（外科学专业论文）cd147和survivin在骨巨细胞瘤中的表达及其临床意义.pdf

c d14 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达及其临床意义 研究生 柳忠兴 专业 外科学 导师 于秀淳教授 中文摘要 目的 骨巨细胞瘤 g i a n tc e l lt u m o ro f b o n e g c t 是一种局部侵袭性强 对放 化疗不敏感 具有复发率高 可发生肺转移等特点的原发性骨肿瘤 骨巨细 胞瘤细胞成分复杂 其病理分级和放射学分级往往不能正确反映肿瘤的生物 学行为 给临床制定正确的治疗方案带来困难 因此 寻找特异性标记物 对于指导临床手术 选择恰当的治疗方案以及准确的判断预后有重要意义 本实验通过探讨c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨肿瘤发生发展中的作用 分析不同 组织学分级 放射学分级在骨巨细胞瘤中c d l 4 7 和s u r v i v i n 的表达 及与 肿瘤复发的相关性 为骨巨细胞瘤的生物学行为和预后判断提供依据 方法 回顾分析我院骨病科2 0 0 0 年1 月 2 0 0 9 年3 月接受局部刮除手术治疗的 3 4 例骨巨细胞瘤患者 按j a f f e 分级 i 级10 例 级2 0 例 级4 例 按 c a m p a n i c c i s 分级 i 级l0 例 i i 级1 5 例 级9 例 的临床特点及变化 运用 免疫组化s p 法检测c d l 4 7 和s u r v i v i n 在3 4 例骨巨细胞瘤中的表达 并与10 例 骨肉瘤和1 0 例骨软骨瘤标本进行对照 分析其与临床病理j a f f e 分级 c a m p a n a c c i s 分级和肿瘤复发的关系 结果 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中阳性表达率分别为4 4 1 2 1 5 3 4 和 5 8 8 2 2 0 3 4 性别 年龄 发病部位 j a f f e 分级及c a m p a n i e c i s 分级各组 的c d l 4 7 表达差异均无显著性 p o 0 5 按治疗效果分组复发组中c d l 4 7 阳性表达率 8 0 0 0 明显高于治愈组 2 9 17 治愈组与复发组之间c d l 4 7 阳性表达率有显著性差异 p o 0 5 c d l 4 7 的阳性表达强度与骨巨细胞瘤的 预后呈正相关 r 0 4 8 9 p 0 0 5 按治疗效果 分组复发组中s u r v i v i n 阳性表达率 9 0 o o 明显高于治愈组 4 5 8 3 治愈 l 组与复发组之间s u r v i v i n 阳性表达率有显著性差异 p o 0 5 s u r v i v i n 的阳性 表达强度的与骨巨细胞瘤的预后呈正相关 r o 4 8 9 p 0 0 5 c d l 4 7 和 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤复发组的双阳性表达率 8 0 明显高于无复发组的双 阳性表达率 2 0 8 3 差异有显著性 p 0 0 5 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细 胞瘤中的表达密切相关 p 0 0 5 b u tt h ee x p r e s s i o no fc d 14 7w a sr e l e v a n tt o p r o g n o s i s p 0 0 5 b u t t h ee x p r e s s i o no fs u r v i v i nw a sr e l e v a n tt op r o g n o s i s p 0 0 5 e x p r e s s i o no fs u r v i v i nw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e ri ng i a n tc e l lt u m o r o fb o n e w i t hr e c u r r e n c et h a nt h a ti ng i a n tc e l lt u m o ro fb o n ew i t h o u tr e c u r r e n c e c 0 n e l u s i o n s 1 i nd i f f e r e n tg r a d et i s s u eo fg c t c d 14 7a n ds u r v i v i np r o t e i n sh a dt h e p o s i t i v ee x p r e s s i o no ft h e d i f f e r e n td e g r e e t h e r ew a ss i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o n b e t w e e ne x p r e s s i o no fc d l 4 7a n ds u r v i v i na n dp r o g n o s i s t h eo c c u r r e n c et h a t e x p r e s s e st h a tt h ec d 14 7a n ds u r v i v i nm a yp a r t i c i p a t eg c te v o l v e b o t ho f e x p r e s s i o na p