（水产品加工及贮藏工程专业论文）乌贼墨多糖的化疗保护作用研究.pdf

c i a s s i f i e dl n d e x ：t p 2 4 2 2 s e c u r i t yc l a s s i f i c a t i o n ：l i u d c ： 6 2 1 8 6 5 8 s e c u d t yp e r i o d ： d i s s e r t a t i o nf o rt h em a s t e r sd e g r e e s t u d yo np r o t e c t i v ee f f e c t so f s e p i ai n kp o l y s a c c h a r i d e so n c h e m o t h e r a p y c a n d i d a t e ： w a n gg u a n g s u p e r v i s o r ：p r o f z h o n gj i e p i n g s p e c i a l i t y ：e n g i n e e r i n g r e s e a r c hf i e l d ：m a r i n ea p p l i e dc h e m i s t r y u n i v e r s i t y ：g u a n g d o n go c e a nu n i v e r s i t y s u b m i s s i o nd a t e ： a p r i l2 0 10 广东海洋大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所 取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任 何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡 献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的 法律后果由本人承担。 作者繇沈2 。口年6 月g 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 本学位论文属于l 、保密口，在年解密后适用本授权书。 2 、不保密团。 ( 请在以上相应方框内打“ ) 作者签名： 导师签名： 2 0 o 年 2 0f0 年 ， 月厢 6 具需e t 乌贼墨多糖的化疗保护作用研究 摘要 目的：环磷酰胺是目前临床上常用的氮芥类化疗药物，但其在杀伤肿瘤细胞的 同时对于正常组织也具有较强的毒副作用，而使其在临床上的应用受到了一定程 度的限制。乌贼墨多糖是从乌贼墨中分离提取得到的活性物质，对于乌贼墨及其 中的蛋白多糖复合体和黑色素的研究前人已有诸多报道，但是鲜见关于乌贼墨多 糖的活性研究报道。因此，本研究拟利用大鼠或小鼠通过腹腔注射环磷酰胺造化 疗损伤模型，通过口服灌喂乌贼墨多糖，对比观察动物在化疗后同一时间上几种 脏器组织内生化指标、血液学指标及病理组织学的变化情况，从而探讨乌贼墨多 糖对环磷酰胺所致的卵巢、脾脏、肝、肺、肾脏、心肌化疗损伤的修复作用及其 可能的作用机制，为其今后的合理开发及临床应用提供科学依据。 方法：健康的昆明种小鼠( 雌雄各半) ，随机分为8 组，通过检测外周血象，谷 丙转氨酶活力，尿酸和胆固醇的变化对乌贼墨多糖的最佳剂量浓度进行测试，并 重复测试确定最佳剂量。 4 0 只雌性s d 大鼠，随机分为4 组：对照组，模型组，多糖组，治疗组。试验 周期( 1 5 天) 结束后，检测体重、卵巢指数、血清中激素水平、血清和卵巢中抗 氧化能力及卵巢组织病理组织学变化。 4 0 只s d 大鼠，随机分为4 组，雌雄各半，分组方式同上，试验周期结束后( 1 5 天) ，检测外周血象、脾脏指数、骨髓d n a 含量、脾脏组织中抗氧化能力及病理 组织学变化。 4 0 只b a l b c 小鼠，随机分为4 组，雌雄各半，分组方式同上，试验周期结束 后( 1 5 天) ，检测肝、肾、肺、心脏指数及四种脏器组织中抗氧化能力变化，肝组 织中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活力变化，血清中总胆红素、白蛋白、尿素氮、肌 酐、尿酸和b - n 乙酰氨基葡萄糖苷酶的变化。 结果： 本试验得到的乌贼墨多糖的得率约为l ，经过几次s e v a g 法除蛋白后， 蛋白含量仍为3 0 7 ，硫酸根离子含量为6 2 9 7 ，经过两次剂量浓度测试，本着 浓度最低，活性最高原则，我们认为最佳剂量浓度为1 8 0 m g k g 。 