（食品科学专业论文）天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究.pdf

学位论文 压 如需保密，解密时间年月日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果尽我所知，除了文中特另4 加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意 研究生签名：最钮1 良 时问：mi 年f 月如日 撇黼等：磐霞。撇名：柱笃 签名日期：刃石年j 月厶日 签名日期： 。 年7 月 刍 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 究 具有很高的 生物效价，因而深受消费者的喜爱。本文旨在利用现代色谱技术，建立天然红心鸭 蛋蛋黄中胆固醇高效准确的定量分析方法；并通过动物实验和分子生物学分析手段 和方法，探讨天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠生长发育，抗疲劳、耐缺氧、免疫调节以 及对血脂的影响和作用机理主要研究结果如下： 1 天然红，b 鸭蛋蛋黄粉中主要成分的分析 建立了一种通过直接皂化一反相高效液相色谱( r p h p l c ) 快速检测蛋黄胆固醇 含量的分析方法，其r p i p l c 分析测定条件为：l c - 1 0 a t 液相色谱；色谱柱：a g i l e n t z o r b a xs b - c 1 8 柱( 0 4 6 m m x 2 5 0 m ) ； ( v v v ) ；柱温：4 5 ；进样量：2 0pl ； 流动相：乙睛：甲醇：异丙醇r - - 5 0 ：8 0 ：1 0 流速v = 1 3 m l m i n ；检测波长2 0 5 n m 在 此分析条件下，蛋黄中胆固醇的出峰时间在1 0 r a i n 左右，测得天然红心鸭蛋蛋黄粉和 普通鸭蛋蛋黄粉中胆固醇含量分别为2 4 8 4 m g g 左右和2 5 7 5 m g g 左右 通过气相色谱( g c ) 分析了蛋黄粉中脂肪酸的组成和含量其中天然红心鸭蛋 蛋黄粉中不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的7 1 9 ，占蛋黄粉量的2 9 7 5 。普通鸭蛋蛋 黄粉中不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的7 2 5 ，占蛋黄粉的2 6 4 4 天然红心鸭蛋蛋 黄粉和普通鸭蛋蛋黄粉中还含有亚油酸( l a ) 、花生四烯酸( 从) 、廿碳五烯酸( e p a ) 、 廿二碳六烯酸( d 姒) 以及少量的c 1 6 ：1 、c 1 7 ：1 、c 2 0 ：1 和c 2 0 2 等不饱和脂肪酸 等 通过高效液相色谱( h p l c ) 分析了蛋黄粉中氨基酸的组成和含量其中天然红 心鸭蛋蛋黄粉中氨基酸总含量约为占2 1 2 8 9 1 0 0 9 ，普通鸭蛋蛋黄粉中氨基酸含量 约为2 4 8 6 9 1 0 0 9 2 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠生长发育的影响 动物分组实验结果表明，天然红心鸭蛋蛋黄粉能够增加生长小鼠的体重。 通过病理切片观察小鼠脾脏组织：发现天然红心鸭蛋蛋黄粉增加了小鼠脾脏中 自小体( w h i t ep u l p ，白髓) 的体积和数量，这提示天然红心鸭蛋蛋黄粉有提高机 7 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 体免疫的作用。 通过病理切片观察小鼠心脏组织：天然红心鸭蛋蛋黄粉对心脏没有明显的影响。 通过病理切片观察肝脏和肾脏组织：发现高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉 ( 1 9 5 9 k g d ) 对小鼠的肝脏有定的影响。发现小鼠肝细胞内有脂肪浸润和轻度变 性。可能是由于给小鼠喂食了高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉( 1 9 5 9 k g d ) 而产生了 轻度的脂肪肝病变。对肾脏的切片观察，高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉( 1 9 5 9 k g d ) 组小鼠中，有个别小鼠的肾近曲小管上皮细胞轻度变性，通过对肾功能指标分析， 随着天然红心鸭蛋蛋黄粉剂量的增加，血肌肝的含量有一定的上升趋势，但与对照 组比较，没有显著差异，这表明高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉对肾脏没有构成病理 性的影响。 对血脂水平的测定结果表明高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉在显著增加了小鼠血 清总胆固醇( t c ) 的含量( p o 0 1 ) ，但同时也增加了高密度脂蛋白( h d l - c ) 含量 ( p o 0 1 ) ，对血清甘油三酯( t g ) 含量没有显著影响。分析小鼠肝功能生化指标 天门冬氨酸氨基转移酶( a s t ) 和丙氨酸氨基转移酶( a l t ) ，与对照组相比，其值有所 增加，但没有显著的差异。