（分析化学专业论文）发光分析在药物检测中的应用研究.pdf

河南大学分析化学专业2 0 0 1 级硕士学位论文刘 彼 中 文 摘 要 发光分析是分子发光光谱分析的简称，它主要包括化学发光分析 ( 包括生物 发光分析) ，分子荧光和磷光三大部分。 化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射 ( 化学发光)确定物质含量的一 种痕量分析方法。1 8 7 7年， r a d z i s z e w s k i 发现在碱性介质中，洛粉碱与氧发生化 学反应产生一种绿色的光，这是首次利用合成化合物观察到的化学发光现象。它 包括气相、火焰和液相化学发光三种类型。化学发光分析具有灵敏度高 ( 检测限 可 达1 0 - 12 - 1 0 m o 11 l ) 、 线 性 范 围 宽c 3 - 6 个 数 量 级) 及 仪器 设 备 简 单 便 宜 等 优 点 。 由 于化学发光分析具有上述的 优点， 它在痕量分析、环境科学、生命科学及临床 医学上得到广泛应用。 由 第一电子激发单重态所产生的辐射跃迁而伴随的发光称为荧光，它是一种 光致发光现象。基于对化合物的荧光性质测量而建立起来的分析方法称为分子荧 光光谱法。自 从1 8 6 7 年g o p p e l s r o d e r 进行历史上首次的荧光分析工作后，经过一 百多年的发展，除常规的方法，如通过化学反应将非荧光物质转换为适合于测定 的荧光物质、荧光淬灭以及能量转移外，随着激光、计算机和电子学的新成就等 一些新的科学技术的引入，同步荧光、导数荧光、时间分辨荧光、荧光偏振、荧 光免疫、低温荧光、固体表面荧光等诸多新方法以及荧光反应速率法、三维荧光 光谱技术和荧光光纤化学传感器等得到了很大的发展。如今，荧光分析法在生物 反应器控制、生物传感器、 药物监测、 生化分析以及复杂体系多组分同时分 析中 受到人们的广泛关注并成为一种重要而有效的发光分析技术。 本研究工作中， 主要对荧光分析和化学发光分析在药物中的应用进行了研究。 各项研究工作简述如下: 一、头抱曲 松钠的流动注射化学发光抑制法测定 基于叮咤橙在氢氧化钠介质中，能被高锰酸钾氧化产生较强的化学发光，头 中 文 摘 要 抱曲松钠能强烈抑制其化学发光， 建立了高锰酸钾一 叮pig 橙一 头抱曲松钠化学发光抑 制测定头抱曲 松钠的方法;头抱曲 松钠的质量浓度与化学发光强度在2 -2 0 m g / l 范围内 呈良 好的线性关系， 方法检出限为8 u g / l ， 对1 0 m g / l 头抱曲 松钠试液连 续进行1 1 次测定的相对标准偏差为3 . 1 %。 方法用于头抱曲松钠针剂测定， 取得了 满意的结果。 二、流动注射化学发光法测定甲 氧苇氨嗜吮 本文基于荧光染料毗罗红 g ( p y r o n i n e ) 在硫酸介质中，能被高锰酸钾氧化 产生较强化学发光，甲氧节氨咯陡加入能增强化学发光，建立了高锰酸钾一 毗罗红 g 一 甲氧节氨p t 陡化学发光体系测定甲氧节氨p a l pt的新方法。甲氧节氨iq的浓度 与 化 学 发 光强 度在l o x 1 0 4 g / m l - 3 .o x l vg / m l 范围 内 呈良 好的 线 性关 系， 方 法 的 检出 限 为3 .4 x 1 0 -9 g / m l ， 对5 .0 x 1 0 -5 咖l甲 氧 节 氨 咯 咤 试 液 进 行1 1 次 测 定 的 相对标准偏差为 2 .6 %。该法己用于甲氧节氨a - wo 片的测定，结果与药典法基本一 致。 三、流动注射化学发光抑制法测定毗罗昔康 本文基于叮睫橙在氢氧化钠介质中，能被高锰酸钾氧化产生较强的化学发光， 毗罗昔康能强烈抑制其化学发光， 建立了高锰酸钾一 叮陡橙一 毗罗昔康化学发光抑制 测定毗罗昔康的新方法。毗罗昔康的 浓度与化学发光强度在1 . 0 x 1 0 - -7 .o x 1 0 g /m l 浓 度范围内 呈良 好的 线 性关系， 方法 检出 限 为4 .5 x 1 0 -馆 /m l ， 对l o x 1 0 s g / m l 毗罗 昔 康试 液连 续进 行6 次 测 定的 相 对 标准 偏 差为3 .6 % . 四、巴比妥的流动注射化学发光法测定 本文基于过氧化氢和次氯酸钠在碱性介质中协同氧化巴比妥产生化学发光， 建立了 化学发光测定巴比妥的新方法。巴比妥的浓度在 7 . 0 x 1 0 - 5一 5 . 0 x 1 0 -3 m o l / l 范围内 与化学发光强 度呈良 好的线性关系， 检出限为4 . 6 x 1 0 - 7 m o t / l 。 对1 .0 x 1 0 - m o l / l 巴比 妥试液进行6 次平行测定的相对标准偏差为1 .2 3 % . 五、荧光衍生法测定构椽酸喷托维林的含量 采用衍生化反应，建立了荧光分光光度法测定构椽酸喷托维林的新方法，并 河南大学分析化学专业2 0 0 1 级硕士学位论文刘 波 对影响荧光强度的衍生体系、反应温度、反应时间、产物稳定性等进行了研究。 实验表明在激发波长和发射波长分别为3 6 7 。 和4 5 7 n m下测得荧光强度与其浓度 在8 .0 x 1 0 2 -1 .0 x 1 0 -4 g / m l范围 内 呈良 好的 线 性关 系， 并 对1 .0 x 1 0 -6 g / m l 构 栋 酸喷托维林溶液进行6 次平行测定的相对标准偏差为。 . 3 1 %，检出限达 1 . 5 x l 0 -s g /m l 。 本 法已 用于 构 椽酸 喷 托维 林 片 剂 含量的 测定， 结果 与 药典 法 测 得 值 相符。 六、流动注射荧光法测定替硝哇 采用铁一冰醋酸还原体系，将替硝哇分子中的硝基还原为氨基后， 测其含量， 据此建立了替硝哇的荧光分析法， 在激发波长3 6 0 n m，发射波长4 2 0 m n 处测定其 荧光 强度， 替硝啤浓度在4 .o x 1 护m o l / l - 4 .o x 1 0 -4 m o l / l范围内与 其荧光强 度呈 良 好的线性关系，本法已 用于替硝哇片剂和替硝啤葡萄糖注射液测定，结果与药 典法基本一致。 