腹腔注射环磷酰胺后大鼠卵巢指数显著降低( p 0 0 5 ) ，卵巢组织中t - a o c 显著升高( p o 0 5 ) ，对 于不同抗氧化酶以及氧化产物含量的影响也不尽相同( p 0 0 5 ) ，血清 中e 2 和p 的含量显著降低( p 0 0 5 ) ，f s h 含量显著升高( p 0 0 1 ) ：与对照组 比较，光镜下卵巢组织中各级卵泡的数量锐减，无成熟卵泡，组织细胞大量纤维 化；与模型组比较，乌贼墨多糖均能不同程度的改变由环磷酰胺所致的各项指标 的变化( p 0 0 5 ) 环磷酰胺均能极其显著的降低正常大鼠外周血白细胞，红细胞，血小板，血红 蛋白及骨髓中d n a 变化( p 0 0 5 ) ，但能不同程 度的抑制环磷酰胺所致的白细胞，血小板及骨髓d n a 变化( p 0 0 1 或p 0 0 5 ) 。 乌贼墨多糖能极其显著的抑制环磷酰胺所致的小鼠肝系数、肝组织中a l t 和 a s t 的变化( p o 0 1 ) ，但对白蛋白和总胆红素变化的影响不显著；能够极其显 著的升高环磷酰胺所致的尿素氮的降低( p 0 0 1 ) ，但对尿酸，b - n 一乙酰氨基葡萄 糖苷酶和肌酐的影响不显著。同时，乌贼墨多糖也能不同程度的抑制环磷酰胺所 致的上述脏器组织中抗氧化能力的变化。 结论：乌贼墨多糖对环磷酰胺引起的雌性生殖系统，造血系统及各种脏器损伤 具有一定程度的修复作用。 关键词：乌贼墨多糖，环磷酰胺，雌性生殖系统，造血系统，抗氧化能力 s t u d yo np r o t e c t i v ee f f e c t so fs e p i ai n kp o l y s a c c h a r i d e s o nc h e m o t h e r a p y 一- a b s t r a c t o b j e c t i v e ：c y c l o p h o s p h a m i d e ( c p ) i sa na l k y l a t i n ga g e n t ，t h em o s tc o m m o n l yu s e d a n t i t u m o u rd r u g si np r a c t i c e ，b u ti ta l s oh a si n t e n s es i d ee f f e c t so nn o r m a lt i s s u e sw h e ni t k i l l st h e u m o u l c e l l s ，w h i c hl e a dt ot h el i m i t a t i o no fc pt os o m ee x t e n t s e p i ai n k p o l y s a c c h a r i d e s ( s i p s ) i sah n do fa c t i v es u b s t a n c ee x t r a c t e df r o ms e p i ai n k , t h er e s e a r c h o ns e p i ai n ka n do np e p t i d o g l y c a no rm e l a n i nf r o ms e p i ai n kh a sb e e nd o n eb yt h ef o r m e r r e s e a r c h e r s ，b u tt h ep a p e ro nt h ea c t i v i t yo fs i p si ss e l d o ms e e n s ow ec r e a t e d c h e m o t h e r a p e u t i ci n j u r ym o d e lb yi n j e c t i n gw i t hc pa n da d m i n i s t e r e ds i p so r a l l yo nr a t s o rm i c e ，e x a m i n e dt h ec h a n g e so fb i o c h e m i s t r yp a r a m e t e r si ns o m eo r g a n s ，b l o o di n d e x e s a sw e l la sh i s t o p a t h o l o g i c a lc h a n g e s ，f u r t h e re x p l o r e dt h er e s t o r a t i v ee f f e c t so fs i p so n i n j u r i e so fo v a r y , s p l e e n ，l i v e r l u n g ，k i d