p e a r a n c em a ya f f e c t t h em a l i g n a n td e g r e ea n dt h ep r o g n o s i s p r o g r e s s i o n s w h i c hc a nb eu s e da st h en e wm a r k i n gt h i n go ft u m o rt od i a g n o s e g c tq u a l i t a t i v e l y 2 t h ec d 14 7a n ds u r v i v i np r o t e i n sh a dh i g h e re x p r e s s i o na n de x p r e s s i o n s h a daa g r e e m e n ti ng c t t i s s u e t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o no fc d 14 7a n ds u r v i v i n h a dn o t h i n gt od ow i t hg e n d e r a g e i n v a s i v el o c a t i o n j a f f eg r a d ea n dc a m p a n i c c i sg r a d e b u tt h ee x p r e s s i o no fs u r v i v i nw a sr e l e v a n tt op r o g n o s i s p 4 0 岁7 例 平均年龄3 4 0 3 岁 发病部位 肱骨上段3 例 桡骨上段3 例 尺骨下段1 例 髂骨2 例 股骨上段5 例 股骨下段7 例 胫骨上段1 0 例 胫骨下段2 例 腓骨上段l 例 j a f f e 病理分级 i 级 1 0 例 级2 0 例 级4 例 c a m p a n i e c i s 影像学分级 i 级10 例 i i 级 1 5 例 级9 例 预后 无复发2 4 例 复发1 0 例 复发率2 9 4 l 随访时间及随访结果 除1 例复发患者复发后未获得随访 首次手术方 式 肿瘤刮除植骨术 其余3 3 例患者均有详细的临床 病理资料 手术记 录及放射线资料 均获得随访 随访时间2 1 1 2 2 个月 平均为7 8 个月 3 3 例获得随访患者随访期间均未于外院治疗 均无肺转移或其它部位转移 其 中2 4 例治疗后无复发患者均选择肿瘤刮除植骨术 1o 例治疗后复发患者首 次手术方式均选择肿瘤刮除植骨术 复发后再次手术方式 1 例肿瘤刮除植 骨术 2 例瘤段切除肿瘤型膝关节置换术 2 例瘤段切除肿瘤型股骨头置换 1 0 术 1 例瘤段切除灭活再植术 1 例大腿截肢术 2 例肿瘤扩大切除术 1 例 患者复发后未获得随访 9 例复发患者再次手术后随访时间为11 个月 1 2 0 个月 平均为5 4 个月 2 骨巨细胞瘤中c d l 4 7 和s u r v i v i n 表达情况的免疫组化研究 2 1 主要试剂 1 兔抗人c d l 4 7 多克隆抗体北京中衫金桥生物技术有限公司 2 s p 兔 免疫组化试剂盒北京中衫金桥生物技术有限公司 3 兔抗人s u r v i v i n 多克隆抗体北京中衫金桥生物技术有限公司 4 s p 兔 免疫组化试剂盒北京中衫金桥生物技术有限公司 5 p b s 缓冲液 p h 7 2 7 4 6 0 0 1 m o l l 柠檬酸缓冲液 p h 6 0 7 0 5 m o l le d t a 缓冲液 p h 8 0 8 d a b 显色剂的配制 d a b 显色液配制 取d a b5 0 m g 溶于1 0 0 m l o 0 5 m o l lt r i s h c i p h8 3 中 加入3 0 h 2 0 2 1 0 u l 搅拌混匀后过滤 用前新 鲜配制 2 2 主要器材 1 石蜡切片机德国莱卡公司 2 q p j 1 展片机天津航空机电公司 3 e p 8 0 0 0 s l 2 3 微波炉广东格兰士公司 4 g d l l 2 4 8 9 电恒温水浴箱北京医疗设备厂 5 p h s 2 5 型酸度计上海电磁仪器厂 6 t n 型托盘式扭力天平上海第二天平仪器厂 7 b x 5 1 型双目显微镜日本o l y m p u s 8 显微镜摄像仪日本o l y m p u s 2 3 实验方法 首先复习手术切除的3 4 例骨巨细胞瘤患者标本病理h e 染色切片 2 4 例 无复发患者 1o 例复发患者 除1 例复发后的骨巨细胞瘤标本不在档外 其 余4 3 张切片均获得 排除无肿瘤细胞的标本 并复习手术切除的1o 例骨肉 瘤和10 例骨软骨瘤标本病理h e 染色切片 排除无肿瘤细胞的标本 将4 3 例骨巨细胞瘤蜡块和10 例骨肉瘤 1 0 例骨软骨瘤蜡块从新制作石蜡切片 连续切片3 张 切片厚4 p m 用于h e 染色及检测c d l 4 7 和s u r v i v i n 2 3 1c d l 4 7 的检测 1 载玻片防脱片剂处理 2 骨巨细胞瘤 骨肉瘤 骨软骨瘤 的石蜡包埋组织切片常规脱蜡至水 p b s p h 7 4 冲洗3 分钟x3 次 3 切片浸于e d t a p h 8 0 缓冲液中对组织抗原进行高压热修复5 m i n 迅 速冷却后蒸馏水漂洗 4 滴加3 h 2 0 2 去离子水 孵育1o 分钟 以阻断内源性过氧化物酶的 活性 5 p b s 冲洗3 分钟 3 次 6 每张切片滴加5 b s a 封闭液 室温2 0 分钟 甩去多余液体 不洗 7 倾去血清 勿洗 每张切片滴加的c d l 