通过血象指标分析，高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉组 ( 1 9 5 9 k g d ) 小鼠的白细胞和血小板的数量都显著高于对照组( p o 0 1 ) ，这提 示高剂量的饲喂天然红心鸭蛋蛋黄粉可能在一定程度上会引起机体的炎症反应。 3 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠抗疲劳和耐缺氧效应的影响 动物分组实验结果表明：饲喂天然红心鸭蛋蛋黄粉的小鼠游泳耐受能力和耐缺 氧存活时间都有所提高。增加肝糖原和肌糖原的贮备能力，以及肝组织和血清中乳 酸脱氢酶( l d h ) 活力，并降低了血清尿素氮( b u n ) 含量。实验结果初步提示天然 红心鸭蛋蛋黄粉能增加机体抗疲劳及耐缺氧能力。 4 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠免疫调节的影响机理研究 对动物进行分组实验，测定2 ，4 一二硝基氟苯( d n f b ) 致敏的迟发性超敏反应 和血清溶血索水平，通过流式细胞仪( f c m ) 测定脾脏单细胞悬液中的t 细胞表面标 记分子的c d 3 和c d 4 分子的百分含量，并利用放射免疫分析( r i a ) 方法测定血清免 疫球蛋白( i g g ) 含量。结果表明：中剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉( 1 3g k g d ) 是 能够增加机体的免疫能力的最佳剂量，能够调节迟发性超敏反应和血清溶血素的水 8 -_1jjj 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 平，增加t 细胞表面标记分子c d 3 和c d 4 分子和血清i g g 的含量这说明中剂量的 天然红心鸭蛋蛋黄粉( 1 3g k g d ) 能提高机体的体液免疫和细胞免疫能力但是高 剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉( 1 9 5g k g d ) 却对调节免疫的能力有所下降这个下 降的原因可能与高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉对肝脏病理的影响有一定的关系 5 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠肝脏的影响及其机理的研究 对动物进行分组实验，解剖小鼠测定血清胆碱酯酶( c h e ) ，肝组织6 一酮一前列 腺素f 。( 6 - k e t o - p g f 。) 和血栓素b 2 ( t x b 2 ) ，以及通过r t - p c r 测定肝脏组织中硬 脂酰c o a 去饱和酶- i ( s c d - i ) m r n a 和肝脏脂肪酸结合蛋白( l - f a b p ) m r n a 两个基 因的表达结果表明：高脂组( p 0 0 1 - - 和高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉组( 1 9 5 g k g d ) ( p o 0 5 ) 的c h e 与对照组相比，有显著的增加，这说明高脂饮食和高剂 量的天然红心鸭蛋蛋黄粉在一定程度上引起了轻度脂肪肝高脂组的 t 】( b 2 6 一k e t o - p ( ；f 。的比例明显高于正常组( p 0 0 1 ) ，添加天然红心鸭蛋蛋黄粉的 小鼠t x b j 6 - k e t o - p g f 。的比例与对照组相比，没有显著的差异，说明高脂饮食会导 致t x i k f - k e t o - p g f 。比例失调，进而会影响肝脏内血液的流动性，而天然红心鸭蛋 蛋黄粉组小鼠对此没有明显的影响 通过对肝脏s c d - i m r n a 和l - f a b p m r n a 两个基因表达的分析，发现高脂组小鼠的 肝脏s c d - i m r n a 的表达显著受到抑制，而l f a b p m r n a 表现出高度的表达，说明高 _- 脂饮食中发生肝脏脂肪酸代谢紊乱，从而导致血脂升高。试验组中高剂量的天然红 心鸭蛋蛋黄粉( 1 9 5g k g d ) 组小鼠肝脏s c d - - l m r n a 的表达受到了显著抑制( p 0 0 5 ) ，但是没有高脂组表现的显著；l f a b p m r n a 的表达也有增高的趋势，但与对 照组相比，之间的差异还不显著但也在一定程度上说明高剂量的食用天然红心鸭 蛋蛋黄粉对肝脏的脂质代谢也存在着一定的影响，而导致肝脏脂肪酸代谢紊乱蛋 黄粉引起小鼠血脂升高一方面与蛋黄中胆固醇含量高有关，另一方面由于蛋黄中脂 肪酸含量较高，小鼠进食高剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉后，来不及及时分解代谢这 些脂肪酸，从而导致脂肪酸在肝脏内的累积，进而导致小鼠肝脏脂肪浸润变性和胆 固醇( t c ) 含量的升高 关键词：红心鸭蛋； 胆固醇；r p - h p l c ；生长发育； 抗疲劳； 耐缺氧： 免疫调节； 血脂；基因表达 9 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 s t u d i e so nt h eb i o a c t i v i t yo fn