n e y ，h e a r ti n d u c e db yc pa n di t sp o s s i b l e m e c h a n i s m s o u rr e s u l t sp r o v i d et h es c i e n t i f i ce v i d e n c eo fr e a s o n a b l ee x p l o i t a t i o na n d a p p l i c a t i o no fs e p i a i n k m e t h o d ：h e a l t h yk u n m i n gm i c ew e r ed i v i d e di n t o8g r o u p s ，m a l ea n df e m a l em i c es h a r e 毒， e q u a lq u a n t i t y v a r i o u sc o n c e n t r a t i o n so fs i p s w e r ea d m i n i s t e r e do r a l l y t ot h ec p i n t o x i c a t e da n i m a l st oo p t i m i z et h em a x i m u me f f i c a c yo fs i p si nt h em i n i m u md o s e ， d e t e r m i n e db yt h ec h a n g e so fp e r i p h e r a lb l o o dp r o f i l e ，g l u t a m i c p y r u v i ct r a n s a m i n a s e ，警 d n ac o n t e n t si nb o n em a r r o w , a n du r i ca c i di ns e r u m ，a n dr e p e a t e di t 4 0f e m a l es d r a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o4g r o u p s ，c o n s i s t i n go f10r a t se a c h ： c o n t r o lg r o u p ，m o d e lg r o u p ，s i p sg r o u pa n dt r e a t e dg r o u p ，e x a m i n e dt h ec h a n g e so f b o d y w e i g h t ，i n d e xo fo v a r y , h o r m o n el e v e li ns e r u m ，a n t i o x i d a t i v ec a p a c i t yi nb l o o da n di n o v a r y 4 0s d r a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o4g r o u p s ，m a l ea n df e m a l er a t ss h a r ee q u a l q u a n t i t yi ne a c h t h ew a yo fg r o u p i n gw a st h es a m e 、i t l la b o v e ，d e t e r m i n e dt h ec h a n g e so f p e r i p h e r a lb l o o dp r o f i l e ，i n d e xo fs p l e e n , c o n t e n t so fd n a i nb o n em a r r o w , a n t i o x i d a t i v e c a p a c i t yi ns p l e e na n dh i s t o p a t h o l o g i c a lc h a n g e sa f t e rt h ee x p e r i m e n tp e r i o d 4 0b a l b cm i c ew e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o4g r o u p s ，m a l ea n df e m a l em i c es h a r e e q u a lq u a n t i t yi ne a c h a n da l s ot h ew a yo fg r o u p i n gw a st