（化学专业论文）聚膦腈明胶骨组织工程支架材料的研究.pdf

学位论文数据集 中图分类号t q 3 1学科分类号 4 3 0 5 0 2 0 论文编号 1 0 0 1 0 2 0 1 1 0 2 5 l 密级无 学位授予单位代码 1 0 0 1 0 学位授予单位名称北京化工大学 作者姓名 蔡绒 学号 2 0 0 8 0 0 0 2 5 1 获学位专业名称化学获学位专业代码 0 8 0 5 课题来源国家自然科学基金研究方向生物材料 论文题目聚膦腈明胶骨组织工程支架材料的研究 关键词聚膦腈明胶生物矿化 论文答辩日期2 0 t 1 年5 月2 0 日论文类型 劾弩磷缸 学位论文评阅及答辩委员会情况 姓名职称 工作单位学科专长 指导教师蔡晴副教授北京化工大学生物材料 评阅人1杨小平教授北京化工大学复合材料 评阅人2隋刚教授北京化工大学 复合材料 评阅人3 评阅人4 评阅人5 答辩委员会主席冯增国教授北京理工大学生物材料 答辩委员1聂俊教授北京化工大学生物材料 答辩委员2蔡晴副教授北京化工大学生物材科 答辩委员3王秀芬副教授北京化工大学生物材料 答辩委员4杨东芝副教授北京化工大学 生物材料 答辩委员5徐福建教授北京化工大学生物材料 注：一论文类型：1 基础研究2 应用研究3 开发研究4 其它 二中图分类号在中国图书资料分类法查询 三学科分类号在中华人民共和国国家标准( o b t1 3 7 4 5 - 9 ) 学科分类与代码中 查询 四论文编号由单位代码和年份及学号的后四位组成 l 一 合，以及合成无机陶瓷材料和天然大分子的复合。合成材料和天然大分子 都不可避免的存在各种性能的缺陷，因此，想要得到理想的组织工程支架 材料，一般都要对其进行物理或者是化学的改性处理，而复合生物材料的 出现给生物材料的制备和研究带来了解决方法，合成材料和天然材料通过 复合可以平衡各组分特有的理化性能，从而得到综合性能优异的材料。 本研究合成了两类可降解的聚膦腈大分子，并通过两种不同的方法与 明胶进行共混或交联首先，利用静电纺丝技术制备了不同比例的聚膦腈 明胶复合纳米纤维膜，采用传统的和改进的5 倍模拟体液( 5 s b f ) 研究 了不同比例的聚膦腈明胶复合纳米纤维膜的生物矿化性能。 研究发现，材料在传统的5 s b f ( t 5 s b f ) 溶液中的矿化速率比在改 进的5 s b f ( i 5 s b f ) 溶液中矿化速率要快，但是在i - 5 s b f 中形成的羟基 磷灰石( h a ) 的晶型要更加的完善。在i - 5 s b f 中前期生成以透钙磷石 ( d c p d ) 为主的矿化层，随着时间的延长，d c p d 逐步向羟基磷灰石( h a ) 北京化工大学硕士学位论文 转化。实验证实聚膦腈明胶的复合纳米纤维膜比单一的聚膦腈的纤维膜 具有更好的生物活性和亲水性，比单一的明胶纤维膜具有更好的结构稳定 性。 本文还尝试了通过在聚膦腈分子上引入丙烯酸酯不饱和键，以及在明 胶分子中引入巯基，利用迈克尔加成反应，拟得到一种大分子交联的新型 聚膦腈明胶支架材料，由此解决小分子交联明胶可能带来的生物相容性 和明胶支架遇水稳定性差的问题。 关键词：聚膦腈，明胶，复合材料支架，生物矿化 一 丝兰堂 b 蝴o n e s t u d yo nt h ep r e p a r a t i o na n d p r o p e t i e so f p o l y p h o s p h a z e n e g e l a t i nc o m p o s i t es c a f f o l d f o rt i s s u ee n g i n e e r i n g a b s t r a c t b i o m a t e r i a l sa r ew i d e l yu s e di na r t i f i c i a lo r g a n ，t i s s u ee n g i n e e r i n g ，d r u g r e l e a s i n gs y s t e ma n do t h e rf i e l d sd u et ot h e i r sg o o db i o c o m p a t i b i l i t ya n d b i o d e g r a d a b i l i t y a p p l i c a t i o na n dr e s e a r c hf i e l d s e x p a n dw i t hi n c r e a s i n g r a r i t i e so fb i o m a t e r i a l s a sw eh a v ek n o w n ，t h e r e i saw i d ev a r i e t yo f b i o c o m p a t i b l em a t e r i a l sw h i c hi n c l u d eb i o c e r a m i c s ，s y n t h e t i ca n dn a t u r a l b