a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro f d u c k se g ga n di t sa c t i o nm e c h a n i s m a b s t r a c t c h i n ai st h em o s tc o u n t r yo f l a y i n ga n dc o n s u m i n gt h ee g g si nt h ew o r l d e g g sr r e r i c hi nu n s a t u r a t e df a t t ya c i da n d a m i n oa c i d e g g sh a v eh i g h e rb i o l o g i cv a l u e s oe g g s w e r ei n t i t u l e d a b s o l u t ef o o d a n d d e e p l yf a v o r e db yc o r l s u m a r s t h er e s e a r c he s t a b l i s h e d af a s ta n da c c u r a t ea n a l y s i sm e t h o df o rc h o l e s t e r o lf r o me g gy o l la n dt h ee f f e c to ft h e n a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g g ( n r y p ) o ng r o w t ha n dd e v e l o p m e n t , a n t i f a t i g u e ， i m m u n i t y , l i v e ra n ds e r u ml i p i do fm i c ea n di t sm e c h a n i s m sw e r ed i s c u s s e dt h r o u g ht h e a n i m a le x p e r i m e n t sa n da n a l y t i c a lm e a n so fm o l e c u l a rb i o l o g y t h em a i nr e s u l t sa r ea s f o l l o w s ： 1 a n a l y z i n go fn u t r i t i o n a lc o m p o n e n t so ft h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro f d u c k se g g af a s ta n da c c u r a t ea n a l y s i sm e t h o df o rc h o l e s t e r o lf r o me g g y o l kw a se s t a b l i s h e db y d i r e c ts a p o n i f i c a t i o n - r p h p l c f o rt h eo p t i m a lc h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n so fr p h p l c ， t h e y w e r ea sf o l l o w s ： c h r o m a t o g r a p h i c c o l u m n ： a g i l e n t z o r b a x s b - c l s ( 0 4 6 m m 2 5 0 m m ) ；m o b i l ep h a s e ：a c e t o n i t r i l e ：m e t h o l ：i s o p r o p a n o l = 5 0 ：8 0 ：1 0 ( v v v ) ；u vd e t e c t i n gw a v e l e n g t h ：2 0 5 u r n ；f l o wr a t e ：1 3 m l m i n ；c o l u m n t e m p e r a t u r e4 5 c t h ec o n t e n t so f c h o l e s t e r o lf r o mt h en a t u r a lr e dy o l ko f d u c k se g ga n d t h eo o m m o nd u c k se g gw e r e2 4 8 4 m g ga n d2 5 7 5 m g gr e s p e c t i v e l yu n d e rt h ec o n d i t i o n s a sa b o v e t h ea n a l y t i c a lr e s u l t so fs o m ef a t t ya c i d sf r o mn r y pw i t hg ca n dh p l cw e r ea s f o l l o w ： 1 0 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 t h ee x i s t e n c eo fo t h e ru n s a t u r a t e df a t t ya c i d s ，f o re x a