca c e t a t e ) 1 3 6 ，岳建新从蒙椴树皮中分离得到的羽扇豆醇( l u p e 0 1 ) 和计曼尼醇乙酸酯( g e 姗a n i c o la c e t a t e ) 3 7 1 ，而且二人分别在蒙椴树的树叶与 树皮中分离得到胡萝h 苷( d a u c o s t e r 0 1 ) 3 6 , 3 7 ；方利从蒙椴树皮中分离得到 齐墩果酸( o l e a n o l i ca c i d ) 3 引。这些都属于萜类化合物。 1 3 苯丙素类化合物 t z a k o r 0 陋1 等从7 i l i at o m e n t o s a 中分离鉴定了一种香豆素苷和两种苯丙酸类 化合物并分别鉴定为七叶树素( a e s c u l i n ) ，咖啡酸( c a f f e i ca c i d ) 和绿原酸 ( c h l o r o g e n i ca c i d ) 。c h a n gm i nk i m 等1 3 9 嚏用常规的柱层析法从韩国产椴树死妇 6 内蒙古大学硕士学位论文 m a n d s u r i c a 中分离了一个香豆素苷一白蜡树苷( f r a x i n ) 。其结构如图1 3 所示。 c a f f e i ca c i d 图1 3椴树属植物中鉴定的四个苯丙素类化合物 f i g1 3 f o u rp h e u y l p r o p a n o i d si d e n t i f i e df r o mt d i ag e n u s 1 4 挥发油 关于椴树挥发油成分的研究较多。b u c hb a u e r ，g 等【4 0 i 用g c - - m s 系 统研究了t i l i ac o r d a t a 等三种椴树属植物中挥发油成分，鉴定了以芋烯为 主的2 0 种成分。t o k e r g u l n u r 等4 运用g c m s 分析鉴定了三种产自土耳 其的椴树挥发油成分，主要为烷烃、酯和脂肪酸，另外一些烯烃、醛、酮 等含量也较高。也有学者2 3 运用g c m s 结合柱层析的方法分离鉴定了欧 洲产椴树7 i l i ap l a t y p h y l l o ss c o p 花中的挥发油成分，鉴定出以b - 石竹烯 ( 2 6 1 1 、反一二氢香芹酮( 1 8 ) 、芋烯( 1 2 9 ) 、顺一二氢香芹酮( 1 1 ) 和香芹酮( 6 ) 等为主的萜类成分，其含量占挥发油总量的9 6 9 。 d a l j p 等1 用二氧化碳超临界提取、g c m s 分析的方法鉴定了椴树t i l i a c o r d a t a 花中挥发油的8 0 种成分，主要为单萜、醛和烷烃类化合物。s a l a g a b r i e l a 等1 分别用水蒸气蒸馏法、减压蒸馏法提取了三种欧洲产椴树花的挥 发油成分，并用g c m s 法分析鉴定其成分，研究发现减压蒸馏提取法效率更高。 于长江等4 53 运用g c m s 技术鉴定了蒙椴( t i l i am o n g o l i c a ) 中的5 1 种成 分，主要为酯、烯烃、醛、酮等。 1 5 酸及其衍生物类 迄今为止，从椴树属中已经分离了酸类化合物1 0 个：其中脂肪酸及衍生物4 7 蒙椴树叶化学成分的研究 个、氨基酸3 个、芳香酸2 个、糖酸1 个。其名称、植物来源及文献如表1 2 。 表1 2 椴树属植物中已分离出的酸及其衍生物 t a b l e1 2a c i da n di t sd e r i v a t i v ei s o l a t e df r o m 而f 缸g e n u s 1 6 生物碱类 生物碱一般指植物中含氮有机物( 蛋白质、肽类、氨基酸及维生素b 除外) 。生物碱在植物体内一般被认为是次级代谢产物，起着保护植物或 促进植物生长与代谢的作用。但是它们的真正作用仍不清楚，因为一些不 含或微含生物碱的植物或生物同样生长发育良好。