七、 流动注射荧光法测定奥硝哇 采用铁一冰醋酸还原体系， 将奥硝哇分子中的硝基还原为氨基后， 测其含量， 据此建立了奥硝哩的荧光分析法，在激发波长 3 5 5 n m，发射波长 4 1 2 n m处测定其 荧 光 强 度， 奥 硝噢 浓度 在1 .0 x 1 0 6 m o l/ l - 2 .0 x 1 0 -4 m o l / l范围 内 与 其荧 光强 度呈 良 好的线性关系，本法已 用于奥硝哇片剂测定，结果满意。 i l 、流动注射荧光法测定甲硝哇 采用铁一冰醋酸还原体系，将甲硝哇分子中的硝基还原为氨基后， 测其含量， 据此建立了甲硝哇的荧光分析法，在激发波长3 5 4 n m，发射波长4 2 6 n m处测定其 荧光强度， 甲 硝哇浓度在1 .0 x 1 0 -6 m o l / l - 9 . 0 x 1 0 -4 m o l/ l范围内 与其荧光强度呈 良 好的线性关系，本法已用于甲 硝哇片剂和甲硝哇葡萄糖注射液测定，结果与药 典法基本一致。 关键词:流动注射 化学发光 荧光分光光度法 头抱曲松钠 甲氧节氨喃咙 砒罗昔康 巴比妥构梅酸喷托维林替硝q 奥硝哇 甲硝哇 河南大学分析化学专业2 0 0 1 级硕士学位论文刘 波 a b s t r a c t l u m i n e s c e n c e a n a l y s i s is t h e a b b r e v i a t i o n o f m o l e c u l a r s p e c t r u m, i n c l u d i n g m o l e c u a r fl u o r e c e n c e p h o s p h o r e s c e n c e a n d c h e m l i l u m i n e s c e n c e a n a l y s i s ( i n c l u d i n g b i o l u mi n e s c e n c e )， c h e m i l u m i n e s c e n c e a n a l y s i s i s a t r a c e a n a l y s i s m e t h o d w h i c h d e t e r m in e s t h e c o n t e n t o f s u b s t a n c e a c c o r d i n g t o t h e l i g h t e m i s s i o n o f t h e c h e mi c a l r e a c t i o n . i n 1 8 7 7 , r a d z i s z e w s k i f o u n d t h a t l o p h in e e m m it t e d g r e e n l i g h t w h e n i t r e a c t e d w i t h o x y g e n i n t h e p r e s c e n c e o f a b a s e .t h i s i s t h e f i r s t e x a m p l e o f c h e m i l u m i n e s c e n c e u s i n g a s y n t h e t i c o r g a n i c c o m p o u n d . t h e r e a r e g a s p h a s e , fl a m e a n d l i q u i d c h e m i l u m i n e s c e n c e r e a c t i o n s y s t e m s . c h e m i l u m i n e s c e n c e a n a l y s i s c a n h a s h i g h s e n s i t i v i t y ( d e t e c t l i m i t c a n b e l 0 - i - l 0 - m o t/ l ) , w i d e l i n e a r r a n g e ( t h r e e t o s i x m a g n it u d e o r d e r ) a n d s i m p l e r , l o w e r i n s t r u m e n t s . c h e m i l u m i n e s c e n c e m e t h o d w i t h c o u p l i n g r e a c t i o n , c h e m i l u m i n e s c e n c e i m m u n o a s s a y w h i c h h a s d e v e l o p e d f o r r e c e n t t e n y e a r s i s t h e p o p u l a r i z a t i o n o f c h e m i l u m i n e s c e n c e t e c h n o l o g y . f o r t h e a b o v e a d v a n t a g e s , c h e m i l u m i n e s c e n c e h a s b e e n w i d e l y a p p l i e d i n e n v i r o n m e n t s c i e n c e , b i o l o g i c a l s c i e n c e a n d c l i n i c a l s c i e n c e . f l u o r e s c e n c e e m i t s w h e n t h e e l e c t r o n s t r a n s f e r fr o m t h e