m p l e , c 1 6 ：1 ，c 1 7 ：1 ，c 2 0 ：1 ， c 2 0 ：2a n ds oo n , w e r ea l s od i s c o v e r e d t h et o t a lc o n t e n t so fa n 血oa c mf o rnr y pan dt h ec o m m o nd u c k se g gw f f r e 2 1 2 8 9 l o o ga n d2 4 8 6 9 l o o gr e s p e c t i v e l y 2 e f f e c to ft h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g g so ng r o w t ha n d d e v e l o p m e n t o f m i c e t h en a u l r a lr e dy o u 【p o w d e ro fd u c k se g g sc o u l da c c e l e r a t et h eg r o w t ha n d d e v e l o p m e n to fm i c et oa c e r t a i ne x t e n tt h r o u g ho b s e r v i n gt h et r e n do fb o d y w e i g h t c h a n g e f r o mp a t h o l o g i c a lo b s e r v a t i o no ft h es p l e e n , t h en u m b e ra n dv o l u m eo fw h i t e p u l po fs p l e e ni nm i c ef e dw i t hn r y pa tt h em i d d l ea n dh i g hd o s a g ew a si n c r e a s e d t h a t i m p l i e dt h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro f d u c k se g g sc o u l di m p r o v et h ei m m u n i t ya c t i v i t y o fm i c e t h ec o n t e n t so fb l o o ds e m mt o t a lc h o l e s t e r o lf r c ) o fm i c ef e dw i t hn r y pa t m i d d l e ( 1 3 9 k g d ) a n dh i g h ( 1 9 5 9 k g d ) d o s a g ei n c r e a s e d a n dt h ec o n t e n to f s e m mh i g h d e n s i t y l i p o p r o t e i n - c h o l e s t e r o l ( h d l - c ) o f m i c e w a s i n c r e a s e d t o o t h ec o n t e n t o f s c r a m t r i g l y c e r i d e 口g ) o fm i c ef e dw i t ht h en r y pw a sn o td i f f e r e n tf r o mt h ec o n t r o lg r o u p t h er e s u l t sm a y b e 托l a t et ot h eh i g hc o n t e n to fu n s a t u r a t e df a t t ya c i da n dp h o s p h a t i d y l c h o l i n e s 口c ) o f d u c k se g g s f r o mp a t h o l o g i c a lo b s e r v a t i o no f h e a r to f m i c e , t h ep a t h o l o g i c a ls t r u c t u r eo f h e a r to f a l lm i c ef e dw i t hn r y pw e r en o r m a l b u tf r o mp a t h o l o g i c a lo b s e r v a t i o no fk i d n e yo f a tt h eh e m o g r a ml e v e l ，t h ea m o u n t so fw h i t ec e l l sa n db l o o d p l a t e l e tw e r e r e m a r k a b l yh i g h e rt h a nt h ec o n t r o lg r o u p s t h er e s u l t ss h o w e dt h em i c ef e dw i t l lt h e n r y pa tt h eh i 曲d o s a g eh a di n f l a m m a t i o n 3 e f f e c to f t h en a t u r a lr e d y o l kp o w d e r o f d u c