（无机化学专业论文）金属硫蛋白的供锌动力学研究及谷胱甘肽的影响和作用.pdf

摘要 金属硫蛋白( m t ) 是一种重要的金属结合蛋白，它在生物体内锌离子的摄取、分 布、存储及释放过程中起到了重要的调控作用。本论文以c d c i ，诱导大鼠肝脏中产生 9 4 j 圣1 2 ：丛! ! 从鼠肝中分离提取m t ，并考察了它的光谱学性质。发现金属硫簇中的金 属离子可以不断地与溶液中的外加金属离子发生交换，而调节蛋白溶液的p h ( uozuz：luouuuq竹xuz和uzuozuuzo昌ooo和山umubmoz ouuzo uuuzoozuuoduxuo山uuuuxzu咀山u蕾u受笛uouun口a自uuzozuuuzoozuuod：u羞uo山uuouzzu叽uzuquzuouun廿自ouz口= u uuzj，oxuuoauuo山uuuux描u叽山uu受uxu时。正昌uou和山uuzm9uuuxo譬oxuuoduzuouu竹uuzzu叽uuo)gxuouhuo)uuz山o=juuzooxuuoduuo瞄山uuuuzgum8uguxuouuoo自uuzozquuuzo-ozu)uoau爱uoouuuu譬zu印u匹u柚gu戈u计ouhuoo和山uuz山口z qouuzo；oxuuoduuoomuuuuxguho蕾u望oxouu即uoo自uuzozou=uxoozuhuoouz巧o山uu计uuzu日zu冒uzu册ou目uoouuzo=uu=uz叫oxuuoa：uu山uuuu研zxu自uzu璺uxu2u日uuhuuz山o d u u册uz签歪叫oozuuozuxu“uu协uuxxubxuouzu盆uuoo山u山u墨山口=tuuuxo-oxuhuoau60“uu帕uugu目u碡u皿uxuo昌uoo墨uu=口zuuuzoh要uhuod：uzuouu研uuzu日h0茹u霹uzu譬uu，山uuzm星uouz；ozuhuuau墨uo山uu坊uu竹ku日uzum豆uzu譬昌uulu忻uz山9uuuzozuhuoau瑶uo山uu协uuzgubxu冒uxuuuhuo墨uuz山口zuuuzoxuhuodu羞uod山uo讥uu时xu日uzum足u篙uo昌uu至uuz山qz uuuzq a u u!iuzouuzu田 uuuz越uuuz兽 ：廿kuhuoooxuuodo墨uuqao碣uuoa o越uhuod u巧o山uu吼uu珥zob碣u怕2uzu翌uhud砷uz山全uzuouuuuzzum臼u)lu盟uxuou日uo叠u册uz“9u巧o山uu岫uuxxuhuzu呵0zuoguoo日uuzooxuo山uu讥uuuxzu即uzu曲卫uxuouujoguz9 u磁59uumuu昕u，zuzu山鼋uzu昌uhuoo钾巧uz山9 o n 叩7 叩旱7 甲 望宝宝宝宝呈宝宝 = = = 景暑导：2 = ；雩导暑导0 景= 譬：= 昌暑= 篇嚣2g 譬 4 q一8ds ngpq的口百iio菩。焉苗s gj0q譬qgpi譬。皇llr 一s i zu!；uowauzu；_ohu日uouu_lo田uo己，葛uo呻uouo5苦噶凸臼u8uxq幻uqn臼uho；h岫hu石山o山， 誓u听uo：iuzuzh山。臼u口uouu臼ou面u；xuo竹uou廿u墨uoouduoz口田u08uho舀huzu山o山，墨。们uooz旦一a9“uououu，ouzu；坷u口uouo曲uzuoou茁uu瑶ooo器uho，蚕一一uzu山o山 01u口uzo=_ouou廿uxupouzuzuou口uu计oxuoouuu*ouogu_o蚕huzum口山 zoojwuz2一ou凸uuuzu印ouzu；zuououou蟹uouu叵uuzo田uo骞uho置huzu山臼公uuouzu日山oouo曲uuouzuzuougu盆。啡uzuoou匮uo叫ouo宕uho己宣阻一uzu山m。uu廿蛊甚uhmohu口盘uu坤o：uxu宝zu口uzu凸o吣uuooououuo臼ouhozhuzu山zo卅oouxo_山uq)fu叫u砷臼u磁u宝zoq协uxu8吣u荸蓉ou篮uo啦uu臼即ou-o看huzu山xuuo蛊uxuo山ohuozouwuo研uzu、5zuouxuooozuoou甚uoouohouhozhhuzu zzomououguohuzouzuoouuvsguouguooouzuu“ouzuoamuouo旨huzumoz xu|、u宴u目*u旦uuo“0zu“ueun留鞋uo竹碡uoo目o蚌j金u，uo4uuu皇uh譬瞄uo盟=uxu廿册册uau山山uuhuxu箸罐uuo篁uaoxozuu自o“uuu5oh篙u盟=：u越uouz埘u山u瞄uhoauo盟uuo目6o：xozuuo山 au o3u=；uzuhuouzuouuu。