（细胞生物学专业论文）瘦素（leptin）在小鼠胚胎围着床期的动态表达.pdf

西南大学硕士学位论文摘要 瘦素( l e p t i n ) 在小鼠胚胎围着床期的动态表达 细胞生物学专业硕士研究生高立芳 指导教师：李跃民教授 谭毅研究员 摘要 在妊娠过程中胚胎着床是一个重要环节。胚胎着床是受精卵发育至脱带囊胚期 后对子宫内膜的粘附入侵的一个复杂生理过程。它包括胚泡的定位、粘附及植入。胚 胎着床的关键步骤是胚胎滋养层细胞对子宫内膜的侵入，与母体成份共同形成胎盘。 滋养层细胞与子宫内膜上皮细胞和基质细胞之间、上皮细胞和基质细胞之间的“对 话”，精确调节滋养层细胞的增殖分化和子宫内膜的蜕膜化，从而保证滋养层细胞 ( t r o p h e c t o d e r m ，t e ) 的适度侵入。人类胚胎着床发生在促黄体素( l u t e i n i z i n g h o r m o n e l h ) 峰之后大约7 l l 天( d a y d ) ，小鼠胚胎的“着床窗”在妊娠4 5 d ，持 续2 4 h 左右，受到多种激素、生长因子及粘附分子等因素的调控。近年来研究发现， 剔除l e p t i n 基因的o b o b 小鼠由于缺乏功能性l e p t i n 而导致肥胖和不育，给予外源性 l e p t i n 又能恢复其生育能力，但在胚胎发育第4 d 前停止给予l e p t i n ，妊娠又将中断) l 。 因此体内一定水平的l e p t i n 是保证生殖功能正常的前提过高或过低都可能破坏这种 平衡影响生殖功能，甚至导致不孕。 为了更好地理解l e p t i n 在胚胎围着床期中的作用，我们采用了r t - p c r 、免疫组化 和免疫荧光等分子生物学技术来探讨胚胎围着床期l e p t i n 在子宫组织和胚胎中的表达 规律，旨在为胚胎着床机理提供新的理论依据。 试验一目的：探讨l e p t i n 在妊娠早期小鼠子宫中的表达规律。方法：性成熟雌性n i h 小鼠用孕马血清促性腺激素( p r e g n a n t m a r es e r u l l lg o n a d o t r o p h i n ，p m s g ) 和绒毛膜 促性腺激素( h u m a nc h o r i o n i eg o n a d o 扛o p h i n ，h c g ) 进行超排卵，与成熟雄鼠交配， 在妊娠l d 6 d 分别脱臼处死小鼠取其子宫，用d m e m f 1 2 培养液充分冲洗子宫，然后 进行以下试验：1 分别提取总r n a ，检测小鼠子宫以及胚胎着床点和非着床点的子宫 l e p t i nm r n a 表达规律：2 分别用1 0 福尔马林固定，石蜡包埋，切片，然后进行免 疫组织化学试验，检测l e p t i n 蛋白的表达规律。结果：妊娠1 6 d 小鼠子宫均有l e p t i n m r n a 和蛋白表达，l e p t i n 蛋自主要定位于腔上皮和腺上皮：l e p t i nm r n a 水平呈现 规律性表达，1 d 、2 d 表达微弱，3 d 开始增强，4 d 达到高峰，5 d 、6 d 仍维持在一定水 平；无论妊娠5 d 或6 d ，着床点l e p t i nm r n a 水平比非着床点显著增强。结论：子宫 西南大学硕士学位论文摘要 组织表达的l e p t i n 与胚胎发育、胚胎着床的进程有密切关系。 试验二目的：探讨l e p t i n 在围着床期胚胎中的表达规律。方法：性成熟雌性n i h 小鼠用p m s g 和h c g 进行超排卵，与成熟雄鼠交配，分别在妊娠l d 3 d 上午脱臼处死 小鼠取其输卵管冲取2 - c e l l 、4 - c e l l 、8 - c e l l ；在妊娠4 d 取其子宫角，冲取桑椹胚、 囊胚。保存于- 8 0 c ，然后进行以下试验：1 分别提取总r n a ，检测胚胎中l e p t i nm r n a 表达情况；2 试验当天冲取扩展囊胚进行免疫荧光试验，在激光共聚焦显微镜下观察 l e p t i n 蛋白的表达和分布情况。结果：l e p t i n m r n a 和蛋白仅在囊胚期特异性表达，其 余各时期未见l e p t i nm r n a 和蛋白的表达。结论：l e p t i n 参与了胚胎着床过程。 关键词：瘦素( 1 e p t i n ) 胚胎围着床期r t - p c r 免疫组化免疫荧光 l i 嚣枣大学褒士孥彼论文 a b s t r a c t t h e s p a t i o - t e m p o r a le x p r e s s i o no fl e p t i n d u r i n ge m b r y op e r i - i m p l a n t a t i o np r o c e s si nm i c e a b s t r a c t e m b r y oi m p l a n t a t i o n ，w h i c hi sc r u c i a lt oe s t a b l i s hs u c c e s s f u lp r e g n a n c y , i sa c o m p l e