k se g g so nt h ea n t i f a t i g u ea n d a n t i h y p o x i ao f m i c e t h ea b i l i t yo fs w i m m i n ga n dt h el i v i n gt i m eo fa n t i h y p o x i ao f m i c ef e dw i t ht h e n a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g g sw e r ei m p r o v e d t h ep r e s e r v i n ga b i l i t i e so f g l y c o g e no f l i v e ra n dm u s c l ea n dt h ea c t i v i t yo fl a c t i cd e h y d r o g e n a s e ( l d 固o fl i v e r a n ds e r u mo f m i c ef e dw i t ht h ey o l kp o w d e rw e r ei n c r e a s e d a n dt h ec o n t e n to fs e r u m b l o o du r e an i t r o g e n ( b u n ) o fm i c ef e dw i t ht h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g g s w a sd e c l i n e d t h er e s u l t ss h o w e dt h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g g sc o u l d i m p r o v et h ea b i l i t yo f m i c et or e s i s tt h ef a t i g u ea n dh y p o x i a 4 e f f e c to ft h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g go nt h ea b i l i t yo f i m m u n i t ya d j u s t m e n t o f m i c e t h et e s t sf u r t h e rp r o v e dt h a tt h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g g s ( n r y p ) c o u l di m p r o v et h en o n s p e c i f i ca n ds p e c i f i ci n l m ! 1 n ea b i l i 哆o fm i c e t h er e s u l t ss h o w e d t h a tn r y ph a do b v i o u sa c t i o no np r o m o t i n gt h er e a c t i o na b i l i t yo fd e l a y e dt y p e h y p o r s e n s i t i v i t y ( d t h ) a n dr a i s m gt h el e v e lo fh e m o l y s i na n dc o n t e n to f s e r u ml g ga n d p r o p o r t i o no f c d 3a n dc d 4o f s p l e e nc e l li nm i c e t h ee f f e c to f t h en r y p a tt h em i d d l e d o s a g e ( 1 3 9 k g mw a st h eb e s ta m o n gt h eh i g h , m i d d l ea n dl o wd o s e so f n r y p b u tt h e a b i l i t yo fi m m u n i t ya d j u s t m e n to fn r y pa t1 9 5 9 依g do nm i c ed e c l i n e da ta c e r t a i n e x t e m t h er e s o no f d e c l i n i n gm i g h tr e l a t et ot h ed e v e l o p m e n t o f l i g h t l yf a t t yl i v e r 5 s t u d y i n gt h ee f f e c ta n dm e c h a n i s mo ft h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro f d u c k se g go nl i v e ro r g a n i s mo f m i c e b ys t u d y i n gt h ee f f e c to ft h en a t u r a lr e dy o l kp o w d e ro fd u c k se g g so nl i v e r o r g a n i s