（分析化学专业论文）基于铁氰化钾的微生物传感技术的研究.pdf

l 、 i ad i s s e r t a t i o ni na n a l y t i c a lc h e m i s t r y 删| i f i | ! l i f 洲i j | i 舢 y 1717 2 8 2 t h er e s e a r c ho nf e r r i c y a n i d e - m e d i a t e d t e c h n i q u e o fm i c r o b i a ls e n s o r b yc h a n gl i u s u p e r v i s o r ：p r o f e s s o rt i n gs u n p r o f e s s o rs h a o j u nd o n g ( t w a s ) n o r t h e a s t e r nu n i v e r s i t y n o v 1 l t h ，2 0 0 9 ，一 p l 独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是在导师的指导下完成的。论文中取得 的研究成果除加以标注和致谢的地方外，不包含其他人己经发表或撰写过 的研究成果，也不包括本人为获得其他学位而使用过的材料。与我一同工 作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示 谢意。 学位论文作者签名：剖怕 日 期：捌罗i1 i ) 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者和指导教师完全了解东北大学有关保留、使用学位论 文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和 磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人同意东北大学可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索、交流。 作者和导师同意网上交流的时间为作者获得学位后： 半年口一年口一年半口两 裳堡兽銮作者签名：副畅 答字日期：加u 肌f r 。 o 已t 7 fi ，i 导师签名： 签字日期： ，一 一 东北人学博士学位论文 摘要 基于铁氰化钾的微生物传感技术的研究 摘要 本文将铁氰化钾与微生物传感技术有效结合，研究了以此为基础的全细胞型传感 器在快速生化耗氧量( b i o c h e m i c a lo x y g e nd e m a n d ，b o d ) 及毒性( t o x i c i t y ) 检测方面的应 用。结果显示，以铁氰化钾为媒介体( f e r r i c y a n i d e m e d i a t e d ，f m ) 的b o d ( f m b o d ) 技术 可有效地减少有机物降解的时间。并且当该技术采用标准曲线法作为内源呼吸的校正 时，与以前报道的结果相比较，其线性范围及稳定性均有提高。以铁氰化钾为媒介体 的毒性( f m t o x ) 检测技术对多种毒物均有灵敏响应，可作为国际标准化组织( i s o ) 规定的 标准方法和中华人民共和国国家标准法( g b ) 的有效补充，应用于一些不适于采用光学 方法测试的毒性分析领域。具体的工作内容分章介绍如下： 第一章主要介绍了水体污染的定义、来源、特点及危害等，并且简单地归纳了可 应用于水体监测的物理、化学、物理化学及生物学检测方法的优缺点。着重介绍了以 微生物作为分子识别元件的生物传感器的一些相关知识，特别是以此为基础发展起来 的f m 型全细胞传感器的发展历史、构造和原理及其应用。 第二章主要介绍了可应用于水体中的可生物降解的有机污染物检测的f m b o d 技 术的原理及特点。考虑到微生物自身的特性，测试过程中，我们首次提出了采用标准 曲线法替代传统的空白溶液法校j 下微生物的内源呼吸。结果证明了标准曲线法可切实、 有效地减少实验误差，可替代传统的内源校正方法广泛应用于快速b o d 检测。 第三章的研究内容划分为两大部分。第一部分为f m t o x 的前期准备工作。主要讨 论了不同浓度的铁氰化钾对模型微生物e s c h e r i c h i ac o l i 限c o l i ) 的毒性及其损伤机理。 研究表明，高浓度的铁氰化钾不仅可以抑制ec o l i 的呼吸作用，还会损伤细胞的形态。 但是在6 0r a i n 内，铁氰化钾的浓度 2 - n p 3 n p 苯酚。该顺序与m i c r o t o x 及小鼠的毒性排序基本一致。最后，本章 对苯酚和n n p 混合物的毒性进行了详细的考察，其结果显示为：f m t o x 对苯酚和4 n p 、 2 - n p 和4 n p 的二元混合物及苯酚、2 - n p 和4 n p 的三元混合物的毒性均有灵敏响应， 相对应的i c 5 0 分别为1 6 1m e t e 、3 6 1m e d l 、1 0 3m g l ；其联合毒性作用类型分别为 加合型、加合型及协同型。但是f m t o x 对苯酚及苯酚和2 - n p 的二元混合物的毒性响 应迟钝，其i c 5 0 分别为2 9 1 4m g l 、2 8 0 8m g l ；其二元混合物的联合毒性作用类型 为拮抗型。确定的影响因素除了待测毒物的自身性质及所采用体系的差异以外，还包 括了苯酚类物质对电极的污染及磷酸缓冲溶液对n n p 的化学性质的影响。 最后我们给出了本论文的总结论：基于媒介体的生物学检测技术由于其优势明显 而在环境监测领域中被广泛研究，但其研究和应用多处于初级阶段，尚需要我们更多 的努力使其优势充分发挥，并早日应用于实际工作中去。 