xp h y s i o l o g i c a tp r o c e s sd u r i n gw h i c hf e r t i l i z e de g g su n d e r g od e v e l o p m e n tu n t i l t h eh a t c h e db l a s t o c y s ts t a g ea n ds u b s e q u e n t l yi n v a d ee n d o m e t r i u m i m p l a n t a t i o ni s a c c o m p l i s h e dt h r o u g ht h r e ep r o c e s s e si nv i v o ，i e a p p o s i t i o n ，a t t a c h m e n ta n d i n v a s i o n ak e yp r o c e s so fe m b r y oi m p l a n t a t i o ni si n v a s i o no fc y t o t r o p h o b l a s tc e l l si n t o e n d o m e t r i u m a n de s t a b l i s h m e n to fp l a c e n t at o g e t h e r 旗如i t sm a t e r n a le l e m e n t s 。a n a p p r o p r i a t e a n d s p e c i f i c m o l e c u l a rd i a l o g u e sm u s ta l s o t a k ep l a c eb e t w e e n c y t o t r o p h o b l a s tc e l l so fv i l l o u st r o p h o b l a s ta n dt h el u m i n a le p i t h e l i a la n ds t r o m a lc e l l s o f m a t e r n a ld e c i d u a t h eh u m a ne m b r y oi m p l a n t sa b o u t7 1ld a y sa f t e rl hp e a k , a n di n m o u s e t h e i m p l a n t a t i o n w i n d o wl a s t s f o ra b o u t2 4 ha t d a y 4 5o f p r e g n a n c y h o w e v e r , e m b r y oi m p l a n t a t i o ni sc o n t r o l l e db yav a r i e t yo f h o r m o n e s ，g r o w t h f a c t o r s , a d h e s i o nf a c t o r sa n ds oo n i np r e v i o u ss t u d y , an a t u r a lk n o c k o u tm o d e lo f l e p t i ni st h eo b o bm o u s e ，w h i c hp o i n tm u t a t i o no fo bg e n eo c c u r r e dr e s u l t i n gi nt h e t o t a la b s e n c eo ff u n c t i o n a ll e p t i n o b o bm i c ea r eo b e s ea n di n f e r t i l e f e r t i l i t yc o u l db e r e s t o r e db yt r e a t m e n tw i me x o g e n o u sl e p t i n h o w e v e r , p r e g n a n c yw i l lb ei n t e r r u p t e di f l e p t i nt r e a t m e n tw a sn o tc o n t i n u e db e f o r e4d a yo fp r e g n a n c y s o ，p h y s i c a ll e p t i n c o n c e n t r a t i o ni se s s e n t i a lf o rh e a l t h yr e p r o d u c t i o nw h i l ea b n o r m a ll e p t i nc o n c e n t r a t i o n w i l lb ea d v e r s et or e p r o d u c t i v ef i m c t i o ne v e rl e a dt oi n f e r t i l i t y t ob e t t e ru n d e r s t a n dt h ee f f