uzzu日自uau旨uzu日ouzo昌zuuo=口ounouzozuuouxuo山uuu。ugu臼hoau旨uzu日ouzu目譬xmuu山口= duu-30 jjzouuouguo山uu山uu叮x譬uhou=uguouuzo蓦啦uuo=ouuouhz譬uuouzuo山uuouu受zu8茸u=uzuo廿uzu昌誓muu：山9二auu钾oo莹oxuuouz山uo山uu山uukzu臼huu，guhuoouzoo兽xuu：山o=ouu。hhou针珥；qxuu口计望“u口砷山uujuu呻gzu印留曲u委uhu口廿u=uh口p*muua皇_石uuzmt盟uuo瑶u=工uot山uuuu珥茁u蓝u茁u葶6zu臼uuou叠u8aom口z=ju譬翥da)|uuozuzu山uuu，uz蓝uau瞄u蓦6譬uouo册ou叠u目uad“o=一5q吧u吾乇uzuuoqu善uoauuq。o鼍xo和uzu；￥u蟹uzoou盆uo乏u山u凸do= fiouuzm移0uox舌uzzuo山uu叮uu矾域子露邑弓r。xu册q吒uo自菩邑是)d9 o鼍tozo鼍；q墨uhuoau薯uo山uuqu竹鼍zo8域u譬uzuo山uonoo8册u鼍山9二g一望。盈臣譬8已田u薯譬d38鼍x苦8苦g譬u富。uzo凸是器竺山金ou”o墨qk譬uuquzuu山uuqq吧鼍gubxu羞uouuooooamu叮u鼍山璺5u吧基。叠；曼譬8a田u薯g乏g昌q崎舀臼b吾璺譬端2器u3凸器8鼍自星子鼍鼍。羞盘；譬譬吕q譬u竽ti岂s。吧呼孑e百盆8品笛呈o五s曷呈山呈 3 0 o _ ； o 口 。一 o n o h 皿1170n阻兽u ：hhon罢u h h o n 日u口h。on自guqhon目uho【“日puhhho_【山日uhho_【黾u ho一乱日可u h z = h zh ，h z日z zh z p j 0 自 z u日一山臼z口町cj0一山 h u j 凸c 0 o mc u h c uc一上ao凸 面的功能有关【8 】。 ( 二) 非哺乳动物组织中的金属硫蛋白 最近几年，对m t 种类的了解进展很迅速，对于非哺乳类m t s 的结构和功能的认 识也有所提高。利用重金属对这一类m t s 进行诱导及随后细胞内的金属累积，已作为 生物标记被应用于环境毒理学领域。对各个种类m t s 的新的氨基酸序列的报道不断增 加。到目前为止，发现的m t s 序列数目接近于2 0 0 。 最有意思的是新在蜗牛h e l i xp o m a t i a 中发现的m t 。陆地上的蜗牛可以忍受异常高 浓度的c d “，而且它可以积累相对较高含量的c u + 以备氧载体血蓝蛋白的生理合成。 蜗牛体内的c d 2 + 主要积累在中央管腺，c u + 则绝大部分位于足部和外套( m a n t e l ) 中。 有意思的是伴随着金属在特定组织中的累积，在各组织中也产生特定的m t 形式，它们 都含有1 8 个保守的c y s 残基，而其他的氨基酸则不同。除去他们在各自一级结构上的 相似性，中央管腺m t 结合c d ”，外套m t 结合c u + 。这预示着与特定的金属结合的m t 可能会在镉离子的解毒和c u 的分布中发挥作用m 】。 ( 三) 金属硫蛋白的结构 对于金属硫蛋白生理功能的理解很多都来自于对它们的结构和化学性质的研究。从 哺乳动物到甲壳类m i s ，对它们三维结构的研究表明，单体蛋白( m o n o m e r i cp r o t e i n ) 由两个球状结构域( d o m a i n ) 组成，每个结构域中有一个金属硫簇( c l u s t e r ) 。在进化 关系上较远的海胆m t a ，由6 4 个氨基酸残基构成，它与哺乳动物m t s 拥有同样数目 的c y s c y s ，c y s x x x - c y s 单元( x x x 代表除c y s 之外的任何氨基酸) 及同样数目的金属 离子。但它们在序列上没有明显的同源关系。c d ，m t a 的三级结构也是由两个结构域 组成，每个结构域中有一个金属硫簇( n 端为c d 4 c y s 。簇，c 端为c d 3 c y s 。簇) 1 。尽 管它的结构与已知的哺乳动物和甲壳类m t s 的结构很相似，但在c y s 和金属的配位以 及肽链骨架的局部折叠方面存在很大差异。而且虽然海胆m t a 的金属簇在拓朴学上与 哺乳动物m r s 很相似。但它们在肷链上的定位却发生了翻转，这是由它们不同的基因 编制所决定的】。进化关系较远的m r s ，它们在金属硫簇上的相似性预示了这种结构在 m t s 功能方面的意义。 m t s 功能方面的意义。 本实验中所研究的大鼠肝脏c d ，z n 2 m t 一2 ，整个肽链由6 1 个氨基酸残基构成，其 中有2 0 个为c y s ，全部与金属离子相结合。