关键词：基于铁氰化钾的微生物传感器；生化耗氧量；毒性；微电极阵列；ec o l i ； p f l u o r e s c e n s 东北大学博士学位论文 a b s t r a c t t h er e s e a r c ho n f e r r i c y a n i d e - m e d i a t e dt e c h n i q u eo f m i c r o b i a ls e n s o r a bs t r a c t t h ed i s s e r t a t i o ni sf o c u s e do nt h ea p p l i c a t i o no ff e r r i c y a n i d e m e d i a t e d ( f m ) t e c h n i q u e c o m b i n e dw i t hw h o l e - c e l lb i o s e n s o ri nt h er e s e a r c ho fb i o c h e m i c a lo x y g e nd e m a n d ( b o d ) a n dt o x i c i t y r e s u l t ss h o w e dt h a tf m b o dc o u l dr e d u c et h eb i o d e g r a d a b l et i m eo fo r g a n i c c o m p o u n d se f f e c t i v e l ya n dt h ee m p l o y e ds t a n d a r dc u r v em e t h o de n h a n c e dl i n e a rr a n g ea n d s t a b i l i t yc o m p a r e dt op r e v i o u sr e p o r t s t h ef mt e c h n i q u eo ft o x i cd e t e c t i o n ( f m t o x ) e x h i b i t e ds e n s i t i v er e s p o n s e st od i f f e r e n tk i n d so ft o x i c a n t ，w h i c hc o u l db eu s e da sa n e f f e c t i v es u p p l e m e n tt oi n t e r n a t i o n a lo r g a n i z a t i o nf o rs t a n d a r d i z a t i o n ( i s o ) a n dn a t i o n a l s t a n d a r do fc h i n a ( g b ) o f o p t i c a lm e t h o d d e t a i l e dw o r kw i l lb ep r e s e n t e da sf o l l o w s ： i nc h a p t e rlt h ed e f i n i t i o n ，s o u l c e ，c h a r a c t e r i s t i ca n dh a r mo fw a t e rp o l l u t i o nw e r e i n t r o d u c e d ，a n dt h ec h a r a c t e r so fp h y s i c a l ，c h e m i c a l ，p h y s i c a l c h e m i c a la n db i o l o g i c a l m e t h o d so fw a t e rm o n i t o r i n gw e r es u m m a r i z e d i tw a sf o c u s e do nt h ek n o w l e d g eo f w h o l e - e e l lb i o s e n s o rt h a ti n c l u d e dm i c r o o r g a n i s m su s e da sr e c o g n i s e ra n dh o wt or e f l e c tt h e i n f l u e n c e so fp o l l u t a n t sb yc e l la c t i v i t i e so fm e t a b o l i t e s e s p e c i a l l y , t h ed e v e l o p i n gh i s t o r y , c o n s t r u c t i o na n d p r i n c i p l eo fb i o s e n s o rb a s e do nf mt e c h n i q u eh a v eb e e nr e v i e w e d i nc h a p t e r2w ei n t r o d u c e dt h ep r i n c i p l ea n de x c e l l e n c e so ff m b o dt e c h n i q u et h a tw a s e m p l o y e dt o d e t e c tt h eb i o d e g r a d a b l eo r g a n i cp o l l u t a n t si nw a t e r sa n dw a s t ew a t e r s c o n s i d e r i n gt h ec h a r a c t e ro fm i c r o o r g a n i s m s ，w eh a v ed e v e l o p e dan e w ，r a t i o n a la n d a c c u r a t em e t h o d ，n a m e das t a n d a r dc u r v em e t h o df o re n d o g e n