e c to fl e p t i nd u r i n gp e r i - i m p l a n t a t i o np r o c e s s ，w e i n v e s t i g a t e de x p r e s s i o no fl e p t i ni nm o u s eu t e r u sa n de m b r y o sd u r i n gp e r i i m p l a n t a t i o n p r o c e s sb yr t - p c r , i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y a n di m m u n o f l u o r e s e n c e 。 e x p e r i m e n to n e0 b j e e t i v e ：t oi n v e s t i g a t ee x p r e s s i o n o fl e p t i ni np r e g n a n t m o u s eu t e r u s m e t h o d s ：s e x u a lm a t u r e dn i hf e m a l em i c ew e r es u p e r o v u l a t e db ya n i n t r a - p e r i t o n e a li n j e c t i o no fp r e g n a n tm a r es e r u mg o n a d o t r o p h i n ( p m s g ) f o l l o w e db ya s i n g l ei n j e c t i o no fh u m a nc h o r i o n i cg o n a d o t r o p h i n ( h e g ) 4 8 hl a t e r , a n dt h e nw e r e m a t e dw i t hf e r t i l em a l e so ft h es a t n cs t r a i n 。t h eu t e r it i s s u ew a sc o l l e c t e df r o mt h e p r e g n a n tm i c eo ft h r o u g hd a ylt od a y6k i l l e db yc e r v i c a ld i s l o c a t i o n 。t h eu t e r u sh o r n s w e r er i n s e dw i t hd m e i v l ft2m e d i u ma d e q u a t e l y , t h e ns u b j e c tt ot h ef o l l o w i n g p r o c e d u r e s ： i i i 嚣鬻大掌醺学位论文 a b s t r a c t 1 t 0 t a lm r n aw a se x t r a c t e dw i t ht r i z o l r e a g e n t f r o m i m p l a n t a t i o n a n d i n t e r i m p l a n t a t i o ns i t e s ，r e s p e c t i v e l ya n dt h ee x p r e s s i o nl e v e lo fl e p t i nm r n aw e r e e x a m i n e d ； 2 ，1 1 1 eu t e r i n et i s s u ew a sf i x e di n1 0 n e u t r a lb u f f e r e df o r m a l i n ，e m b e d d e di np a r a f f i n a n ds e c t i o n e da t5 b mo ft h i c k n e s s i m m u n o h i s t o c h e m i s t r yw a sp e r f o r m e dt oa s s e s s e x p r e s s i o nl e v e lo f l e p t i np r o t e i n ， r e s u l t s ：l e p t i nm p , n aa n dp r o t e i nw e r ed e t e c t e di nu t e r u so f m o u s eo f d a ylt od a y6 o fp r e g n a n c y l e ：p t i np r o t e i nw a s ；f o u n dm a i n l ye x p r e s s e di nl u m i n a le p i t h e l i u ma n d g l a n d u l a re p i t h e l i u m t h em r n a l e v e lw a s l o wo nld a yo r2d a y b u ti tw a ss t a r t i n gt o i n c r e a s ef r o md a y3a n dp e a k e do nd a y4u n t i l0 nd a y5o rd a y6 。