f i g 2 为鼠肝c d z n 2 - m t 2 的三级结构图。 f i g2 s t e r ov i e wo f r a tl i v e rc c t , z n 2 一m t 一2 在鼠肝c d z n 2 - m t 中，n 端肽链的1 - 3 0 位氨基酸残基构成b 结构域，其中含有9 个c y s ， 结合了3 个二价会属离子，形成类似于环己烷结构的金属硫簇m ，c y s 9 ；c 端肽链的3 1 6 l 位氨基酸残基构成a 结构域，含有1 1 个c y s ，结合4 个二价金属离子，形成类似于 二环壬烷( 少一个桥) 结构的金属硫簇m 4 c y s ， 1 2 o0 【，3 - 结构域是由多肽链各自部分 的两个大的螺旋转折构成的。c 端a 一结构域的链折叠是逆时针向左旋转的，n 端b 域 的链折叠则是顺时针向右转的o ”。哺乳动物m t 的分子构造相当保守，这是由于其肽链 中c y s 的保守排列所决定的。不同种类m t 分子的氨基酸序列会有所不同，但结构域之 有接触，位于连接片段中的l y s 3 1 与肽链上第1 9 位c y s 和2 1 位c y s 氨基酸主链上的羰 基相互作用”1 。在m t 的每个结构域上都有一个暴露的隙缝( c l e f t ) ，上面含有3 个c y s 残基。鼠肝c d 5 z n 2 m t - 2 中的2 个z n 位于 3 - d o m a i n ，与1 个c d 构成c d z n 2 c y s 9 簇， 另外4 个c d 位于强- d o m a i n ，形成c d 4 c y s 。簇。金属硫簇中每个金属离子都与四个c y s 的硫原子形成四面体配位，同时部分巯基被相邻的金属离子所共享( 桥连) ，见f i g3 。 f i g3 s t e r ov i e w s o f t h em e t a l - t h i o l a t ec l u s t e r si nr a tl i v ec d 5 z n 2 州t _ 2 哺乳动物的m t - 1 和m t - 2 ，在序列上具有很高的相似性( 8 5 ) 。m t s 存在着多 种亚型，这暗示着它们在功能方面的差异，所以检测和比较m t 各亚型之间的结构和金 属结合能力的差别是很有必要的。对小鼠c d ，m t - i 溶液中的三维结构研究f l5 1 发现，它 的结构与大鼠肝脏的m ”7 - m t - 2 的结构i ”1 非常相似，也含有两个独立的结构域，每个结 构域中含有一个金属硫簇。与m t - 2 的d 结构域相比，小鼠m t - i 的p 一结构域具有更 高的柔曲性( f l e x i b i l i t y ) 。 一些含z n 或c d 的哺乳动物m t ，它们的结构是很相似的，但对c u - m t ，无论是 人工合成的还是天然存在的，这种结构上的相似性却不存在。唯一的例外是酵母c u ，m t 的结构模型，n m r 研究发现它拥有一个简单的c u r ( c y s 。) 簇叫1 。但由于没有合适的c u 的同位素，无法直接获得c u ( i ) 中心组成的有关信息。 ( 四) 金属硫蛋白的功能 尽管对金属硫蛋白的研究已历经4 0 余年，但对其生物学功能却始终没有明确的答 案。m t s 在生物界的普遍存在及其结构在进化中的保守性，在发育和再生过程中的程序 合成都有力地说明它在某些基本细胞生物学过程中具有不可替代的功能。而它对许多有 害因素的强烈应答，提示该蛋白涉及到许多应激过程甚至病理过程，并在这些过程中起 着非特异的保护作用【l ”。它所可能涉及到的生理过程包括： 1 参与微量金属元素的储存，运输和代谢； 2 重金属解毒作用； 3 抗辐射，清除自由基： 4 参与激素和发育过程的调节，增强机体对各种应激的反应； 5 参与细胞d n a 的复制和转录，蛋白质的合成与分解，能量代谢等的调节过程 将目标基因破坏或扩增后产生的转基因小鼠，对研究特定蛋白的生物功能非常有价 值m 】。在研究小鼠m t - 1 和m t - 2 的功能时，采用了抑制它们的基因和过量表达m t - 1 的方法。m t - 1 的过量表达对小鼠的表型( p h e n o t y p e ) 没有产生明显的影响，但它对心 脏和大脑的局部缺血再灌注损伤( i s c h e m i a r e p e r f u s i o ni n j u r y ) 具有特别的防护能力， 这可能是通过防止游离z n 和或自由基的毒性造成的。m t 不存在的小鼠，表型正常， 对它们的再生和繁殖能力都没有不利的影响 2 0 - 2 3 1 。最近发现这些小鼠表现出了适度的肥 胖【2 4 】。