i o p o l y m e r sa v a i l a b l ef o rt i s s u ee n g i n e e r i n g e a c hm a t e r i a lh a si t so w n c h a r a c t e r i s t i c s ，a n d w i t h i ne a c h f a m i l yo fm a t e r i a l st h e r ei sar a n g eo f p r o p e r t i e sa n dc h a r a c t e r i s t i c s t h e r es e e m st ob el e s s e m p h a s i so ni l e w m a t e r i a l s ，b u tr a t h e ro nt h ec o m b i n a t i o n , p r o c e s s i n go ro t h e rt r e a t m e n to f e s t a b l i s h e ds y s t e m si nn o v e lw a y s c o m p o s i t em a t e r i a l sw e r e p r o v e dt ob eo n e o rt h eb e s t w a y st oo b t a i nak i n do fi d e a l t i s s u ee n g i n e e r i n gs c a f f o l d c o m p o s i t e b i o m a t e r i a l sc a l l p r o d u c ep r o p e r t i e st h a t e x a c t l y f i tt h e r e q u i r e m e n t sf o rap a r t i c u l a rs t r u c t u r ef o rap a r t i c u l a rp u r p o s e i nt h i s s t u d y , t w ok i n d so fp o l y p h o s p h a z e n e sw e r es y n t h e s i z e da n d b l e n d e do rc r o s s l i n k e dw i t hg e l a t i n ，t oi m p r o v et h eh y d r o p h i l i c i t y , b i o a c t i v i t y i 北京化工大学硕士学位论文 一i 1 。1 。- - - - _ _ _ l - - _ _ _ - - _ _ - - _ _ _ - i _ _ _ - - - - - _ - _ _ _ _ - - _ _ _ 一 a n dr a t e so f d e g r a d a b i l i t y a tf i r s t ，a m i n oa c i de s t e rs u b s t i t u t e d p o l y p h o s p h a z e n ew a ss y n t h e s i z e da n dc o e l e c t r o s p u nw i t hg e l a t i na td i f f e r e n t w e i g h tr a t i o s t h e s ep o l y p h o s p h a z e n e g e l a t i nc o m p o s i t en a n o f i b e r sw e r e s u h j e c t e dt o5t i m e ss i m u l a t e db o d yf l u i d ( 5 - s b f ) t oi n d u c eb i o m i n e r a l i z a t i o n i n t h e t r a d i t i o n a l5 - s b f , i nw h i c ht h ep hv a l u ei n c r e a s e dc o n t i n u o u s l y , h o m o g e n e o u sn u c l e a t i o no c c u r r e da n da p a t i t ed e p o s i t eo nc o m p o s i t ef i b e r s f r o mt h eb e g i n n i n g i nc o n t r a s t ，i nt h ei m p r o v e d5 - s b fw h i c hw a sb a l a n c e d w i t hg a s s yc a r b o nd i o x i d ea l lt h et i m ea tap ho f6 4 = 1 = 0 0 2 ，f l a k y - l i k ea p a t i e c r y s t a l sw e r er e s u l t e df i n a l l y t h em i n e r a l i z a t i o nr a t ei nt - 5s b fi n c u b a t i o n w a sf a s t e rt h a nm i n e r a l i z a t i o nr a t ei ni - 5s b ei ni - 5 s b f , t h em i n e r a l i z a t i o n r a t ew a ss l o wa tt h eb e g i n n i n gb u ti n c r e a s e dw i t hp r o l o n g e di n c u b a t i o nt i m e a n da p a t i t eo b t a i n e db yi - 5s b fw a sm a i n l yb r u s h i t e ( d c p d ) a tt h ei n i t i a l s t a g ea n ds u b s e q u e n t l yc h a n g e di n t oh a b i o m i n e r a l i z a t i o nr e s u l t sc o n f i m e d t h a tp o l y p h o s p h a z e n e s g e l a t i nc o m p o s i t em a t e r i a l sh a v eb e t t e rb i o a c t i v i t ya n d h y d r o p h i l i c i t yt h a np u r ep o l y p h o s p h a z e n e sm a t e r i a l sa n da l s oh a v eb e t t e r s t r u c t u r a ls t a b i l i t yt h a np u r eg e l a t i n b yi n c o r p o r a t i n gu n s a t u r a t e da c r y l a t eg r o u p so n t op o l y p h o s p h a z e n e b a c k o n ea n dt h i o l g r o u p s o n t o g e l a t i nb a c k b o n e ，r e s p e c t i v e l y , t h e p o l y p h o s p h a z e n e g e l a t i nc o m p o s i t e w a sa l s o a t t e m p tt h r o u g h m i c h a e l a d d i t i o n i tw a se n v i s o n e dag o o ds o l u t i o nt oa v o i dt h eu s eo fs m a l lm o l e c u l a r a g e n tf o rg e l a t i nc r o s s l i n k i n gt op r e v e n tt h ep o s s i b l eb i o c o m p a t i b i l i t yi s s u e v ，1 北京化工大学硕士学位论文 s r 吻 a 体外溶出率 消耗的n a o h 的体积，m l 消耗的n a o h 的体积，m l 消耗的n a o h 的体积，m l 氨基的取代度 v n 北京化工大学硕士学位论文 v m 1 _ _ 篱 目录，稻雠 等竺竺：_ 1 ：。：! 磐篓工：! 竺竺竺念：i 2 兰苎? 支架二j ：。i ：专丝! 料：! ： ：。三。! 篓篓g o j o o o o o m 0 0 6 0 0 b q 0 00 0 0 0 0 m0 0 q om0三 ：三。! 竺璧= 三 黑点篓二二三 ：。三：! j ：! ：2 ：! ；4 5 1 ：j 1 7 竺i ：j ：； ：三! 苎丝茎3 譬的生物活1 ! l ：问题：； ：i ：竺竺! 竺。! ：；i 攀。竺竺篓竺卜二二z ：4 篡至竺罂譬二= 三 一4 ：竺塞苎竺璧苎竺粤定义。二：三 ：罢要塞竺竺璧曼譬的机理。二：三 ：二：苎矍三耋警苎剂的迈克尔加成反应二二： ：三：竺苎至竺璧量应的在生物医学中的应用二i 三 l 5 研究课题的提出及意义二二： 2 1 堑妻= ：二：17 量考兰墼? 一 三三。! ! 奎兰景篓：；， 三三：! 奎竺竺嚣：! ：! ：；： 三。三：耋竺警线：!；i 三三：! 耋竺i ! - _ 竺l t - 二：三： ? 。竺警征二= ： 2 3 结果与讨论j 二二：荔 i x 北京化工大学硕士学位论文 2 3 1p a g p 的结构。