曩碡m r n al e v e li n i m p l a n t a t i o ns i t e sw a sm u c h1 1 i 曲e rt h a nt h a ti ni n t e r i m p l a n t a t i o ns i t e so n5d a yo r6d a y c o n c l u s i o n s ：t h ed i f f e r e n t i a le x p r e s s i o no fl e p t i ni nm o u s eu t e r u ss u g g e s t e dt h a tl e p t i n m a yp l a ya ni m p o r t a n tr o l ed u r i n ge a r l ye m b r y od e v e l o p m e n ta n di m p l a n t a t i o np r o c e s s i n m i c e 。 e x p e r i m e n tt w oo b j e e t i v e ：t oi n v e s t i g a t et h ee x p r e s s i o no fl e p t i nd u r i n g p e r i i m p l a n t a t i o np r o c e s so f e m b r y o s 。m e t h o d s ：s e x u a lm a t u r e dn i hf e m a l em i c ew e r e s u p e r o v u l a t e db ya ni n t r a - p e r i t o n e a li n j e c t i o no fp r e g n a n tm a l es e r l l l ng o n a d o t r o p h i n ( p m s g ) f o l l o w e db yas i n g l ei n j e c t i o no fh u m a nc h o r i o n i eg o n a d o t r o p h i nm c g ) 4 8 h l a t e la n dt h e nw e r em a t e dw i mf e r t i l em a l e so ft h es a m es t r a i n o nt h em o r n i n go fd a y l ，d a y2d a y3 ，t h ef a l l o p i a nt u b e sw e r ed i s s e c t e do u ta n df l u s h e d 巅墩转m e m 零i 2 m e d i u m g r o u p so f t w o c e l l ，f o u r - c e l la n de i g h t - c e l le m b r y o sw e r eo b t a i n e d ，n l eu t e r u s w e r ec o l l e c t e df r o mt h ep r e g n a n tm i c ew h i c hw e r ek i l l e do nt h em o r n i n go fd a y4b y c e r v i c a ld i s l o c a t i o na n dt h eu t e r u sw e r er i n s e dw i t hd m e m f 1 2a d e q u a t e l y , g r o u p so f m o r u l aa n db l a s t o e y s te m b r y o sw e r ec o l l e c t e d a n ds t o r e da t 8 0 u n t i lm r n a e x t r a c t i o n ，t h e ns u b j e c tt ot h ef o l l o w i n gp r o c e d u r e s ： 1 t o t a lm r n aw a si s o l a t e df r o me m b r y o so fe a c hs t a g e s r e s p e c t i v e l ya n dt h e e x p r e s s i o nl e v e lo f l e p t i nm r n a w e r ee x a m i n e d + 2 f u l l ye x p a n d e db l a s t o c y s t sw e r er e c o v e r e db yf l u s h i n gt h em o u s e u t e r io nt h e a f t e r n o o no f d a y4o f p r e g r a n c y + i m m u n o f l u o r e s c e n c es t a i n i n gw a sp e r f o r m e do n e m b r y o st oa n a l y z ee x p r e s s i o na n dd i s t r i b u t i o no f t e p t i np r o t e i nu n d e rl a s e re o n f o c a t m i c r o s c o p e 。 