这个结果和在热产生的棕色脂肪组织中适度冷诱导m t - 1 的表达】，都表明m t 可能参与了调控能量的平衡。 为了进一步了解这些蛋白的功能性质，将不含有m t 的小鼠暴露于c d 和z n 等重 金属以及氧化压力之下。这些小鼠对c d 和氧化毒性都更为敏感，对z n 的摄入能力下 降，表明这些动物体内的锌离子平衡被扰乱f 2 6 2 ”。 ( 五) 金属硫蛋白对体内锌离子平衡的影响 利用转基因老鼠对m t - 1 和m t - 2 在体内锌离子平衡中的影响进行研究，其结果已 经被细胞培养实验所证实哪2 9 】。一些细胞可以产生高水平的m tm r n a ，但只有在培 养基质中含有高浓度的锌时才会出现m t 蛋白。当m t 饱和时，培养基质中检测不到锌。 另一方面在细胞内完全丧失锌的条件下培养的成纤维细胞( f l b r o b l a s t ) 中，含有高水平 的m tm r n a ，却没有蛋白。这些结果表明一方面在含有高水平z n 的情况下，通过产 生z n ，一m t 来防止细胞受过量锌的损害，另一方面可以通过形成暂时性的a p o m t 来产 生摄入z n 的驱动力o 。这些都证实m t s 参与调控z n 的流向和它的生物合成能力。 被普遍接受但又存在争论的z n ，m t 的一个功能是向特定的存储位点或蛋白供锌。 一系列的体外实验表明z n m t 及a p o m t 可以通过将锌转移或夺取来影响含锌蛋白的 活性f 3 1 】，并可以参与调节与锌指转录因子( z i n c f i n g e rt r a n s c r i p t i o nf a c t o r ) 的d n a 结合 能力m 1 。z n ，- m t 还可以通过z n c d 交换来恢复被c d 取代的锌指转录因子的d n a 结合 能力1 3 ”。这个作用显示出m t 对于c d 2 + 的强大的亲和力及其金属结合位点的动力学活 性。这些结果预示着哺乳动物m t - 1 和m t - 2 可以作为合成金属蛋白的分子伴侣 ( c h a p e r o n e ) 。n i t s 可以作为锌的储存库来防止金属毒性，也可以向新合成的脱金属蛋 白( a p o m e t a l l o p r o t e i n s ) 转移锌。这个概念被一些体外实验所证实，由z n 7 一m t 介导的 与其它锌蛋白分子间的z n 交换要比用游离锌快好几个数量级【3 2 l 。尽管z n ，m t 中对z n 的表观结合常数( k 。) 为l o ”m - 1 ，它仍然可以向其它结合能力更低的脱锌蛋白转移z n ， 如碱性磷酸酯酶( a l k a l i n ep h o s p h a t a s e ) 或羧肽酶( c a r b o x y p e t i d a s e ) ( i ( a p p 1 0 8m 。) 。这 时z n ，m t 的7 个z n 2 + 中只有一个被转移，暗示着存在有一个金属离子结合较弱i 。 ( 六) 神经细胞生长抑制因子 在体外检测正常和患老年痴呆症( a l z h e i m e r sd i s e a s e a d ) 的脑组织提取物中培养 的大鼠皮层神经元的残存细胞时，首次发现了神经细胞生长抑制因子( g r o w t hi n h i b i t o r y f a c t o r , g i f ) 。奇怪的是老年痴呆症患者的脑组织提取物中的神经元的残存细胞明显多 于正常人，这表明缺乏一种抑制物质。由此从正常人的脑组织中分离出了g i f ，并且发 现它属于m t 家族，也被称为m t - 3 t ”】。老年痴呆症患者的脑组织中g i f 含量普遍低下。 从人脑中分离出的g i f 有6 8 个氨基酸残基构成，与m t - 1 和m t - 2 有7 0 的序列相同， 有2 0 个c y s ，含有c u + 和z n ”。g i f 是非诱导性的蛋白，主要位于脑组织当中。在神 经元中检测到的是g i f ，而不是m t - 1 和m t - 2 ，表明了该蛋白独立的功能。体内实验证 实在小鼠的大部分器官中过量表达g i f 会导致小鼠死于胰腺萎缩，过量表达同量的m t _ 1 却不会产生这种结果1 3 6 1 。尽管对g i f 毒性的原因并不清楚，这些结果已经为m t 的不 同亚型具有不同的功能提供了生理证据。老年痴呆症患者的脑组织中缺乏g i f 与该疾 1 0 病的发病机理有关。 比较哺乳动物m t s 的氨基酸序列，发现g f 中有多插入的两个片段，在c 端肽链 5 5 6 0 位中插入了一个酸性的六肽( g l u 。a l a a l a - g l u a l a g l u ) ，n 端肽链第5 位插入一 个苏氨酸( t h r e o n i n e ，t h r ) 。