2 2 2 3 2 不同比例p a g p 明胶电纺纤维的形貌变化2 2 2 3 3p a g p 明胶交联前后形貌对比2 5 2 3 45 s b f 不同条件下溶液p h 值随时间的变化。2 5 2 3 5 明胶纳米纤维膜在不同矿化条件下的表面形貌2 7 2 3 6 不同比例p a g p 明胶纳米纤维膜在i - 5 s b f 溶液中的矿化情况2 8 2 4d 、结：；2 第三章化学交联聚膦腈和明胶骨支架材料的研究3 3 3 1 前言。3 3 3 2 实验部分3 3 3 2 1 实验原料3 3 3 2 2 实验仪器3 4 3 2 3 实验路线3 5 3 2 4 实验方法。3 6 2 2 5 材料的表征3 8 3 3 结果与讨论3 8 3 3 1p h g p 的化学结构3 8 3 3 2 明胶氨基的取代度和巯基的取代度4 0 3 3 3p h g p 明胶支架材料的制备和结构表征4 l 3 4 ，j 、结4 3 第四章总结4 5 参考文献4 7 蜀c 谢4 9 x c o n t e n t s c h a p t e r1i n t r o d u c t i o n 。1 1 1t i s s u ee n g i n e e r i n g ：l 1 1 1m c o n c e p t i o no f t i s s u ee n g i n e e r i n g 。l 1 l 2 t i s s u ee n g i n e e r i n g s c a f f o l d l 1 2 b i o m a t e n 虬3 1 2 1o v e i e w 3 1 2 2g c l 地5 1 2 3 】p o i y p h o s p h a z e n e s 5 l 3 】b i o m i n e r a l i z a t i o n 1 0 1 3 1b i o a c t i v i t y o f b i o m a t e r i a l s 1 0 l 3 2b i o m i i l e m l i 刎0 n l l l 3 3s i m u l a t e d b o d yf l u i d ( s b f ) 1 1 l 4m i c h e a l a d d i 廿o n 硪i c t i o n 1 2 1 4 ld e 觚石o no f m i c h e a la d d i t i o nr e a c t i o n j 1 3 1 4 2m e c h a n i s mo f m i c h e a la d d i t i o nr e a c t i o n l 3 1 4 3h e t e r o a t o m i cd o n o r si nt h em i c h e a la d d i t i o n r e a c t i o n 1 4 1 4 4m c h e a la d d i d o nr c a c t i o n 向r b i 锄e d i c a l a p p l i c a t i o n s 1 4 l 5p u 唧s eo f t h i ss t u d y 1 5 c h a p t 盯 2 b i o m i n e r a l i z a t i o nr e s e a r c h o n p o l y p h o s p h a z e n e s g e i a t i n c o m p o s i t e f i b e r s 17 2 l 0 v 训e 、j l r 17 2 2e 蛳t a l c o n t e n t 17 2 2 1m a t e r i a l sa n d r e a g e n t s 17 2 2 2a p p a r a n 坞觚d e q u i p m e n t s 18 2 2 3r 0 疵0 f s 蛐锱“1 9 抛4 啪铷临2 0 2 2 5e l l 锄l c t 耐z 撕2 l 2 r 酬t s 锄dd i s 舳s i o n 2 2 2 3 1t h es t r u c t u r e o f p a g p 2 2 2 3 2 灿l o g yo f p a g p g e l a t i nn a n o f l b e r s 2 2 x l 北京化工大学硕士学位论文 2 3 3e f f e c to f e r o s s l i n k i n go nm o p h r o l o g yo f p a g p g e l a t i nn a n o f i b e r s 2 5 2 3 4e f f e c to f d i f f i e r e n ts b f so ng e l a t i nn a n o f i b e r s 2 5 2 3 5e f f e c to fd i f f i e r e n ts b f so nm o p h r o l o g yo fp a g p g e l a t i nc