，因此，生物碱在生物体 内的功能仍有待研究解决。 虽然生物碱是许多药用植物与中草药的有效成分，在许多情况下，含 量最高的生物碱往往是主要有效成分，但是也有例外。生物碱在植物中的 含量高低不一，有的在根皮或根茎中含量较高，有的则主要集中在种子或 果实中。这些情况给分离带来了很大的困难，到目前为止已从该属植物中 分离得到了1 4 种生物碱类化合物，其名称、结构如下： s e a l ，t a p a l l 【4 7 1 等人在t i l i a c o r ar a c e m o s a 的树叶中分离得到两个生物碱 t i l i a c o s i n e ( 1 ) t i l i a s i n e ( 2 ) ；akr a y i 鹌4 9 1 等人在zr a c e m o s a 中分离出了 t i l i a r e s i n e ( 3 ) t i l i a m o s i n e ( 4 ) 雨t ln m e t h y l t i l i a m o s i n e ( 5 ) ；p e t e rp a c h a l yi s 3 1 从z 8 内蒙古大学硕士学位论文 t r i a n d r a 的树干中分离出t i l i t r i a n d r i n e ( 6 ) ，n o r y a n a n g i n e ( 7 ) ，y a n a n g i n e ( 8 ) 和 t i l i a n a n g i n e ( 9 ) ：d o w t l m a b a d u 5 4 1 等人从zd i n k l a g e i 的树根中分离得到了一个季 铵盐类生物碱o b l o n g i n e ( 1 ；p i c h a e tw i r i y a c h i t r a 5 5 从zt r i a n d r a 的根部分离得 到t i l i a c o r i n i n e2 - n - o x i d e ( 1 1 ) ；j s ka y i m l 5 q 分离出i s o t e t r a n d r i n e ( 1 2 ) ：kp g u h a 5 刀从zr a c e m o s a 的根皮中分离得到n - a c e t a t e n o r t i l i a e o r i n i n e ( 1 3 1 和 n - a c e t y l n o r t i l i a e o r i n i n e ( 1 4 、。 1 ：r l = m e 0 r 2 = m e o r l = o h r d = 0 h r f m e k = m e o 2 ：r 1 = m e o r 2 = m e o r 3 ：o h r 4 ；0 h r s = h r 6 = m e 0 3 ：r l = m e 0 r ：m e o r l = o h r 产h r f m e k = h 4 ：r 1 = m e or ，= m e 0r 1 = 0 hr 4 = hr = hl k = m e o 5 ：r 1 = m e or ，= m e or x = o hr d = hr e = m er = m e o 7 ：r 1 = 0 hr ，= m e or 1 ；o hr 4 = hr e = hr = m e o 8 ：r l - 0 hr ，= m e or 1 = o hr 4 = hr ，= m ek = m e o 9 ：r t = 0 hr 2 - - - o hr 3 = m e or 4 = hr s ：m ek = m c 0 1 i ：r 1 = h r 2 = m e o r ，= o h r 4 = h r = m e r 6 = m e o 1 3 皿1 = m e 0r ，= m e or ，= o hr 4 = hr = a c = m e o 1 4 ：r i = h r 2 = m e o r 庐o hr 4 - h r 5 = a cr 6 = m e o 1 0 ：o b l o n g i n e 图1 4 椴树属植物中鉴定的十四种生物碱类化合物 f i g1 4f o r t e e na l k a l o i d si d e n t i f i e df r o mt i l i ag e n u s 另外，方利首次从蒙椴树皮中分离得到咖啡碱( c a 廊i ) f 3 8 j 。 