（外科学专业论文）非小细胞肺癌mk、dpc4smad4的表达及其相关性的研究.pdf

u ( ： = 一；0 ： 目录 中文摘要o ooooo l 英文摘要o ooo oo 4 研究论文非小细胞肺癌m k 、d p c 4 s m a d 4 的表达及其相关性的研究 前言“”o ooooooo o ”一”o ooooo ”一”一” 翮百“”“”“ ”“”“”“”“”。 材料和方法7 结果“1 1 附图”“”“”一”一”“”一”“”“一”“一”1 3 附表1 7 讨论1 9 结论- 2 4 参考文献2 4 综述2 8 致谢 3 8 个人简历o oo o oooooooo oo0 3 9 中文摘要 非小细胞肺癌m k 、d p c 4 s m a d 4 的表达及其相关性的研究 摘要 目的：肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，其发病率和死亡率是恶性 肿瘤中连续6 0 年来唯一逐年明显上升的肿瘤。了解肺癌发生发展的分子机 制将有利于肺癌的诊治及预防。当人体的癌基因和抑癌基因平衡被打破， 从而引起细胞增殖失控，导致肿瘤发生。 许多研究表明生长因子不仅促进组织细胞的增殖，而且能诱导组织细 胞的恶性转化。中期因子( m i d k i n e ，m d k ，m k ) 是一类肝素结合性生长 因子，已有研究证实，在多种肿瘤组织中m k 高表达，包括食管癌、胃癌、 结直肠癌和胰腺癌等。m k 具有多种生物学功能，它不仅在神经发育过程 中起到营养及保护作用，还通过促有丝分裂和细胞增殖、促血管生成、诱 导细胞恶性转化、抗凋亡等功能影响肿瘤细胞的增殖、分化及凋亡。 细胞内信号转导调节着多细胞生物的生长、发育、分裂及死亡等生物 学行为，与肿瘤的发生发展密切相关，肿瘤抑制基因d p c 4 s m a d 4 编码的 蛋白是转化生长因子1 3 ( t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - 1 3 ，t g f 1 3 ) 超家族细 胞内信号转导和调节的中心分子。有研究表明，s m a d 4 的失活与表达缺失 和多种肿瘤的发展、组织细胞分级以及预后有一定的关系。 目前对于m k 和d p c 4 s m a d 4 的研究并不少见，但是对于肺癌组织中 m k 和d p c 4 s m a d 4 的表达与相关性的研究，以及二者在肺癌分期、病例 分型的关系方面的研究尚处于相对空白状态。本研究旨在通过运用免疫组 化的方法检测胍和d p c 4 s m a d 4 在肺癌及癌旁组织中的表达，探讨其在 肺癌发生、发展中的作用。进一步揭示二者在肺癌发生过程中是否存在相 关性。为基因水平的肺癌检测及治疗提供理论基础和依据。 方法：收集经手术切除且病理证实的非小细胞肺癌病例5 2 例，所有 患者术前未经过化疗及放疗，分别记录患者的性别、年龄、肿瘤大小、组 织学类型、病理分期等临床资料，采用免疫组化s p 法检测标本中m k 和 d p c 4 s m a d 4 表达。选取无坏死的癌旁组织3 0 例，作为阴性对照，所选 取的组织距病灶切除的距离5 c m 以上。阳性判断标准：每张切片选取具 有代表性的5 个高倍视野进行观察计数，每个视野计数1 0 0 个细胞，以出 中文摘要 现棕色颗粒作为阳性细胞，采用半定量积分法，分别根据染色程度和染色 细胞的百分率进行分级评分，并将评分的乘积作为判定标准，以判定其阳 性程度。根据染色程度：基本不染色为o 分，着色淡为1 分，着色适中为 2 分，着色深为3 分；着色细胞占计数细胞的百分率：5 为0 分， 5 2 5 为1 分， 2 5 , - - 5 0 为2 分， 5 0 为3 分。将每张切片的平均着色程度得 分与平均细胞着色百分率得分各自相乘为最后得分：1 分为阴性( 一) ， 2 3 分为阳性( + ) ， t 4 分为强阳性( + + ) 。应用统计学软件s p s s1 7 0 ， 通过x 2 检验及s p e a r m a n 相关性分析法分析二者与非小细胞肺癌的关系 及二者之间的关系。 结果： l5 2 例非小细胞肺癌标本中，m k 和d p c 4 s m a d 4 阳性表达率分别为 5 9 6 2 ( 3 1 5 2 ) 、6 3 4 6 ( 3 3 5 2 ) ，3 0 例癌旁正常肺组织的m k 和 d p c 4 s m a d 4 阳性表达率分别为1 6 6 7 ( 5 3 0 ) ，9 0 0 0 ( 2 7 3 0 ) ，两 组比较有显著性差异( p o 0 5 ) 。 3m k 和d p c 4 s m a d 4 阳性表达与肺癌分化程度无关系，组间差异无显 著性( p o 0 5 ) 。 