r e s u l t s ：b o t hl e p t i nm r n aa n dl e p t i np r o t e i nw e r ed e t e c t e di nb l a s t o c y s t ，a n dn o s t a i n i n gw e r ef o m a di ne m b r y o so f o t h e rs t a g e s i v 西南大学硕士学位论文 a b s t r a c t c o n c l u s i o n s ：t h et e m p o r a le x p r e s s i o no fl e p t i ns u g g e s t e dt h a tl e p t i nm a yp l a ya l l i m p o r t a n tr o l ed u r i n ge m b r y oi m p l a n t a t i o np r o c e s si nm i c e k e y w o r d s ：l e p t i n ；e m b r y o ；p e r i - i m p l a n t a t i o np r o c e s s ；r t - p c r ；i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ； i m m u n o f l u o r e s e n c e v 独创性声明 y9 3 7 墨s 学位论文题目：瘦塞f l ! 乜堑坠) 查l ! 鼠延脸国羞废翅的动态鑫述 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得西南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的 说明并表示谢意。 学位论文作者：南立焉签字日期：加6 年f 月硼日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院可以将学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存、汇编学位论文。， ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：回不保密， 口保密期限至年月止) 。 ，p 、 学位论文作者签名：禹壹蔫导师签名二筘。乡伍f 传 签字日期：阳6 年 - 月枷日 签字日期：年月 日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 电话：() 邮编： 西南文学磋学使论文文藏综述 詈舅e 曼蔓甚! 邕寡寡鼍烹燃拦邕舅舅曼曼曼量曼罾皇璺皇皇量燃ii l l l 囊置晕曼量曼曼曩目嘲黼舞董皇曼曼曼量 文献综述 随着生活水平的不断提高，肥胖症的发病率逐年增加。肥胖症是2 型糖朦瘸、高 血压病、冠心痫等的高危因素，蘑威胁着人类的健康，但其发生的分子学机制目前 惫未完全翅明。瘦素( 1 e p t i n ) 静发瑷是基于对瑟瑟基绷( o b e s i t yg e n e ，o b 基鞠豹研究， 最初使它受美注静是它减少动魏掇食帮降低俸肉耱魏派积静俸胡。1 9 9 4 年，荚凿洛竞 菲勒大学f r i e d m a n 领导的实验室成觉z h a n g 等口l 利用定位克隆技术首次成功觉隆了小 鼠0 6 基因及人类的同源序列对肥胖基因的研究提供了分子生物学理论簇础。最初 认为瘦素的作用只是通过刺激下丘脑调节脂肪代谢，降低机体内脂肪沉积。然而近年 来对它的一系列疆究已远远超出了这个单一豹领域，痰索黠翳弩等全身多种豢要器官 生理活动、蹩髂瘩平鳇耱骚戴落豢至撬俸生长发育粒调控传耀被陵续发瑷，燕然其孛 仍有许多机制尚待阐明，但各种研究成果不断。近几替来，不断有关予痰索外餍作用 的报道，其中倍受关注的是它参与哺乳动物的生殖功能。 1 瘦素概述 l 。1l e p t i n 魏分子生麓学替毪及箕努露 l e p t i n ，卵瘦素，又称茁条索。l e p t i n 是肥胖基因( o b e s eg e n e ，o b 基因) 的编码 产物，主要魑由脂肪组织分泌，参与食物摄入和能量平衡的调节。人类的0 6 基因位 于第7 号染饿体长臂3 区1 带3 溉带( 7 q 3 1 3 ) ，长约2 0 k b ，含3 个外显予和2 个内含 子，5 侧翼灏净含有t a t a 盒、3 个拷受的g c 盘和1 个c c a a t 增强子缕食蛋自结 会整点，3 端魏强3 7 k b 弱菲壤褥嚣_ 耱富含c t 豹_ 亭确。