4 7 一抗 1 2 0 0 稀释 置 湿盒内 3 7 1 小时左右 8 p b s 冲洗3 分钟 3 次 9 滴加生物素标记的二抗工作液 室温孵育1 0 m i n 1 0 p b s 冲洗3 分钟 3 次 1 1 滴加链亲和素一过氧化物溶液 室温孵育1 0 m i n 1 2 p b s 冲洗3 分钟x3 次 1 3 滴加新配置的d a b 显色剂3 5 分钟 充分水洗 1 4 苏木素复染 盐酸分化 梯度酒精脱水 二甲苯透明 中性树胶封 片 1 5 光学显微镜下观察 拍照 2 3 2s u r v i v i n 的检测 1 载玻片防脱片剂处理 2 骨巨细胞瘤 骨肉瘤 骨软骨瘤 的石蜡包埋组织切片常规脱蜡至水 p b s p h 7 4 冲洗3 分钟 3 次 3 切片浸于e d t a p h 8 o 缓冲液中对组织抗原进行高压热修复5 m i n 迅 速冷却后蒸馏水漂洗 4 滴加h 2 0 2 去离子水 孵育1o 分钟 以阻断内源性过氧化物酶的活性 5 p b s 冲洗3 分钟x3 次 1 2 6 每张切片滴加5 b s a 封闭液 室温2 0 分钟 甩去多余液体 不洗 7 倾去血清 勿洗 每张切片滴加的s u r v i v i n 一抗 1 2 0 0 稀释 置 湿盒内 3 7 1 小时左右 8 p b s 冲洗3 分钟x 3 次 9 滴加生物素标记的二抗工作液 室温孵育1 0 m i r a 1 0 p b s 冲洗3 分钟x3 次 1 1 滴加链亲和素一过氧化物溶液 室温孵育10 m i n 1 2 p b s 冲洗3 分钟x3 次 13 滴加新配置的d a b 显色剂3 5 分钟 充分水洗 1 4 苏木素复染 盐酸分化 梯度酒精脱水 二甲苯透明 中性树胶封片 15 光学显微镜下观察 拍照 2 4 结果判定标准 c d l 4 7 和s u r v i v i n 检测的判定 c d l4 7 主要表达于单核间质细胞和多核 巨细胞 c d l 4 7 阳性表达呈棕黄色 棕褐色颗粒状 定位于单核间质细胞和 多核巨细胞细胞膜上 也表达于胞浆内 s u r v i v i n 主要表达于单核间质细胞 和多核巨细胞 也有少部分表达于血管内皮细胞 s u r v i v i n 阳性表达呈棕黄 色 棕褐色颗粒状 主要定位于细胞质 部分亦表达于细胞膜 每张切片进 行综合染色强度和阳性细胞数量分级 取表达的最强部位 分别随机观察具 有代表性的1 0 个高倍视野 1 0 x 4 0 每个视野下数1 0 0 个细胞 总计1 0 0 0 个肿瘤细胞 c d l 4 7 记分标准参照赵彤 2 3 等的方法 表3 1 根据胞膜和胞 浆的染色程度及染色细胞百分率进行评分 1 染色强度 基本不着色者为0 分 着色弱者 淡黄色 为1 分 着色适中者 棕黄色 为2 分 着色深者 棕褐 色 为3 分 染色强度需与背景色对比 2 阳性细胞所占百分比 5 为0 分 6 2 5 为1 分 2 6 一5 0 为2 分 5 1 7 5 为3 分 7 5 为4 分 s u r v i v i n 计分标准 2 4 1 根据胞膜和胞浆的染色程度及染色细胞百分率进行 评分 1 染色强度 基本不着色者为o 分 着色弱者 淡黄色 为1 分 着 色适中者 棕黄色 为2 分 着色深者 棕褐色 为3 分 染色强度需与背景色 对比 2 阳性细胞所占百分比 阴性为0 分 10 为1 分 1 l 3 0 为2 分 3 1 7 0 为3 分 7 1 为4 分 将每张切片着色程度得分与着色 细胞百分率得分相乘为其最后得分 0 1 分为阴性 2 3 分为弱阳性 1 3 4 5 分为阳性 6 分为强阳性 表3 2 表3 1c d l 4 7 免疫组化记分标准 阳性细胞百分比 记分着色强度 颜色 记分 0 50无0 6 2 51 弱 淡黄色 l 2 6 5 02 中 棕黄色 2 5 1 7 53 强 棕褐色 3 7 54 表3 2s u r v i v i n 免疫组化记分标准 阳性细胞百分比 记分着色强度 颜色 记分 o0无0 lo 1 弱 淡黄色 1 1 1 3 0 2 中 棕黄色 2 3 1 7 03 强 棕褐色 3 7 14 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中表达与性别 年龄 发病部位 j a f f e 分级 c a m p a n i e e i s 分级 骨巨细胞瘤预后之间的关系 采用四格表卡方检验法分 别分析c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤与骨肉瘤 骨软骨瘤中表达的关系 采用四格表精确概率检验法分析c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中联合表 达与预后的关系 所有统计资料采用s p s s l3 0 软件处理 p 4 0 岁的7 例患者 中阳性表达4 例 阳性表达率为5 7 1 4 在发病部位位于股骨下段或胫骨上 段的17 例患者中阳性表达7 例 阳性表达率为4 1 18 发病部位位于其它 部位的1 7 例患者中阳性表达8 例 阳性表达率为4 7 0 7 j a f f e 分级中 i 级10 例患者中阳性表达4 例 阳性表达率为4 0 0 0 i i 级2 0 例患者中阳性 表达9 例 阳性表达率为4 5 0 0 级4 例患者中阳性表达2 例 阳性表达 率为5 0 o o c a m p a n i e e i s 分级中 i 级10 例患者中阳性表达4 例 阳性 表达率为4 0 0 0 i i 级15 例患者中阳性表达6 例 阳性表达率为4 0 0 0 级9 例患者中阳性表达5 例 