4m k 和d p c 4 s m a d 4 阳性表达与肺癌临床分期、淋巴结转移情况密切 相关，有显著性差异( p 0 0 5 ) ；t h ep o s i t i v e r e l a t i o n s h i pw a sf o u n db e t w e e nd p c 4 s m a d 4e x p r e s s i o n a n dl y m p hn o d e m e t a s t a s i sa n dc l i n i c a ls t a g e ；t h ep o s i t i v er e l a t i o n s h i pw a sf o u n db e t w e e nm k e x p r e s s i o na n dl y m p hn o d em e t a s t a s i sa n dc l i n i c a ls t a g e ( p 2 5 5 0 为2 分， 5 0 为3 分。将每张切片的平均着色程度得分与平均 细胞着色百分率得分各自相乘为最后得分：1 分为阴性( 一) ，2 3 分 为阳性( + ) ， 1 4 分为强阳性( + + ) 。 4 2d p c 4 s m a d 4 阳性结果判断标准 每张切片选取具有代表性的5 个高倍视野进行观察计数，每个视野计 数1 0 0 个细胞，以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞，并采用半定量计分 法对其进行计数。 5 统计处理 统计学处理采用s p s s ( 1 7 o ) 软件对数据进行统计学处理。对正常肺组 织、肺癌组织之间m k 、d p c 4 s m a d 4 蛋白的表达及两者与临床病理参数 间的关系比较用# 检验和f i s h e r s 精确检验；对肺癌组织中m k 、 d p c 4 s m a d 4 的表达关系用双向有序r x c 表资料相关分析、# 检验，p o 0 5 ) ；d p c 4 s m a d 4 在高分化、中分 化、低分化肺癌中的阳性表达率分别为6 6 6 7 、6 5 5 2 、5 4 5 5 ，肺癌 组间比较，差异无显著性，其中高分化与中分化组间比较差异无显著性 ( x 2 = 0 0 0 5 ，p = 0 9 4 4 0 0 5 ) ，高分化与低分化组间比较差异无显著性 ( f = 0 3 5 4 ，p = 0 5 5 2 0 0 5 ) ，中分化与低分化组间比较差异无显著性 ( f = 0 4 1 0 ，p = 0 5 2 2 0 0 5 ) 。d p c 4 s m a d 4 的表达随着t n m 分期的逐步增 高有逐步降低的趋势，临床i i i 期+ 期的阳性率为3 9 1 3 ，显著低于临 床i 期+ i i 期的阳性率8 2 7 6 ，临床分期组间比较差异有显著性( f = 8 7 3 2 p = o 0 0 3 0 0 5 ) ，同时伴有淋巴结转移的肺癌组与未发生淋巴结转移 的肺癌组中比较亦有显著性( f = 5 3 0 8 ，p = 0 0 2 1 o 0 5 ) ：m k 在高分化、 中分化、低分化肺癌中的阳性表达率分别为6 6 6 7 、51 7 2 、7 2 7 2 ， 肺癌组间比较，差异无显著性，其中高分化与中分化组间比较差异无显著 性( x j ! = 0 2 8 2 ，p = 0 5 9 5 o 0 5 ) ，高分化与低分化组间比较差异无显著性 ( f = 0 1 0 0 ，p = 0 7 5 2 0 0 5 ) ，中分化与低分化组间比较差异无显著性 ( f = 1 4 4 0 ，p = 0 2 3 0 0 0 5 ) 。m k 的表达随着t n m 分期的逐步增高有逐 研究论文 步增高的趋势，临床i i i 期+ 期的阳性率为9 1 3 0 ，显著高于临床i 期 + i i 期的阳性率3 4 4 8 ，临床分期组间比较差异有显著性( f = 4 7 2 3 ，p = 0 0 3 0 0 , 0 5 ) ，同时伴有淋巴结转移的肺癌组与未发生淋巴结转移的肺癌 组中比较亦有显著性配= 5 1 1 2 ，p = 0 0 2 4 0 0 5 ) ；m k 在高分化、中分化、低分化肺癌中的阳性 表达率比较，差异无显著性( p 0 0 5 ) 。m k 的表达随着t n m 分期的逐步 增高有逐步增高的趋势，临床i i i 期+ 期的阳性率为9 1 3 0 ，显著高于 临床i 期+ i i 期的阳性率3 4 4 8 ，临床分期组间比较差异有显著性 ( f = 4 7 2 3 ，p = o 0 3 0 o ，0 5 ) ，同时伴有淋巴结转移的肺癌组与未发生淋巴结 转移的肺癌组中比较亦有显著性( # = 5 11 2 ，p = 0 0 2 4 0 0 5 ) ；d p c 4 s m a d 4 在高分化、中分化、 低分化肺癌中的阳性表达率比较，差异无显著性( p 0 0 5 ) 。