h es a m e 晰t i la b o v e ，t h ec h a n g e s o fi n d e xo fl i v e r , k i d n e y , l u n g ，h e a r ta n da n t i o x i d a t i v ec a p a c i t yi nt h e m ，a l ta n da s ti n l i v e r ，a n dt o t a lb i l i r u b i n ( t b i l ) ，a l b u m i n ，b l o o du r e an i t r o g e n ( b u n ) ，c r e a t i n i n e ，1 3 - n - a c e t y l g l u c o s a m i n i d a s e ( n a g ) i nb l o o dw e r ee x a m i n e d i i i r e s u l t s ：t h ey i e l do fs i p st h a te x t r a c t e db yu sw a sa b o u t1 ，t h ec o n t e n t so fp r o t e i ni s a l s o3 0 7 a f t e rb e i n gg o t t e nr i do f p r o t e i nb ys e v a gm e t h o d ，t h es u l f a t ec o n t e n ti s6 2 9 7 a f t e rt w i c et e s t s ，w ec o n f i r m e dt h a tt h eo p t i m a lc o n c e n t r a t i o no fs i p sw a s18 0 m g k g a m o n gv a r i o u sc o n c e n t r a t i o n st e s t e db yu s c o m p a r e d 、v i t i lc o n t r o lg r o u p ，c pc a r lc h a n g et h ec o n t e n t so fp ，e 2 ，f s hi nb l o o da n d t h et - a o ci no v a r yt i s s u es i g n i f i c a n t l y ( p 0 0 5o rp 0 0 5 ) c pc a ns h a r p l yr e d u c et h eq u a n t i t yo f f o l l i c l e si nd i f f e r e n tp h a s e s ，a n dt h e r ew a sn o tm a t u r ef o l l i c l e si no v a r yw h i c hh a df o c a l f i b r o s i si nh i s t i o c y t e c o m p a r e d 、i t l lm o d e lg r o u p ，s i p sc a l la m e l i o r a t ei n c o o r d i n a t e l yt h e c h a n g e so fp a r a m e t e r si n d u c e db yc p ( p 0 0 5 ) c pc a na f f e c ts i g n i f i c a n t l yt h ec o n t e n t so fe r y t h r o c y t e s ，l e u k o c y t e s ，h e m o g l o b i n ， p l a t e l e t si nb l o o d ，d n ai nb o n em a r r o w ( p 0 0 1 ) ，o r g a ni n d e xo f s p l e e n ( p o 0 5 ) s i p sh a dn o o b v i o u se f f e c t so nt h ea b o v ep a r a m e t e r sc o m p a r e d 晰t hc o n t r o l g r o u p ， b u tc a n i n c o o r d i n a t e l yc h a n g et h ep a r a m e t e r si n d u c e db yc p ( p 0 0 5o rp o 0 5 ) s i p sc a n i n h i b i to b v i o