阳性表达率为5 5 5 6 在随访发现无复发的 2 4 例患者中阳性表达7 例 阳性表达率为2 9 17 复发的1o 例患者中阳性 表达8 例 阳性表达率为8 0 0 0 经统计学f i s h e r 精确概率法分析 发现 骨巨细胞瘤中c d l 4 7 的表达在患者的性别 年龄 发病部位 j a f f e 分级 c a m p a n i c e i s 分级不同分组中无显著差异 p o 0 5 预后组中 c d l 4 7 在复 发组中的阳性表达率 8 0 0 0 高于未复发组 2 9 1 7 有显著差异 p o 0 1 0 4 0 岁 发病部位 l6 18 6 2 1 7 股骨下段和 1 7 胫骨上段 其他1 7 j a f f e 分级 i1 0 2 0 4 c a m p a n i e e i s 分 i i i h i 预后 治愈 1 0 15 9 7 8 9 l o 3 3 81 3 4 3 7 4 3 7 5 p o 0 5 4 4 4 4 5 0 0 0 3 8 1 0 p o 0 5 5 7 1 4 4 1 1 8 894 7 0 6 6 1 1 2 p o 0 5 4 0 0 0 4 5 0 0 p o 0 5 5 0 o o 64 0 0 0 94 0 0 0 p o 0 5 4 5 5 5 6 2 4 71 72 9 1 7 p 0 0 5 与 临床预后呈正相关 r 0 4 8 9 p 0 0 0 3 0 0 5 无统计学意义 c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达 强度与性别之间无相关性 表1 3c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达强度与年龄的相关性 r 0 0 7 3 p 0 6 7 0 0 0 5 无统计学意义 c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达 强度与年龄之间无相关性 表1 4c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达强度与发病部位的相关性 1 7 r 一0 0 3 0 p 0 8 6 7 0 0 5 无统寸学意义 c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达 强度与发病部位之间无相关性 表1 5c d l4 7 在骨巨细胞瘤中的表达强度与j a f f e 分级的相关性 r o 0 6 4 p 0 7 2 4 0 0 5 无统计学意义 c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达 强度与j a f f e 分级之间无相关性 表1 6c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达强度与c a m p a n i c c i s 分级的相关性 r 一0 0 4 6 p o 7 9 7 0 0 5 无统计学意义 c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达 强度与c a m p a n i e c i s 分级之间无相关性 表1 7c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达强度与预后的相关性 r 0 4 8 9 p o 0 0 3 0 0 5 无统计学意义 c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达 强度与复发前后之间无相关 1 3c d l4 7 在骨巨细胞瘤 骨肉瘤 骨软骨瘤中的表达的关系 3 4 例骨巨细胞瘤中c d l 4 7 阳性表达15 例 阳性表达率4 4 12 1 0 例 骨肉瘤中c d l 4 7 阳性表达8 例 阳性表达率8 0 0 0 10 例骨软骨瘤中c d l 4 7 阳性表达0 例 表达率0 0 0 经统计学四格表卡方检验分析 c d l 4 7 在骨 肉瘤与骨巨细胞瘤之间的表达有显著性差异 p o 0 5 c d l 4 7 在骨巨细胞瘤 与骨软骨瘤之间的表达有显著性差异 p 0 0 5 c d l4 7 在骨肉瘤与骨软骨瘤 之间的表达有显著性差异 p 4 0 岁的7 1 9 例患者中阳性表达5 例 阳性表达率为7 1 4 3 在发病部位位于股骨下段或 胫骨上段的l7 例患者中阳性表达1 1 例 阳性表达率为6 4 7 l 发病部位位 于其它部位的17 例患者中阳性表达9 例 阳性表达率为5 2 9 4 j a f f e 分级 中 i 级10 例患者中阳性表达6 例 阳性表达率为6 0 0 0 i i 级2 0 例患者 中阳性表达1 2 例 阳性表达率为6 0 0 0 i i 级4 例患者中阳性表达2 例 阳性表达率为5 0 0 0 c a m p a n i c c i s 分级中 i 级10 例患者中阳性表达4 例 阳性表达率为4 0 0 0 i i 级15 例患者中阳性表达1o 例 阳性表达率为 6 6 6 7 i i i 级9 例患者中阳性表达6 例 阳性表达率为6 6 6 7 在随访发 现无复发的2 4 例患者中阳性表达1 1 例 阳性表达率为4 5 8 3 复发的10 例患者中阳性表达9 例 阳性表达率为9 0 0 0 经统计学f i s h e r 精确概率 法分析 发现骨巨细胞瘤中s u r v i v i n 的表达在患者的性别 年龄 发病部位 j a f f e 分级 c a m p a n i e e i