荧光光谱软件spectraSense使用说明[1].doc

荧光光谱软件spectraSense使用说明1. 预热并准备好激光器和反射镜组，调整好光路，确认光斑能够入射到样品上（请参照激光器和光路调整说明）。2. 准备好样品，固体片状样品采用固体样品夹，液体样品盛于石英四通比色皿。将样品放置于样品室位置并固定。3. 开启荧光光谱的单色仪（SpectraPro-2500i） 和 （SpectraHub）的电源4. 双击桌面spectraSense图标，开启荧光光谱软件5. 首先点击软件左下角的Hardware Configure页面，在该页面设置仪器参数（1） 左上角显示的是单色仪及其配件的示意图，其配件（如PMT光电倍增管）可以用鼠标左击并拖拽的方式，移到任何一个窗口。在荧光测试中，请将其移到光线出射箭头所指向的窗口，放开鼠标。单色仪中的反射镜，用于调整出射和入射光路。PMT和反射镜的位置，如没有特别要求，请勿擅自更改。（2） 右上角optics卡片上显示的是仪器及其配件的状态。如果不存在，或者没有连接的设备，在界面上会显示成灰色。本设备，在Monochromator1处显示为SP-2500i，为测试荧光时采用的单色仪。（3） 右上角CCD卡片：本设备没有安装CCD配件，该卡片现没有功能。（4） 右上角Detection卡片：该卡片用于显示并调整光谱探测器的初始状态。Channel1为PMT可见光探测器，Channel2为InGaAs红外探测器（一般两个探测器不同时开启，根据测试的光谱范围，决定开启那个探测器。如果探测器的电源没有开启，在该界面上不会显示相关参数设置，或者显示为灰色，不可调整）。Maximum HV设定PMT的最大工作电压，一般不作调整，以保护PMT。Default HV用于设定PMT正常工作时的电压。设定完工作电压后，要点击set，以确认此次设定。Turn HV Off on Exit该选项一般被选上，当软件退出后，系统会自动关闭PMT。注意事项：a） Default HV不要高于Maximum HV；b） 为了工作的稳定，请勿频繁开关PMT或者频繁调整PMT电压。每次开启PMT后，让其在一定电压下稳定一段时间，再开始测试，以保证重复性。（5） 右上角的monochromator卡片：该卡片用于调整单色仪参数。其中Model显示的是设备的型号。Grating显示的是处于初始位置的光栅。本设备有三块光栅，分别对应于不同波长的测试。其中1号光栅，对应？nm之前的测试，2号对应？nm之前，3号对应？nm以后。请根据不同的测试范围选择光栅。下拉Grating右边的滚动栏，选中光栅的序号，仪器会自动转到该光栅的位置。Grating选项的下方四个小窗口，显示的设备的狭缝（Slits）的工作状态。该设备配备有手动狭缝，因此狭缝状态一般不作调整。注意事项：a) 光栅调整过程会听到光栅移动的声音，在这期间，请勿关闭设备或者作任何与设备相关的操作；b）Slits狭缝参数会影响实验图谱的重复性，即使是手动狭缝，也请仔细的记录实验中，光路进口和出口的狭缝宽度，可以将该参数输入到，side exit slit和side entrance slit相应栏中（单位为um），以便和图谱一并保存。狭缝宽度调整范围在10um-3000um，请不要接近极限刻度，以防止咬合损坏。（6） 其余的选项卡，因为本设备没有配备相关的配件，不作说明6. Hardware Status页面：显示设备的状态，一般在Hardware Configure页面做完相关调整后，在Hardware Status页面就不再作调整。7. survey mode页面：该页面用于初步获取图谱并对测试仪器参数进行调整，以获取信噪比更好的实验数据。右上角的窗口显示获得的图谱。首先在右上角的窗口察看仪器参数。a） setup卡片中integration time用于设定积分时间，越长的积分时间能够得到越好的信噪比，同时要使用越长的时间用于图谱扫描。slit width在前面设定完成后就不作变更。如果发现信号强度比较低，可以手动调整光线入口（样品室端）和出口（PMT端）的千分尺，以达到调整狭缝宽度的目的。一旦得到满意的图谱，就可以固定两个狭缝的宽度进行测试，这时候请将狭缝的宽度在千分尺上读出来，记录在Entrance slit width和Exit slit width下面（单位um），并按set键，以便和测试图谱仪器保存，用于将来实验条件的重复。