o u sc o n t r o li n s t e a do ft h e b l a n ks o l u t i o nm e t h o d t h er u s u l t sf u r t h e ri n d i c a t e dt h a tt h es t a n d a r dc u r v em e t h o dc o u l d r e d u c et h ee r r o r si n d u c e db yt h et r a d i t i o n a le n d o g e n o u sc o n t r 0 1 c o n s e q u e n t l y ，i tw i l lb ea g o o da l t e r n a t i v et ob ee x t e n s i v e l ye m p l o y e di no t h e rr a p i db o dm e t h o d c h a p t e r3c a nb ed i v i d e di n t ot w op a r t s p a r t1w a sp r e p a r i n gw o r ka b o u tf m t o x ，w h i c h m a i n l yi n c l u d e di n v e s t i g a t i o n so ft o x i c i t ya n dp r i n c i p l e so fd a m a g eo ff e r r i c y a n i d eo nt h e m o d e lm i c r o o r g a n i s m ，e s c h e r i c h i ac o l i ( e c o l i ) t h er e s u l t ss h o w e dt h a tn o t o n l y r e s p i r a t i o n c o u l db ei n h i b i t e db u ta l s o m o r p h o l o g yc o u l d b e d e s t r o y e db yh i 曲 c o n c e n t r a t i o n so ff e r r i c y a n i d e h o w e v e r , n e g l i g i b l ee f f e c t sw e r eo b s e r v e dw h i l et h e c o n c e n t r a t i o n so ff e r r i c y a n i d ew e r eb e l o w5 0 0m m o l lw i t h i n6 0m i ni n c u b a t i o n f i n a l l y , w ec h o s e4 5 0m m o l lf e r r i c y a n i d ea st h ep r o p e rc o n c e n t r a i o ni nt h ef m t o xa s s a y s i nt h e p a r tu ，w ei n t r o d u c e dt h ep r i n c i p l eo ff m t o xf i r s t l y t h e nt h ei n f l u e n c e so fp h ，i n c u b a t i o n t i m ea n dt e m p e r a t u r eo nm i c r o o r g a n i s m sw e r ei n v e s t i g a t e d l a s tw ec o m b a i n e ds e n s i t i v e u l t r a m i c r o e l e c t r o d ea r r a y ( u m e a ) a n df m t o xt e c h n i q u et os t u d yt h et o x i c i t yo fd i f f e r e n t i v 东北大学博士学位论文 a b s t r a c t c h e m i c a l so nec o l ic a r e f u l l y 6 0m i ni n c u b a t e di n3 7o ca tp h7 0 ，t h eo b t a i n e d5 0 i n h i b i t i n gc o n c e n t r a t i o n ( i c 5 0 ) f o r3 , 5 d i c h l o r o p h e n o l ( d c p ) ，c n 。a n da s 2 0 3w e r e8 0m g l 1 ，4 9m g la n d18 3m g l ，r e s p e c t i v e l y h o w e v e r , m e t a li o n ss h o w e dn oo b v i o u st o x i c i t y o n 叵c o l ia se x p e c t e du s u a l l y i tw a sa t t r i b u t e dt oc e r t a i na n i o n sc o n t a i n e di ns a m p l e s ，s u c h a sp 0 4 3 ，c n 。