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文档简介
多聚酶链式反应扩增dna片段 pcr 基础知识 1 dna分子的组成成分和结构 dna分子的基本组成单位是 共有种 每个基本单位是由一分子的 一分子的 和一分子的构成 脱氧核甘酸 4 磷酸 碱基 脱氧核糖 2 脱氧核甘酸的基本结构 基础知识 5 2 3 4 1 多脱氧核苷酸链结构简图 基础知识 3 dna分子的平面结构 识别 dna分子的3 端与5 端 oh端为3 磷酸基团的末端为5 1 dna分子的复制需要哪些条件 回忆 2 dna分子的复制的过程是怎样的 1 dna分子细胞内复制需要哪些条件 dna母链 4种脱氧核甘酸 解旋酶 dna聚合酶 2 dna分子的复制的过程是怎样的 解旋酶 dna聚合酶 母链 母链 引物 子链 pcr 多聚酶链式反应 1 定义 是一种体外迅速扩增dna片段的技术 能以极少量的dna为模板 在几小时内复制出上百万份的dna拷贝 2 原理 1 dna的热变性原理 2 dna复制原理 体外扩增dna如何提供相似环境 打开dna双链 模板 合成子链原料 催化子链合成 使dna聚合酶能从引物3 端开始连接脱氧核苷酸 细胞内复制 pcr 解旋酶 dna母链 4种脱氧核苷酸 dna聚合酶 引物 rna 变性 80 100 taqdna聚合酶 20 30个核苷酸构成dna或rna dna母链 4种脱氧核苷酸 dna的热变性原理 dna双链 单链 变性 加热80 100 复性 缓慢冷却 变性的目的 复性的目的 解开双链 有利于引物 和引物 与两条单链的结合 变性95oc pcr的反应过程 pcr的总结 1 每个循环包括 变性 复性 延伸 2 复制的方向 子链的5 端向3 端延伸 3 体外dna复制的条件 四种脱氧核苷酸 耐高温的dna聚合酶 引物 模板 缓冲溶液 严格控制温度 从第二轮循环开始 上一次循环的产物也可以作为模板参与反应 并且由引物 延伸而成的dna单链会与引物 结合 进行dna的延伸 这样 dna聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的dna序列 使这段固定长度的序列呈指数扩增 体内dna复制与pcr的技术区别 引物i 引物ii 5
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