o m p o s i t em a t e r i a l s 2 7 2 3 6p r o p e r t i e so fp a g p g e l a t i nc o m p o s i t em a t e r i a l si n c u b a t e di ni - 5 s b f ：2 8 2 4s u m m a r y 3 2 c h a p t e r3c r o s s l i n k e dp o l y p h o s p h a z e n e s g e l a t i nc o m p o s i t es c a f f o l db y m i c h e a la d d i t i o nr e a c t i o nf o rt i s s u ee n g i n e e r i n g 3 3 ：；1o v e r v i e w 3 3 3 2e x p e r i m e n t a lc o n t e n t 3 3 3 2 1m a t e r i a l sa n dr e a g e n t s 3 3 3 2 2a p p a r a t u sa n de q u i p m e n t s 3 4 3 2 3r o u t eo f e x p e r i m e n t 3 5 3 2 4e x p e r i m e n t s 3 6 3 2 5c h a r a c t e r i z a t i o n 3 7 3 3r e s u l t sa n dd i s s c u s s i o n 3 8 3 3 1t h es t r u c t u r eo f p h g p 3 8 3 3 2p r o p e r t i e so f t h i o l e dg e l a t i n 4 0 3 3 3p r o p e r t i e so f p a g p g e l a t i nc o m p o s i t es c a f f o l d 4 0 3 4s u m m a r y 4 2 c h a p t e r 4c o n c l u s i o n s 4 5 r ! f e r e n c e s 4 7 a c k n o w l e d g e m e n t s 4 9 x 第一章绪论 1 1 组织工程 1 1 1 组织工程的概念 第一章绪论 组织工程的本质是利用细胞构建一种新的有功能的器官或者组织。这些细胞能与 细胞外基质或支架材料相结合，同时，细胞外基质具有生物诱导作用，能够引导细胞 和组织的发育等。组织工程这个概念首先是美国国家科学基金委员会在1 9 8 7 年提出 的，在过去的三十年间快速发展。组织工程体现出了各种学科的大交叉，从生物学、 分子生物学等学科获取构建新组织的知识，利用材料学和工程学的原理和方法模拟细 胞外基质，另个相关领域是内外科对人体的治疗。目前已经能够临床应用的人造组 织和器官有骨、皮肤、软骨、心脏瓣膜、眼角膜等等。组织工程的问题是如何构造支 架和模板材料以及评价细胞和组织与细胞外基质的相互作用。 目前被普遍运用的组织工程学的定义，是由l a n g e r 和v a c a n t i 【1 1 在1 9 9 3 年提出 的：组织工程是结合了工程学以及自然科学为一体的综合性学科，致力于发展替代材 料以修复，替代，提高人体器官及其功能。组织工程的过程如图1 1 所示。 1 1 2 组织工程支架 图1 1 组织工程的一般过程 f i g 1 - 1g e n e r a lp r o c e s so f t i s s u ee n g i n e e r i n g 组织工程的三要素是以生物组织的三个基本成分( 细胞、支架和信号系统) 为基 础的。理想的组织工程支架材料应该具有以下的特性【2 】： ( 1 ) 由相连的孔组成的网络结构，以便细胞能够移动、增殖和贴附在支架材料 表面： 北京化工大学硕士学位论文 ( 2 ) 通道结构为支架内部生长的细胞提供氧气，同时由细胞产生的代谢废弃物 也能通过通道排出； ( 3 ) 良好的生物相容性保证细胞与材料的亲和性，以便细胞能够在材料表面增 殖和分化； ( 4 ) 与手术需求相应的形状； ( 5 ) 合适的力学强度和生物可降解性o 。 组织工程支架常用的生物材料通常可以分为合成的生物材料和天然衍生的生物 材料两大类，现在又出现了一类半合成的材料。 组织工程可用支架材料的基本要求是具有生物相容性以及能够使细胞黏附、增殖 和分化的良好的表面性能。因此，合成生物材料( 生物陶瓷和生物高分子) 首先被应 用在组织工程的各个领域。支架材料可以是天然的抑或合成的，但合成的生物材料较 之天然生物材料的优势就是合成生物材料可以设计性能的范围比较广泛，而且材料的 性能具有预估性。特别是，许多关于合成的生物可降解材料已被f d a 所认可。