a n do h ，w h i c hr e d u c e dh e a v ym e t a lc o n c e n t r a t i o n sb yc o m p l e x a t i o no r p r e c i p i t a t i o n i nc h a p t e r4w er e s e a r c h e dr e s p o n s e so fd i f f e r e n tm i c r o o r g a n i s m st od c pa n dc o n t i n u e d t oo p t i m i z ec o n d i t i o n so ff m t o xs y s t e mb a s e do nr u s u l t so b t a i n e da b o v e t h e nt h eo p t i m a l c o n d i t i o nw a se m p l o y e dt oe s t i m a t et h et o x i c i t yo f p h e n o la n dn - n i t r o p h e n o l ( ni sp o s i t i o no f n i t r y l ，n - n p ) p s e u c o m o n a sf l u o r e s c e n s 僻伽o r e s c e n s ) w a sm o r es e n s i t i v et od c pt h a n o t h e rm i c r o o r g a n i s m su s e d ，a n ds t a n d a r dg l u c o s e - g l u t a m i ca c i d ( g l u c o s e g l u t a m i c a c i d ， g g a ) s o l u t i o nc o u l de n h a n c ei t ss e n s i t i v i t ye f f e c t i v e l y h o w e v e r , a c t i v i t yo fpf l u o r e s c e n s d e c r e a s e do b v i o u s l yw h e ni ts u f f e r e d4hh a r v e s t i n gi n c u b a t i o n f i n a l l y , u n t r e a t e dp f l u o r e s c e n sw a su s e da st h em o d e lm i c r o o r g a n i s m ；i n c u b a t i o nt i m ew a s6 0m i n ；t e m p e r a t u r e o ft h i sa s s a yw a ss e ta t3 0o c t h eo b t a i n e di c 5 0f o r4 - n pw a s1 4 0m g l w h i c hw a ss a m e 舔t h er e s u l t so b t a i n e do fm i c r o t o x 固t h er e l a t i v et o x i c i t i e so fp h e n o la n dn n pf o rf m t o x a s s a y sw e r eo r d e r e da sf o l l o w s ： 4 - n p 2 一n p 3 - n p p h e n o l t h i so r d e rw a sv e r ys i m i l a rw i t ht h a to fm i c r o t o x a n dm i c ea s s a y s f u r t h e r m o r e w e i n v e s t i g a t e dt h et o x i c i t e so fm i x t u r e so fp h e n o la n dn n po npf l u o r e s c e n s 1 1 1 ef m t o x s y s t e ms h o w e ds e n s i t i v er e s p o n s et os o m em i x t u r e so ft w oc o m p o n e n t s ，s u c h 弱p h e n o la n d 4 - n p , 2 - n pa n d4 - n p , a n dt h e i ri c 5 0w e r e16 1m g la n d3 6 1m g l r e s p e c t i v e l y t h e c o m b i n a t i o ne f f e c t so fm i x t u r em e n t i o n e da b o v ew e r ea d d i t i v ee f f e c t s t h ei c 5 0o fm i x t u r e o fp h e n o l ，2 - n pa n d4 - n pw a so n l y10 3m g l ，a n di t sc o m b i n a t i o ne f f e c tw a ss y n e r g i s t i c e f f e c t p h e n o la n di t sm i x t u r eo f2 一n ph a dt h es l o wt o x i c i t i e s ，a n dt h e i ri c 5 0w e r e2 91 4 m g la n d2 8 0 8m g l ，r e s p e c t i v e l y t h ec o m b i n a t i o ne f f e c to fm i x t u r eo fp h e n o la n d2 - n p w a sa n t a g o n i s t i ce f f e c t t h ei n f l u e n c i n gf a c t o r so nt o x i c i t yo fp h e n o l sw e r ed i s c u s s e db a s e d o nt h ep r o p e r