1 7 糖类 椴树属植物中含有多种糖类化合物，以椴树属植物的花中含量最高。已分离 鉴定的糖类化合物中，含有d 半乳糖，d 木糖，l 鼠李糖，d 甘露糖，l 阿拉伯 糖，d 葡萄剖5 引，且多糖主链一般是以1 ，3 或1 , 6 相连的半乳糖，侧链是l 阿拉 伯糖相连。 9 蒙椴树叶化学成分的研究 1 8 直链烷烃类 目前，已从多种椴树的皮和叶中分离鉴定了不同长度范围的直链烷烃 混合物，呈凝胶状，均由g c m s 方法鉴定。 表1 3 般树属植物中鉴定出的烷烃类混合物 t a b l e1 3h y d r o c a r b o nm i x t u r ei d e n t i f i e df r o mt i l i ag e n u s 1 9 其它化合物 此外，y o u n gp i ly u 等3 5 1 和于长江等2 6 1 都曾先后从t i l i am a n d s u r i c a 和力肠 m o n g o l i c a 中分离得到植物甾醇b 一谷甾醇( b - - s i t o s t e r 0 1 ) 。陈荣峰h 7 1 从蒙 椴树皮的乙醇萃取物中分离鉴定了两种核苷类异构体( b - - d ) 37 ，57 一二( 4 一氯苯甲酰) 胸腺嘧啶脱氧核苷( b - dt h y m i d i n e37 ，5 ，- d i ( 4 c h l o r o b e n z o a t e ) ) 和( a d ) 3 ，57 一二( 4 一氯苯甲酰) 胸腺嘧啶脱氧核苷( a dt h y m i d i n e 3 7 ，5 d i ( 4 一c h l o r o b e n z o a t e ) ) ，该类化合物通常只在动物体内发现，植物中分 得实属罕见。j a v i e r d el a sr i v a s 等哺o3 利用反相高效液相色谱鉴定了t i l i a t o m e n t o s a 中的九种类胡萝卜素色素，分别为：新黄质、顺新黄质、堇黄质、 蒲公英黄质、花药黄质、叶黄质、顺叶黄质、b 一胡萝卜素和a 一胡萝卜素。 岳建新 3 7 1 从蒙椴树皮乙酸乙酯提取物中分离出了三棕榈酸酸甘油酯 ( p r o p a n e 一1 ，2 ，3 一t r i y lt r i p a l m i t a t e ) 。 2 生物活性 椴树属植物具有多方面的生物活性。在中国，从远古时期就把椴树的 树皮和根皮用于治疗筋无力、慢性咳嗽、关节炎、风湿等疾病，为民间常用 药材。欧美则应用椴树花作发汗剂、镇静剂、解热剂等，多种椴树的花和叶 被药典收录用于治疗感冒、发烧等。v i o l a h 证实用苯并二氮杂吸附法从t i l i a 1 0 内蒙古丈学硕士学位论文 t o m e n t o s am o e n c h 分离得到的黄酮类化合物中，一部分具有抗焦虑的生物活性 【卅。目前已开展了其对心血管系统、抗炎、护肝和抗菌抗病毒等作用的研究。 椴树中的黄酮苷芦丁( r u t i n ) 具有多种生物活性。它有维生素p 样作用， 能降低血管脆性及异常的通透性，可用于防治高血压及动脉硬化的辅助治疗 剂。芦丁具有明显的扩冠作用，并已用于临床。芦丁还对角叉菜胶、5 一t h 及p e g 诱发的大鼠足爪水肿、甲醛引发的关节炎及棉球肉芽肿等均有明显抑 制作用哺。 