病实验室检测PPT课件.ppt

,性病实验室检测,1,性病实验室在性病防治中的作用,效果评价,临床服务,疫情监测,科学研究,实验室诊断,2,性病实验室在性病疫情监测中的任务,专项性病患病率调查,疾病准确诊断梅毒淋病沙眼衣原体感染,淋球菌耐药监测分离株收集MIC检测,实验室质量控制,实验室检测,3,一、梅毒,4,概述-梅毒病原体,小而纤细的螺旋状微生物长520m，粗细0.2m有612个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕行动缓慢而有规律-围绕其长轴旋转中前后移动-伸缩其圈间之距离而移动-全身弯曲如蛇行,5,检测方法-病原体检查,梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法。诊断一期梅毒、二期梅毒时，可取患者的渗出液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下观察螺旋体的特征性形态和运动方式.病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法,6,检测方法-病原体检查的临床意义,暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单克隆抗体等检查方法，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。暗视野显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一。螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性.,7,8,暗视野显微镜检查,9,镀银染色,10,检测方法-血清学检测,根据检测所用抗原不同，临床血清试验分为两大类：1.非梅毒螺旋体抗原血清试验2.梅毒螺旋体抗原血清试验,11,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都一样,其基本成分是心磷脂、卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见敏感性和特异性都基本相似,12,非梅毒螺旋体血清试验原理示意图,13,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,性病研究实验室试验（VDRL）不加热血清反应素试验（USR）血浆反应素环状卡片试验（RPR）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）,14,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,RPR试验特点：在USR试剂成分的基础上加入黑色碳颗粒作为沉淀的指示物用白色的硬纸片替代玻片血清不需要灭活不需要显微镜观测结果可作定量试验有现成的试剂盒携带方便操作简单价格便宜试验的结果可长期保存,15,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,甲苯胺红试验(TRUST)特点：其原理和成分与RPR试验相同用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒其余的特点均与RPR相同,16,检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,17,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点,前带现象指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。,18,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原体反应。梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TP-PA）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA-TP）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB-Test）,19,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,TPPATPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。,20,+,Sheepredcell,T.pallidum,+,Sensitisedcell,Sensitisedcell,SpecificAntibody,Hemagglutination,TPPA/TPHA,21,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,FTA-ABS其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。,22,检测方法-梅毒螺旋体血清试验的临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA试验仍可阳性，故TPPA试验阳性不能作为疗效观察的指标。TPPA阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。,23,非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图,早期,晚期,一期,二期,早期潜伏,晚期潜伏,三期,治疗前治疗后,阳性,阴性,24,梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图,早期,一期,二期,早期潜伏,晚期,晚期潜伏,三期,治疗前治疗后,阳性,阴性,25,梅毒血清学试验结果的临床意义总汇,USRTPHA意义RPRTPPAVDRLFTA-ABS_排除梅毒一期梅毒的早期艾滋病患者合并梅毒+现症梅毒(梅毒孕妇所生的婴儿除外)+-生物学假阳性-+早期梅毒经治疗后前带现象,26,二、淋病,27,概况-病原学,淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae,简称淋球菌)引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病.淋球菌为革兰阴性双球菌，大小约0.60.8m。通常成对生长，两菌接触面平坦。