u s l yt h ec h a n g e so fi n d e xo fl i v e r , t h ea c t i v i t yo fa l ta n da s ti nl i v e r ， c o n t e n t so fb u ni nb l o o di n d u c e db yc p ( p o o1 ) ，b u th a dn oe f f e c t so na l b u m i n ，n a g c r e a t i n i n e ，u r i ca c i dl e v e li nb l o o d m e a n w h i l e ，s i p sa l s oc a ni n h i b i ti n c o o r d i n a t e l y a n t i o x i d a t i v ec a p a c i t yc h a n g e si na b o v eo r g a n si n d u c e db yc p c o n c l u s i o n s ：s i p sc a np r o t e c tf e m a l er e p r o d u c t i v es y s t e m ，h e m o p o i e t i cs y s t e ma n d s o m eo r g a n sf r o mc h e m o t h e r a p e u t i ci n j u r i e si n d u c e db yc p k e y w o r d s ：s e p i a i n kp o l y s a c c h a r i d e s ，c y c l o p h o s p h a m i d e ，f e m a l er e p r o d u c t i v e s y s t e m ，h e m o p o i e t i cs y s t e m ，a n t i o x i d a t i v ec a p a c i t y i v 目录 摘要i a b s t r a c t i i i 1 引言1 1 1 乌贼墨的理化特性1 1 2 乌贼墨的药理作用研究2 1 2 1 乌贼墨的止血作用2 1 2 2 乌贼墨的抗肿瘤作用3 1 2 3 乌贼墨的抗菌活性4 1 2 4 乌贼墨的抗辐射作用4 1 2 5 乌贼墨的抗氧化作用4 1 2 6 乌贼墨的升白作用4 1 2 7 乌贼墨的其他作用5 1 3 环磷酰胺的药代动力学原理5 2 乌贼墨多糖的提取及活性测试7 2 1 试验材料和方法7 2 1 1 乌贼墨多糖的提取7 2 1 2 蛋白含量的测定8 2 1 3 硫酸根离子含量的测定8 2 1 4 乌贼墨多糖的活性测试9 2 2 结果。9 2 2 1 蛋白含量的测定。9 2 2 2 硫酸根离子含量的测定1 0 2 2 3 乌贼墨多糖的活性测试结果1 0 2 3 讨论l2 3 乌贼墨多糖对雌性生殖系统的保护作用1 3 3 1 试验材料和方法1 3 3 1 1 试验设计。1 3 3 1 2 体重和卵巢指数的测定1 3 3 1 3 血清和卵巢组织中抗氧化能力的测定1 3 3 1 4 血清中激素水平的测定1 4 3 1 5 病理组织学检验1 4 3 2 结果1 4 3 2 1 体重和卵巢指数的变化1 4 3 2 2 血清和卵巢组织中抗氧化能力的变化1 4 馨 3 2 3 血清中激素水平的变化1 5 3 2 4 病理组织学变化1 6 3 3 讨论19 4 乌贼墨多糖对造血系统的保护作用2 0 4 1 试验材料和方法2 0 4 1 1 试验程序设计。2 0 4 1 2 指标的测定2 0 4 2 结果2l 4 2 1 外周血象的变化2 l 4 2 2 脾脏指数的变化2 1 4 2 3 骨髓d n a 含量的变化2 1 4 2 4 脾脏组织中抗氧化能力的变化2 1 4 2 5 病理组织学观察2 2 4 3 讨j 沧2 3 5 乌贼墨多糖对肝、肾、肺、心肌组织的保护作用2 6 5 1 试验材料和方法2 6 5 1 1 试验程序设计2 6 5 1 2 指标测定。2 6 5 2 结果2 7 5 2 1 体重变化。2 7 5 2 2 肝、肾、肺、心脏指数变化2 8 5 2 3 肝功能的变化2 9 5 2 4 肾功能的变化。