（分析化学专业论文）中药血竭的质量控制研究.pdf

摘要摘要血竭是珍贵的中药传统品种之一，在我国药用历史已经有一千五百多年。进口血竭为棕榈科黄藤属植物d a e m o n o r o p sd r a c ob 1 的树脂，市价昂贵。我国用来代替进口血竭的药用资源，为百合科龙血树属剑叶龙血树( d r a c a e n ac o c h i n c h i n e n s i s ( l o u r ) s c c h e n )的含脂木质部提取的树脂，1 9 9 9 年定名为“龙血竭”。进口血竭与国产血竭有着相似的外表与药效，但在价格方面却有着相当大的差异，故需建立稳定可靠的分析方法达到质量控制的目的。本课题的研究方向是，中药血竭的质量控制研究。以中药血竭为研究对象，采用高效液相色谱法与微乳毛细管电动色谱法对血竭的指纹图谱进行了初步的研究，同时，建立了快速鉴别进口血竭与国产血竭的方法。课题的研究内容主要包括以下三个部分：1 毛细管电泳法用于进口血竭与国产血竭的快速鉴别；2 国产血竭的高效液相色谱指纹图谱研究；3 国产血竭的微乳毛细管电动色谱指纹图谱研究。首先，本文采用毛细管电泳电化学检测( c e e d ) 的方法达到了进口血竭与国产血竭快速鉴别的目的，同时用此方法测定了有效成分的含量。研究运行缓冲溶液浓度和酸度、分离电压、进样时间及检测电位等电泳条件对龙血素a 、龙血素b 和血竭素分离效果的影响。得到了最佳电泳条件：电极电位0 9 0v ( v s s c e ) 、分离电压1 4k v 、电动迸样8s 、运行缓冲液2 0m m 0 1 l ( p h = 9 2 4 ) 硼砂溶液。在此优化条件下，龙血素a 、龙血素b 和血竭素得到很好的分离。在5 1 0 一1 1 0 4 m l 的范围内存在良好的线性关系，方法检测限低，回收率测定结果说明该法准确、可靠。其次，本文采用高效液相色谱法( h p l c ) 建立了不同产地国产血竭药材的指纹图谱。研究了流动相类型、梯度洗脱条件及检测波长的选择对国产血竭药材指纹图谱的影响，得到了优化的分析条件；色谱柱，“c h r o s p h e rc 1 8 ( 2 5 0m m 4 6m m 内径，5 岬) ；流动相，乙腈( a ) 一o 1 磷酸水溶液( b ) 梯度洗脱，o 。9 0m i n ，a ：3 0 6 0 ；流速为0 6m l m i n ；检测波长：2 8 0m 。以4 种样品色谱图中2 0 个共有峰平均相对峰高为标准建立对照指纹图谱，采用夹角余弦和相关系数的方法计算4 种国产血竭样品h p l c 色谱图相似度，结果均大于0 9 1 ，表明所有样品的质量一致。该方法准确、可靠，还可用于进口血竭与国产血竭的鉴别。最后，本文采用微乳毛细管电动色谱( m e e c k ) 方法建立不同产地国产血竭药材的指纹图谱。实验条件为：b e c l ( m a np a c e m d q 型毛细管电泳仪；熔融石英毛细管，6 6c m 7 5 “m ；运行电压，1 8k v ；检测波长，2 8 0i u n ；压力进样，o 6p s i ，进样时间，6s ，运行缓冲液，s d s ：j 下丁醇：j 下辛烷：硼砂溶液( p h9 2 4 ，l om m o l l ) = 3 3 ：6 6 ：o 8 ：8 9 3 。以2 7 个共有峰平均相对峰面积作为标准建立国产血竭m e e k c 对照指纹图谱，利用央角余弦和相关系数衡量4 批国产血竭样品的相似度，均大于0 9 0 ，说明4 种样品质量一致，结果与h p l c 方法所得结论相同。关键词：中药血竭；毛细管电泳；高效液相色谱法；微乳毛细管电动色谱；指纹图谱a b s t r a c ta b s t r a c td r a g o n sb l o o di sad e e pr e dr c s i nt h a th a sb e e nu s e df o rd i v e r s em e d i c a lp u 丌) o s e sf o rs e v e r a lc e n _ t u r i e s s a j l g u i sd r a c o n i s ，ar e s i ne x c l u d e d 行o mt h ef m i to fd a e m o n o r o p sd r a c o b 1 ( i l yp a l m ) c u i t i v a t e di ns o u t h e a s ta s i a n ，i st l l ep r i n c i p a ls o u r c ef o rc o m m e r c i a l l yh a r v e s t e dd r a g o n sb l o o d i nc h i n 如s a n g u i sd r a c o n i si sr e c o r d e da sd r a g o n sb l o o di nt h eo m c i a lc h i n e s ep h a n n a c o p o e i a h o w e v e r ，o w i n gt oi t sr 撕饥s a n g u i sd r a c o n i si