d p c 4 s m a d 4 的表达随着t n m 分期的逐步增高有逐步降低的趋势，临床i i i 期+ 期的 阳性率为3 9 1 3 ，显著低于临床i 期+ i i 期的阳性率8 2 7 6 ，临床分期 组间比较差异有显著性( f = 8 7 3 2 ，p = o 0 0 3 o 0 5 ) ，同时伴有淋巴结转移的 肺癌组与未发生淋巴结转移的肺癌组中比较亦有显著性( # = 5 3 0 8 ，p = o 0 2 1 0 0 5 ) 。 在本实验所研究的5 2 例非小细胞肺癌组织中，m k 阳性表达组织中 d p c 4 s m a d 4 的表达率为58 0 6 ( 13 31 ) ，m k 阴性表达组织中 d p c 4 s m a d 4 的表达率为7 1 4 2 ( 18 2 1 ) ，两组间比较有显著性差异 ( x 2 = l3 12 7 ，p = o 0 0 0 o 0 5 ) ，经相关分析发现，两者表达呈负相关 ( f 一0 4 7 7 ，p o 0 5 ) 。 非小细胞肺癌的发生、发展等过程是多因素共同作用的结果，本实验 从癌基因和抑癌基因两个方面分别进行研究，证实了中期因子( m i d k i n e ， m d k ，m k ) 和d p c 4 s m a d 4 在n s c l c 的作用，以及二者之间的关系。虽 然目前我们仍然不能够单纯的通过单个基因或某几个基因的表达来判断 肿瘤的分期和预后，但是基于分子生物水平的基因治疗进一步被人们认识 研究论文 和研究，大量的癌基因和抑癌基因被不断发现并逐渐纳入临床应用中，为 恶性肿瘤的治疗提供了新的思路。 结论 1m k 在肿瘤发生过程中起到促进肿瘤发展的重要作用。 2d p c 4 s m a d 4 在肿瘤组织中表达明显减少或缺失时，使其对肿瘤细胞 的生长抑制作用减弱，这在一定程度上促进了肿瘤的发展和转移。 3m k 、d p c 4 s m a d 4 的表达与患者的性别、年龄及肿瘤的大小、病理类 型、分化程度无关。 4m k 、d p c 4 s m a d 4 的表达与肺癌临床分期和淋巴结转移有关。 参考文献 1 q im ，i k e m a t s us ，s a k u m as ，e ta 1 m i d k i n er e s c u e sw i l m st u m o r c e l l s f r o m e i s p l a t i n i n d u c e da p o p t o s i s ：r e g u l a t i o n o fb c l 2 e x p r e s s i o nb y m i d k i n e jb i o c h e m 2 0 0 0 ，l2 7 ：2 6 9 - 2 7 7 2o w a d ak ，s a n j on ，k o b a y a s h it ，e ta 1 m i d k i n ei n h i b i t sc a s p a s e d e p e n d e n t a p o p t o s i s v i a t h ea c t i v a t i o no fm i t o g e n a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s ea n d p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l3 - k i n a s ei nc u l t u r e dn e u r o n s jn e u r o c h e m 19 9 9 ，7 3 ： 2 0 8 4 2 0 9 2 3k a d o m a t s uk ，h a g i h a r am ，a k h t c rs ，e ta l ：m i d k i n ei n d u c e st h e t r a n s f o r m a t i o no f n i h 3 t 3c e l l s b rjc a n c e r 19 9 7 ，7 5 ：3 5 4 3 5 9 4r a t o v i t s k iea ，k o t z b a u e rpt ，m i l b r a n d tj ，e ta 1 m i d k i n ei n d u c e st u m o r c e l lp r o l i f e r a t i o na n db i n d st oah i g ha f f i n i t ys i g n a l i n gr e c e p t o ra s s o c i a t e d w i t hj a k t y r o s i n ek i n a s e s jb i o lc h e m 19 9 8 ，2 7 3 ：3 6 5 4 3 6 6 0 5w a i c h is ，k e n j ik , y u k i oy ，e ta 1 m i d k i n ei si n v o l v e di nn e t r o p h i li n f