微生物学---培养基的制作.doc

微生物学-培养基的制作l 牛肉汤培养基1. 去掉筋膜及脂肪的新鲜牛肉,切成条、绞碎、按1000g牛肉加入DH2O 2000ml浸泡,置冰箱过夜.2. 次晨,将其煮沸半小时,并同时不断用不锈钢饭勺去掉脂肪及油汽（注意:不能用铁勺以免Fe2+掉入汤中影响细菌生长）,静置15分钟,肉汤分层,将上清液吸出,沉渣过滤.3. 于上述肉汤中加入蛋白胨10g每1000ml,NaCl 3g 每1000Ml,再煮沸3分钟,用10mol/L的NaOH调节PH 7.27.6（实际应用中应调到处7.78.0 每12000ml 加入10mol/L 的NaOH调出浓度即大致为PH约为8 即每400ml加入1mlNaOH）4. 再按2g每1000ml 加入K2HPO4（对肉汤的PH起缓冲作用）,煮沸150秒,静置30分钟吸取上清液,沉淀过滤用1mol/L NaOH 滴到PH为8 （以酚红作指示剂）再煮沸静置12小时,吸取上清液,以DH2O补至原有体积,再测PH8（因高压会使PH降低）分装、高压灭菌、置室温备用l 肝化汤1. 取猪胃数个,洗净绞碎称400g 与绞碎的猪肝400gI混合,再加50摄氏度DH2O 4000ml 浓盐酸40ML置5056度水箱中消化1824小时2. 加2N Na2CO3溶液约25ML或3N Na2CO3 15ml 煮沸30分钟,静置过夜.3. 吸上清液加热70摄氏度调PH7.2,补充DH2O至4000ML,再煮沸30分钟,静置30分钟以上.4. 加入K2HPO4 8g 煮沸15分钟,调节PH7.6 再煮沸30分钟,静置数小时,吸上清液分装,高压灭菌. 附注;国产的营养粉可代替牛肉汤和肝化汤作血培养基和巧克力培养基l 肝化汤和血清肝汤1. 肝化汤 肝汤（PH7.6）: 100ML 牛肉汤（PH8）: 100ML混合后,以200ML量分装三角烧瓶,高压灭菌,临用时倒入无菌试管2. 血清肝汤问;是否可以不要肝汤？答;可以 肝汤（PH7.6）: 100ML 牛肉汤（PH8）: 100ML 混匀灭菌后,加新鲜兔或羊血清20ML,混合备用同上l 普通琼脂培养基（作用和成分类似于M-H水解酪蛋白培养基,常用于做药敏）蛋白 10g NaCl 5g DH2O 1000ml 肉浸膏 5g 酵母膏 5g1. 溶解、煮沸15分钟,调PH7.47.6,过滤后补充体积,再测PH 7.47.62. 分装每瓶300ML,加琼脂5g 或琼脂粉1.52g, 高压15 磅15分钟.3. 室温保存,临用时加热溶化制板.（注意;在用普通琼脂做药敏时,应先用无菌NS调菌浓度,革兰氏阳性球菌G+c应调1个麦氏单位,因它生长速度没有G-b快,而G-b调0.5个麦氏单位）l 血琼脂培养基及巧克力培养基 肝化汤 100ML 牛肉汤 100ML 1 .混合后调节PH至7.6 ,加琼脂5g,分装三角烧瓶、高压、备用.2 .临用时加热溶化冷却至50摄氏度左右,加兔血2030ML（810%或以上）混合制板,冰箱4度保存备用,有效期一周附注;巧克力培养基制作:即趁80度时加入兔血，按58%比例混匀,再到80摄氏度水浴中1015分钟（同时不停轻摇）让V、X因子充分释放,最后加入用NS或DH2O适量稀释的万古霉素（每100ML加8mg）摇匀,冷却至50度左右制板（常用去甲万古霉素5080mg/ml且在制板之前加）,以抑制G+c菌的生长,大多数G-b 能生长,也可加杆菌肽（最好）300mg/ml.为使血琼脂保存的时间相对较长,适量多加点兔血,这样可保存一个月,但巧克力不能太多,因太多太浓时V、X因子不易释放出来.l 沙氏培养基蛋白胨 10g DH2O 1000ML调PH5.5 ,分装200ML/瓶,每瓶加4g琼脂,高压10磅15 分钟 ,备用.