sv e 巧e x p e n s i v ei nc h j n e s em a 血e t ，w h i c hl i m i t si t se x t e n s i v eu s ei nc l i n i c a lt r e a t m e n t s f o l l o w i n ga ne x t e n s i v ei n v e s t i g a t i o n ，c a ia n dc 0 一、o d ( e r s ( 19 7 9 ) h a v ef o u n dad r a g o n sb l o o ds u b s t i t u t e ，ar e dr e s i nf 而mt h et r e e s t e mo fd r a c a e n ac o c l l i c h i n e n s i s ( l o u r ) s c c h e n ( f a m i l yl i 王i a c e a )a i l d 懈n a m e dr e s i n ad r a c o m s w i t hp h a n l l a c o l o g i c a lr e s e a r c hi m p r o v e m e n t ，d r a g o n sb l o o dh a sb e e ne x t e n s i v e l ye x p l o i t e df o rc l i n i c a l 慨a t m e n t c o r r e s p o n d i n g l y ，m o r ea n dm o r ef 砒汜a n dd e f e c t i v eg o o d sa p p e a r e di nt h em a r k e t a l t h o u g hr e s i n ad r a c o n i sr e s e m b l e ss a n g u i sd r a c o i l i si nm a u l ya s p e c t s ，o n em 勾o rd i f f e r e n t i a t i n gf e a t u r ei st h e i rf i n a n c i a lv a l u e ni st h e r e f o r en e c e s s a 巧t oe s t a b l i s ha i la c c u r a t e ，r e l i a b l ea n dc o n v e l l i e n tm e t h o df o rq u a l i t vc o n t r 0 1i no r d e rt oe n a b l ed i f f 宅r e n t i a t i o no f b o t hp l a n tp r o d u c t s f i r a ne a s ym e m o d ，b 勰e do nc 印i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ( c e ) w i t he l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o n ( e d ) ，f o rq u i c k l yi d e n t i 聊n gs a n g u i sd r a c o n i sa n dr e s i n ad r a c o n i sa n ds i m u l 切n e o u sd e t e m l i n a t i o no fl o u r e i r i na 1 0 u r e i r i nba n dd r a c o r h o d i ni nr e s i n ad r a c o n i sa n ds a n g u i sd m c o i l i s t h ee & c t so ff a c t o r ss u c ha st h e 印p l i e dp o t e n t i a lt ot h ew o r k i n ge l e c t f o d e ，c o n c e n 乜a ：t i o no ft h er 吼n i n gb u 虢r ，t h es e p a r a t i o nv o l t a g e ，a n dm ei n j e c t i o nt i m ew e r es t u d i e dt of i n dt h eo p t i m u i nc o n d i t i o n s t h eo p t i m u i nc e e dc o n d i t i o n sw e r ea sf e l l o w s ：0 9 0v ( 协s c e ) a sm ea p p l i e dp o t e n t i a lt ot h ew o r k i n ge l e c t r o d e ，2 0m m 0 1 lb o r a x ( p h9 2 4 )a st h er u n n i n gb u 虢r ，t h es 印a r a t