据报道【6 2 1 ，t i l i aa r g e n t e a 中两种主要的黄酮苷k a e m p f e r 0 1 3 ，7 o l - d i r h a m n o s i d e 和q u e r c e t i n 3 ，7 o l - d i r h a m n o s i d e 均有好的镇痛和抗炎作 用，当剂量为5 0 m g k g 时，它们对大鼠角叉菜胶致足浮肿有较强的抑制作 用，并且无明显毒性和胃损伤反应。 t i l i aa r g e n t e a 花的甲醇萃取物能明显抑制由d g a l n l p s 过量引起的 肝损伤。通过生物测定指导下分离鉴定其活性成分主要为五种黄酮苷，其 主要成份t i l i r o s i d e 在2 5 1 0 0 m g k g 剂量范围内对d g a l n l p s 处理大鼠的 血清g p t 和g o t 上升有强的抑制作用d o 。 已有对椴树中槲皮素、山奈酚等成分的抗病毒作用的报道 6 3 1 0 椴树中已分离出的羟基白菖烯是一种植物抗毒素，是椴树创口不被真 菌感染的活性物质 3 4 1 0 总的说来，目前对椴树属植物的生物活性研究还没有广泛开展， 对椴树中黄酮类化合物的活性研究居多。随着新的有效成分的分离和 鉴定，相信将会有越来越多的活性化合物被发现并应用于药学研究。 本论文的工作仅为田福利教授国家自然科学基金的一小部分，定题为蒙椴树 叶化学成分的研究。利用乙醇连续浸泡提取的方法，通过采用梯度有机溶剂萃取， 最后分别得到石油醚、氯仿提取物。从树叶中分离得到5 个化合物及一个烷烃混 合物。利用瓜、h n m r 、”c - n m r 、2 d n m r 等分析鉴定了它们的结构。 1 1 蒙椴树叶化学成分的研究 第二章蒙椴树叶化学成分研究 ( 一) 实验仪器与材料 仪器：n e x u s 6 7 0 f t - i r 型傅里叶变换红外光谱仪，k b r 压片，美国； b r u k e ra v a r i c e3 0 0 型核磁共振仪，氘代氯仿为溶剂，t m s 为内 标，测定温度为3 0 ，美国； w a t e r sd e l t a6 0 0 e 型高效液相色谱仪 j y 0 2 s 型紫外分析仪，北京君意东方电泳设备有限公司； r e 5 2 型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂； s h 厶c 循环水多用真空泵，巩义市峪予仪器厂； x t r - 2x 4 显微熔点测定仪( 未校正) ，麦克仪器有限公司 试剂：柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶和预制硅胶薄层板均为青岛海洋化工 厂生产； 常规试剂均为天津光复化学试剂厂生产( 分析纯) ； 材料：蒙椴树叶均采自内蒙古林业科学研究院植物园，并由张玉凤研 究员鉴定树种为而妇m o n g o “c am a x i m ，树龄1 9 年。 ( 二) 蒙椴树叶化学成分的提取、分离与纯化 将3 0k g 阴干的蒙椴树叶在室温( 约1 8 ) 下，用9 5 乙醇2 7 0 0 0 m l 反复浸泡提取，共7 次，每次浸泡7 天左右。合并提取液减压浓缩后得到约 4 0 0 9 浸膏，即为乙醇提取物。乙醇提取物用5 0 的乙醇溶液分散后，再分别 用石油醚、氯仿进行萃取，然后减压浓缩，得到石油醚提取物、氯仿提取物，质 内蒙古人学硕上学位论文 量分别为1 5 0 9 、5 0 9 。 1 石油醚提取物分离与纯化 将1 5 0 9 石油醚浸膏用石油醚溶解，加入1 2 0 9 硅胶( 8 0 1 2 0 目) 拌样， 在通风储中挥干溶剂，剩余的少量溶剂于烘箱中低于6 0 c 烘干至不结块。用 1 0 0 0 9 硅胶( 8 0 - 1 2 0 目) 和2 5 0 0 m l 石油醚湿法装柱，干法上样，并轻搅赶 出气泡。石油醚一乙酸乙酯一乙醇梯度洗脱，共得到8 4 0 个流分。 当溶剂为石油醚时，合并组分5 1 2 ，得到一凝胶状固体组分。