i l t r a t i o ni n t ot h et u b u l o i n t e r s t i t i u mi ni s c h e m i cr e n a li n j u r y j 】ji m m u ， 2 0 0 1 ，16 7 ( 6 ) ：3 4 6 3 - 3 4 6 9 6j e r s h e n w a l dj e ，f i d l e r i j t a r g e t i n gl y m p h a t i c m et a s t a s i s 研究论文 【j 】s c i e n c e ，2 0 0 2 ，2 9 6 ( 5 5 7 4 ) ：18 1 1 7 苏文忠肺癌相关肿瘤标志物的研究进展肿瘤研究与临床2 0 0 6 ， 1 8 ，( 6 ) ：4 2 8 - 4 2 9 8o h a m ah ，m a l s u b a r as ，g u e n e tj ，e ta 1 t h em i d k i n ef a m i l yo fg r o w t h d i f f e r e n t i a n t i o nf a c t o r s ；s t r u c t u r eo fam i d k i n e - r e l a t i o n s h i pa m o n g m e m b e ro f t h em i d k i n ef a m i l y j 】jb i o c h e m ，1 9 9 4 ，11 5 ( 3 ) ：5 1 6 5 2 2 9t o m o m u rm ，m u r a m a t a s ut e d n ac l o n i n ga n ds e q u e n c i n go fan e w g e n ei n t e n s e l ye x p r e s s e d i n c a r l yd i f f e r e n t i a t i o ns t a g e so f e m b r y o n a l c a r c i n o m ac e l l sa n di nm i d g e s t a t i o np e r i o do fm o u s e e m b r y o g e n e s i s 【j 】 b i o c h e mb i o p h y sr e sc o m m u n ，1 9 9 8 ，1 5 1 ( 3 ) ：1 3 1 2 1 3 1 8 1o0 b r i e nt ，c r a n s t o nd t h ea n g i o g e n i cf a c t o rm i d k i n ei se x p r e s s e di n b l a d d e ra n do v e r e x p r e s s i o nc o r r e l a t e sw i t hap o o ro u t c o m ei np a t i e n t sw i t h i n v a s i v ec a n c e r s c a n c e rr e s 19 9 6 ，5 6 ：2 515 - 2 518 l lr e ny j ，z h a n gqy e x p r e s s i o no fm i d k i n ea n di t sc l i n i c a ls i g n i f i c a n c ei n e s o p h a g e a ls q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a w o r l djg a s t r o e n t e r 0 1 2 0 0 6 1 2 ： 2 0 0 6 2 0 l o 12k o n i s h in ，n a k a m u r am i m m u n o h i s t o c h e m i c a la n a l y s i so fm i d k i n e e x p r e s s i o ni nh u m a np r o s t a t ec a r c i n o m a o n c o l o g y 19 9 9 ，5 7 ：2 5 3 2 5 7 13t a op ，x ud ，l i ns ，e ta 1 a b n o r m a le x p r e s s i o n ，h i g h l ye f f i c i e n t d e t e c t i o na n dn o v e lt r u n c a t i o n so fm i d k i n ei nh u m a nt u m o r s ，c a n c e r sa n d c e l ll i n e s c a n c e rl e t t 2 0 0 7 2 5 3 ：6 