i o nv o l t a g ea t14k va j l d8 sa st h ei n je c t i o nt i m e u n d e rm eo p t i m u mc o n d “i o n s ，t h ea na _ l 舛e sw e r eb a s e 1 i n es e p a r a t e dw i t h i n3 0m i na n de x c e l l e n tl i n e 撕哆w a so b t a i n e di nt h ec o n c e n t r “o nr a n g e 舶m5 x l o 一1 1 0 珥g m l t h ea n a l y t e si nr e s i n ad r a c o n i sw e r ea l s od e t e r m i n e dw i t hr e c o v e r i e sr a n g ef r o m9 8 8 t 01 0 1 8 ，w h i c hs h o w e dt h ea s s a yr e s u l t sw e r es a t i s f a c t o 珥t h e n ，am e t h o db a s e do nk 曲p e r f o r m a n c el i q u i dc 1 1 i | o m a t o g r a p h y ( h p l c ) t oe s t a b l i s h吐l e 缸g e r p d n to fr e s i n ad r a c o i l i sw a l sd e s c r i b e d t h ec h r o m a t o g r 印h y 、a sc 硎e do u tu s i n gal i c h r o s p h e rc 1 8 ( 2 5 0m m 4 6m mi d ，5 p m ) c o l u m ne l u t e dw i t hal i n e a rg r a d i e mo fa c e t o m t r i l e ( a ) a i l dw a t e rc o n t a 越n g0 1 p h o s p h o r i ca c i d ( b ) ，i n i t i a l l ya t3 0 ：7 0 ( a ：b ) a n dc h a n g i n gt o6 0 ：4 0i n9 0m i n ；v e l o c i 母o fn o w ：o 6m l m i n ；u vd e t e c t i o n ：2 8 0n i n f o u rc h r o m a t o g r a m so fs 锄p l e so b t a i n e df 的md if f e r e n tp h a r m a c e u t i c a lf a c t o r i e ss h o w e d2 0p e a k si nc o m m o na r d 组k em ea v e r a g eo ft h e ma st h ef i n g e r p r i n to fs t a n d a u r d d a t a so ft h es a i l l p l e sw e r ep r o c e s s e dw i t ht w ol ( i n d so fm a m e m a t i cm e t h o d si n c l u d i n gc o m e l a t i o nc o e 硒c i e n ta 1 1 di n t e r a n g l e c o s i n et ov a l i l a t et h es i m i l a r i t y t h ev a l u e sw e r em o r et h a no 91 ，w h i c hs h o w e dr e s i n ad r a c o n i ss 锄p l e s 、e r ec o n s i s t e n t t h i sm e t h o dw a sa c c u r a t e ，r e l i a b l ea n dc o u l db eu s e dt 0d i s t i n g u i s hs a n g u i sd r a c o n j s 丘o mr e s i n ad r a c o n i s t h el a s t ，也em e t h o db a s e do nm i c r o e m u l s i o ne l e c t r o k i n e t i cc h r o m a t o g r a p h y ( m e k k c )t oe s t 2 l b l i s hm e6 n g e r p 五n to f r e s i n ad l c o n i sw a sa l s od e s c r i b e d t h em i c r o e m u l s i o nm a d eu po f3 3 ( 细) s o d i u r i ll a u r y ls