将保守的c y s ( 6 ) 一p r o c y s p r o ( 9 ) 片段中的两个脯氨酸( p r o l i n e ， p r o ) 突变为人类m t - 2 中相应的丙氨酸( a l a n i n e ，a l a ) 和丝氨酸( s e r i n e 、s e r ) 后，就 彻底破坏了g i f 的生物活性。这些都说明位于b 结构域中的这两个特定的p r o ，是维 持g i f 生物功能所必需的口”。 对c u 4 z n ，一g i f 和z n r g i f 的结构研究表明它同m t - i 和m t - 2 一样，存在着两个结 构域，每个结构域中含有一个金属硫簇 3 8 , 3 9 】。g i f 的一级结构与哺乳动物m t s 相比较， 其结构的柔曲性显著增加，使它有利于行使特定的生物功能【4 。j 。 对于金属硫蛋白的性质和功能的研究一直为人们所关注，本实验室也对此长期进行 了研究。同一物种中的金属硫蛋白为何会有不同的亚型，它们在金属硫蛋白行使生物功 能时会有何差异? 金属硫蛋白中双结构域的组成形式又会对它产生怎样的影响? 细胞内 的组成成份是否会影响到金属硫蛋白的功能? 这些问题都是我们所特别关注的。本论文 以由c d c l ，诱导，并从大鼠肝脏中分离纯化得到的金属硫蛋白为主要研究对象，研究了 它与碳酸酐酶( c a r b o n i c a n h y d r a s e ，c a ) 之间的锌转移反应，着重考察了两种不同的亚 型m t - i 和m t - 2 及其a 结构域片段在供锌能力上的差别，并模拟体内环境，引入谷胱 甘肽( g s g s s g ) 这生物体内广泛存在的小分子配体，考察了谷胱甘肽对金属硫蛋 白的供锌能力的影响及相关作用并探讨了可能的机制。 一旦 2 1 【3 4 5 6 7 】 8 9 1 0 1 2 】 13j 参考文献 b e r g ，j - m ；s h i ，yt h eg a l v a n i z a t i o no fb i o l o g y ：ag r o w i n g a p p r e c i a t i o nf o r t h er o l e so f z i n c s c i e n c e ( 1 9 9 6 ) 2 7 1 ，1 0 8 1 v a l l e e ，b l ；f a l c h u k ，k ht h eb i o c h e m i c a lb a s i so fz i n c p h y s i o l o g y p h y s i 0 1 尺p v ( 19 9 3 ) 7 3 ，7 9 k o j i m a ，y d e f i n i t i o n sa n dn o m e n c l a t u r eo f m e t a i l o t h i o n e i n s m e t h e n z y m o l ( 1 9 9 1 ) 2 0 5 8 b i n z ，p a ；k a g i ，j h rc l a s s i f i c a t i o n o fm e t a l i o t h i o n e i n s h t t p ：w w wu n i z he h m m a g e c l a s s i f i r o n ( 2 0 0 0 1 0 - 7 ) w e s t ，a k ；s t a l l i n g s ，r ；h i l d e b r a n d ，c e ；c h i u ，r ；k a r i n ，m ；r i c h a r d s ，r i g e n o m i c s ( 1 9 9 0 ) 墨5 1 3 s u z u k i ，k t ；l m u r a ，n ；k i m u r a ，m ( e d s ) m e t a l l o t h i o n e i n1 1 1 ( 1 9 9 3 ) 2 9 5 5 b i r k h l 【u s e rv e r l a gb a s e l s w i t z e r l a n d q u a i f e ，c j ；f i n d l e y , s d ；e r i c k s o n ，j c ；f r o e l i c k ，g j ；k e l l y ，e j ； z a m b r o w i c z ，bp ；p a l m i t e r , r d i n d u c t i o no fan e wm e t a l i o t h i o n e i n i s o f o r m ( m t i v ) o c c u r