f i s r t e x c i t e d s i n g l e s t a t e t o t h e b a s e s t a t e . s i n c e 1 8 6 7 , g o p p e l s r o d e r h a s c a r r i e d o u t t h e fl u o r e s c e n c e a n a l y s i s f o r t h e f i r s t t i m e i n h i s t o r y , i n a d d i t i o n t o t h e g e n e r a l fl u o r e s c e n c e a n a l y s i s , s u c h a s t h e n o n fl u o r e s c e n c e s u b s t a n c e b e i n g tr a n s f e r r e d in t o fl u o r e s c e n c e o n e s w h i c h c a n b e d e t e r m i n e d , fl u o r e s c e n c e q u e n c h i n g m e t h o d , e n e r g y t r a n s f e r r i n g m e t h o d a n d s o o n w i t h t h e i n t r o d u c t i o n o f l a s e r , c o m p u t e r s a n d a d v a n c e m e n t o f e l e c t r o n i c s , s y n c h r o m o u s fl u o r i m e tr y， d e iv a t i v e fl u o r i m e t r y，t i m e - r e s o l v e d fl u o r e s c e n c e，fl u o r e s c e n c e p o l a r u z a t i o n , fl u o r e s c e n c e i m m u n o a s s a y , l o w t e m p e r a t u r e fl u o r e s c e n c e a n d o t h e r m e th o d s h a v e g r e a t l y d e v e l o p e d ，a c c e l e r a t i n g t h e a d v e n t o f a l l k i n d s o f n e w fl u o r e s c e n c e i n s t r u m e n t s .n o w，t h e fl u o r e s c e n c e a n a l y s i s h as b e i n g c o n c e r n e d i n n 英 文 摘 要 b i o l o g i c a l r e a c t i o n c o n t r o l , b i o s e n s o r , p h a r m a c e u t i c a l s r a i n it o r , b i o c h e mi c a l a n a l y s i s a n d m u lt i - c o n t e n t i n c o m p l i c a t e d s y s t e m. a n d i t h a s b e e n d e v e l o p e d i n t o a n i m p o rt a n t e ff e c t i v e s p e c t r u m a n a l y s i s t e c h n o l o g y . t h e t h e s i s c o n s i s t s o f s i x p a r t s : p a r t o n e d e t e r mi n a t i o n o f c e f t r i a x o n e s o d i u m b y q u e n c h i n g o f f l o w i n j e c t i o n c h e m i l u m i n e s c e n c e i n t e n s i t y c h e m i l u min e s c e n c e c a n b e e m i t t e d b y o x i d a t i o n r e a c t i o n o f p o t a s s i u m p e r m a n g a n a t e w i t h a c r i d i n e o r a n g e i n s o d i u m h y d r o g e n m e d i u m , c h e m i l u m i n e s c e n c e i s g r e a t l y q u e n c h e d b y t h e a d d i t i o n o f c e ft r i a x o n e s o d i u m .t h e c a l i b r a t i o n c u r v e i s l i n e a r o v e r t h e r a n g e o f 2 -2 0 m g / l .t h e d e t e c t i o n l i m i t i s 8 n g / m l . a 3 . 