临用前每瓶加入8g葡萄糖和氯霉素针一支（抑制细菌生长,只允许霉菌生长.在临倒之前直接加入）. 制斜面.（？是否煮）l 双糖（克氏双糖铁琼脂KIA）培养基一、 上层（产酸产气将变黄并有气泡）蛋白胨 10g NaCl 5g DH2O 1000ml 牛肉膏 煮沸,冷却后,调PH7.6 ,补充DH2O 至1000ML,加入0.6%酚红4ML,分装,每200ML加入4g琼脂. 临用前加乳糖成1%浓度,煮沸（注;不能高压）二、 下层（产酸产气将变黄并有气泡）蛋白胨 10g NaCl 5g Na2S2O3 0.5g 枸櫞酸铁铵混合煮沸，补充至，调，加入酚红溶液，（？）琼脂粉分装，高压，临用时加入葡萄糖，煮沸备用 l 乙酰甲醇（）试验培养基（葡胨水）甲基红M和Vp试验均应用葡胨水 蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 磷酸氢二钾（对PH起缓冲作用） 5g DH2O 1000ml将以上成份混合加热溶解,调节PH7.2 ,分装小试管内,每管约2.5ml,再10磅20分钟灭菌l 蛋白胨水用于靛基质试验的培养基蛋白胨 10g NaCl 5g DH2O 1000ml.混合煮沸10分钟,校正PH7.4 ,分装高压10磅15分钟,临用时倒入无菌管.l 尿素培养基蛋白胨 1g NaCl 5g KH2PO4 2g DH2O 1000ml加热溶解-以1N NaOH 调节PH至6.9-煮沸-补充DH2O至1000ml,再调节PH至6.9 ,分装200ML/瓶,加4g琼脂高压. 临用前加热煮沸并加入:尿素 4g 0.6%酚红4ml 葡萄糖0.2g 煮沸冷却至50摄氏度左右制斜面. l 伊红美兰琼脂培养基（EMB）蛋白胨 10g NaCl 5g 乳糖 10g 琼脂 20g 2%伊红水溶液 10ml 1% 美兰水溶液 5ml DH2O 1000ml 1. 将蛋白胨、NaCl溶于DH2O中,水浴煮沸,调节PH7.27.4,DH2O补足至1000ml2. 分装6g琼脂于300ml 1.液中三角烧瓶内高压.临用前加3g乳糖、2%伊红3ml、1%美兰1.5ml,煮沸制板.附:它为鉴定性培养基,无色半透明菌落为可疑菌,有金属光泽的紫黑色菌落为非致病菌.l SS琼脂培养基SS粉 18.5g DH2O 1000ml煮沸溶解-高压-制板附: 它为强选择性培养基,抑制非致病菌如大肠杆菌和阳性球菌的生长. 目的是选择志贺氏和沙门氏以及2号病菌等,以无色半透明和黑色菌落为可疑菌.（粉红色为利用乳糖的非致病菌）注意:伊红美兰麦康凯SS溶于DH2O后都必须在水浴中煮沸.l 6.5%NaCl肉汤培养基NaCl 6.5g 1.6% 溴甲酚紫 0.05ml 肉汤 100ml 葡萄糖 0.5g 1.0g 调节PH至7.0l 七叶素苷培养基蛋白胨 15g 枸橼酸铁铵琼脂 将上述成分煮沸溶化调至，临用时加七叶素苷制成斜面l 高盐培养基牛肉浸液蛋白胨调节分装于三角烧瓶内高压灭菌l 硝酸盐培养蛋白胨硝酸钾（无）将上述成分混合后溶解，矫正，用滤纸过滤，分装试管磅高压灭菌分钟后备用注意：如无硝酸钾可用蛋白胨硝酸钠代替 用营养肉汤硝酸钾均可l 枸橼酸盐及醋酸钠培养基（）枸橼酸钠或醋酸钠溶于中，调节加溴麝香草酚酒精溶液、琼脂分装磅高压分钟，制斜面l 丙二酸培养基酵母浸膏 硫酸铵 磷酸氢二钾磷酸二氢钾丙二酸钠 3g葡萄糖溴甲麝香草酚兰将以上成份（除指示剂外）混合加热溶解，调节后再加入指示剂分装小试管内，每管约，磅高压灭菌分钟，同时做一份不加丙二酸钠的空白对照培养基l 苯丙氨酸培养基酵母膏磷酸氢