u l 白t e ( s d s ) ，6 6 ( v ) n 南u t a n o l ，0 8 ( w w ) n h e x a n ea n di ia b s t r a c t1om m o l 几s o d i 啪t e t r a b o r a t eb u f f e r ( p h9 2 ) ，w m c hw a sa l s ou s e da st h es 0 1 v e n tf o ru l t r a s o n i ce x t r a c t i o n 7 r h ef i n g e r p r i n to fr e s i n ad r a c o m sc o m p r i s e d2 7c o m m o np e a k sw i t h i n10 0m i n t h er s dv a l u e so ft h er e l a t i v em i g r a t i o nt i m eo ft h e s ec o m m o np e a k sw e r el e s st h a j l2 1 ，w h i c hd e m o n s t r a t e dt h a tt h em e t h o dh a dg o o ds t a b i l i t ) ，a n dr e p r o d u c i b i l i 够f o u re l e c t r o p h e r o g r 锄so fs a m p l e ss h o w e d2 7p e a k si nc o m m o na 1 1 dt a k et h ea v e r a g eo ft h e ma st h ef i n g e r p r i n to fs t a n d a r d d a t a so ft h es a m p l e sw e r ep r o c e s s e dw i t l lt w ok i n d so fm a t h e m a t i cm e t h o d si n c l u d i n gc o r r e l a t i o nc o e 佑c i e n ta n di n t e r - a n g l e c o s i n et ov a l u a t et h es i i n i l a r i t y t h ev a l u e so fs i m i l 撕哆d e g r e eo fa us a m p l e sw e r em o r et h a n0 9 0 ，w h i c hs h o w e dr e s i n ad r a c o n i ss 锄p l e s 丘o md i f l f e r e n tp h 唧l a c e u t i c a lf a c t o r i e sw e r ec o n s i s t e n t k e yw o r d s ：d r a g o n sb l o o d ；c a p i l l a 叫e l e c t r o p h o r e s i s ( c e ) ；h i g hp e i f o m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r 印h y ( h p l c ) ；m i c r o e m u l s i o ne l e c t r o k i n e t i cd 1 1 r o m a t o g r a p h y ( m e e k c ) ；f i n g e 印r i n tn l独创l 生声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。签名：。礁太墨日期：塑立壁垒墨二! 盈关于论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定：江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。签名：藿望墨导师签名：第一章文献鱼考第一章文献查考1 1 中药血竭简介血竭是珍贵的中药传统品种之一。该药性平，味甘、咸，有活血祛瘀、消肿止痛、收敛止血之功效，主要用于跌打损伤、内伤瘀痛、外伤出血、溃疡不敛等症i 。现代医学研究证实，血竭具有改善机体微循环，调整机体新陈代谢、改善机体免疫功能等作用。血竭的基源包括棕榈科( p a l m a e ) 、百合科( l i l i a c e a e ) 、豆科( l e g u m i n o s a e ) 和大戟科( e u p h o u b i a c e a e ) 4 科5 属2 0 余种不同植物的树脂。血竭治病在我国已经有一千五百多年的历史，以往其来源从无国产，全靠进口，价格昂贵，所以只用它配制一些名贵的中成药，限制了其临床使用。七十年代以来，我国著名植物学家蔡希陶教授1 2 j ，历尽千辛万苦，终于在云南西双版纳的密林中找到了世界珍贵的树种一龙血树，利用龙血树树脂为原料，研制丌发出与进口血竭具有相似临床疗效的国产血竭，并且在各地区广泛使用。