sd u r i n g d i f f e r e n t i a t i o no fs t r a t i f i e d s q u a m o u s e p i t h e l i a b i o c h e m i s t r y ( 19 9 4 ) 3 3 ，7 2 5 0 m o f f a t t ，p ；d e n i z e a u ， f m e t a l l o t h i o n e i ni n p h y s i o l o g i c a l a n d p h y s i o p a t h o l o g i c a lp r o c e s s e s d r u gm e t a b 如v ( 1 9 9 7 ) 2 9 ，2 6 1 r a u s e r , we p h y t o c h e l a t i n sa n dr e l a t e dp e p t i d e s s t r u c t u r e ，b i o s y n t h e s i s ， a n d f u n c t i o n p l a n t p h y s i 0 1 ( 1 9 9 5 ) 1 0 9 , 1 1 4 1 d a l l i n g e r , r ；b e r g e r , b ；h u n z i k e r ；p ；k a g i ，j lm e t a l l o t h i o n e i n ：m o l e c u l a r e v o l u t i o na n dc l a s s i f i c a t i o n n a t u r ef 1 9 9 7 ) 3 8 8 ，2 3 7 r i e k ，r ；p r e c h e u r , b ；w a n g ，y _ ；m a c k a y , e a ；w i d e r ，g ；g u n t e r t ，p ；l i u ，a ； k a g i ，j h r ；w u t h r i c h ，k n m r s t r u c t u r eo ft h es e au r c h i n ( s t r o n g y l o c e n t r o t u sp u r p u r a t u s ) m e t a l l o t h i o n e i nm t a jm 0 1 b i o l ( 1 9 9 9 ) 2 9 14 1 7 s u z u k i ，k t ；i m u r a ，n ；k i m u r a ，m ( e d s ) m e t a l l o t h i o n e i nh i ( 1 9 9 3 ) 2 9 5 5 ， b i r k h i u s e rv e r l a gb a s e l s w i t z e r l a n d s c h u l t z e ，p ；w 6 r 9 6 t t e r ，e ；b r a u n ，w ；w a g n e r , g ；v a s a k ，m ；k a g i j h r ： 一旦 w f i t h r i c h ，k c o n f o r m a t i o no f 【c d 7 卜m e t a l l o t h i o n e i n 2f r o mr a tl i v e ri n a q u e o u ss o l u t i o nd e t e r m i n e db yn u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c es p e c t r o s c o p y 1 jm o lb i o l ( 1 9 8 8 ) 2 0 3 。2 5 1 1 4 1 r o b b i n s ，a h ；m c r e e ，d e ；w i l l i a m s o n ，m ；c o l l e t t ，s a ；x u o n g ，n h ： f u r e y , wf ；w a n g ，b c ；s t o u t ，c d r e f i n e dc r y s t a ls t r u c t u r eo fc d z n m e t a l l o t h i o n e i na t2 0 ar e s o l u t i o n ，m 0 1 b i 0 1 ( 1 9 9 1 ) 2 2 1 ，1 2 6 9 15 】z a n g g e r , k ；g u l i no z ；o t v o s ，j d ：a r m i t a g e ，im t h r e