s 分级不同分组中无显著差异 p o 0 5 预后组中 s u r v i v i n 在复发组中的阳性表达率 9 0 0 0 高于未复发组 4 5 8 3 有显著差 异 p o 0 2 4 0 0 5 无统计学意义 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表 达强度与预后之间无相关性 表2 2s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达强度与年龄的相关性 r 一0 4 5 0 p o 8 0 1 0 0 5 无统计学意义 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表 达强度与年龄之间无相关性 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达强度与发病部位的相关性 r 一0 2 2 0 p o 2 1 0 0 0 5 无统计学意义 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达 2 1 强度与发病部位之间无相关关系 表2 4s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达强度与j a f f e 分级的相关性 r 一0 0 4 2 p o 8l5 0 0 5 无统计学意义 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表 达强度与j a f f e 分级之间无相关性 表2 5s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达强度与c a m p a n i c e i s 分级的相关性 r 一0 2 0 4 p o 2 4 6 0 0 5 无统计学意义 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表 达强度与c a m p a n i c c i s 分级之间无相关性 表2 6s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达强度与预后的相关性 r o 4 8 0 p o 0 0 4 0 0 5 无统计学意义 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表 达强度与肿瘤复发前后之间无相关性 2 3s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤 骨肉瘤 骨软骨瘤中的表达的关系 3 4 例骨巨细胞瘤中阳性表达2 0 例 阳性表达率5 8 8 2 10 例骨肉瘤中 阳性表达7 例 阳性表达率7 0 0 0 1o 例骨软骨瘤中阳性表达0 例 阳性 表达率o 0 0 经统计学四格表卡方检验分析 s u r v i v i n 在骨肉瘤与骨巨细 胞瘤之间的表达无显著性差异 p o 0 5 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤与骨软骨瘤之 间的表达有显著性差异 p 0 0 5 s u r v i v i n 在骨肉瘤与骨软骨瘤之间的表达无 显著性差异 p 0 0 5 详见表2 8 表2 8s u r v i v i n 在骨肉瘤 骨巨细胞瘤 骨软骨瘤中的表达 四格表卡方检验 3c d l 4 7 和s u r v i v i n 联合表达与骨巨细胞瘤预后的关系 在本组资料中 2 4 例无复发患者中 c d l 4 7 和s u r v i v i n 双阳性表达5 例 阳性表达率2 0 8 3 1 0 例复发组中 c d l 4 7 和s u r v i v i n 双阳性表达8 例 双阳性表达率8 0 经统计学f i s h e r 精确概率法分析 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤复发组的双阳性表达率明显高于无复发组的双阳性表达率 差 异有显著性 p 0 0 0 2 0 0 5 详见表2 9 表2 9c d l4 7 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中联合表达 f i s h e r 精确概率法 4c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中表达的相关性分析 在本组资料中 3 4 例骨巨细胞瘤患者中c d l 4 7 和s u r v i v i n 都表达阳 性的有1 3 例 阳性表达率为3 8 2 4 c d l 4 7 表达阳性而s u r v i v i n 表达阴性 的有2 例 表达率为5 8 8 c d l 4 7 表达阴性而s u r v i v i n 表达阳性的有7 例 表达率为2 0 5 9 c d l 4 7 和s u r v i v i n 都表达阴性的有1 2 例 表达率为 3 5 2 9 经统计学s p e a r m a n 相关性分析 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤 患者中的表达呈正相关 r 0 5 0 3 p 0 0 0 2 0 0 5 详见表3 0 表3 oc d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中表达的相关性 讨论 1 骨巨细胞瘤在我国发病率约占原发骨肿瘤4 5 西方国家并不多 