最早 也是最常用的合成生物可降解材料有：聚乳酸( p l a ) 、聚羟基乙酸( p g a ) 、聚( 乳 酸羟基乙酸) ( p l g a ) 、聚酸酐( p a ) 、聚延胡索酸( p f ) 、聚原酸酯( p o e ) 、聚己内 酯( p c l ) 和聚碳酸酯( p c ) 等。 聚合物的降解往往伴随着副产物酸的出现，酸性物质会影响周围组织的代谢，还 会引发炎症反应，这就限制了聚合物在组织工程上的应用。为了改善聚合物在这方面 的缺点，和天然生物材料的复合成为主要的方式，例如，生物陶瓷磷酸三钙( t c p ) 和羟基磷灰石( h a ) 能中和聚合物降解产生的酸性产物，因此能起到缓冲的作用从 而避免由于环境p h 值降低引起的不良生物反应。为了提高支架材料的细胞亲和性， 常用于复合的天然大分子有胶原、明胶、壳聚糖、甲壳素、透明质酸、淀粉等等。 生物材料制备成支架有很多种方法，传统的方法有注入成型和烧结成型的生物陶 瓷，溶液浇注、颗粒萃取、无纺纤维、纤维编织、相分离、冷冻干燥等等制备的聚合 物支架。表1 。l 总结了研究中经常应用到的几种支架制备方法。从支架设计及其功能 性的角度出发，各种方法都有其利弊。支架的制备方法主要可以分为四种： ( 1 ) 溶液浇注辅助以粒子沥虑。这个方法是用聚合物溶液和水溶性的粒子浇注 成型，使溶剂蒸发以后，用水洗去粒子，即可得到多孔的支架；这种方法简便易行， 但是仅仅适用于薄膜和非常薄的三维样品。如果样品比较厚，很难把所有聚合物基体 里的粒子完全萃取干净。另外，有机溶剂的大量使用对细胞的黏附和增殖也会产生不 利的影响； ( 2 ) 形成纤维网络。电纺丝技术能获得从几百个纳米到几百个微米直径的不同 尺寸的纤维结构，常用的p l a 、p l g a 纤维就是用这种方法得到的。这种方法不仅可 以制备单组分的纤维，也能制备多组分的纤维，例如利用p l g a 与胶原明胶混纺， 可以明显提高p l g a 的生物相容性。但是，这种方法很难控制多孔结构的尺寸。 2 第一章绪论 ( 3 ) 相分离与冷冻干燥或临界点干燥相结合。相分离法是利用均相多组分系统 ( 如，聚合物水相乳液) 为了降低自由能会出现热动力学不稳定现象从而出现相分离。 因此，热诱导相分离最终能形成富聚合物相和贫聚合物相，除去溶剂后，原来溶剂的 位置被孔取代，因此形成多孔结构。 ( 4 ) 固相自由成型( s f f ) 。固相自由成型是利用从c a d 、c t 和m r i 获得的电 脑数据控制s f f 成型设备制备具有3 d 结构的支架。这种方法能够有效地控制支架材 料的内部结构。 1 2 生物材料 1 2 1 概述 生物材料从字面意义上来说就是能够应用于生物体内修复各种缺陷的材料，而生 物材料学就是研究讨论这些材料的基本结构、基本性能、生物性能以及制备方法，细 胞及组织与材料的相互作用等等。其意义就是希望能找到用于治疗疾病与创伤的材 料，来修复组织缺陷或是取代活体部位来满足人类的健康需求。因此，生物材料的可 以这样来定义：生物材料是一种可以植入体内在体内起一定特殊作用的材料。例如， 可以利用人工关节来替代坏死或创伤的组织，手术线和接骨板可以协助组织的修复， 而心脏起搏器可以改进组织的功能等等。 生物材料的分类有很多种，按材料的属性分，可以分为高分子生物材料、金属生 物材料、陶瓷生物材料、生物衍生材料和复合生物材料五种。按照材料与生物体的相 互作用，又可以分为生物惰性材料、生物活性材料、生物降解材料等。生物材料能否 成功的植入体内发挥作用取决于材料的化学结构及稳定性、材料的设计加工、材料的 力学性能、材料的生物相容性以及细胞或组织与材料的相互作用等等。 3 北京化工大学硕士学位论文 表1 - 1 常用的组织工程支架材料及其性能 t a b l e1 c o m m o n l yu s e ds c a f f o l d sa n dt h e i rb i o l o g i c a lp e r f o r m a n c e 【2 l f a b r i c a t i o np o r e s i n v i t r o i n s c a f f o l dc e i l sv i v ot i m e r e s u l t sr e f e r e n c e t e c h n i q u ep o r o s i t y ( w e e k ) 1 2 w e e k s p o l y ( ( 1 a c t i c - c o f i b e ri nr a b b i t ( o u y a n g - g l y c o l i ca c i d ) f i b r o u sb m s c s d e f e c th e a l e d ( p l g a ) k n i t t i n g t e n d o n e t a l ，2 0 0 3 ) d e f e c t s p h a s e 6 w e e k s m a c r o p o r e s i n v e r s i o nb o n em a r r o w p l g ao 1 2m i l ls t a t i ci nf a c i l i