m o fr a t s ，t h ea c t i v i t yo fc h o l i n e s t e r a s ( c h e ) ，t h ep r o p o r t i o no ft x b 2 1 2 r e s u l t ss h o w e dt h ea c t i v i t yo fc h o l i n e s t e r a s e ( c h e ) o fm i c ef e dw i t hf a t - r i c hd i e t ( p o 0 1 ) a n dt h en r y pa th i 曲d o s a g e ( 1 9 5 9 k g d ) 口 o 0 5 ) w c l eo b s e r v a b l yi n c r e a s e d a n dt h ep r o p o r t i o no ft x b 2 6 - k e t o - p g f 埘o fm i c ef e dw i t hf a t - r i c hd i e tw a s o b s e r v a b l y h i 曲艇t h a nt h ec o n 乜o lg r o u p ( p o 0 5 ) t h el e v e lo fs c d i m r n ao fl i v e ri nm i c ef e d w i t hf a t - r i c h d i e t 口 o o i ) a n dn r y pa th i g hd o s a g e ( 1 9 5 9 g g d ) 口 0 0 5 ) d e c r e a s e d t h el e v e lo f i ，f ：a j b p m r n ao fl i v e ri nm i c ef e dw i t hf a t - r i c hd i e ti n c r e a s e d ( p 1 5 度的天然红心鸭蛋，其蛋黄粉中的类胡萝卜色素含量高达 9 2 5 m g 1 0 0 9 ，一般r c f 在5 度左右的普通禽蛋蛋黄粉色素中的类胡萝 色素含量一 般为4 6 5m g 1 0 0 9 ( 石嘉怿，2 0 0 4 ) 。本实验室通过质谱，液相色谱及液质连用技 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 术分离鉴定了禽蛋蛋黄的色素的主要成分除了主要1 3 一胡萝卜素外，还有一些非常 重要的色素，有虾青素、叶黄素和紫杉紫素( 石嘉怿，2 0 0 4 ；刘良忠，2 0 0 4 ) 。 参考文献 1 郭祖超医用数理统计方法，第二版 m 人民卫生出版社，1 9 8 1 ，9 8 一1 0 0 2 刘良忠天然红心蛋中红色类胡萝卜素的结构表征及其生物活性评价 博士学位论文 武汉：华中农业大学图书馆，2 0 0 4 3 石嘉怿天然红心鸭蛋的营养价值及对血脂水平影响的研究 硕士学位论 文 武汉：华中农业大学图书馆，2 0 0 4 4 张佳程，骆承庠直接皂化一比色法测定食品中胆固醇的研究食品与发酵业， 2 0 0 3 ，2 6 ( 3 ) ：3 5 3 8 5 b e y e rrs ，j e n s e nls c h o l e s t e r o lc o n t e n to f c o m m e r c i a l l yp r o d u c e de g g si ng e o r g i a p o u l t r ys c i e n c e ，1 9 8 9 ，6 8 ，1 7 0 3 - 1 7 0 6 6 b r a g a g n o l on ，r o d r i g u e z - a m a y adba v a l i a o c o m p a r a t i v ad et r a e sm i e t o d o sp a r a d e t e r m i n a c a od ec h o l e s t e r o le mg e m ad eo v o a r q u i v o sd eb i o l o g i a et e c h n o l o g i a , 1 9 9 3 ，3 6 ，2 3 7 - 2 5 1 7 b r a g a g n o l on ，r o d r i g u e z - a m a y adb c o m p a r i s o no ft h ec h o l e s t e r o lc o n t e n to f b r a z i l i a nc h i c k e na n dq u a i le g g s j o u r n a lo f f o o dc o m p o s i t i o na n da n a l y s i s ，2 0 0 3 ， 1 6 ：1 4 7 - 1 5 3 8 j i a n gz ，e n t o nm ，& s i m js c o m p a r i s o no f f o u td i f f e r e n tm e t h o d sf o re g gc h o l e s t e r o l d e t e r m i n a t i o n p o u l t r ys c i e n c e ，1 9 9 1 ，7 0 ，1 0 1 5 1 0 1 9 9 m a u r i c ed v ，l i g h t s c ysf ，h s e nkt ，g a y l o r dtg ，& r e d d yr v c h o l e s t e r o li n e g g sf r o md i f f e r e n ts p e c i e so f p o u l t r yd e t e r m i n e db yc a p i l l a r yg l c f o odc h e m i s t r y ， 1 9 9 4 ，5 0 3 6 7 _ - 3 7 2 1 0 p o r t e rfs u r a i ，b r i a nk s p e a k e ，n i c h o l a sa tw o o d c a r o t e n o i dd i s c r i m i n a t i o nb yt h e t h ea v i a ne m b r y o ：al e s s o nf r o mw i l db i r d s 叨c o m p a r a t i v eb i o c h e m i s t r ya n d p h y s i o l o g yp a r tb ，2 0 0 1 ，1 2 8 ：7 4 3 - 7 5 0 1 1 r a n g a c h a r t r s ，s e t t y s vs ，& h e d g e i lc h o l e s t e m lc o n t e n t i ne g g s o f c h i c k e n a n dd u c k j o u r n a lo f a g r i c u l t u r a ls c i e n c e ，1 9 7 0 ，4 ，1 4 6 1 4 8 4 6 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 1 2 s a i n zf ，g o n z a l c sm ，r o c ap ，& a l c m a n yp p h y $ i c a la n d c h e m i c a ln a t u r eo f e g g s f r o ms i xb r e e d so f d o m e s f i c f o w l b r i t i s hp o u l t r ys c i e n c e , 1 9 8 3 , 2 4 ，3 0 1 - 3 0 9 1 3 t h o m p s o nrha n dm c r o l agv as i m p l i f i e da l t e r n a t i v et ot h ea o a co f f i c i a l m e t h o df o rc h o l e s t e r o li n m u l t i c o m p o n e n tf o o d s 阴j o u r n a lo fa o a c i n t e r n a t i o n a l 1 9 9 3 ，7 6 ( 4 ) ：1 0 5 7 - 1 0 6 8 4 7 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 第三章天然红心鸭蛋蛋黄粉对断乳小鼠生长发育的影响 第一节前言 禽蛋是一类生理效价极高的营养食品。禽蛋富含蛋白质和脂肪，此外还含有丰 富的矿物质和维生素。除此之外，禽蛋还富含许多生理活性物质，如磷脂 ( p h o s p h o l i p i d ) 、溶菌酶( 1 y s o z y m e ) 、涎酸( s i a l i ca c i d ) 、蛋黄免疫球蛋白 ( i m m u n i t yg l o b i no fy o l k ) 等( 曹宗顺和卢风琦，1 9 9 5 , 迟玉杰和林淑英，2 0 0 2 ) 天然红心鸭蛋产自湖区放养的蛋鸭，由于湖区放养的蛋鸭食性广泛，除普通饲 料外，还可以采食虾，蟹及菹草等水生植物，蛋黄呈亮红至深红色。天然红心鸭蛋 不仅具有丰富的营养价值，而且其鲜艳的色泽深受国内外消费者的喜爱。本章实验 主要从天然红心鸭蛋对断乳小鼠的血象指数及对小鼠脏器的影响等方面来探讨天然 红心鸭蛋对小鼠生长发育的影响。 第二节材料及方法 2 1 实验材料 天然红心鸭蛋由仙桃食品公司提供，蛋黄的罗氏色度值( r c f ) 在1 5 度左右， 普通鸭蛋，购于湖北天门，蛋黄的罗氏色度值( r c f ) 小于5 度。 天然红心鸭蛋蛋黄粉和普通鸭蛋蛋黄粉均由第二章方法所制备。 2 2 化学试剂 氯化钠 硫代巴比妥酸 a s t 试剂盒 a l t 试剂盒 血肌肝试剂盒 肝素 总胆固醇酶法测定试剂盒 甘油三酯酶法测定试剂盒 a r 武汉江北化学试剂厂： ， 生化试剂上海试剂一厂 中生北控生物科技股份有限公司 中生北控生物科技股份有限公司 中生北控生物科技股份有限公司 生化试剂上海伯奥生物科技有限公司 上海科欣技术研究所 上海科欣技术研究所 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 高密度脂蛋白胆固醇酶法上海科欣技术研究所 测定试剂盒 苏木素 甲醛 a r 基础饲料 s c r v a 上海试剂二厂 湖北省医学科学院实验中心提供 2 3 实验仪器 m i n d r a yb c - 3 0 0 0 p l u sa u t oh e m a t o l o g ya n a l y z e深圳 紫外一可见分光光度计u v - v i s1 2 0 - 0 