1 % r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a t i o n i s o b t a i n e d i n a r e p e a t a b i l i t y s t u d y ( n = 1 1 ) a t t h e 1 0 m g / l l e v e l o f c e ft r i a x o n e s o d i u m. t h e m e t h o d h a s b e e n a p p l i e d t o d e t e r m i n e c e ft r i a x o n e s o d iu m i n p h a r m a c e u t i c a l w i t h g o o d r e s u l t . p a r t t w o s t u d y o n c h e mi l u m i n e s e c e n c e r e a c t i o n o f t r i me t h o p r i m - k mn 0 4 一 p y r o n i n e - h 2 s o 4 b y f l o w i n j e c t i o n me t h o d a n e w c l r e a c t i o n o f t r i m e t h o p r i m一 k mn 0 4 - p y r o n i n e - h 2 s o 4 w a s s t u d i e d b y fl o w i n j e c t i o n m e t h o d .t h e f a c t o r s o f i n fl u e n c i n g c l i n t e n s i t y w e r e i n v e s t i g a t e d . a n e w m e t h o d b a s e d o n t h e c l r e a c t i o n f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f t mp h a s b e e n e s t a b l i s h e d b y o p t i m i z i n g t h e e x p e r i m e n t a l c o n d i t i o n s .t h e l in e a r r a n g e f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f t m p w a s 1 .0 x 1 0 -4 m o l / l 一3 .0 x 1 0 7 m o l/ l a n d t h e d e t e r m i n a t i o n l i m i t w a s 3 . 4 x 1 0 -9 m o l/ l .t h e r e la t iv e s t a n d a r d f o r th e d e t e r m in a t io n o f 5 .0 x 1 0 s m o l/ l t m p ( n = 1 1 ) w a s 2 . 6 % . t h e me t h o d h a s b e e n u s e d t o d e t e r mi n a t i o n i n t a b l e t s a n d t h e r e s u l t s we r e i n g o o d a g r e e m e n t w i t h t h o s e o b t a i n e d b y c l a s s i c a l m e t h o d . p a r t t h r e e d e t e r mi n a t i o n o f p i r o x i c a m b y qu e n c h i n g o f th e ch e mi l u mi n e s c e n c e a m e t h o d i s d e s c r i b e d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f p i r o x i c a m b y q u e n c h i n g o f t h e v 河南大学分析化学专业2 0 0 1 级硕 卜 学位论文刘 波 c h e m i l u m i n e s c e n c e s i g n a l o f t h e a c r i d in e o r a n g e - k m n 0 4 - o h - . t h e m e t h o d i s b a s e d o n t h e f a c t t h a t t h e c o n c e n t r a t i o n o f p o t a s s i u m p e r m a n g a n a t e s o l u t i o n i s l o w e r b y t h e r e a c t i o n o f p e r m a n g a n a t e w i t h p i r o x i c a m.t h e m e t h o d i s s e n s i t i v e , t h e l im i t o f d e t e c t i o n i s 4 .5 x 1 0 - g / m l . t h e li n e a r r a n g e o f t h e w o r k i n g c u r v e s i s 1 .0 x 1 0 - - 7 .0 x 1 0 -4 g / m l t h e r e l a t iv e s ta n d a r d d e v ia t io n i s 3 .6 % f o r d e t e r m i n a t i o n o f 1 .0 x 1 0 - s g / m l p i r o x i c a m s o l u t i o n . t h e me t h o d h a s b e e n u s e