3 0 5 2 5 肝、肾、肺、心脏中抗氧化能力变化3 1 5 3 讨论3 3 6 结论与展望3 4 6 1 结论3 4 6 2 创新点3 4 6 3 展望3 4 参考文献3 5 致谢4 1 作者简介4 2 导师简介4 4 缩略词表 缩略词英文全称 中文全称 s i p s s e p i ai n kp o l y s a c c h a r i d e s乌贼墨多糖 c p c y c l o p h o s p h a m i d e 环磷酰胺 g i c ag l u c u r o n i ca c i d 葡萄糖酸 g a l n a c n - a c e t y l g a l a c t o s a m i n en 乙酰半乳糖胺 f u c f u c o s e 岩藻糖 t v b nt o t a lv o l a t i l eb a s i cn i t r o g e n 挥发性盐基氮 c y sc y s t e i n e半胱氨酸 e d t a e t h y l e n ed i a m i n et e t r a a e e t i ca c i d乙二胺四乙酸 s o d s u p e ro x i d e d i s m u t a s e超氧化物歧化酶 m d a m a l o n d i a l d e h y d e丙二醛 t - a o ct o t a la n t i o x i d a t i v ec a p a c i t y 总抗氧化能力 c a t c a t a l a s e 过氧化氢酶 a l t a l a n i n ea m i n o t r a n s f e r a s e 丙氨酸氨基转移酶 a s t a s p a r t a t ea m i n o t r a n s f e r a s e天冬氨酸氨基转移酶 p p r o g e s t e r o n e 孕酮 e 2 e s t r a d i o l 雌二醇 f s h f o l l i c l e - s t i m u l a t i n gh o r m o n e促卵泡刺激素 o d o p t i c a ld e n s i t y光密度 t b i l t o t a lb i l i r u b i n 总胆红素 b u nb l o o du r e ab i t r o g e n 尿素氮 试剂清单 试验仪器及设备一览表 仪器名称及型号 生产厂家 e l 2 0 0 型电子天平 d e l t a 3 2 0p h 计 h i m a cc f l 6 r x 型冷冻高速离心机 h h 6 型水浴锅 8 5 1 型恒温磁力搅拌器 z 一9 1 4 0 m b l 烘箱 7 2 2 s 可见光分光光度计 m i c r o s 6 0 型全自动血球分析仪 w p 2 1 b 半自动生化分析仪 b c d 2 19 s kd c 型冰箱 m p c 1 型微孔板单光子计数仪 9 0 1 型台式低速离心机 l e i c ag a l e n i i i 型生物显微镜 l e i c ae mf c 7 冷冻超薄切片机 7 5 6 m c 紫外可见分光光度计 s h l m a d z uc o r p o r a l 。l u n m e t t l e r - t o l e d o 仪器( 上海) 有限公司 h 1 1 a c h i 公司 金坛市晶玻试验仪器厂 常州澳华仪器有限公司 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 上海精密科学仪器有限公司 法国h o r i b a a b x 公司 上海维世康医用电子有限公司 青岛海尔股份有限公司 北京源德生物医学工程有限公司 上海市医疗器械厂 l e i c ai n c ，b u f f a l o ，u s a 上海江文信息技术有限公司 上海精密科学仪器有限公司 广东海洋大学硕士学位论文 1 引言 乌贼属于软体动物门，头足纲，乌贼目，乌贼科的一种海洋动物，种类繁多， 常见的有：金乌贼、虎斑乌贼、白斑乌贼、拟目乌贼、罗氏乌贼、曼氏无针乌贼 等。乌贼墨主要取自乌贼科动物( 曼氏无针乌贼和金乌贼) 的墨囊，在遇敌时它 们喷出墨以保护自身安全。不同种类的乌贼其墨的含量不同，其干重的变化范围 约为1 1 0g 。乌贼墨作为传统药物，在我国有着悠久的历史，据本草拾遗所述： “腹中墨，主治血刺心痛 。另据本经记载：“可收敛止血，固精止带，制酸 定痛， 除湿敛疮”。目前乌贼墨制剂临床上主要作为止血剂，治疗出血性疾病如： 功能性子宫出血、胃出血等。另据中国药用动物志记载，在我国作为药用的 乌贼仅为乌贼属动物一金乌贼、针乌贼和无针乌贼属的曼氏无针乌贼，我国主要 药用乌贼类动物的分布情况i l j 见表1 1 表1 - 1 我国药用乌贼类动物的分类及分布情况 1 1 乌贼墨的理化特性 乌贼的墨汁约占乌贼全部体重的1 2 8 ，是由肉眼看不见的黑色颗粒构成的粘 稠的混悬液。每毫升中约含有2 0 0m g 颗粒。