目前，国内市场上国产血竭主要为百合科植物剑叶龙血树d r a c a e n ac o c h i n c h i n e n e s i s ( l o 比) s c c h e n 的含脂木材提取得到的树脂。近年来，海南省亦将小花龙血树d r a c a e n ac a m b o d i a n ap i e h ee xg a g n e p 提制的血竭载入地方标准；广西血竭则来自广西产的剑叶龙血树，并以“龙血竭”名称于1 9 9 9 年批准为国家一类新药，收载于2 0 0 0 年的部颁标准。血竭已广泛用于临床，在治疗“血症”方面具有双向调节作用，即一方面可以活血化瘀，另一方面又能止血，特别是可以改善微循环，而微循环障碍又是涉及临床各科的问题，也就是说很多疾病都与血瘀有关，按活血化瘀的治疗原则，都可以取得良好的效果，所以血竭在内科、外科、妇产科、五官科以及皮肤科等领域都有很广阔的应用。但是血竭的基础研究还较薄弱，其质量控制是否满足中药现代化的要求，是否存在一定的问题，也有待于进一步的研究。现有文献中，多为对血竭中有限几种活性成分的研究，或对全血竭的药理活性研究。但是却忽视了中药药效是各种成分的协同作用，故使用一种或几种化学成分为参照物无法对其进行合理有效的质量控制。本文探讨中药指纹图谱技术用于国产血竭质量控制的可能性。除此之外，毛细管电泳技术也被带入国产血竭与进口血竭的快速鉴别的研究中。随着中药血竭基础研究的深入，将会更好的利用这一宝贵而有限的药物资源，为进一步规范中药市场提供科学依据。1 1 1 植物基源血竭( d r a g o n sb l o o d ) 在我国作为传统中药使用已有1 5 0 0 多年的历史，始载于南北朝时代的雷公炮炙论。太清伏炼灵砂称“麒麟竭，出于西胡”，表明血竭最初应来源于西域。宋代苏颂撰本草图经称：“旧不载所生州土，今出南蕃诸国及广州”。明代以后，均多记载“出南蕃”，并常与紫矿相混。由此说明，血竭本不产我国，其来源自古以来就有西来和南来二说，且西来者在先，南来者在后，南来者逐渐取代西来者。江雨大学硕上学位论文明清以来，东南亚产的血竭已经成为我国进口血竭的主流，其主要基源是印度尼西亚产棕榈科黄藤属植物d a e m o n o r o p sd r a c ob 1 的树脂，如著名的“手牌”和“阜冠牌”血竭，近百年来已成为我国血竭传统的主流品种，并一直依赖于进口。“d r a g o n sb 1 0 0 d ，实为古希腊的传统药物，最早记载于希腊学者d i o s c o r i d e s 所著的d em a t e r i am e d i c a ( 药物学) 一书，据书中记载该药的基源植物为百合科龙血树属的数种植物，如龙血树d r a c a e n ad r a c o 和特产于也门s o k o t r a 岛的索科特拉龙血树d c i i l l l a b a r 。龙血树属的拉丁属名d r a c a e n a 就是依据阿拉伯传统的称呼而来的。该药物作为阿拉伯文化和传统药物的代表，不仅在欧洲和北非广泛流传，隋唐时代沿“丝绸之路”传入我国。我国最早认识的“出于西胡”或“大食诸国”的麒麟竭，以及南宋诸藩志记载输入的药物血竭，应该就是产于西亚和北非的“d r a g o n sb l o o d ”。明史夕 、国七亦记载：我国使节访问祖法儿( 今阿拉伯半岛东南) ，“起王遍谕国人尽出乳香、血竭、芦荟、没药、苏合油、安息香与华人交易”。该血竭的基源应是龙血树属植物。近代，我国还曾从南也门进口来源于龙血树属植物的血竭。棕榈科麒麟竭作为血竭资源在我国使用，应追溯于宋朝，发展于明清。著名航海家郑和从明成祖永乐三年( 1 4 0 5 年) 起，历经东南亚，返国时带回阿魏、血竭、芦荟等药，上述血竭可能就是棕榈科的麒麟竭。明清以来，东南亚盛产的棕榈科黄藤属植物果实的树脂逐渐替代来源日渐枯竭的以龙血树属植物为原料的西域血竭，成为我国传统中药进口血竭的主流品种。多种药物考证文献表明，我国在1 9 世纪末大量进口南洋产的血竭。9 0 年代以前，我国商品血竭的主要来源均为进口的“苏门达腊血竭”( s u m a t l 7 ad r a g o n sb l o o d ) ，其基源为棕榈科黄藤属植物麒麟竭果实产生的树脂【3 】。虽然我国历代史籍都没细致描写产血竭的基源植物，但是几乎都记载为“木高数丈”，并将血竭描述为“木之脂液”，不为“溢果外”，这说明由棕榈科植物果实产生的麒麟竭早先并未被用为血竭的来源。从陈仁山的药物出产辨、陈存仁编著的中国药学大辞典和刘文英的药物学备考等的记载来看，我国在十九世纪末，大量进口黄藤属植物果实的树脂作血竭的原料。我国产的血竭，可追溯到5 0 0 多年前旧云南志的记载，称其“树高数丈，叶类樱桃，脂流树中，凝红如血，为木血竭”；明代兰茂著滇南本草的描述“麒麟竭，木高数丈，婆娑可爱，叶似樱桃而有三角，其脂液从木中流出，滴下如胶饴状，久而坚凝乃成竭赤作血色，故亦谓之血竭。采无时”相似，所指麒麟竭的基源或许是枫杨，也可能是产紫胶的植物。但“今俱无”。国产血竭一度失传，长期依赖进口。为改变历年来血竭依靠进口的状况，自2 0 世纪7 0 年代初就在云南和广西重点进行血竭药源的勘察，发现广西有丰富的剑叶龙血树植物( d c o c h i n c h i n e n s i s ) 资源，云南也有一定储存量，经初步研究认为百合科龙血树属植物的含脂木材有作血竭应用的前景。