0 6 7 14i k e m a t s us ，y a n oa ，a r i d o m ek ，e ta 1 s e r u mm i d k i n el e v e l sa r ei n c r e a s e d i np a t i e n t sw i t hv a r i o u st y p e so fc a r c i n o m a s b rjc a n c e r 2 0 0 0 ，8 3 ： 7 0 1 7 0 6 15s o u l i ep ，h e r o u l tm ，c a r u e l l ed ，e ta 1 c o r r e l a t i o no fe l e v a t e dp la s m a l e v e l so ft w os t r u c t u r a l l yr e l a t e dg r o w t hf a c t o r s ，h e p a r i na f f i nr e g u l a t o r y p e p t i d ea n dm i d k i n e ，i na d v a n c e ds o l i dt u m o rp a t i e n t s c a n c e rd e t e c t p r e v 2 0 0 4 ，2 8 ：319 3 2 4 16m u r a m a k im ，m i y a k eh ，h a mi ，e ta 1 i n t r o d u c t i o no fm i d k i n ei n t oh u m a n b l a d d e rc a n c e rc e l l se n h a n c e st h e i r m a l i g n a n tp h e n o t y p e b u t i n c r e a s e st h e i r s e n s i t i v i t y t oa n t i a n g i o g e m c t h e r a p y c l i nc a n c e r r e s 研究论文 2 0 0 3 ，9 ：5 1 5 2 - 5 1 6 0 17k a d o m a t s uk ，h a g i h a r am ，a k h t e rs ，e ta l ：m i d k i n ei n d u c e s t h e t r a n s f o r m m i o no f n i h 3 t 3c e l l s b rjc a n c e r 1 9 9 7 ，7 5 ：3 5 4 - 3 5 9 1 8 吴晓冬，杨绍娟肝素结合生长因子m i d k i n e 在早期大肠肿瘤的表达 中国肿瘤临床2 0 0 6 ，3 3 ：4 11 - 4 1 3 1 9 李春义m a d 蛋白与t g f 1 3 信号转导国外医学生理、病理科学与临 床分册，2 0 0 1 ，2 1 ( 2 ) ：8 9 9 0 2 0 朱帮福s m a d s 分子及其介导的t g f 1 3 超家族信号转导国外医学分子 生物学分册，1 9 9 9 ，2 1 ( 3 ) ：1 5 2 1 5 3 21 s k e l s k yj j ，n e w f e l ds j ，r a f l e r yl a ，e ta 1 g e n e t i cc h a r a c t e r i z a t i o na n d c l o n i n g o f m o t h e r sa g a i n s td p p ，ag e n er e q u i r e df o rd e c a p e n t a p l g i cf u n c t i o n i nd r o s o p h i l am e l a n o g a s t e r g e n e t i c s ，19 9 5 ，13 9 ( 3 ) ：13 4 7 - 13 5 8 2 2s a v a g ec ，d a sp ，f i n e l l ia l ，e ta 1 c a e n o r h a b d i t i se l e g a n sg e n e ss m a - 2 ， s m a 一3 ，a n ds m a - 4d e f i n eac o n s e r v e df a m i l yo ft r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r b e t ap a t h w a yc o m p o n e n t s p r o cn a t la c a ds c iu s a ，19 9 6 ，9 3 ( 2 ) ：7 9 0 - 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