抗球蛋白实验.ppt

抗球蛋白实验 1 主要内容 前言实验原理实验方法临床应用注意事项 2 前言 1908年 CarloMoreschi首先描述该试验 1945年 Coombs Mourant和Race建立了抗球蛋白试验方法 故该试验又称为Coombs试验 3 前言 抗球蛋白试验中球蛋白指IgG C3片段 C4片段 IgM IgA等 但主要指IgG和C3片段 IgG型抗体与红细胞表面相应抗原结合后致敏 但不产生可见的凝集反应 属不完全抗体 IgG具有很好的免疫原性 用其免疫动物 或通过杂交瘤技术 可获得相应抗体 即抗IgG 亦称抗抗体 4 5 抗球蛋白试验原理 待检红细胞 表面可能包被有IgG或C3片段等球蛋白 待检血清 可能含有IgG等球蛋白 已知抗原的红细胞 待检红细胞 表面未知的抗原 已知抗体的血清 产生可见凝集反应为阳性 否则为阴性 抗球蛋白血清 广谱和或单价 桥联作用 致敏 6 分类 直接抗球蛋白试验 检测红细胞表面是否结合IgG C3片段等免疫球蛋白 间接抗球蛋白试验 检测血清中是否含有IgG等免疫球蛋白 7 直接抗球蛋白试验 检测红细胞上抗体 不完全抗体 8 试剂 抗人球蛋白血清 分两类 广谱为抗IgG 抗C3抗体 单价分别为抗IgG抗体 抗C3抗体 不完全抗D血清 IgG型 AB型血清 5 RhD阳性红细胞悬液 3个人O型红细胞洗涤后制备 9 操作步骤 1 取受检查红细胞 以生理盐水洗涤3次 末次洗涤后 将上层盐水倒尽 再以滤纸将管口附着的盐水吸去 再配成5 红细胞盐水悬液 尽量除去血清 防止其含有的抗体产生干扰 2 取上述5 受检者红细胞盐水悬液1滴 移入试管 10mm 60mm 内 加抗球蛋白血清1滴 混匀 10 操作步骤 3 阳性对照 用不完全抗D血清致敏的5 RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴 混匀 4 阴性对照 正常人5 RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴 混匀 5 受检者以及阳性 阴性对照管同时以1000rpm离心1min 轻轻摇动 观察结果 11 间接抗球蛋白试验 检测血清中抗红细胞抗体 不完全抗体 12 操作步骤 13 操作步骤 1 取3支试管 按上表分别加入相应的细胞 血清和试剂 混匀 置37 水浴1h 致敏 用生理盐水洗涤3次 末次洗涤后 将上清液除尽 并用滤纸将附着于管口的盐水吸去 尽量除去血清 防止其含有的抗体产生干扰 每管再各加生理盐水1滴 混匀 2 每管各加适当浓度抗球蛋白血清1滴 桥联 混匀 1000rpm离心1min 观察结果 14 结果判读 阳性对照管凝集 阴性对照管不凝集 受检管出现凝集者为阳性 不凝集者为阴性 如阳性对照出现红细胞不凝集或阴性出现红细胞凝集结果 应分析原因重做 15 注意事项 离心过度 红细胞不易散开 容易导致假阳性 红细胞洗涤时应迅速 连续 不应中途停止 标本采集后最好立即进行试验 延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失 直抗 抗球蛋白血清严格按说明书使用 否则可产生前带反应和后带反应 而误为阴性结果 16 注意事项 红细胞上吸附抗体过少或Coombs试验阴性自身免疫性溶血性贫血直抗试验可呈假阴性反应 全凝集或冷凝集血标本及脐带血标本含有Wharton胶 且洗涤不充分 血液标本中有很多网织红细胞 且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时 都可使红细胞产生凝集 出现假阳性 阴性结果应核实 在试管中再加1滴IgG致敏红细胞 若阳性则表示试管内的抗球蛋白试剂确未被消耗 结果可靠 17 抗球蛋白试验临床应用 新生儿溶血病 HDN 胎儿红细胞已被母亲血型抗体 能通过胎盘的IgG型 致敏时 自身免疫性溶血性贫血 AIHA 自身抗体吸附在自身红细胞表面时 溶血性输血反应 输入红细胞被受者不完全抗体致敏时 药物性溶贫 甲基多巴类药物 青霉素等产生的不完全抗体吸附于红细胞时 18 抗球蛋白试验其他技术 抗