小肠耶尔森氏菌及其检测方法.doc

小肠耶尔森氏菌及其检测方法一、 小肠耶尔森氏菌小肠结肠炎耶尔森氏菌，简称小肠耶尔森氏菌，学名Yersinia enterocolitica，是革兰氏阴性杆菌或球杆菌，大小为1-3.50.5-1.3m，多单个散在，有时排列成短链或成堆。该菌是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一，在4条件下能保存和繁殖。 小肠耶尔森氏菌在自然界分布很广： （1） 作为重要的食源性致病菌，该菌在生的蔬菜、乳和乳制品、肉类、豆制品、沙拉、牡蛎、蛤和虾等食物中也分布很广，很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目。（2） 该菌也存在于环境中，如湖泊、河流、土壤和植被。（3） 该菌天然寄居在多种动物体内，如鼠、狗、猫、山羊、家畜等，在港湾周围，许多鸟类包括水禽和海鸥可能是带菌者。小肠耶尔森氏菌通过污染食物（牛奶、猪肉等）和水，经粪口途径感染或因接触染疫动物而感染，易染人群为婴幼儿。典型症状常为发热、腹痛、腹泻和呕吐。有的引起反应性关节炎，还有少数患者可表现为脑膜炎、肺炎、败血症即血液系统感染，尽管少见，但死亡率较高。二、 小肠耶尔森氏菌检测方法1. 细菌培养法本菌生长温度为30-37，但在22-29才能使本菌的某些特性出现。4时能保存和繁殖。本菌世代时间长，最短亦需40分钟左右。在SS或麦康凯琼脂上于25经24小时培养，菌落细小，至48小时直径才增大成0.5-3.0mm。菌落圆整、光滑、湿润、扁平或稍隆起，透明或半透明；在麦康凯琼脂上菌落淡黄色，如若微带红色，则菌落中心的红色常稍深。本菌在肉汤中生长呈均匀混浊，一般不形成菌膜。2. 生化鉴定法从营养琼脂平板上挑取单个菌落做生化实验，所有的反应皆在261培养。主要生化特性如下： 动力（26）阳性； 素酶阳性； VP试验（26）阳性； 鸟氨酸脱羧酶阳性； 蔗糖有不同生化型； 棉子糖阴性； 山梨醇阳性； 甘露醇阳性； 鼠李糖阴性。3. 血清凝集法小肠结肠炎耶尔森氏菌的抗原结构较为复杂，现已知有84个O抗原因子和19个抗原因子，在同一血清型的菌株中，可含两种或更多的O抗原。小肠耶尔森氏菌在我国分布很广，菌群复杂，目前主要占优势的血清型为O：3，O：5，O：8和O：9型。某些O抗原同其他细菌有共同性，如O：9与布氏菌有交叉反应，O：12血清与沙门氏菌有交叉反应等，在流行病学调查中，血清学诊断起着较为重要的作用。关于血清凝集法用的诊断血清方面，推荐天津生物芯片公司生产的小肠耶尔森氏菌全套诊断血清产品，该菌最常见的O：3，O：5，O：8和O：9型的诊断血清 被纳入这套产品. 4. 分子生物学检测方法常规PCR检测法许文炯等利用小肠结肠炎耶尔森菌的ail基因以及毒力质粒上的virF基因应用PCR技术区分出致病菌与非致病菌。马宏伟等根据小肠结肠炎耶尔森菌的ail基因和伤寒沙门菌的Hl-d基因顺序设计2对引物，通过聚合酶链反应检测食品中的小肠结肠炎耶尔森菌和伤寒沙门菌，扩增出170和458 bp条带，适用于食品中小肠结肠炎耶尔森菌和伤寒沙门菌的快速检验。实时定量PCR检测法郑浩轩等应用针对致病性小肠结肠炎耶尔森菌染色体上yst基因而设计的特异引物和探针进行实时定量PCR，检测致病性(7种血清型)和非致病性(5种)小肠结肠炎耶尔森菌、耶尔森菌属内的其他菌