d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f p i r o x i c a m i n p h a r m a c e u t i c a l 勿q u e n c h i n g o f t h e c h e m i l u m i n e s c e n c e . p a r t f o u r d e t e r mi n a t i o n o f b a r b i t o n e b y f l o w i n j e c t i o n a n a l y s i s wi t h ch e mi l u mi n e s c e n c e de t e c t i o n a n e w c h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) r e a c t i o n o f b a r b it o n e - n a o c i - h z o z w a s s t u d i e d b y fl o w i n j e c t i o n m e t h o d .t h e f a c t o r s o f i n fl u e n c i n g c l i n t e n s i t y w e r e i n v e s t i g a t e d . a n e w m e t h o d b a s e d o n t h e c l r e a c t i o n f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f b a r b it o n e h a s b e e n e s t a b l i s h e d b y o p t i m i z i n g t h e e x p e r im e n t a l c o n d it io n s . t h e l in e a r r a n g e f o r th e d e t e r m i n a t io n o f b a r b it o n e w a s 7 .0 x 1 0 - 一 5 .0 x 1 0 -3 m o l / l a n d t h e d e t e r m i n a t i o n l i m i t w a s 4 .6 x 1 0 - m o l / l .t h e r e l a t iv e s t a n d a r d f o r t h e d e t e r m in a t io n o f 1 .0 x 1 0 -4 m o l/ l b a r b ito n e ( n = 6 ) w a s 1 .2 3 %， p a r t f i v e d e t e r m i n a t i o n o f p e n t o x y v e r i n e c i t r a t e b y f l u o r e s c e n c e a s i m p l e m e t h o d f o r t h e d e t e r m in a t io n o f p e n t o x y v e r i n e c i t r a t e b y f l u o r e s c e n c e， i n v o l v i n g t h e r e a c t i o n b e t w e e n c it r i c a c i d w it h a c e t i c a n h y d r i d e , i s d e s c r i b e d b a s e d o n i t s e m i s s i o n i n t e n s i t y a t 4 5 7 n m i n e t h a n o l ( 9 5 % ) m e d i u m w h e n e x c i t e d a t 3 6 7 n m .t h e l in e a r c a li b r a t i o n g r a p h i s 8 .0 x 1 0 -， 一 1 .0 x 1 0 -4 g / m l w it h t h e d e t e c t io n l i m it o f 1 . 5 x i o -s g / m l .t h e r e l a t i v e s t a n d a r d d e v ia t io n i s 0 .3 1 % a t h e p r o p o s e d m e t h o d h as b e e n s u c c e s s f u l l y a p p l i e d t o t h e d e t e r m i n a t i o n o f p e n t o x y v e r i n e c it r a t e i n t a b l e t s w i t h s a t i s f a c t o ry r e s u l t s . p a r t s i x : d e t e r mi n a t i o n o f t i n i d a z o l e b y fl u o r e s c e n c e a f a s t a n d s i m p l e m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f t i n i d a z o l e b y fl u o r e s c e n c e i s d e s c r i b e d b a s e d o n i t s e m i s s i o n i n t e n s i ty a t 4 2 0 n m i n w a t e r m e d i u m w h e n e x c i t