t a t ec e l l s p a r t i c u l a t e c e l l s v i t r o p e n e t r a t i o n l c a c h i n g p h a s e 0 6 1 5 m2 w e e k se n h a n c e st h e p o l y l a c t i ca c i d i n v e r s i o n ( g i u r e ac t ( p 【a )p a r t i c u l a t e mp c d y n a m i c s t a b i l i t yo ft h e 9 3 i n v i t r oi ns e e d e dc e l l s a 1 ，2 0 0 3 ) l c a c h i n g p h a s ep o r c i n e 1 5 w e e k s c o l l a g e n p l a i ns t a t i c s u p e r i o ri n ( w a n ge ta 1 ， s e p a r a t i o nc h o n d r o c y t e s b i o r c a c t o r v i a b i l i t y2 0 0 4 ) p o l y h y d r o x y b p a r t i c u l a t e 2 0 w e e k sp h b v h a d u t y r a t e l e a c h i n g + 0 5m i l l c h o n d r o c y t e i nr a b b i t sb e t t e rh e a l i n g ( k o s ee ta 1 ， v a l e r a t e p a t e u a r r e s p o n s et h a n 2 0 0 5 ) ( p h b v ) f r e e z ed r y i n g c a p g e l f i x g r o o v e a l g i n a t e g a l a c t o s y l a t e d f r e e z e 2 0 0 m r n h e p a t o e y t e s 5 d a y s i n( a l g ) g c ( c h u n g e t c h i t o s a n ( g c )d r y m g p ss i c hb e t t e rt h a n a 1 ，2 0 0 2 ) a l ga l o n e o 5 m mh u m a n s t a t i cs c a f f o l dw a s a g a r s f f s t r a n d ， o s t e o s a r c o m a 9 6 - w e l l e n t i r ec o v e r e d ( l a n d e r se t h y d r o g e l s 3 9 c e l li i n ea n d a 1 ，2 0 0 2 b ) p o r o s i t y f i b r o b l a s t p l a t e sb y c e l l s h y d r o x y a p a t i t s f f 4 0 ，丽m m a n d i b l e s 9 w e e k s i n b o n e e ( h a ) c h a n n e l sv i v o p e n e t r a t e d ( c h ue t a l ， 1 4 m m 2 0 0 2 ) 6 w e e k s i n嘶c a l c i u m w i t h b m s c sn u d e b o n el a y e r ( w i l s o ne t p h o s p h a t e i n d i r e c ts f f c h a n n d sf o r m e d a 1 ，2 0 0 4 ) ( t c p ) m i c e 8 9 w i t l l2 4 w e e k sg o o nb o n e ( x i o n gc t p l i a 门r c pl d mb b m 口 e h a n n d sm v o c o n d u c t i v i t ya 1 ，2 0 0 2 ) 9 6 一1 5 0r a n l ( o b r i e ne t c o l l a g e n - f r e e z e1 1 m 也0 0 m c 3 t 3 - e l4 8h p o r e sa r e g l y c o s a m i n o g l d r y i n g m m a 1 ，2 0 0 5 ) y c a n b e t t e r f r e e z e8 0 1 4 4 2 d a y s i nc y t e c o m p a t i b ( m ae t a l ， c o l l a g e