e d i m e n s i o n a l s o l u t i o ns t r u c t u r eo fm o u s ef c d 7 卜m e t a l l o t h i o n e i n 一1b yh o m o n u c l e a rn m r s p e c t r o s c o p y p r o t e i ns c i ( 19 9 9 ) 8 ，2 6 3 0 1 6 v a s a k ，m ；k a g i ，j h r ：m e t a l l o t h i o n e i n s i ne n c y c l o p e d i ao fi n o r g a n i c c h e m i s t r y e d i t e db yk i n gr b n e wy o r k ：jw i l e y & s o n sl t d ；( 1 9 9 4 ) 2 2 2 9 17 】b e r t i n i ，i ；k l e i n ，t ；g a o h u a ，l ；l u c h i n a t ，c ；w e s e r , u h i g hr e s o l u t i o n s o l u t i ns t r u c t u r eo ft h e p r o t e i np a r to fc u 7 - m e t a l l o t h i o n e i n e u rjb i o c h e m ( 2 0 0 0 ) 2 6 7 , 1 0 0 8 18 b u s h ，a i m e t a l sa n dn e u r o s e i e n c e c u r to p i nc h e mb i o l ( 2 0 0 0 ) 每l8 4 19 】v a s a k ，m ；h a s l e r , d wm e t a l l o t h i o n e i n s ：n e wf u n c t i o n a la n ds t r u c t u r a l i n s i g h t s c u r t i n c h e mb i o l ( 2 0 0 0 ) 重1 7 7 【2 0 m a s t e r s ，b a ；k e l l y , e j ；q u a i f e ，c j ；b r i n s t e r ，rl ；p a l m i t e r ，r d t a r g e t e dd i s r u p t i o n o fm e t a l l o t h i o n e i n ia n dm e t a l l o t h i o n e i n - i i g e n e s i n c r e a s e ss e n s i t i v i t yt oc a d m i u m p r o c n a t la c a ds c ius a ( 19 9 4 ) 9 1 ，5 8 4 【21 m i c h a l s k a ，a ，e ，；c h o o ，k ht a r g e t i n g a n dg e r m l i n et r a n s m i s s i o no fan u l l m u t a t i o na tt h em e t a l l o t h i o n e i nia n di il o e ii nm o u s e p r o c n a t la c a d f usan 9 9 3 ) 9 0 , 8 0 8 8 2 2 】k a n g ，yj ；l i ，g ；s a a r i ，j tm e t a l l o t h i o n e i ni n h i b i t si s e h e m i a r e p e r f u s i o n i n j u r yi nm o u s eh e a r t a m ，p h y s i 0 1 ( 19 9 9 ) 2 7 6 ，h 9 9 3 【2 3 】c a m p a g n e ，m v ；t h i b o d e a u x ，h v a nb r u g g e n ，n ；c a i r n s ，b ；g e r l a i ，r ； p a l m e r , j t ；w i l l i a m s ，s p ；l o w e ，d g e v i d e n c ef o rap r o t e c t i v er o l eo f m e t a l i o t h i o n e i n 1i nf o c a lc e r e b r a li s c h