利用硅胶 板进行薄层层析分析，确定其为混合组分l ，约2 0 r a g 。 当溶剂为石油醚：乙酸乙酯= 1 0 0 ：1 时，合并组分4 7 1 0 1 ，浓缩后得到一伴 有红色液体的固体1 2 1 9 。利用硅胶( 1 6 0 2 0 0 目) 柱层析对其进行纯化，以 石油醚一乙酸乙酯体系( 8 0 ：1 ) 进行梯度淋洗，得到一略带黄色的固体1 6 9 ， 反复柱层析，经苯重结晶得化合物1 ，白色固体，无晶型，约3 0 r a g 。 当溶剂为石油醚：乙酸乙酯= 7 5 ：1 时，合并组分1 8 1 2 0 5 得到伴有黄色物 质的白色固体5 4 7 9 ，利用多次硅胶( 1 6 0 2 0 0 目) 柱层析对该组分进行纯化； 再以石油醚一乙酸乙酯( 1 5 ：1 ) 体系为流动相进行制备薄层层析，得到黄 色固体，通过测定熔点确定其纯度不高，再使用高效液相色谱对其进行纯化， 得化合物2 ，约8 m g 。 液相色谱测试条件：c 1 8 正相柱一c n ( 氰基) 温度：室温下( 2 5 ) 柱尺寸：2 5 0 x 4 6 m m 流动相：正己烷( 色谱纯，国药集团) 当溶剂为石油醚：乙酸乙酯= 2 0 ：1 时，合并组分3 1 4 - - 3 4 7 得到伴有黄色液 体的固体7 6 5 9 ，再利用硅胶( 1 6 0 2 0 0 目) 柱层析对其进行纯化，以石油醚 一乙酸乙酯梯度洗脱，在洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯= 1 0 ：1 时，得到大量 白色固体，再用乙醇反复重结晶，得到化合物3 ，白色针状晶体，约l o o m g 。 蒙椴树叶化学成分的研究 当溶剂为石油醚：乙酸乙酯= 1 0 ：1 时，合并组份4 2 7 4 3 5 ，为黄色固 体，利用1 6 0 2 0 0 目硅胶进行多次柱层析，再用石油醚反复进行重结晶，得 到化合物4 ，白色针状晶体，约8 m g 。 2 氯仿提取物的分离与纯化 将5 0 9 氯仿浸膏用氯仿溶解，加入5 0 9 硅胶( 8 0 1 2 0 目) 拌样，挥干溶 剂得到浅绿色的固体粉末。用8 0 0 9 硅胶( 8 0 1 2 0 目) 和1 5 0 0 m l 石油醚湿法 装柱，干法上样，并轻搅赶出气泡。石油醚一乙酸乙酯一乙醇梯度洗脱，共 得到6 5 0 个馏分。 当石油醚：乙酸乙酯- - 1 0 ：1 时，合并组分1 8 5 1 9 7 ，得到略带黄色的白色固 体，该组分利用硅胶( 1 6 0 - - 2 0 0 目) 柱层析，以石油醚一乙酸乙酯体系进行 梯度洗脱，得到白色固体，用石油醚重结晶，得到化合物5 ，约l o m g 。 蒙椴树叶化学成分的提取、分离和纯化过程见流程图2 1 。 1 4 内蒙古人学硕士学位论文 蒙椴树叶 i i 室温浸泡 上 乙醇提取物 石油醚提取物 石油醚：乙 酸乙酯= 1 ：o 组分5 1 2 混合组分 l 石油醚： 乙酸乙酯一 1 0 0 ：l 组分4 7 - - 1 0 1 硅胶柱层析 苯重结晶 l 化合物1 石油醚：乙 酸乙酯= 7 5 ：1 组分1 8 1 2 0 5 硅胶柱层析 制备薄层层 析( 石油醚： 乙酸乙酯= 1 5 ：1 1 ) l 使用i - i p l c 化合物2 石油醚：乙 酸乙酯= 2 0 ：1 组分3 1 4 3 4 7 硅胶柱层析 乙醇重结晶 l 化合物3 石油醚：乙 酸乙酯= 1 0 ：1 组分4 ”一 4 3 5 硅胶梓层析 石油醚重结 晶 l 化合物4 图2 1 蒙椴树叶提取分离流程图 f i g 2 1p r o c e d u r eo f e x t r a c t i o na n ds e p a r a t i o nf r o m i l am o n g o l i c al e a v e s 氯仿提取物 石油醚：乙 酸乙酯= 1 0 ：1 组分1 8 5 1 9 7 硅胶柱层析 石油醚重结 晶 j 化合物5 蒙椴树叶化学成分的研究 1 混合组分1 第三章结果与讨论 ( 一) 化学成分的结构鉴定 白色凝胶状固体，n a p ：2 0 - - 3 0 1 2 ，易溶于石油醚。