t i e so fc h e m i c a l s ，s y s t e mo ff m t o xe m p l o y e d ，e l e c t r o d ep a s s i v a t e db yp h e n o l s a n dt h ei n t e r a c t i o n sb e t w e e nt h ep h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o na n dn - n p w em a d et h et o t a l c o n c l u s i o na tt h ee n do ft h i sd i s s e r t a t i o n f mt e c h n i q u ec o m b i n e dw i t h b i o l o g yh a sb e e ne x t e n s i v e l yi n v e s t i g a t e di ne n v i r o n m e n t a lm o n i t o r i n gb e c a u s eo fi t sd i s t i n c t a d v a n t a g e s h o w e v e r , t h i st e c h n i q u ei ss t i l li ni t se a r l ys t a g eo fd e v e l o p m e n ta n da p p l i c a t i o n t h e r e f o r e ，m o r ee f f o r t sw i l lb en e e d e dt oe x p l o i ti t sa d v a n t a g e sa n dp r o m o t ei t sp r a c t i c a l a p p l i c a t i o n sa ss o o na sp o s s i b l e k e yw o r d s ：f e r r i c y a n i d e m e d i a t e dm i c r o b i a ls e n s o r ；b i o c h e m i c a lo x y g e nd e m a n d ；t o x i c i t y ；, u l t r a m i c r o e l e c t r o d ea r r a y ；e s c h e r i c h i ac o i l ；p s e u c o m o n a sf l u o r e s c e n s v 。 东北大学博十学位论文 目录 声明i 中文摘要n a bs t r a c t 缩写词一览表 第l 章文献综述l 1 1 水环境污染概述1 1 1 1 水资源危机l 1 1 2 水污染的定义2 1 1 3 水体污染及其特征。3 1 1 4 污水中主要化学污染物对环境及生物体的危害一3 1 2 环境污染分析与检测技术的发展趋势及意义5 1 3 水污染监测的非生物学技术一5 1 3 1 物理学手段5 1 3 2 化学手段6 1 3 3 物理化学手段7 1 4 生物学水污染分析与监测技术8 1 4 1 发展生物水体监测技术的意义8 1 4 2 传统的毒性检测方法8 1 4 2 1 基本概念8 1 4 2 2 毒性作用机理。l o 1 4 2 3 影响毒性作用的因素1 1 1 4 2 4 传统的生物水体毒性检测方法及其发展方向1 2 1 4 3 传统的水体微生物环境检测技术。1 5 1 4 3 1 传统的生物化学需氧量检测方法一1 5 1 4 3 2 传统的水质病原微生物污染监测方法1 5 1 5 生物传感器16 v l 东北大学博士学位论文 目录 1 5 1 技术开发背景1 6 1 5 2 生物传感器的概念、原理及特点1 7 1 5 3 微生物传感器一18 1 5 3 1 概述1 8 1 5 3 2 微生物1 8 1 5 3 3 微生物固定化技术1 9 1 5 3 4 微生物传感器的工作原理2 1 1 5 3 5 微生物传感器的应用概况2 3 1 5 4 基于铁氰化钾的微生物传感器概述2 3 1 5 4 1 铁氰化钾型微生物传感器的发展及应用2 3 1 5 4 2f m b o d 传感器2 7 1 5 4 3 基于f m 的毒性检测”2 7 1 6 选题意义及研究内容2 8 参考文献2 9 第2 章基于铁氰化钾的快速生化需氧量( f m b o d ) 检测”4 2 2 1 引言4 2 2 2 实验部分4 4 2 2 1 材料和试剂4 4 2 2 2 准备微生物4 5 2 2 3 基于媒介体及底物的微生物培养4 5 2 2 4 分析方法4 5 2 2 5 内源呼吸测定4 5 2 2 6 污水水样的f m b o d 5 测定4 6 2 - 3 结果与讨论4 7 2 3 1 方法的可行性分析4 7 2 3 2 对比不同的校正方法对6 种纯e o m s 的影响一4 7 2 3 3 采用不同的内源校正方法校正标准混合物4 9 2 3 4 标准有机物的线性范围5 0 2 3 5 实际水样的f m b o d 与b o d 5 的相关性5 2 v i i 东北大学博士学位论文 目录 2 4 结j 沧5 3 参考文献5 5 第3 章基于铁氰化钾的微生物毒性检测技术的可行性分析5 9 3 1 人工媒介体一铁氰化钾的毒性实验5 9 3 1 1 引言5 9 3 1 2 实验部分6 0 3 1 2 1 材料和试剂6 0 3 1 2 2 微生物培养6 0 3 1 2 3 光密度法测定微生物浓度6 l 3 1 2 4 采用f c m 检测细胞的活性6 l 3 1 2 5 细胞的形态研究6 1 3 1 2 6 受污染细胞的呼吸速度及再繁殖能力的研究6 1 3 1 3 结果与讨论6 2 3 1 3 1 经铁氰化钾处理后的细胞的生长速度及活性6 2 3 1 3 2 受损细胞的形态学表征6 3 3 1 3 3 受污染细胞的r t 检测6 5 3 1 4 小结6 6 3 2 基于媒介体的毒性实验6 7 3 2 1 引言6 7 3 2 2 实验部分6 8 3 2 2 1 材料和试剂6 8 3 2 2 2 培养微生物6 9 3 2 2 3 基于媒介体、底物和毒物的细胞培养6 9 3 2 2 4 考察f m t o x 体系的所有因素对c u 2 + 和h 孑+ 毒性的影响“6 9 3 2 2 5 电化学检测7 0 3 2 2 6 信号处理7 0 3 2 3 结果与讨论7 l 3 2 3 1 电化学检测的可行性分析7 1 3 2 3 2p h 、培养时间和温度的影响7 2 v i i i - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。 