Mono1栏显示单色仪现在所在波长，可以键入一个感兴趣的波长，并按Goto将单色仪调整到该波长位置，以便后面的操作。b） DET HV选项卡，用于调整PMT的工作电压，一般在前面Default HV调整完毕后，这边就不作调整。如果发现实验图谱信噪比很低，可以在一定程度上提高PMT的工作电压。在下方键入所需的工作电压（小于Maximum HV），按set进行设置。设置完毕，按on打开PMT（该窗口界面的红灯亮起表示PMT开启，绿灯表示关闭）。开启PMT后，可以在下面的channel1窗口，按read察看单色仪所在波长的强度。（注意：按read或者进行测试之前，请先确定样品室的样品处于正确的位置，样品室的盖子已经合上，激光没有直接进入单色仪，并估计样品的发光强度，调整合适的狭缝宽度。对于未知发光强度样品，请先调小狭缝宽度进行测试，以免损坏PMT）。c） 如果需要进行差谱或者扣除仪器的暗信号，可以在real time processing栏进行设置。需要扣除仪器的暗信号，把Dark Subtract选项选中；如果需要进行差谱，要在Ref source a File中，调出要被扣除的谱线文件。Reads per point用于设定每个点进行的测试数，如果选择的2以上的测试数，仪器自动对测试得到的数值进行平均后，作为结果输出，如果没有特别要求，一般选择1。d） Monochromator栏用于输入测试的起始波长（From）和终止波长（To）以及扫描步长（Step）。e） Adjustments和Hideadjustments用为显示和隐藏Setup和DET HV选项卡f） 所有参数设定完毕，调整样品室侧面的滤光片轮，选择合适的滤光片进行测试。其中1位置：表示全开，该位置用于仪器检查，一般不建议用该档；2位置：滤除350nm波长的光；3位置：滤除500nm波长的光；4位置：滤除650nm波长的光；5位置：滤除800nm波长的光；6位置：滤除800nm波长的光。g） 请综合考虑所采用的激发光源以及自己的样品的发光峰位选择滤光片和测试范围以及其他的测试参数，原则是滤掉激光线，避开倍频线，充分反映样品的发光谱线，并保证谱线强度。h） 以上设定完成，请复查一遍光路，按Go进行测试。按Clear，会清除窗口显示的谱线。i） 按optimize按键，可以对图谱的发光峰强度进行进一步的调整。进入optimize，单色仪会自动移到图谱的发光峰所在位置，可以通过调整PMT的电压，Slits的宽度以及积分时间，观察峰位的强度，得到理想的强度和信噪比，按stop返回。8. Acquisition页面用于采用survey模式优化了测试参数后，获取样品的谱线。其中大部分参数已经在前面介绍过了，在这里主要强调几个方面。a） ITime用于设定积分时间。cycle用于设定测试过程中谱线需要被扫多少次。每一次可以被分别存下来，也可以合并保存成一个文件。当cycle被设置为大于1的数值时，Delay则用于设定两次测试之间的间隔时间。注意间隔时间设定前，应先测试单次扫描所进行的时间，设定的Delay时间应该大于单次扫描时间。b） 关于图谱获取程序（Acquisition Routines）和图谱文件的保存:为了保持同类样品的测试具有重复性并且提高测试效率，一般需要对同类样品，设定一个最佳的获取程序。最佳的获取程序，一般在多次测试摸索后获得。一旦固定下来，可以把在该软件中键入的所有仪器参数，都保存为 *.rtn的文件，以便下次测试重现所有参数。一旦*.rtn文件被调用，本软件的所有参数将被重置到该文件所描述的状态。Comment栏用于键入关于测试样品的说明文字，比如样品的制备条件，以及一些测试中没能够保存的条件。下方的save data as用于保存测试获得的图谱文件。图谱文件有三种格式，一般保存为*.spt和*.txt两种格式，其中*.spt包含该图谱测试过程中的参数，可以方便下次测试同类样品时重复；而*.txt文件只是单纯的XY数据文件，用于输出。建议每次测试同时保存两种文件。9. Post Processing页面用于对测试得到的谱线进行分析和处理。该页面由两个窗口组成，第一个窗口显示处理前的数据，第二个窗口显示数据处理后的结果。在第一个窗口中，最多可以显示