i 。2 9 5 6 c m 一，2 9 2 3 锄， 2 8 5 3c n l l ，1 4 6 1c n l l ，1 3 7 5 锄一，7 2 3c l i 1 。2 9 2 3e r a - 1 峰高于2 9 5 6 伽+ 1 峰，2 8 5 3 c l n 一1 峰也显示为很强的吸收，说明c h 2 的数量多于c h 3 的数量，7 2 3c l n l 可证明 c h 2 长链的存在。推测该组分为直链烷烃类化合物的混合物。由于于长江和马云 翔之前也得到过类似的组分，所以没有做进一步的测试。 2 化合物1 l i e b e r m a n n b u r c h a r d 反应呈阳性。m p ：2 4 1 2 4 2 5 c ，i r 口m a ，2 9 4 5c m 、2 8 5 5 c n l l ( c h 3 ) ，1 7 3 0c m 1 ( c = o ) ，1 4 6 0c n l 一、1 3 8 0 伽。1 ( c h 2 ) ，1 2 5 0g i n 、1 0 2 7 e r a 1 ( c - - o ) 。1 h n m r ( d ) 4 5 2 ( 1 h ，t , c = c h ) 0 8 7 、o 8 8 、0 8 9 、0 9 0 、0 9 1 、0 9 7 、 0 9 9 、1 1 5 、2 0 7 ( 单峰，每个3 个h ，9 个c h 3 ) ，根据”c n m r 及d e p t 可知 该化合物分子有3 2 个碳原子，其中9 个c h 3 ( m e t h y l ) ，1 0 个c h 2 ( m t h y l e n e ) ，5 个c h ( m e t h i n e ) 和8 个季碳( q u a t e m a r y ) 。由此可知该化合物的分子式为 c 3 2 h 5 2 0 2 ，0 - - 7 ，应存在五环体系及一c = c 一结构。 通过分析二维核磁共振的h m q c ，h m b c 及h hc o s y 谱的相互关联信息， 可确定化合物的结构。 ( 1 ) 从核磁氢谱中能够看到甲基h 的吸收单峰，并且在h m b c 中，甲基h 和与其相关的c 显示耦合相关，所以首先确定甲基h 与碳的相关信息，即可初 1 6 内蒙古大学硕十学位论文 步确定化合物的骨架结构，从h m q c 和h m b c 中反映出的甲基h 的关联情况 见表3 - 1 。 ( 2 ) 由h m q c 可知，5 2 与1 2 1 7 ( c h ) 直接相连，由h ，h c o s y 可知5 2 1 9 相关，1 9 和2 3 6 ( c h 2 ) 直接相连，由此可以确定1 2 1 7 和2 3 6 直接相连。 ( 3 ) 由表1 可知2 8 4 与季碳3 1 2 直接相连，从h m b c 可见2 8 4 和1 6 8 相 关由h m q c 判断，1 6 8 和4 6 8 ( c h 2 ) 直接相连，由此可知4 6 8 和3 1 2 直接相连。 ( 4 ) 根据h ，h c o s y , 4 5 2 与1 6 5 相关，由h m q c 判断4 5 2 与8 1 0 相关， 1 6 5 与2 3 6 直接相关，可知8 1 0 与2 3 6 直接相连。 ( 5 ) 根据 i h c o s y , 2 0 1 与1 7 8 相关，由h m q c 判断1 7 8 与2 6 2 相关， 2 0 1 与2 7 。0 直接相关，可知2 6 2 与2 7 0 直接相连。 ( 6 ) 根据h ，h c o s y ，1 9 0 与1 5 7 相关，由h m q c 判断1 9 0 与2 3 6 相关， 1 5 7 与4 7 6 相关，可知2 3 6 与4 7 6 直接相连。 ( 7 ) 根据h