颗粒呈球形，直径变化较大，多数为 1 2 0 1 8 0m 。颗粒有两层结构，高密度的内核和低密度的外壳，内核就是乌贼墨黑 色素。乌贼墨可溶于二氯乙醇、二乙胺和碱性溶液，不溶于水，对许多物理、化 学处理耐受性极强；在有机溶剂中仍保持颗粒状态，但在酸性环境下又产生沉淀【2 】。 乌贼墨的鲜品中有水、色素、蛋白质、糖类、脂类等成分，其组成比例约为 7 5 ：1 5 5 ：6 3 ：3 0 ：0 2 p j 。主要的化学成分为黑色素和蛋白多糖复合体。黑色素是吲哚 1 乌贼墨多糖的化疗保护作用研究 5 , 6 醌与2 羧基吲哚5 ，6 醌的共聚物，通过酪氨酸在酪氨酸酶的作用下形成多巴 醌，进一步氧化经多巴色素、5 ，6 一二羟基吲哚、黑素原色素而最后形成的，与或不 与蛋白结合【4 】。通过m a l d i m s 图谱，鉴定出乌贼墨黑色素中含有分子量从 4 5 0 1 2 0 0 d a 不等的次生降解低聚糖，是由5 , 6 二羟基吲哚一2 羧酸的对二酚部分经 过氧化裂解，并伴随着脱羧和加氧而产生的。乌贼墨中粗蛋白含量为1 0 0 8 ，粗 脂肪含量为1 3 4 。其中，不饱和脂肪酸含量约占总脂肪的4 3 4 ，脂肪酸主要组 成是油酸和棕榈油酸，油酸占总脂肪酸的2 6 3 5 ；乌贼墨中含1 6 种氨基酸，总量 达9 9 2 2 ，以天门冬氨酸含量最高f 5 6 】。乌贼墨中含丰富的酶系，学者从中检测到 酪氨酸酶，壳多糖酶，1 3 - n 一乙酰己糖胺酶和一种可以催化多巴色素重排的黑色素酶 的活性【_ 7 引。日本有关研究人员运用生化分离技术对乌贼墨的蛋白多糖复合体进行 分析，从中分离出一组抗肿瘤活性的肽聚糖并经酶消化后在乙酸纤维膜电泳中只 显示一条区带，表明这几种肽聚糖中只有一种多糖链并被连到一种肽上，其重复 结构为( 6 g a l n a c a l g i c a l 3 1 3 f u c a l ) i i ，只是聚合度不同【9 j 。糖类部分主要含有等 分子质量的葡萄糖酸( g i c a ) 、n 乙酰半乳糖胺( g a l n a e ) 、岩藻糖( f u e ) 。研究表 明多糖部分本身并无抗肿瘤活性，这表明其抗肿瘤活性来自多糖同其他组分的复 合体。肽链部分主要的氨基酸为：天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸。 此外，很多学者还对乌贼墨中微量元素的含量进行了测定，结果显示乌贼墨中含 有铝、钙、铜、铁、镁、锰、钠、锶、锌等2 1 种微量元素，其中镁、钠、铁、锌、 钙和锶含量较高，并认为较高的微量元素可能与乌贼墨的生理活性相关【l 叭。 1 2 乌贼墨的药理作用研究 日本学者t a k a y a 指出：海洋生物中含有我们熟悉或不熟悉的、具有生理活性 的物质，很多生理活性还没有被深入的研究，而这些研究都很可能引导我们去开 发一种新的药物资源或得到一种新的有药用的化合物。现代医学研究表明，乌贼 墨具有多种生理活性，是一种很有潜力的天然药物资源。 1 2 1 乌贼墨的止血作用 现代临床应用证明乌贼墨是一种良好的全身性止血药，对妇科、外科、内科 等多种出血症状，止血效果明显，无毒副作用。 王劲松等通过乌贼墨凝血作用的研究表明乌贼墨能明显缩短小鼠凝血时间 2 广东海洋大学硕士学位论文 和出血时间，可增强凝血因子、血小板和毛细血管的功能，具有明显的促凝作用。 谢光临等【l2 】研究表明：乌贼墨可缩短小鼠的凝血时间，使兔血清中纤溶酶活性明 显降低，但对兔血小板数量无影响。因此，其可能的止血作用机制是通过抑制纤 溶酶的活性，导致纤维蛋白溶解减少，从而促进凝血，并指出这种作用可能与乌 贼墨中铁和钙的含量较高有判。 1 2 2 乌贼墨的抗肿瘤作用 乌贼墨的药用价值最早始于止血。进入2 0 世纪9 0 年代以来，其抗肿瘤研究 一度成为新的热点。t a k a y a | i 3 】等首先对乌贼墨蛋白多糖复合体进行了体外研究， 发现该蛋白多糖对m e t h a 肉瘤细胞无直接的细胞毒作用，但可以抑n d , 鼠体内肉 瘤细胞的生长，同时发现小鼠腹腔内巨嗜细胞的活性增强，推测其抗肿瘤作用可 能是通过调节机体免疫功能来抑制肉瘤细胞的生长，并指出单独的糖链部分无抗 肿瘤活性。另据试验表明，乌贼墨可明显抑制m e t h a ，s 1 8 0 两种肉瘤的生长，抑 制率分别为9 5 4 8 和7 3 9 l ，并在一定程度上抑制移植瘤的形成【1 4 1 。鱿鱼墨汁提? 取物在体外对h l 6 0 ，c n e 2 z 和h e l a 细胞的生长有明显的抑制作用，在体外对 小鼠移植性肿瘤s 1 8 0 和h 2 2 生长的抑制效果亦很显著，且不影响动物的体重【1 5 】。