东北大学博士学位论文目录 3 2 3 3c n 。和a s 2 0 3 对ec o l i 的毒性7 4 3 2 3 4 金属离子对ec o l i 的毒性及其影响因素7 6 3 2 4 小结7 8 3 3 本章结论7 9 参考文献8 0 第4 章苯酚和硝基苯酚类物质的毒性检测8 8 4 1 引言8 8 4 2 实验部分9 0 4 2 1 材料和试剂”9 0 4 2 2 微生物的保藏及培养9 0 4 2 3 微生物生长曲线的测定9 0 4 2 4 优化f m t o x 实验条件9 2 4 2 4 1 菌种筛选”9 2 4 2 4 2g g a 对f m t o x 灵敏度的影响9 2 4 2 4 3 饥饿培养对f m t o x 灵敏度的影响9 2 4 2 5 基于f m t o x 的苯酚及n n p 的毒性检测9 3 4 2 6 考察f m t o x 体系中可能影响苯酚及n n p 毒性的因素9 3 4 2 6 1 考察苯酚的电活性及其对电极的钝化作用9 3 4 2 6 2 考察p b s 和通氮对苯酚及n n p 性质的影响9 3 4 3 结果与讨论9 3 4 3 1 筛选对d c p 毒性反应最灵敏的菌种9 3 4 3 2 标准g g a 溶液对体系灵敏度的影响9 7 4 3 3 饥饿培养对体系灵敏度的影响1 0 1 4 3 4 基于f m 体系的苯酚及n - n p 的毒性检测1 0 1 4 3 5 考察f m t o x 体系中可能对苯酚及n n p 毒性产生影响的因素1 0 3 4 3 5 1 苯酚的电活性及电极的钝化1 0 3 4 3 5 2p b s 对苯酚及n - n p 化学性质的影响一1 0 4 4 3 5 3 通氮对苯酚及n n p 浓度的影响1 0 6 _ 4 3 6 采用f m t o x 体系检测苯酚及n n p 的混合物的毒性1 0 6 i x x 东北大学博士学位论文 关键词缩写一览表 缩写词一览表 l i - l - - - _ a l i _ , _ i _ - _ _ l - - _ l l _ - _ _ _ - _ - i - _ - - _ l l 一一_ _ a b b r e v i a t i o n s f u l ln a m e 全称 b o d b i o c h e m i c a lo x y g e nd e m a n d 一一至蓓裤匡一 f m f e r r i c y a n i d e m e d i a t e d f m t o x i s o g b u m 匝a d c p i c 5 0 n - n p d o a p h a g g a e o m s b s m e c s c m o e c d p b s r p m o d f c m a f m r t p c i n t e r n a t i o n a lo r g a n i z a t i o nf o r s t a n d a r d i z a t i o n u l t r a m i c r o e l e c t r o d ea r r a y 3 , 5 - d i c h l o r o p h e n o l 5 0 ( m e d i a n ) i n h i b i t i n g c o n c e n t r a t i o n n - n i t r o p h e n o l d i s s o l v e do x y g e n t h ea m e r i c a np u b l i ch e a l t h a s s o c i a t i o n g l u c o s e g l u t a m i ca c i d e x o g e n o u so r g a n i cm a t e r i a l s b l a n ks o l u t i o nm e t h o d e n d o g e n o u sc o n t r o l s t a n d a r dc u r v em e t h o d o r g a n i z a t i o nf o re c o n o m i c c o o p e r a t i o na n dd e v e l o p m e n t p h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o n r e v o l u t i o n sp e rm i n u t e o p t i c a ld e n s i t y f l o wc y t o m e t r y a t o m i cf o r c em i c r o s c o p y r e c o v e r yt e s t p o s i t i v ec o n t r o l 以铁氰化钾为媒介体 以铁氰化钾为媒介体的 毒性检测 国际标准化组织 中华人民共和国国家标准 微阵列电极 3 ，5 二氯苯酚 半数抑制率 n 稍基苯酚 ( n 代表硝基取代物的位置) 溶解氧 美国公共健康协会 葡萄糖谷氨酸 外源有机物 空白溶液法 内源控制 标准曲线法 经济合作与