云南省药品标准( 1 9 7 4 ) 收载了这种血竭，植物基源为柬埔寨龙血树d r a c a e n ac a n b o d i a i l ap i e r r ee xg a g n e p l 引。中国植物志第十四卷修订柬埔寨龙血树学名，确定其基源植物为剑叶龙血树，因此云南血竭与广西血竭的植物基源是一致的【4 j 。本文中对广西血竭和云南血竭统称为2笙二至茎堕垒耋国产血竭。血竭虽然最早用于西亚和北非的阿拉伯民间，但很早就为西方所接受，并成为常用的草药。同本的资源植物事典云：“欧美所说的d r a g o n sb l o o d ，一般指红色树脂，亦即古希腊时代被欧洲称为k i n o 的深红色树脂，此为埃及产的d r a c a e n ac i n n a b a r i 树干中的分泌物”。k i n o 最早的记载是产于北非，应是数种龙血树属植物的树脂。这从又一个角度支持血竭最早的基源应是龙血树属植物。随着新大陆的开发，欧洲人在南亚、非洲和美洲也不断发现血竭的代用品，主要为来源于豆科紫檀属和大戟科巴豆属植物的树脂。以上的考证说明，血竭最早为西亚和北非阿拉伯民间药物，其基源应是来源于西亚和北非的百合科龙血树属的树脂，隋唐时代传入我国。而明清以来，我国已习惯将从东南亚进口的棕榈科黄藤属植物树脂用作血竭。在我国云南省南部亦曾有产血竭的记载，但后全无，直至二十世纪七十年代，在我国南方发现并开发成功以百合科龙血树属植物为基源的国产血竭。为了兼顾历史和传统习惯，二者均可作为传统中药的“血竭”使用。据初步统计，世界各地产血竭的基源分属4 科5 属的2 0 余种植物，详见表1 1 。表1 1 世界各地产血竭的基源分属植物植物名称n a m e科名f a m i l y产地d i s t r b u t i o n索科特拉龙血树d l a c a e n ac i n n a b a r i白 合科( l i l i a c e a e )阿拉伯半岛、南也门b a l f 龙血树d d r a c ol d 1 0 u r e i r i阿拉伯龙血树d s c h i z a i l t h a小黄藤d m i c r a c a n t h u s摩特勒黄藤d m o t l e y e i马来黄藤d 。p r o p i n q u u s红果黄藤d r u b e rm a n i u s龙血黄藤d d i d y m o p h y l l u sb e c c 含脂黄藤d d r a c o n e l l u sb e c c d m a t t a n e n s i sb c c c c a l 锄u sr o t a n gl 拟龙血巴豆c r o t o nd r a c o n o i d e sc e c h i n o c a r p u sc e r y t h m c h i l u sc g o s s y p i f o l i u s木槿叶巴豆c h i b i s c i f o l i u sc 1 e c h l e r ic s a l u t a “s流脂巴豆c s a n g u i f l u i sc u r u c u r a nc x a l a p e n s i s龙血紫檀p t e r o c a 印u sd i a c ol pm a u r s u p i u mr o x b p c r i n a c c u sp o i r e t百合科百合科百合科棕榈科( p a l m a e )棕榈科棕榈科棕榈科棕榈科棕榈科棕榈科棕榈科大戟科( e u p h o r b i a c e a e )大戟科大戟科大戟科大戟科大戟科大戟科大戟科大戟科人戟科豆科( l e g u m i n s a )豆科豆科两非、印度泰国西砸马来西亚印度尼西亚马来两哑、印度印度尼西亚马来西距印度尼西亚印度尼两亚印度、越南、斯里兰卡及美洲秘鲁、巴西阿根廷秘鲁美洲墨西哥、委内瑞拉秘鲁巴拉丰巴拉丰巴拉圭危地马拉、墨曲哥南美洲、非洲、葡萄牙印度、葡萄牙、瑞士及美洲1 洲江堕查兰堡兰篁丝奎1 1 2 血竭植物资源的研究2 0 0 5 版中国药典收载品种，为棕榈科黄藤属藤本植物麒麟竭( d a e m o n o r o p sd r a c ob 1 ) 果实中渗出的树脂。麒麟竭分布于印度尼西亚的加里曼丹和苏门答腊、印度、印尼、马来西亚等地。麒麟竭为多年常绿藤本，羽状复叶在枝梢互生；叶柄和叶轴均被稀疏小刺，小叶片互生，条形。花单性；肉穗花序；花淡黄色，花被6 ；雄蕊6 枚；雌花具6枚不育雄蕊，雌蕊密被鳞片。核果，阔卵形，果皮猩红色，密被覆瓦状鳞片，成熟时鳞片缝中流出红色树脂。我国用来代替进口血竭的药用资源，为百合科龙血树属剑叶龙血树( d r a c a e n ac o c h i n c h i n e n s i s ( l o 眦) s c c h e n ) 的含脂木质部提取的树脂。剑叶龙血树为常绿乔木状植物，分布于我国云南南部和广西南部，茎直立，具坏状叶痕，叶聚生，革质，大型圆锥花序顶生。花簇生，白黄色。浆果球形，橘红色，干后黑色。