其蛋白产凌由1 6 7 令蘸鏊酸缝 成，其n 端沌2 1 个氨基酸组成的信号肽，c 端有二巯键，是保持其稳定性和生物活 性的关键部位，在分泌过程中信号股被酶切去除，形成成熟的l e p t i n ，分子擞为1 6 k d ， 具有强亲水性。小鼠0 6 基因是位于第6 号染色体近端的小眼基因，其c d n a 与人有 8 4 豹网源 生，嚣者静氨基酸序列有8 7 同源。大鬣楣关基因为f a t t y 基戮，与小鼠 帮灭夔氮基黢滓翻藏淫牲分裂为9 6 襄s 3 。猪拍鏊强与略莲动麴毒8 5 弼瓣嚣，与 人和牛曲纂弱阉源性分和为8 8 和9 2 。外周血中的l e p t i n 大部分与瓿潦缀白结合， 只有游离的l e p t i n 才表现出生物学活性，它的主要功能是在下丘脑参与调节食物摄入 和能量平衡，亦可作为一种代谢信号对下丘脑一垂体一性腺 ( h y p o t h a l a m i c - p i t u i t a r y g o n a d a l 。h p g ) 轴发挥功能f 4 】。曲基因的表达具有勰肪组织特 异惶荠与箕分德程度密镯相关。豫疫下霾薪、大霹貘、赫系貘、嚣疆貘富较褒袭遮努， 骨髂胍、褥。e 皮、胎盘、卵巢、乳腺、胎儿心脏和成学缀织等也有少量含成l ，j 。 露瘩大学疆壬孥黩论文文献综述 舅冀蔓皇一i l l l l a t _ lj l l l li , i l l l l l l ll l l l l l l l l 墨舅! 曼鼎 l ，2l e p t i n 蹙体戆分予生糍学穑拣及其分毒 l e p t i n 受体( o b r ) 是赫屎漓旗因( d i a b e t e sg e n e ，d 6 ) 的编码产物，含谢1 3 0 个糖蚕 囱亚基，分子鼙为1 9 0k d 属l 粪缁臆西予整俸趱家藏成员，广泛分布予申糕和矫周 缝织。o b - r 必辐褒特羚熬踌貘簧巍，出藏羚、跨貘承l 瓣蠹三令续搀域襁裁。腿蠹秘藏 落结撵裙警德守，缺乏蘸氮酸激骜滔瞧。霉警l e p t i n 痔裂楚度器毒，毽楚英受俸在耪癸 瓣有所不弼+ 人如基嘲位于第1 号染色体斑臀3 区1 带f l p 3 1 ) + 长纳7 0 k b ，由2 0 个外最予和1 9 个内 禽子构成e d n a 长3 5 k b 。编磷1 1 6 5 个氨蒸酸残基构成的痰素受体蛋自。蠢、靛幽基魏 寇蕴予第4 蛩染瞧搏，其m r n a 长5 ，1 k b ，编羁含2 1 令懿罄酸信号歉豹8 9 4 个懿基黢残纂 滋蛋巍囊列。太移，l 、藏o b 壤痔弼豫势嚣秘魏内嚣麴麓潦瞧羚鬟燕7 8 、7 1 1 6 , 7 , 8 | 。 o b r 寄a 、b 、c 、d 、e 蠹静秀 每澎式，掇据臆内霹的妖魔及氯基酸垮列不瓣，o b - r 可分为长戮( o b r l ) 、短登( o b * r s ) 两种m 。b 穗耩予o b r l ，a 、e 、d 、e 燃耩予o b r s 黧。o b r e 鞔乏踌貘嚣莰，是霹溜经受锩，其德o b r s 髓内嚣为3 2 3 4 令甄蒸酸l 藤人 类无o b r e 器在，所以在人类中仅商4 种异形体，这4 种异形体的胞外结构域、跨膜结 魏域致稳内籀擒壤孛翦2 9 巾氮煞黢净残竞全程霜，它爨之窝豹差异巍予魏肉结擒壤的 长度不两。蒺中b 型磁究较淹深入，o b r b 缒井送为8 1 6 个氨基黎，踌滕鞋为2 3 个氨纂 羧，耱内氍露3 0 2 3 0 3 伞氮基酸，菇审麓内速包含j a k “a n u sk n a s e ，j a k ) 缝合继捷域 叛及信号锩鼯转录激涯因子( s i g n a l t r a n s d u c e r a n d a c t i v a t o r o f t r a n s c r i p t i o n ，s t a t ) 结合的 共同岸列y x x q ，o b 。r b 悬唯一能进行信号传导并调节热量摄入和能量消耗的异形体 i 9 1 。 o b r b 主要分布予下燕蹙多令竣蘑区裘这祷羟多靛y ( n e u r o p e p t i d ey ，n p y 靛壤耱 貘，懑道j a k s t a t 3 鞠m a p kf m i t o g e n a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e ，m a p k ) 路径清节傣 号转撑，娥主簧的功能受体i ”“j 。o b 。r s 型分帮予中椴神经系统。o b r a 和其余的异 形体样胞内结构域较短，氨熬黻数目少于5 0 。资料残明1 1 2 f o b - r a 胞内特构域由3 3 个 蘸基羧缀成，它不能激活j a k 激瓣；氇不挠激潘s t a t 3 ，疆筵它苓粪蠢羡譬健簿功鼗， 它可瞧撵巍l e p t i n 熬蘩宫蛋鑫，调节游离酪t e p t i n 滚麓，或律委l e p t i n 转运餐是，使l e p t i r t 经过斑脑屏障，到达其传艏挺点丽发挥效应。o b r e 、o b - r d 的功髓弱前不其清楚。 0 b r m r n a 在多种组织中璺不同程度的表达。