见 g c t 好发于2 0 4 5 岁的青壮年 约一半的病例发生在膝关节周围 骨巨 细胞瘤局部侵袭性强 对化疗治疗不敏感 放疗后容易肉瘤变 g c t 的治疗 主要以手术为主 但局部刮除术后复发率高 少数病例还可发生肺转移 采 用广泛切除术能降低g c t 的复发和肺转移 但是严重影响了术后患者的生 活质量 收集我院2 0 0 0 年1 月 2 0 0 9 年3 月诊断为骨巨细胞瘤资料完整的 3 4 例患者 应用免疫组织化学技术 检测c d l 4 7 和s u r v i v i n 在3 4 例骨巨细 胞瘤中的表达 并选择1 0 例骨肉瘤和1o 例骨软骨瘤作为对照 分析c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤和骨肉瘤 骨软骨瘤中的表达 2c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达及意义 2 1c d l 4 7 的生物学特性和功能 c d l 4 7 分子属于免疫球蛋白超家族 i m m u n o g l o b i ns u p e r f a m i l y i g s f 成 员属于单次跨膜糖蛋白 c d l 4 7 的m r n a 长度大约1 1 7 k b n 端起始码之前 约有115 个核苷酸为非编码区 编码区编码2 6 9 个氨基酸 其中2 1 个氨基 酸为信号肽 中间的1 8 5 个氨基酸构成胞外结构域 从2 0 6 一2 2 9 共2 4 个氨 基酸为穿膜区 c 端3 9 个氨基酸为胞内结构域 穿膜区包括3 个亮氨酸和1 个苯丙氨酸 每间隔7 个氨基酸出现一次 为典型的亮氨酸拉链结构 胞外 4 个半胱氨酸形成2 个二硫键 构成i g s f 典型的半球型结构域 b i s w a s 等 首次发现肿瘤细胞表面分子可以诱导临近的成纤维细胞分泌m m p 最初将 其命名为t c s f j 中瘤细胞介导的胶原酶激活因子 e m m p r i n 基质金属蛋白 酶诱导因子 随后将肿瘤细胞表面m r 为5 8 0 0 0 的糖蛋白分离纯化 发现其 可诱导成纤维细胞合成m m p 1 同时纯化或重组的c d l 4 7 还可诱导成纤维 细胞合成m m p 2 m m p 3 t 7 9 p r e s c o t t 等将提纯的c d l 4 7 与人的纤维母细 胞共同培养 并提高了细胞m m p 一1 的m r n a 水平 刺激了m m p 1 的产生 进一步的研究发现c d l 4 7 还能刺激纤维母细胞产生m m p 2 和m m p 一3 但不 能刺激m m p 1 1 和丝氨酸蛋白酶 u p a 的产生 提示c d l 4 7 是m m p s 活化的 重要细胞因子 c d l4 7 作为一种广泛分布于体内的膜蛋白 其具有很多不同 的功能 然而 人们最感兴趣的还是它在肿瘤的生长 浸润和转移中的作用 通过近几年的研究 人们逐渐认识到肿瘤细胞周围微环境在肿瘤的生长和侵 袭过程中的重要性 这种微环境是依靠多种蛋白酶来修饰重塑的 其中m m p 起了重要的作用 这些蛋白酶通过特殊的结合位点在肿瘤细胞表面聚集 其 中m m p 2 通过m m p 2 m t m m p 复合物的形式位于肿瘤细胞表面上 另外 研究还发现c d l 4 7 m m p 1 复合物能从人肺癌l x 1 细胞膜上分离出来 说 明c d l4 7 不仅能刺激纤维母细胞产生m m p 1 还能结合m m p 1 于肿瘤细 胞膜表面 从而促进肿瘤的生长和侵袭 2 5 1 肿瘤细胞的侵袭和转移是一个复 杂的过程 肿瘤细胞浸润时 需要跨越2 层细胞外基质 即基底膜和组织间 隙基质 肿瘤演进过程中的几个重要方面均涉及m m p 的蛋白水解作用 例 如 m m p 与基底膜的降解 肿瘤细胞进出血管 对靶组织的侵袭和肿瘤细 胞的生长有关 c d l 4 7 分子与m m p 在肿瘤细胞表面形成复合物 将m m p 浓缩在肿瘤细胞周围 有利于肿瘤细胞对周围基质的降解 使肿瘤细胞易于 扩散和转移 c d l4 7 还可以诱导m m p 的活性增加 从而增强降解基底膜的 主要成分 型胶原的能力 促进肿瘤细胞浸润和转移 26 1 体内的大量研究显 示 2 7 2 8 2 9 多种肿瘤细胞的c d l 4 7 表达水平与m m p 的表达水平密切相关 提示在肿瘤细胞与基质的相互作用过程中 c d l 4 7 与m m p 发挥着重要的作 用 并参与肿瘤细胞的侵袭和转移 c d l 4 7 还可通过旁分泌与内皮细胞产生 的m m p 相互作用 3 0 3 1 提示肿瘤细胞产生的c d l 4 7 通过调节内皮细胞产 生的m m p 诱导肿瘤血管的生成 c d l 4 7 的作用不仅局限于肿瘤一成纤维细 胞 肿瘤 内皮细胞之间的相互作用中 也可以在肿瘤细胞或成纤维细胞中诱 导m m p 分泌 在肿瘤细胞中转染c d l 4 7 或用重组的c d l 4 7 分子处理肿瘤 细胞 发现肿瘤细胞本身m m p 的表达明显增加 3 2 3 3 将c d l 4 7e d n a 转染 m d a m b 4 3 6 乳腺癌细胞 能够促进裸鼠乳腺肿瘤的浸润和转移 同时肿瘤 细胞m m p 2 和m m p 一9 表达增加 这充分证明了c d l 4 7 在肿瘤细胞生长 侵袭和转移过程中起重要作用1 3 4 2 2c d l 4 7 在骨巨细胞瘤中的表达 c d l 4 7 分子是一种广泛存在于人体各个组织器官的免疫球蛋白超家族 的糖蛋白 参与机体多种生理过程 研究发现 在骨肉瘤 胃癌 肺癌 肝 癌 大肠癌 乳腺癌 胰腺癌 黑色素瘤中均发现c d l 4 7 的表达增高 