e d a t vi 英 文 摘 要 3 2 0 n m .t h e l in e a r c a l ib r a t io n g r a p h i s 4 .0 x 1 0 -6 一4 .0 x 1 0 -4 m o l /l .t h e r e l a t iv e s t a n d a r d d e v ia t i o n i s 2 .2 % .t h e d e t e c t i o n l im i t i s 8 .4 x 1 0 -8 m o l/ l .t h e p r o p o s e d m e t h o d h a s b e e n s u c c e s s f u l l y a p p l i e d t o t h e d e t e r m i n a t i o n o f t i n i d a z o l e i n t a b l e t s a n d i n j e c t i o n w i t h s a t i s f a c t o ry r e s u lt s . p a r t s e v e n : d e t e r mi n a t i o n o f o r n i d a z o l e b y fl u o r e s c e n c e a f a s t a n d s i m p l e m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f o r n i d a z o l e b y fl u o r e s c e n c e i s d e s c r i b e d b as e d o n i t s e m i s s i o n i n t e n s i t y a t 4 1 2 n m i n w a t e r m e d i u m w h e n e x c i t e d a t 3 5 5 n m .t h e l in e a r c a l ib r a t i o n g r a p h i s 1 .0 x 1 0 -6 - 2 .0 x 1 0 -4 m o l/ l .t h e r e l a t i v e s t a n d a r d d e v ia t i o n i s 3 .5 2 %. t h e d e t e c t io n li m it i s 1 .0 9 x 1 0 -7 m o l/ l .t h e p r o p o s e d m e t h o d h as b e e n s u c c e s s f u l l y a p p l i e d t o t h e d e t e r m i n a t i o n o f o r n i d a z o l e i n t a b l e t s w i t h s a t i s f a c t o ry r e s u l t s . p a r t e i g h t : d e t e r m i n a t i o n o f me t r o n i d a z o l e b y fl u o r e s c e n c e a f a s t a n d s i m p l e m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f m e t r o n i d a z o l e b y fl u o r e s c e n c e i s d e s c r i b e d b a s e d o n i t s e m i s s i o n i n t e n s i t y a t 4 2 6 n m i n w a t e r m e d i u m w h e n e x c i t e d a t 3 5 4 n m .t h e l in e a r c a l ib r a t i o n g r a p h i s 1 .0 x 1 0 -6 _ 9 .0 x 1 0 m o u l .t h e r e l a t iv e s t a n d a r d d e v ia t i o n i s 1 .0 5 % . t h e d e t e c t io n l i m i t i s 1 .7 5 x 1 0 -7 m 0 1/ l .t h e p r o p o s e d m e th o d h a s b e e n s u c c e s s f u l l y a p p l i e d t o t h e d e t e r m i n a t i o n o f me t r o n i d a z o l e i n t a b l e t s a n d i n j e c t i o n w it h s a t i s f a c t o ry r e s u l t s . k e y w o r d s : f l o w i n j e c t i o n c h e m i l u m i n e s c e n c e f l u o r i m e t r y c e ft r i a x o n e s o d i u m t r i m e t h o p r i m p i r o x i c a m b a r b i t o n e p e n t o x y v e r i n e c i t r a t e t i n i d a z o le orni d a z o l e me t r o n i d a z o l e -vu - 河南大学分析化学专业2 0 01 级硕士学位论文刘 波 第一章 发光分析在药物检测中的研究进展 一、引言 药物是用来预防、治疗、诊断疾病和帮助机体恢复正常机能的物质。任何药 物都必需达到一定的质量标准。