实验二 影响酶促反应的因素ppt课件.ppt

实验二温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响及特异性,1,一、实验目的,1通过实验，观察温度、pH值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。2能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。,2,二、实验原理,利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pH、激动剂和抑制剂对酶的活性影响。,3,二、实验原理,在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适温度在37左右。温度过高，酶变性失活，酶促反应速度下降，甚至停止。每种酶都有最适的pH值，在最适pH值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pH均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适pH值为6.8。氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用。,4,三、实验材料,1.1%淀粉溶液取可溶性淀粉1g,加5ml蒸馏水,调成糊状,再加80ml蒸馏水,加热并不断搅拌,使其充分溶解,放冷,最后用蒸馏水稀释至100ml。2.pH3.0缓冲液取0.2mmol/LNa2HPO4溶液205ml，0.1mol/L柠檬酸溶液795ml,混合即成.3.pH6.8缓冲液取0.2mmol/LNa2HPO4溶液772ml，0.1mol/L柠檬酸溶液228ml,混合即成.4.pH8.0缓冲液取0.2mmol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L柠檬酸溶液28ml混合即成.,5,5.0.9%NaCl溶液6.1%CuSO4溶液7.碘液9.试管架11.试管夹12.滴管13.白瓷板14.恒温水浴箱15.电炉16.烧杯,6,【注意事项】1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应结果2.各管反应时间应严格控制，保证一致。,7,四、实验方法,稀释唾液制备用水漱口，含蒸馏水咀嚼2分钟后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量）煮沸唾液的制备取上述唾液约5ml，放入沸水中煮沸5分钟，取出备用。,8,（一）温度对酶促反应速度的影响,9,取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化(切记勿摇动)。摇匀再观察。,10,（二）pH对酶促反应速度的影响,11,将各管混匀，放进37水浴箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化。,12,（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响,13,将各管摇匀，放进37水浴箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀，观察各管颜色变化。,激活剂与抑制剂,14,激活剂与抑制剂,五、思考题1.什么是酶的最适温度？2.什么是酶的最适pH?3.激活剂与抑制剂对酶活性影响实验中设置第四管的作用是什么？4.什么是酶的特异性？,15,（四）酶的专一性对酶促