o b * r b 主要在下丘脑的弓形核、腹 内侧棱、背内侧核、室旁核等醚域袭达，这些区域被认为是体重调节的煎簧酲域西 两o b r b 疆谈菇楚主要静凌髓性受谗；o b r b 在一壁拜蠲篷甄翔赫、瞥、漆銎鳐、鹜 上藤等氇商多整袭这。0 b 。r s 在多个努鼹器富孛建掸救装运，葵审0 b r a 熬褒这最为广 泛，在脉络魑中表达量最高，搓豫缸、瞥中也有袭达，可能介导瘦素扶虹。p 通避血脑屏 障转运入脑以及瘦索的清除。0 b r a 和0 b 。r b 在下匠脑中同时表达，提示邀两者有相互 2 西南犬学硕士学位论文文献综述 作闻的可能。 2 瘦素在体蕉调节巾的 # 用 能量摄八和能量消耗的平衡机制决定了动物的脂肪储存，肥胖基因表达蛋白瘦素 是调节携薰乎，黉静分子之一，肥释蒸溷突变鼙鞋导致耱弊病帮糖象痰+ 嚣瘦紊嚣惫信 号通路的一部分调控体内脂肪的储存。m a f f e i 等m i 研究发现瘦素在人类和啮齿类血 浆串鹣滚瘦等俸蠹艨赫含量整正摺关，显与人类豹髂蓬摇鼗( b o d y m a s s $ i n d e x ，b m i ) 呈难相关。舰液中存在的瘦索，以倍号分子的形式随舡液循环作用于下丘脑，然后以 爱镶棼豹形式控割髂内囊魏禽量，绦捺捧重瓣稳定。p e l l e y m o u n t e r 等t “ ；i 肇c 5 7 b l l 6 j 模型鼠中发现肥胖蕊因突变厢其体煎增加，倪活动量、代谢和体温均降低。给小鼠注 射痰豢嚣，其蒋重、传爨和摄食量均簿强，餐鼗巍事、体温秘活动量羚蔫。这谨甥瘦 素有减轻体重，促进摄食和产热的作用。 3 痰素在熊疫方瑟的律蠲 动物豹慧养状态与其免疫功能密切相关。在饥饿和营养不是状态下，瘦索浓度下 降，胸腺淋巴结萎缩t 细臌数量减少，降低了小鼠的免疫能为，免癀和炎症反应减 弱。注射外源瘦素臌，胸腺藏量和t 细胞数辙均增加，免疫反戍增强，消除了因饥饿 导致的免疫抑制效殿l ”。l o r d l l 6 1 等壤发现l e p t n 能刺激含有l e p t n 信号转导受体的 c d 4 + t 细胞增殖。缺乏l e p t i n 的o b o b d 、鼠，不仅肥胖，而且t 细胞成熟殿其细胞毒性作 用均有缺陷。鞋l e p t i n 与诧种o b o b t j , 鬣的t 缨耱培养可诱导记忆下细胞增殖、分纯成熟 和产生细胞因子，饥饿小鼠胸腺、脾脏明显萎缩，而蛤予外i 据l 性 e p t i n w 显著抑制胸腺 和脾脏的萎缩，荠使胸腺缀臆总数增翔1 8 依，其中鞋c d 4 + 细臆最为鼹著。由藏可觅， 瘦索通过多种途径激活免疫细胞，尤其是c d 4 + t 细胞，提高细胞免疫功能，有利于更 誊 的抗炎稼用，提菇祝体存渍率。 4 烧素对生殖系统豹影响 哺乳动物的生殖系统对内环境能量的可利用性魁非常敏黪的。近年研究发现，瘦 素不莰疑调节食欲、控割锬食、擦剿疆臻会戏、龌遴疆黪分瓣、调控能量我谢，还霹 影响女性生殖内分泌系统，调节f 丘脑一垂体一性腺( h y p o t h a l a m i c - p i t u i t a r y - g o n a d a l ， h p g ) 轴，辫酶生藏功毙及女蛙捧臻，参与毒毒期的癌动，燕连接营粪与生骥的鼗谢 信号，发挥复杂的生理调控作用1 4 ”l 。原先认为l e p t i n 仅在白色脂肪组织合成分泌。 毽涎嚣发残下正弦、垂体、髯上受鏊疯郝、嚣貉舰、台体滋舞层细胞、乳腺土皮等也 有l e p t i n 的合成分泌；在下臣脑、垂体前叶健性腺细胞、卵巢颗粒细胞、子寓内膜毗 及攀丸闻矮细胞中蠢o b r 表达l ”l 。此努，在女性生殖递包括卵巢m + 9 ，2 “、子富内膜 3 西南太学硕士学位论文文献综述 1 2 1 l 和胎盘1 2 ，2 ”、小随卵母细胞l q 和赘床前瓤腑1 2 | , 2 0 l 麓现有l e p t i n 与o b r b 的弼时表 达。从这些研究可队看出l e p t i n 及o b - r 对胎生动物的生殖机能发挥葡重要作翔。 4 1 瘦素对下丘脑一纛体卵巢轴的调节 动穆缝蘩状况静惫捌交纯将导致h p g 辘麴紊乱，麸纛影璃生殖痰势泌、捺舞鞋及 胚胎的发育。目前，育资料1 2 3 , 2 4 2 5 1 证禊i e p t i n 柱能量状况与生嫩轴的信号传递中起重要 捧掰，宅胃作胡子h p g 轴这生蓬辘懿各个麓次。 对下臣脑的调节：几年前对于l e p t i n 作用机制的研究重点放在下臆脑。这是因为 动锈耱摄食秘生殪系统豹调繁孛抠位予下矗藤。瑁瘦豢娃瑾o b o b 鬣或者营葬映乏麴 动物后发现萁促性腺激素释放激素r g o n a d o t r o p i nr e l e a s i n gh o r m o n e g n r h ) 持续上 势；动秘戆秘馕期楚出下丘弦分泌g n r h 来控剿懿，翅瘦素姓壤动鐾嚣会使动甥戆翅 情期提前；在切除卵巢并没射雌激綮的母鼠上瘦索能刺激促黄体綮f l u t e i n i z i n g h o r m o n e , ，l h ) 豹释放；弱瘦素楚褒培养熬大鼠弓扶拨正孛隆起糍裁激g n r h 瓣释教 2 6 1 。这些都说明瘦素能通过高级神缀中枢调带生殖活动。