且与 肿瘤复发和转移相关 e b e ni 等采用免疫组化法对c d l 4 7 在3 5 例喉部鳞状 细胞癌中的表达进行了研究 结果证实c d l 4 7 的表达与肿瘤的大小无关 与 肿瘤细胞的转移显著相关 采用t m e m 值 t r a n s m e m b r a n ec d l 4 7i m m u n o r e a c t i v i t y 分析发现c d l 4 7 可作为一临界性的重要预后指标 k a t a o k a 等采用酶 免疫测定法检测c d1 4 7 转染的成纤维细胞 结果显示m m p 1 m m p 2 和 m m p 3 蛋白表达明显增高 提示c d l4 7 通过增加m m p s 蛋白的表达使肿瘤 细胞周围基膜及基质成分的降解增强 从而肿瘤细胞的侵袭性增强 毕乃贵 等 1 9 运用免疫组织化学s p 法 检测c d l 4 7 在3 6 例g c t 中的表达 c d l4 7 阳性表达率为4 7 2 c d l 4 7 的表达与患者的性别 年龄 肿瘤的发病部位 等因素无关 在j a f f e 分级中 随着级别的增高 c d l 4 7 的阳性表达率也增 高 差异有显著性 p 0 0 5 按e n n e k i n g 分期i i 期阳性表达率明显高于 i 期 差异有显著性 p o 0 5 复发组的c d l 4 7 阳性表达率 6 9 3 明显高于 未复发组 3 4 7 差异有显著性 p o 0 5 预后组中 c d l 4 7 在复发组中的阳性表达率明显高 于未复发组 有显著差异 p 0 0 5 与临床预后呈正相关 r 0 4 8 9 p 0 0 0 3 o 0 5 说明c d l 4 7 高表达者骨巨细胞瘤的预后不良 可将其作为评价g c t 恶性程度和判断预 后的重要指标 2 3c d l 4 7 在骨巨细胞瘤 骨肉瘤和骨软骨瘤中的表达 应用f i s h e r 精确概率法对3 4 例骨巨细胞瘤组织和l0 例骨肉瘤组织及1o 例骨软骨瘤组织进行了分析 发现3 4 例骨巨细胞瘤组织中l5 例为阳性表达 15 例为阴性表达 阳性表达率为4 4 1 2 骨肉瘤为常见的恶性骨肿瘤 好 发年龄为l1 2 0 岁之间 其恶性程度高 易发生转移 本实验将骨肉瘤组作 为恶性对照组 10 例骨肉瘤组织中8 例为阳性表达 阳性表达率8 0 0 0 骨软骨瘤为最常见的良性骨肿瘤 本实验将其作为良性对照组 10 例骨软骨 瘤组织中无阳性表达 阳性表达率0 0 0 结果显示 c d l 4 7 在骨肉瘤中的 阳性表达率高于骨巨细胞瘤 其表达无显著性差异 p o 0 5 c d l 4 7 在骨巨 细胞瘤中的阳性表达率高于骨软骨瘤 其表达有显著性差异 p 0 0 5 c d l4 7 在骨肉瘤中的阳性表达率高于骨软骨瘤 其表达有显著性差异 p 0 0 5 预后组中 s u r v i v i n 在复发组中的阳性表达率高于为复发组 有显著差异 p o 0 5 与临床预后呈正相关 p 0 0 5 s u r v i v i n 可作为判断g c t 预后的 重要指标 3 3s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤 骨肉瘤和骨软骨瘤中的表达 应用f i s h e r 精确概率法对3 4 例骨巨细胞瘤组织和1 0 例骨肉瘤组织及1 0 例骨软骨瘤组织进行了分析 本实验将骨肉瘤组和骨软骨瘤组分别作为恶性 组和良性对照组 发现3 4 例骨巨细胞瘤组织中2 0 例为阳性表达 1 4 例为阴 性表达 阳性表达率为5 8 8 2 1 0 例骨肉瘤组织中7 例为阳性表达 阳性 表达率7 0 0 0 1 0 例骨软骨瘤组织中无阳性表达 阳性表达率0 0 0 结 果显示 s u r v i v i n 在骨肉瘤中的阳性表达率高于骨巨细胞瘤 其表达无显著 性差异 p 0 0 5 s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的阳性表达率高于骨软骨瘤 其表 达有显著性差异 p 0 0 5 s u r v i v i n 在骨肉瘤中的阳性表达率高于骨软骨瘤 其表达有显著性差异 p o 0 5 随着骨肿瘤的恶性程度的增高 s u r v i v i n 的阳 性表达程度也增高 说明其阳性表达程度与骨肿瘤的恶性程度有关 s u r v i v i n 在骨肉瘤中的阳性表达率高于骨巨细胞瘤 但无明显的统计学差异 在骨巨 细胞瘤中的阳性表达率高于骨软骨瘤 其表达有显著性差异 表明骨巨细胞 瘤为一种 潜在恶性 或 介于良 恶性之间 的溶骨性肿瘤 s u r v i v i n 可 作为判断骨巨细胞瘤恶性程度和判断预后的一个重要指标 4c d l 4 7 和s u r v i v i n 联合表达与骨巨细胞瘤复发的关系及其相关性的研究 c d l 4 7 和s u r v i v i n 基因表达的组织的特异性和功能的多样性 为辅助肿 瘤的诊断和治疗提供了一条新的思路和途径 已经逐渐成为肿瘤学研究领域 中的一个热点 陈志刚等 48 1 的研究发现 下调c d1 4 7 的表达引起s u r v i v i n 表达降低 其下降趋势和干扰效率有一定的关系 即s i r n a 沉默c d l 4 7 效 率越佳 s u r v i v i n 表达的下降趋势越明显 与之伴随的是c a s p a s e 表达的升 高 从而使细胞进入凋亡程序 研究发现 4 9 jc d l 4 7 下调后b i m 促广泛凋亡 前因子 水平上升 其表达上升导致s u r v i v i n 表达下调 细胞进入凋亡程序 在本组资料中 2 4 例无复发患者中 c