黄 枚1 1 6 1 等的研究表明：高、中、低剂量的乌贼墨对荷人肝癌h h c l 5 裸小鼠瘤重抑制，? ， 率分别为8 2 2 、7 0 1 与3 5 5 ，并呈明显的剂量依赖关系。吕昌龙等【1 。7 】从免 疫学角度对乌贼墨及其提取物的抗肿瘤机制的研究表明：乌贼墨及其提取物可提 高肿瘤坏死因子0 【和白细胞介素1 ( i l 1 ) 的分泌水平，增加n k 细胞的杀伤活性， 并能提高小鼠淋巴细胞产生白细胞介素2 的能力。 赫牲等【1 8 】应用成纤维细胞增殖实验检测乌贼墨诱导巨噬细胞产生i l 1 的生 物学活性，结果表明乌贼墨能诱导b a l b c 鼠巨噬细胞产生i l 1 ，且分泌活性较 强，与对照组比较有显著差异，在4 8h 分泌活性最高。表明乌贼墨对巨噬细胞有 较强的刺激作用，使巨噬细胞活化成为效应细胞，参与抗肿瘤免疫。乌贼墨能明 显的激活正常人和肿瘤病人红细胞c 3 b 受体和红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力， 且浓度为1 0 时作用最明显，说明乌贼墨的抗肿瘤作用与其激活红细胞的免疫粘 附功能有关【1 9 】。此外乌贼墨可以降低癌细胞内c a 2 + 浓度，继而影响到线粒体上c a 2 + 依赖性c a 2 + m 9 2 + a t p 酶的活性，并减少c a 2 + 向线粒体内的转运，减少甚至消除 c a 2 + 对a t p 合成的抑制作用。这可能是乌贼墨抑制肿瘤生长的又一机制【2 们。综上 所述，乌贼墨的抗肿瘤作用主要是通过免疫系统或是分子水平上的中介而产生的。 乌贼墨多糖的化疗保护作用研究 1 2 3 乌贼墨的抗菌活性 日本学者发现一种黑色鱿鱼的贮藏期较普通的鱿鱼长，前者的化学变化缓 慢，甚至在成熟期也显示出了微生态环境的显著差异，而这种变化是由于在前者 中加入了乌贼墨1 2 。鱿鱼肉在保存时添加3 的乌贼墨后其t v b - n 的含量较没有 加乌贼墨的对照组低，贮藏期明显延长田j 。 杜铁平等【2 3 j x , j - 乌贼墨中抗菌活性物质进行了分离与研究，发现乌贼墨可以作 为一种天然的抗菌剂，并从乌贼墨中提取出一种浅黄色吸湿粉末，其对金黄色葡 萄球菌、大肠杆菌均具有抑菌作用，该物质得率为0 5 2 。且不同浓度乌贼墨提取 物的抑菌性能，随着抗菌物质浓度的增加而增强。 1 2 4 乌贼墨的抗辐射作用 乌贼墨可保护造血干细胞，预防大鼠急性放射病，说明乌贼墨有抗辐射作用， 此外，雷敏等口4 1 研究表明乌贼墨制品能够显著促进辐射损伤小鼠骨髓粒系造血作 用。 1 2 5 乌贼墨的抗氧化作用 电离辐射对生物机体的损伤除直接作用于细胞外，主要通过间接作用诱导产 生超氧阴离子自由基、羟自由基等活性氧自由基。而活性氧自由基是辐射损伤细 胞和组织的重要因素，可引起细胞内d n a 的氧化、断裂或碱基错配等现象，并诱 发细胞凋亡【2 引。陈士国等【2 6 1 研究表明，乌贼墨中的黑色素具有抵抗光氧化危害的 重要功能，起着类似于超氧化物歧化酶的作用，能够催化o - 2 转变为h 2 0 2 和0 2 ， 从而起到抵抗光氧化的作用。张永军等【2 7 j 研究复方乌贼墨胶囊对小鼠s o d 活性的 影响，结果显示：肝脏和肾脏中s o d 活性均较对照组有显著增高并呈良好的剂量 效应关系。 1 2 6 乌贼墨的升白作用 在环磷酰胺所致小鼠白细胞低下的情况下食用含2 0 墨饲料，可加快白细胞 水平的回升，继续服用还可继续提高白细胞数 2 1 。陆通掣2 硼试验表明在抗癌药物所 致白细胞数低下时乌贼墨具有明显的升白作用，其作用机制与乌贼墨诱生骨髓细 胞产生多重集落刺激因子、促进骨髓细胞体外增殖形成集落有关。 4 广东海洋大学硕士学位论文 1 2 7 乌贼墨的其他作用 日本水产株式会社中央研究所佐竹干雄对乌贼墨进行了深入研究，他把乌贼 墨进行乙醇抽提、透析、凝胶过滤等试验步骤后，精制得到分子量2 5 万以上的高 分子s mi 与分子量约3 9 0 0 0 的低分子s mi i ，然后在大白鼠身上进行药理功能研 究表明，s mi 和s m i i 都有抑制胃液分泌、抗溃疡的作用，s m i i 的活性更强一些， s m i i 还有抑制浮肿、抗炎症的功效。雷敏等【2 9 】研究表明：乌贼墨还可通过调节机 体血脂代谢、提高机体内源性抗氧化酶活性，降低机体的过氧化水平，有效预防 高血脂症的形成，另据逢龙等1 3 0 j 研究表明，乌贼墨制品能够促进骨髓造血，其作 用途径可能通过调节机体的免疫机能，诱导产生多种细胞因子，促进造血干细胞、 粒单系祖细胞的增殖，并向粒系分化，促进小鼠的粒系造血。 1 3 环磷酰胺的药代动力学原理 环磷酰胺是临床上常用的氮芥类抗肿瘤药物，氮芥类化合物作为重要的一类 抗肿瘤药物，已有多种用于临床。肝脏被氧化生成