药物质量直接影响着治疗和预防的效果，而且 密 切关系到人民的健康与安全。药物检测是研究药物的化学检验、药物稳定性、生 物利用度、药物临床检测和中草药有效成分的定性和定量分析等的一门学科，其 目的是保证药物的质量和用药的安全有效。在临床中，通过体内 ( 体液和组织) 药物的检测，可以了解给药后药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄的情况，为 药物的药效、毒副作用的评价及其体内的机制研究提供信息。药物检测一般包括 鉴别、检查和含量测定等方面 。其中含量测定一般采用化学分析方法或物理化学 分析方法，确定药品中有效成分的含量范围，测定方法力求简便快速，易于推广 和掌握。常用测定药物方法有容量滴定法、紫外一 可见光度法、荧光法、原子吸收 法、气相色谱、高效液相色谱、薄层扫描法、红外光谱和质谱等方法。随 着药物 分析的发展，要求分析方法灵敏、快速、 准确、自 动化。原有的一些灵敏度低、 操作烦琐的化学分析法将被逐步淘汰，有些大型仪器由于过于昂贵而难以 推广， 而 化 学 发 光 技 术 具 有灵 敏 度 高 ( 检 测 限 可 达 l 少 2 m o 1几 ) 、 线 性 范围 宽 ( 3 - 6 个 数 量 级 ) 、 不需光源，可避免瑞利和拉曼散射等干扰，大大提高了信噪比，分析速度快，仪 器设备简单，易于实现自 动化等特点，是当前分析化学研究的热点。近1 0 年来， 利用 发光反 应进行有机药物分析应用 工作 进展较快， 周同惠 i i i 、 周延秀 2 1 和 庞志功 3 -0 都曾 对 发光 分 析 在 药物 检 测中的 应 用作了 评 述; a n d r e w s 5 等也 介 绍了 化 学 发 光 在临床及药物检测中的应用。 本文简要综述了化学发光的发现、测定基本原理，及近十年来国内外化学发 光在药物检测中的应用研究进展情况。 二、化学发光发现和基本原理 2 . 1化学发光发现 发光现象在自 然界通常发生在生物体内，最明显的例子是萤火虫发光，因而 第一章 发光分析在药物检测中的研究进展 人们认识这种现象是从生物发光开始的。十九世纪后期人们发现简单的非生物有 机化合物也能产生化学发光。1 8 7 7 年， r a d z i s z e w s k i 16 发现洛汾碱 ( 2 , 4 , 5 一 三苯 基咪吟)在碱性介质中被过氧化氢等氧化剂氧化时发出绿色的光。1 9 2 8年， a l b r e c h t 观察到 鲁米诺 ( 3 - 氨基苯二甲 酞阱) 在碱性介 质中的 化学发光行为， 这 是化学发光史上一个重要的里程碑。 1 9 3 5 年g l e n 和 p e t s c h 第一个报告了光泽精 ( n ,n 一 二甲 基二叮 陡硝酸盐 ) 与过氧化氢反 应产生化学发光， 迄今， 许多 化学 发光体 系已为人们所认识。 2 .2 化学发光基本原理 2 .2 . 1 化学发光分析定义 化学发光反应( c h e m i l u m i n e s c e n c e r e a c t i o n ) : 是指在常温下， 在一些特殊的 化 学反应体系中， 物质进行化学反应时释放出的能量被处于基态的反应物( 或生成物、 反应中间体) 分子吸收，电 子从基态跃迁到激发态，当返回基态时， 激发态的电 子 把吸收的能量以光的形式辐射出来，产生的光称为化学发光。 基于化学发光反应 而建 立起来的 分析方法， 称为 化学发光分 析( c h e m i l u m i n s c e n c e a n a l y s i s ， 简称c l ) . 2 .2 .2 化学发光测定原理 化学发光必须满足三个条件，即该反应必须提供足够的激发能，最好由某一 步骤单独提供，因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发 光;另外，有利的反应历程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成 激发态;第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率，释放出光子，或 者能够将能量转移给其它分子使之成激发态并释放出光子。 化学发光过程表示为: a + b 一c .+ d c 、 c + h u 或a + b c + d c m+ f 、f i +f f ;、 f +h u 化学发光强度( i c l ) 取决于反应的 速度( d p / d t ) 和化学发光量子效率( ( 11 c .) 。 可用 下式表示:i c l ( t ) = (d c l x ( d p / d t ) ，其中，(d c l 为cd c l = q ) , x (df ; d ， 为生成激发 河南大 学分析化 学专业2 0 0 1 级硕十学位论文 刘 波 态产物分子的量子效率，q) , 为激发态产物分子的发光量子效率。 对于一定的 化学 发光反应，巾 c 七 为一定值，其反应速度可按质量作用定律表示出与反应体系中物 质浓度的关系。因此通过测定化学发光强度就可以测定反应体系中某种物质的浓 度。原则上讲，对任何化学发光反应，只要反应是一级或假一级反应，都可以通 过上述公式进行化学发光定量分析。例如，在上述化学发光反应中，如果物质 b 保 持 恒定， 而 物 质a的 浓 度变 化并 可 视为 一 级 或 假一 级反 应， 则i c l = h o i ( t) d t = j ( q) c l d a ( t ) / d t ) d t =- d c 1,c a ，即 化学发光强度与a的浓度成正比。 2 .2 .3 化学发光的 特点 化学 发光 分析 具 有灵 敏度高 ( 检 测限 可 达1 0 - 1 1 m o l/ l ) ， 线性 范围 宽 ( 3 - 6 个 数 量 级) ， 适合微量和痕量分析， 分析速度快， 仪器设备简单， 易于实现自 动化等特点， 是当前化学分析和痕量分析研究的热点。然而，该法