d l 4 7 和s u r v i v i n 双阳性表达5 例 阳性表达率2 0 8 3 l o 例复发组中 c d l 4 7 和s u r v i v i n 双阳性表达8 例 双阳性表达率8 0 经统计学f i s h e r 精确概率法分析 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在 骨巨细胞瘤复发组的双阳性表达率明显高于无复发组的双阳性表达率 差异 有显著性 p o 0 5 表明c d l 4 7 和s u r v i v i n 联合表达对于判g c t 的预后有 一定的指导作用 在3 4 例骨巨细胞瘤患者中c d l 4 7 和s u r v i v i n 都表达阳性 者有1 3 例 阳性表达率为3 8 2 4 c d l 4 7 表达阳性而s u r v i v i n 表达阴性者 有2 例 c d l 4 7 表达阴性而s u r v i v i n 表达阳性者有7 例 c d l 4 7 和s u r v i v i n 都表达阴性者有1 2 例 经统计学s p e a r m a n 相关性分析 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在g c t 患者中的表达呈正相关 表明c d l 4 7 和s u r v i v i n 之间存在密切的联 系 然而 c d l 4 7 和s u r v i v i n 之间通过何种机制相互影响其表达调控 还需 进一步研究 3 1 结论 1 c d l4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中呈不同程度的高表达 共同参与 骨巨细胞瘤的发生 发展 2 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤复发组中的阳性表达率均明显高于 治愈组 有显著性差异 c d l4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤中的表达强度与临 床预后均呈正相关关系 可将其作为判断骨巨细胞瘤患者预后的重要指标 其表达强度的增高预示骨巨细胞瘤预后不良 3 c d l 4 7 在骨肉瘤与骨巨细胞瘤之间的表达有显著性差异 p o 0 5 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤与骨软骨瘤之间的表达均有显著性差异 p o 0 5 骨肉瘤与骨软骨瘤之间的表达有显著性差异 p 0 0 5 表明骨巨细胞瘤为一 种 潜在恶性 或 介于良 恶性之间 的溶骨性肿瘤 c d l 4 7 和s u r v i v i n 可作为判断骨巨细胞瘤恶性程度和判断预后的一个重要指标 4 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞瘤复发组中的双阳性表达率明显高于 无复发组中的双阳性表达率 差异有显著性 c d l 4 7 和s u r v i v i n 在骨巨细胞 瘤患者中的表达呈正相关关系 可以认为c d l 4 7 和s u r v i v i n 联合表达对于 判断骨巨细胞瘤的预后有一定的指导意义 c d l 4 7 和s u r v i v i n 之间通过某种 作用机制互相影响 其联合表达可初步作 为骨巨细胞瘤患者预后的重要指 标 肿瘤靶向治疗已经成为研究的热点 抗c d l4 7 或s u r v i v i n 的靶向治疗 为骨巨细胞瘤的治疗提供一种新的方法 可能有效地控制骨巨细胞瘤患者的 复发及转移 3 2 图l a 骨巨细胞瘤组织中c d l 4 7 蛋 白表达阴性 s p 2 0 0 图2 a 骨巨细胞瘤组织中c d l 4 7 蛋 白表达阳性 s p 2 0 0 图3a 骨肉瘤组织中c d l 4 7 蛋白表 达阳性 s p x 2 0 0 图4a 骨软骨瘤组织中c d l 4 7 蛋白表 达阴性 s p x 2 0 0 附图 3 3 图1 b 骨巨细胞瘤组织中c d l 4 7 蛋白表达阴性s p x 4 0 0 图2 b 骨巨细胞瘤组织中c d l 4 7 蛋白 表达阳性 呈棕黄色 定位于细胞的细 胞膜和胞浆内s p x 4 0 0 图3b 骨肉瘤组织中c d l 4 7 蛋白表达阳 性 呈棕黄色 主要定位于细胞膜上 也表达于胞浆内s p x 4 0 0 图4b 骨软骨瘤组织中c d l 4 7 蛋白表达 阴性s p x 4 0 0 圈5 a 骨巨细胞瘤组织中s u r v i v i n 蛋白表达阴性 s p x 2 0 0 图6 a 骨巨细胞瘤组织中s u r v i v i n 蛋白表达阳性 s p x 2 0 0 图7 a 骨肉瘤组织中s u r v i v i n 蛋白 表达阳性 s p x 2 0 0 图8a 骨软骨瘤组织中s u r v i v i n 蛋白 表达阴性 s p x 2 0 0 图5 b 骨巨细胞瘤组织中s u r v i v i n 蛋白表达阴性s p x 4 0 0 图6 b 骨巨细胞瘤组织中s u r v i v i l l 蛋 白表达阳性 呈棕黄色 定位于细胞质 内和细胞膜上s p x 4 0 0 图7 b 骨肉瘤组织中s m v i v i n 蛋白表达 阳性 呈棕黄色 定位于细胞质内和细 胞膜上s p x 4 0 0 图8b 骨软骨瘤组织中s u r v i v i n 蛋白表 达阴性s p x 4 0 0 1 2 3 4 5 j a f f ehl l i c h t e n s t e i nl p o r t i srb g i a n