血竭形成于受损伤茎干的次生维管束及结合组织中。1 1 3 血竭化学成分研究现状1 1 3 1 来源于棕榈科黄藤属植物血竭的化学成分1 5 l出产于马来西亚和印度尼西亚的血竭的基源植物来源于棕榈科黄藤属( d a e m o n o r o p s ) 的数种植物，这些植物的果实分泌出红色的树脂，经提炼得到血竭。我国2 0 0 5 版药典收载的麒麟血竭就是来源于黄滕属麒麟竭果实的树脂。麒麟血竭的化学成分主要有酚类化合物，另外还有一些萜类成分。a 酚类成分1 9 3 6 年德国学者b r o c k m a nh 和h a s s e 从麒麟竭中分离到主要的红色成分，命名为血竭红素( d r a c o r u b i n ) 。经过近2 0 年的研究，终于确定了血竭素( d r a c o r h o d i n ) 和血竭红素的化学结构。c a r d i l l o 等从麒麟竭中分离得到6 个新化合物：( 2 s ) 一5 一m e t h o x y 一6 一m e t h y l t l a v a n 一7 一o l、( 2 s ) 一5 一m e t h o x y f l a v a n 一7 一ol、n o r d r a c o r h o d i n、n o r d r a c o m b i n、2 ，4 一d i h y d r o x y - 5 - m e t h y l - 6 - m e t h o x y c h a l c o n e和2 ，4 一d i h y d r o x y - 6 一m e t h o x y c h a i c o n e 。m e r l i n i 等从麒麟竭中得到一个双黄酮。a m o n e 和n a s i m 亦得到双黄酮d r a c o o x e p i n e 和d r a l e o n a v a l l a 。a m o n e 等在进一步的研究中还分离到6 个原花青素类化合物d r a c o n a v a nb 卜b 2 、c l 、c 2 、d l 和d 2 。b 萜类成分p i o z z i 等从麒麟竭中得到了p i m 撕ca c i d 、i s o p i m a r i ca c i d 、d e h y d r o a b i e t i ca c i d 、a b i e t i ca c i d 以及s 锄d a r a c o p i m a r i ca c i d 。n a s “等从麒麟竭中得到三萜类化合物：齐墩果醛、乌索醛、齐墩果酸、2 2 - h y d m x y h o p a n o n e 、d i p t e r o c a r p o l 和d a m m a r e n o l i ca c i d ，以及倍半萜化合物p t e r o c a 印o l 。2 0 0 5 版中国药典中用h p l c 法测定血竭素含量作为其质量控制的标准，其结构见图1 1 。1 1 3 2 国产血竭的化学成分国产血竭含有挥发油、黄酮、酚类、强心苷、多糖等成分，但没有棕榈科黄滕属来4第一苹文献硷考源血竭所含有的血竭素和血竭红素1 6 j 。广西血竭的石油醚提取物经气质联用分析，鉴定出金合欢酮、苯二羧酸二丁酯、四甲基十七烷乙基油酸酯、二十三烷、二十五烷、二十七烷、3 ，4 二甲基肉桂酸、十六烷酸、十七烷酸、1 1 ，1 4 十八二烯酸、2 一环戊烯一1 一十三烷酸1 7 】。对来源于百合科植物的广西血竭、云南血竭、索拉特拉血竭及棕榈科皇冠牌血竭进行了比较研究，发现百合科的3 种血竭的i r 、u v 、h p l c 和t l c 极为相似，而与皇冠牌血竭差别极大，而云南血竭和广西血竭的化学成分完全相同1 8 圳。1 9 9 5 年王锦亮等从剑叶龙血树提取物中分离得到2 个黄烷( 7 ，4 二羟基黄烷和7 羟基4 甲氧基黄烷) ，2 个黄酮( 7 ，4 二羟基黄酮和龙血素a ( l o u r e i r i na ) ) 。同年唐人九等从其中分得3 ，7 二羟基一4 甲氧基黄酮等成分。1 9 9 8 年卢文杰等从氯仿部分分得6 个化合物，其中5 个为黄酮类，两个新化合物剑叶龙血素a ( 4 羟基2 ，6 二甲氧基二氢查耳酮) 和剑叶龙血素b ( 6 羟基7 甲氧基3 ( 4 羟苯基) 苯并二氢吡喃) 1 9 】o2 0 0 0 年周志宏等从国产血竭中分离得到9 个查耳酮化合物【l0 1 ，分别为1 5 2 ，4 ，4 三羟基二氢查耳酮基 1 对羟基苯基一3 2 甲氧基4 羟基苯基丙烷、2 m e t h o x y s o c o t r i n 5 o l 、s o c o t r i n 4 o l 、2 甲氧基4 ，4 二羟基二氢查耳酮、2 ，4 ，4 三羟基二氢查耳酮、2 ，4 ，4 一三羟基6 甲氧基二氢查耳酮、2 ，4 ，4 三羟基查耳酮、2 甲氧基4 ，4 二羟基查耳酮、2 甲氧基一4 ，4 二氢查耳酮。其中1 【5 2 ，4 ，4 三羟基二氢查耳酮基 1 对羟基苯基3 2 一甲氧基一4 羟基苯基丙烷为一个新的二聚查耳酮，命名为剑叶血竭素( c o c h i n c h i n e n i n ) 。