e m i a p r o c n a t l a c a ds c i usa ( 1 9 9 9 ) 9 6 , 1 2 8 7 0 2 4 】b e a t t i e ，j h ；w o o d ，a m ；n e w m a n ，a m b r e m n e r , i ；c h o o ，k h ； 一旦 m i c h a i s k a ，a e ；d u n c a n ，m s ；t r a y h u m po b e s i t ya n dh y p e r l e p t i n e m i ai n m e t a l l o t h i o n e i n ( - ia n d i i ) n u l lm i c e p r o c n a t l a c a ds c iusar19 9 8 ) 9 5 , 3 5 8 2 5 b e a t t i e ，j h ；b l a c k ，d j ；w o o d ，a m ：t r a y h u r n ，p c o l d i n d u c e d e x p r e s s i o no f t h em e t a l l o t h i o n e i n - ig e n ei nb r o w na d i p o s et i s s u eo fr a t s a m ，p h y s i o l ( 19 9 6 ) 2 7 0 , r 9 7 1 2 6 c o y l e ，p ；p h i l c o x ，j c ；r o f e ，a m m e t a l l o t h i o n e i n n u l lm i c ea b s o r bl e s s z nf r o ma ne g g - w h i t ed i e t ，b u tas i m i l a ra m o u n tf r o ms o l u t i o n s ，a l t h o u g h w i t ha l t e r e di n t e r t i s s u ez n d i s t r i b u t i o n ，n u t r ( 1 9 9 9 ) 1 2 9 3 7 2 2 7 k e l l y , e j ；q u a i f e ，c j ；f r o e l i c k ，g j ；p a l m i t e r , r d m e t a l l o t h i o n e i nl a n d1 1 p r o t e c ta g a i n s tz i n cd e f i c i e n c ya n dz i n ct o x i c i t yi nm i c e n u t r ( 1 9 9 6 ) 1 2 6 ，1 7 8 2 2 8 】s t u d e r , r ；v o g t ，c p ；c a b i g e l l i ，m ；h u n z i k e r , p e ；k a g i ，j h m e t a l l o t h i o n e i na c c r e t i o ni nh u m a nh e p a t i cc e l l s i sl i n k e dt oc e l l u l a r p r o l i f e r a t i o n b i o c h e m 一( 19 9 7 ) 3 2 8 ，6 3 2 9 】s c h m i d y , c ；b e y e r s m a n n ，d t r a n s i e n tp e a k si nz i n ca n dm e t a l l o t h i o n e i n l e v e l sd u r i n gd i f f e r e n t i a t i o no f3 t 3 l 1c e l l s a r c hb i o c h e m b i o p 缈s ( 1 9 9 9 ) 3 6 4 , 9 1 3 0 】s u h y ，da ；s i m o n ，kd ；l i n z e r ，d i ；o h a l l o r a n ，t vm e t a l l o t h i o n e i ni s p a r to faz i n c - s c a v e n g i n gm e c h a n i s mf o rc e l ls u r v i v a lu n d e rc o n d i t i o n so f e x t r e m ez i n cd e p r i v a t i o n ，b i 0 1 c h e m ( 1 9 9