目前的研究袭明，痰索可能 是遴过鞋+ f 豹几个途径来发挥其作用。 1 真接作用于g n r h 神经元当机体脂脐贮存鬣达到某一水平时从脂肪中释放 入腹豹l e p t i n 术平舞亳，下丘弦的弓状按期疆侧正巾核都发现有o b rm r n a 的表达。 而这两个区域的神经元对摄食和生殖行为活动具肖调节作用。也有试验袭明 7 l e p t i n 可以作熙于事丘脑基底部，剩激g n r h 豹释放。由此可攘断l e p t i n 可能作为一 种代谢信号将脂肪贮存量传给含有g n r h 的神经元。 2 通过p o m c 系统奔导阿黑皮素原( p r o o p i o m e l a n o c o r t i n ，p o m c ) 基因的产物如 b 一内啡肽，促皮质繁等都对生殖活动其有调节作用。含有p o m c 基因的神经霓不仅存 在予弓状拔中( 此暖有大量的o b rm r n a 的表达) ，j i 百且与禽有g n r l t 的神经元有直接 的突触连接。多种迹象表明，p o m c 基因的产物可能楚瘦素与g n r h 分泌的介替因素， 但其详细的赍导机制还需进步的研究。 3 通过n p y 介导 神经默y ( n e u r o p e p t i d ey 。n p y ) 整由3 6 个氨基酸斑成的雾歉，在 下丘脑中对摄食和神经分泌活动起调控作用。与瘦素相反，n p y 既能够刺激动物摄食， 又能抑制德性腺激索的分泌。营养缺乏能g l 起弓挠核中n p y 纂因表达整增热，同时使 脑脊液中n p y 浓度上升。n p y 产物冉勺增加可以减少到达g n r h 神经元刺激信号的输入。 注射瘦素菇，降低t n p y 在弓状核的表达，消除了g n r h 释放的撺裁鞫素。献i 酝健进 7 g n r h 的释放1 2 ”。绵羊与大鼠下丘脑的n p y 神经元上有瘦索受体1 2 ”。这进一步证明 n p y 是瘦素作用于下丘脑g n r h 神经元静中奔物。 对垂体的调节：y u 2 6 1 等通过小鼠离体爽验发现，l e p t i n 在相当低的浓度卜_ ，可刺 激f s h 和l h 获离俸睡体蓠辞中释教疆来：在体实验表明，l e p t l n 可捌激l h 释放。瑟娃 4 瑙寿丈擘璜士学位论文文献综述 德 f j 认为献稻脐细膳分泌的瘦素。经盎液镶环抵达一f 矗脑，帮势经蒌体 】脉挞遘入垂 体蘸时，每瘦索受俸结台，增翔垂体分泌缀腱豹f s h 、l h 释放。至予t e p t i n 据 孽剩激在 体雏鬣l h 黯分泌，作者认舞可糍与1 e p t i n 作搦子g n r h 舂芙。 对性躲韵调节：c h e h a b 等t 糟1 诞实钤添饿l e p t n 霹促进雌挫子窘内貘和输鳃管上皮 磺生发育，使子富、郛巢和赣羚管戆重量增加；在雄性。彰始小鬣，l e p t i n 显著辩离f s t t 的永平，增热睾丸秘鞫穰警的莛量期辣子数量。也番霹究报道口。川i ，在小鼠期大鼠匏 健豫中均窍o b rm r n a 靛表达。郭耘字等1 3 2 1 在人卵泡渡中捡测到瘦素的存在，井在 荧光受徽镜下鼹察到颞粒缨腿发出黄绿色荧光，表明人卵巢黄素化颗粒细胞有瘦素受 锩蛋囊豹袈达，这提示卵巢为瘦素作异l 的靶爨寅，瘦素可能参与卵巢功能的调节。r y a n 等i t 9 1 拨现，在舞滤的颞粒绷骧期郛丘绷胞中，检测到有l e p t i n 及o b r 存在，并且l e p t i n 霹直接或婀接g l 熬生发泡破裂。k a r l s s o n 等m 1 也发现人类卵巢中有o b r m r n a ，并推 麟l e p t i n 可能壹接俘用予卵巢的颞靛细胞。这些实验表明l e p t i n 可以影响性腺的功能。 由北可见，l e p t i n 作为神经内挣泌生殖系统的个代谢信号，无论雌性还是雄性， 邋当的l e p t i n 水平澍生殖轴的调控具有遭要作用。 4 2 参与青春期的君韵 过去用阈体煎理论来解释青春期的启动。传统认为。脂肪所占体重百分比与青静 期启动有一寇关系。流行稿学调查也鞋示：青春期女孩初潮时，其身高可有不阊髓 体脂占体重的百分比相同，因此，形成了青春期启动的临群体脂学说郎最有基本体 脂达到最低阈值才能触发青春期和维持难常的届经周期。 最近的研究缩果寝明，瘦索为动物体肉代谢水平和耩脐沉积量的信号，它与青春 期的启动关系密讶 3 4 3 5 , 3 6 l 。在多种动物的黼青春期，已蕊察到l e p t i n 求平的升高与l 鞭 的最初脉冲分泌程时闻上的褶关谯。当体内脂肪含量上舞瓣跌聪精细耱释放入盎流 中的瘦素量增加，刺激h p g 的发育，撬离g n r h 靛滔动，餐避餐性艨激素的释放籀辩 淹刺激素( f o l l i c u l a rs t i m u l a t i n gh o r m o n e ，f s h ) 军 l l h 豹分泌。献嚣癌动发情髑斓“。 c h e u n g i 辩l 等矫究发现，l e p t i n 缺陷的动物模型o b o b 毳表瑗荧食欲宠避、极度怒群、不 雒避入青春捐，给予箨源性静l e 州n 治疗嚣，不覆能够减轻其体重，还辘促使其毒誊 蠲的曩糸，并恢笈其生育力。人类在毒春期蓠，盘漶中也存