从广西血竭石油醚和乙酸乙酯提取部分中分离得到1 个特征性成分含氯化合物剑叶龙血素c ，推定结构为1 ，2 ，4 ，5 四氯二甲基苯【1 1 】，以及1 5 个己知化合物【1 2 以3 1 。1 9 9 5 年王锦亮从剑叶龙血树提取物中分得甾体皂苷新鲁斯可苷元1 0 伐l 鼠李吡喃糖基( 1 2 ) o 0 【l 阿拉伯吡喃糖苷。近年来，将h p l c 法测定得到的龙血素a 和龙血素b 含量作为其质量控制标准，两者结构见图】- 2 。00 c h 3d r a c o r h o d i i i图1 1 血竭素结构式c h 3h 0l o i l r e i r i l lb图l 一2 龙血素a 、龙血素b 结构式江南人学硕十学位论文1 1 4 血竭药理活性的研究现状与临床应用血竭被誉为“活血圣药”，药理实验证实血竭有着神奇的双重活性不但可以活血化瘀同时具有止血的功效【1 4 。1 6 】。此外还肯定了血竭消炎镇痛【1 7 邶】、促进皮肤修复的作用【19 1 。毒性实验中未见引起动物病理状态的改变，对红细胞、白细胞的生长和肝、肾功能方面亦未见损害【1 7 。1 8 】。如今，血竭己广泛应用于临床，对冠心病2 0 1 、上消化道出血【2 1 1 、胃炎和消化性溃疡犯2 1 、慢性结肠炎【2 3 】、大面积软组织损伤及骨折【2 4 】、痔疮【2 5 1 、皮肤严重顽固性溃疡【2 6 】、烧伤并感染2 7 1 、复发性口腔溃疡2 8 1 、皮肤瘙痒症【2 9 1 等病症均表现出显著疗效。1 1 5 血竭现行质量控制标准国产血竭的质量控制执行国家药品监督管理局国家标准w s 3 0 8 2 ( z 0 1 6 ) 9 9 ( z ) ，其具体内容见附录1 。进口血竭的质量控制标准见2 0 0 5 版中国药典( 第一部) ，其具体内容见附录2 。1 1 6 血竭质量控制研究现状a 薄层扫描法( t l c s )王玉华等【3 0 j 研究不同来源血竭中血竭素含量，测出不同来源血竭有效成分相差很大。刘迪等【3 1 】对血竭复方制剂中血竭素含量进行了测定，制剂中成分复杂，干扰因素多，使样品前处理复杂。b 薄层色谱法( t l c )孙胜利【3 2 1 等用薄层色谱法分别比较了6 种不同来源国产血竭甲醇提取液部分、石油醚提取部分和乙酸乙酯提取部分的成分差异，综合薄层色谱结果比较，6 种血竭所含成分基本一致，但也还存在微小差异。白秀美【3 3 】用此方法对愈骨胶囊质量标准进行研究，以乙醇提取样品，与血竭素标样点于同一硅胶g 薄层板上，以氯仿甲醇( 1 9 ：1 ) 为展开剂，晾干后对比斑点。薄层色谱法多用于对某物质进行定性鉴别或半定量，但不能进行准确定量。c 紫外光谱法( u v )张静泽等【3 4 1 用紫外分光光度法测定了龙血竭中二氢查耳酮的含量。以甲醇为溶剂，于2 7 9i u n 处测定吸收度，测定二氢查耳酮总含量。刘玉琴等例探讨了用二阶导数光谱测定七厘散中血竭素含量的基本方法，结果表明，在一定范围内，峰谷间极距与血竭素浓度呈良好的线性关系( r = 0 9 9 9 9 ) 。此方法只经简单提取，不用特殊分离处理，直接进行含量测定，具有简便、快速、灵敏、准确性高、重现性好的优点，但很难排除同一波长下其他组分吸收对结果造成干扰。d 高效液相色谱法( h p l c )高效液相色谱法自7 0 年代发展起来以后，以其高效、快速、灵敏等特点，在药物分析中得到普遍应用，由于其特有的分离功能，对于分析成分复杂的中药显示出得天独厚的优势。2 0 0 5 版中国药典中通过h p l c 法测定血竭素的含量达到监控血竭质量的目的。鲁静等对原装血竭和加工血竭中血竭素含量进行测定。张新勇等3 7 1 对测定血6第一章文献查考竭药材中血竭素含量的方法进行了改进。很多以血竭为君药的中成药也将血竭素含量作为其质量控制指标【3 o 】。国家药品监督管理局对国产血竭的质量控制标准是用h p l c 法测定龙血素b 的含量。孙胜利【4 l j 在对国产血竭研究中发现测定龙血素b 的含量时其峰旁有一个杂质峰，严重干扰龙血素b 的含量测定，通过对该物质的判定，得出该干扰峰为龙血素a ，且该峰大于龙血素b ，两者难于用h p l c 分开，建议修订质量标准。现有文献中多为对龙血素a 和龙血素b 含量的同时测定【4 2 小】。此外，还有文献分别对国产血竭中对羟基苯甲酸乙酯 4 5 1 、龙血素“4 6 1 和剑叶龙血素c j 含量进行了单独测定。1 2 中药指纹图谱中药作为中华民族的瑰宝，以其丰富的资源，独特的疗效，较小的不良反应而受到世人的瞩目。同时，西药的研制难度越来越大，周期越来越长，投入越来越多，迫使许多国家将目光转移至中药，这给中药走出国门带来了难得的机遇。但中药的化学成分复杂，质量难以控制，是传统中药制剂的痼疾，这也成为中药跨出国门的“瓶颈”。传统的中药质量控制与现代化学合成药品的质量控制技术有着根本区别。中药一般为复方制剂，组方配伍讲究君、臣、佐、使；讲究药物组方配伍；讲究因人而异、天人合一、辨症施治，处方有效成份极为复杂，大部分结构、作用机理尚不清楚。在现有条件下，以单一化学成份分析的观点，不适合中药( 天然药物) 这一拥有复杂成份混合物的分析。中药材生产过程复杂，受多种因素的制约，这些都为其实现质量可控提出了新的课题。而中药指纹图谱具有整体、宏观和模糊分析等特点，可以通过对中药整体特性的