2 s h i m a d z uj a p a n 电子分析天平 s a r t o r i u sc o p e r a t i o n1 1 0 0 0 0g e r m a n y 电子天平 s a r t o r i u sc o p e r a t i o n1 1 0 0g e r m a n y 低温高速离心机s c r 2 0 b c h i t a c h i 全塑不锈钢循环水多用途真空泵s b z - 3上海沪西分析仪器厂 旋转蒸发器r e s 2 - 3上海沪西分析仪器厂 低速离心机l d 4 - 2 a 型北京医用离心机厂 电子恒温水浴锅国华仪器中国深圳 玻璃组织匀浆器 干燥箱c s i o i - i c 型重庆试验设备厂一分厂 冷冻干燥机a l p h a l 一2 g e r m a n 2 4 实验动物分组与喂养 实验动物为无特定病原体( s p e c e f i cp a t h o g e nf r e e ，s p f ) 级健康雄性昆明小 鼠( 合格证号为s c x k ( 鄂) 2 0 0 3 - 0 0 0 5 ) ，体重1 5 2g ，5 0 只预饲1 w 后，随机分 为5 组，( 1 ) 对照组，继续喂基础饲料( 2 ) 普通鸭蛋组，以1 3 9 k g d 剂量的普通鸭 蛋蛋黄粉加基础饲料混合后喂养小鼠( 3 ) 红心蛋黄i 组( 低剂量天然红心鸭蛋组) ， 以6 s g lk g d 剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉加基础饲料混合后喂养小鼠。( 4 ) 红心蛋 黄2 组( 中剂量天然红心鸭蛋组) ，以1 3 9 k g d 剂量的天然红心鸭蛋蛋黄粉加基础饲， 料混合后喂养小鼠( 5 ) 红心蛋黄3 组( 高剂量天然红心鸭蛋组) ，以1 9 5 9 k g d 剂 量的天然红心鸭蛋蛋黄粉加基础饲料混合后喂养小鼠。 每只小鼠每天5 9 饲料，连续给料5 w 后，进行实验 普通饲料组成( 以s o k g 饲料计算) ：玉米2 0 6 2 5 k g ，麸皮1 7 5 k g ，豆粕8 k g ，鱼 粉3 1 2 5 k g ，食盐0 1 2 5 k g ，贝粉0 7 5 k g ，微量元素5 0 9 ，维生素5 9 ，锌2 9 。 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 2 5 实验方法 2 5 1 观察小鼠生长情况及体重的变化 喂养中，观察小鼠活动的能力，并且每三天称量体重一次。 2 5 2 脏器重量及其指数的测定 然后处死小鼠，立即取出脏器用吸水纸吸去污血置于电子分析天平上称量 脏器的重量，脏器指数以脏器重量( m g ) 与体重( 1 0 9 ) 之比表示。 2 5 3 血细胞含量的测定 5 w 称重后，于小鼠尾静脉采血，在m i n d r a yb c - 3 0 0 0 p h sa u t oh e m a t o l o g y a n a l y z e ( 深圳) 上测定其血象指数。 2 5 4 心、肝、脾、肾病理切片观察 取出小鼠的心、肝、脾、肾后，吸去脏器表面的污血，剪取一部分脏器固定于1 0 福尔马林溶液中，h e 染色观察。 h e 染色方法：石蜡切片，厚度4 p m ，裱于干净载玻片上，6 0 c 烤片机上烤片2 h 二甲苯脱蜡2 次，每次1 5 m i n ，依次用无水乙醇，9 5 乙醇，8 0 乙醇，蒸馏水处理 至透明，苏木素染核胞5 m i n - l o m i n ，1 0 盐酸酒精分化，自来水冲1 5 m i n ( 返蓝) ， 树脂胶封片。在光学显微镜下观察。 2 5 5 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠生长发育中生化指标的影响 2 5 5 1 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠脑，肺、肝脏等器官过氧化脂质( l p 0 ) 的影 响 解剖小鼠后，分别取出脑、肺、肝脏，用0 9 生理盐水制成1 0 的匀浆液，然 后通过硫代巴比妥酸( t b a ) 法，在5 3 2 n m 处测定上清液中m d a 的含量，以丙二醛( m d a ) 的含量来表示组织的脂质过氧化程度。 2 5 5 2 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠肝、肾功能指标的影响 测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶( a l t ) 和天门冬氨酸氨基转移酶( a s t ) 活性 和血肌肝( c r ) 含量，试剂盒测定。 2 5 5 3 天然红心鸭蛋蛋黄粉对小鼠血清脂质的影响 测定小鼠血清甘油三酯( t g ) 、总胆固醇( t c ) 和高密度脂蛋白一胆固醇( h d l - o 的含量，试剂盒测定。按公式l d l - = t c 一( 1 5 t g + h d l c ) 计算低密度脂蛋白一 胆固醇( l d l - c ) 的含量( 张炜平，2 0 0 4 ) 。 天然红心鸭蛋蛋黄粉的生物活性及作用机理研究 2 6 统计学方法 采用善s 表示相关指标，应用t 检验进行统计学处理。 第三节结果及分析 3 1 一般观察和大体解剖观察 小鼠在饲养过程中无异常现象，进食、饮水，粪便和活动等情况均正常。动物 解剖后，观察各脏器情况，没有