,28,淋病的实验室诊断方法,直接显微镜检查；分离培养淋球菌；非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原或DNA（EIA,PCR/LCR）,29,直接显微镜检查,染色方法:革兰染液美兰染液姬姆萨染液荧光抗体革兰染色为一传统方法，因简便、快捷及价廉、仍然为最广泛采用的方法。革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。,30,革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌,31,革兰染色：多形核白细胞增多,32,美兰染色,33,直接显微镜检查的临床意义,男性淋菌性尿道炎的尿道标本敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时敏感性仅4070%。不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。,34,淋球菌培养,培养法为诊断淋病的金标准.对女性淋病的确诊应做淋球菌培养从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。培养的敏感性81100%。培养的优点有：特异性极高（100%）；可发现无症状淋球菌感染患者；可确诊儿童性虐待；可用于进一步作药敏试验；可用于治疗后的判愈试验。,35,淋球菌培养,培养条件：3536，含5%10%CO2，湿润（70%湿度）的环境。CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。培养时间：2448小时,36,淋球菌培养-培养条件,37,淋球菌培养-观察结果,培养24小时后检查平皿，此时没有菌生长的平皿应继续培养至48小时，仍无菌生长才可丢弃，作出淋球菌培养阴性的报告。对选择性培养基上分离的直径在0.51mm，无色、灰白色的半透明菌落应作进一步鉴定。,38,淋球菌培养-观察结果,39,淋球菌培养-淋球菌的初步鉴定,初步鉴定淋球菌的主要依据菌落特征氧化酶试验革兰染色,40,淋球菌的鉴定特征,41,淋球菌氧化酶阳性,42,生殖道沙眼衣原体感染,43,生殖道沙眼衣原体感染-病原体,革兰阴性、专性细胞内寄生的微生物衣原体有特殊的发育周期,可见2种不同的结构原体：感染型，较小，呈球形始体：增殖型，大，呈圆形或卵圆形,44,沙眼衣原体感染-实验室检测,细胞培养抗原检测试验快速抗原试验核酸扩增检测(NAAT)法,45,细胞培养,原理：沙眼衣原体专性细胞内寄生，将其接种于易于其感染的敏感细胞，在适宜培养条件下，可在细胞中形成胞浆内包涵体，染色后镜检可见。方法：McCoy细胞或Hela229细胞单层包被96孔微量板中小圆盖玻片；标本接种；培养。,46,衣原体的培养,评价敏感性7080特异性100缺点费时（需35天），费力，技术要求高不宜作为临床常规检查不宜用于大规模的筛查和流行病学调查,47,直接免疫荧光法,原理：衣原体Ag+荧光素标记的单克隆Ab评价敏感性70%90%特异性83%99%由于有可能将某些发光颗粒(白细胞、上皮细胞、色素颗粒)、细菌和酵母菌误认为沙眼衣原体，因此此法对于实验人员的技术水平要求较高,48,酶联免疫吸附试验,评价敏感性和特异性与直接免疫荧光法相似敏感性：7997高特异性:9799高试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故,49,抗原快速检测,试剂盒如ClearviewChlamydia（C-C），即立明试验，为乳胶免疫扩散法。优点简易，方便，快速，尤其适用于基层单位缺点标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果,50,核酸扩增检测,核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。方法包括聚合酶链反应（PCR）连接酶链反应（LCR）等温链置换扩增技术（SDA）转录介导扩增技术（TMA）核酸序列扩增技术（NASBA）实时荧光PCR等。,51,核酸扩增检测,核算扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。核算扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。,52,生殖器疱疹,53,实验室诊断的必要性,HSV实验室诊断的必要性生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，临床诊断的准确性不足50%70%，常常需要通过实验室检测手段来证实亚临床感染:孕妇、性伴的检测等进行HSV分型的必要性HSV-2是该病的主要病原体，但近年来HSV-1所致生殖器感染正在增多，约占该病的10%40%两型HSV感染的预后(复发性与复发频率)不同,54,实验室诊断方法分类,病原学检测病毒检测抗原检测DNA检测血清学检测,55,1细胞学检查,HSV感染细胞后,可使细胞产生特征性的病变。取疱液或溃疡渗液涂片，在显微镜下观察细胞的变化，同时观察病毒包涵体，有助于诊断。,56,2直接免疫荧光法,直接免疫荧光法检测简单，阳性结果为上皮细胞的浆和细胞核内可见亮绿色的荧光。目前，国外有疱疹病毒分型的单克隆抗体试剂供应，可用于病毒细胞培养鉴定和临床标本检测。,57,3抗原酶联免疫试验,酶联免疫诊断试剂盒可检测水泡、溃疡和痂皮中的疱疹病毒。本法与细胞培养比较，敏感性为85.6，特异性为97.8。本法的缺点是疱疹病毒不能分型。,58,4.核酸扩增试验,实时荧光PCR检测PCR反应时加入一对引物和一个与PCR模板特异性杂交的寡核苷酸荧光探针，探针的5和3端分别标记了一个荧光报告基团（R基团）和一个荧光淬灭基团（Q基团）。探针完整时，R基团发射的荧光信号被Q基团吸收，即PCR反应前荧光探针不发荧光；PCR扩增过程中，使R基团和Q基团分离，Q基团对R基团的淬灭作用消失，荧光监测系统就可接收到R基团的荧光信号。每完成一次扩增，就有一个荧光分子形成，通过自动化的荧光检测仪进行实时荧光检测。,59,5.细胞培养法,1.细胞培养是HSV检测的“金标准”。2.用免疫荧光等方法对HSV进行鉴定和分型。3.选择敏感细胞株系，为活力强的幼龄细胞。4.标本取材后尽快接种(24h)，-70。5.注意其他病毒（水痘-带状疱疹病毒）也可引起类似的细胞病变。需鉴定。,60,6.血清学检测,1.血清学检测主要采用HSV的特异性的糖蛋白。2.可检测并区分血清中的抗HSV1和HSV2型抗体。3.检测抗HSV抗体的血清试验可用于证实既往HSV的感染。4.主要用于回顾原发性感染的诊断，对恢复期或复发性生殖器疱疹的意义不大。,61,尖锐湿疣的实验室检查,62,尖锐湿疣的实验室诊断,主要有二大类1.