DAPI说明书翻译.doc

4,6二脒基-2-苯吲哚盐酸核苷酸染料D1306 4,6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI)D3571 4,6-diamidino-2-phenylindole, dilactate (DAPI, dilactate)D21490 4,6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI), FluoroPure grade简要说明收到后储藏：*室温*避光分子量 350.3 (dihydrochloride) 457.5 (dilactate)吸收峰/散射峰是461nm/358nm。连接至DNADAPI是一种常用的多色核荧光染料它的蓝色荧光颜色光鲜显著区别于其他结构荧光探针所发出的绿、黄、红等荧光。使用时应遵照我们的备忘录，DAPI染色剂专用于胞核染色，几乎没有细胞质标记点。任意一形态的DAPI在这说明内介绍的都有很好的效果。DAPI, dilactate可能水溶性更好。复染技术说明与宽范围细胞学标记技术相同直接或间接抗体结合探测方法，mRNA原位杂交或用细胞结构特异性荧光染料染色。DAPI还可用于在多色流式细胞试验中分析荧光标记细胞。以下说明可用于指导组织染色或非固定的细胞或组织染色。绪论蓝色荧光的DAPI核酸染料优先染双链DNA，它与小沟槽内的AT碱基对结合。1. DAPI连接到双链DNA产生一个20折叠的荧光增强这是由于水分子在DAPI以及小沟槽的移位造成的。2.DAPI 也可以用于连接RNA，只是连接的方式不同一种观点是可能是AU碱基对选择性嵌入。3. DAPI/RNA 复合体可以出现更长波长的最大荧光激发比DAPI/dsDNA复合体并且量子产率仅为它的20。材料储存与操作DAPI dihydrochloride (MW = 350.3) 与DAPI dilactate(MW = 457.5)均为10mg包装的。FluoroPure（荧光纯）级别的DAPI dihydrochloride 纯度 98%也为10mg包装的。收到后将管形瓶存放于室温并避光保存。固体至少可稳定保存一年。将5 mg/mL DAPI(14.3 mM 的dihydrochloride 或10.9 mM 的 dilactate)溶解到一个管形瓶（10 mg）有2 mL 的去离子水 (dH2O) 或是二甲基酰胺 (DMF)。水溶性差的DAPI dihydrochloride溶到水中可能需要更长的时间，声裂法有时是必要的。要点没有一种DAPI衍生物是极易溶于磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)的。需长期保存时原液可分装并保存在20C。短期保存时可以在26C避光保存。操作适当DAPI溶液至少可稳定保存六个月。注意DAPI是已知的一种诱变剂，操作要小心。颜料必须安全可控的处理。DAPI可在水溶液中被活性炭滤过。吸附颜料的炭必须经安全可行的方法处理。荧光光谱性质DAPI 结合到 dsDNA上吸收峰 是358 nm, 散射峰是 461 nm。DAPI能够被氙或水银灯或UV激光激发。利用UV激发源DAPI可被用于流式细胞计量术。荧光显微术中复染法粘附细胞的说明样品制备用固定法处理你的标本，DAPI染色通常在其他染色的最后进行。注意：标本的固定和透化并非DAPI复染的必要步骤。复染法说明1.1 将标本简单的放入磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中保持平衡。1.2 在PBS中将DAPI原液稀释到 300 nM，将大约300 L 这种稀释的 DAPI染液加到盖玻片上制备，确保细胞被完全覆盖。1.3 培养15 minutes.1.4 将标本在PBS液中冲洗几次，滤干盖玻片上过多的缓冲液。我们推荐使用固装的含有抗退色试剂的介质，如我们独家提供的SlowFade Antifade Kit (S2828), SlowFade Light Antifade Kit(S7461) or ProLong Antifade Kit (P7481).1.5 用荧光显微镜及合适的滤镜观察标本流式细胞计量术中悬浮细胞复染的说明样品制备用固定法处理你的标本或采取以下方法：2.1 收集2 105 到 1 106 cells的细胞悬液一份。2.2 通过离心及去除上悬浮物来获得细胞团块。2.3 将在残留液的团块重新悬浮，并在室温中加入1 mL 的 PBS。2.4 将重新悬浮细胞整体转移到4 mL 20C的无水乙醇中。转移时通过移液缓慢的将悬浮液在旋转峰速时移入乙醇中。留细胞在20C的无水乙醇中放置 515 minutes。2.5 通过离心及去除上悬浮物来获得细胞团块2.6 轻弹试管使团块松动在室温下加入5 mL的PBS让细胞再水合15 minutes复染法说明.3.1 将DAPI原液稀释到3 M在染色缓冲液中(100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% Nonidet P-40).每个细胞标本需要1 mL3.2 离心悬浮细胞(from step 2.6)弃上清，轻弹松动团块并加1 mL DAPI在缓冲液中的稀释液。3.3 室温下培养15 minutes。3.4 在染料存在的情况下用流式细胞仪分析。如果细胞在荧光显微镜下可见，离心标本弃上清并且在新鲜缓冲液中再悬浮。点一滴悬液在载玻片上，盖盖玻片观察。染色体荧光素原位杂交复染法的说明样品准备根据标准步骤5，6准备标本。在复染之前用去离子水快速冲洗备好的样本以去除残留在玻片上的buffer盐，这最后的冲洗有助于减少玻片上的非特异背景染色。将标本在空气中晾干。复染说明4.1 用PBS将DAPI原液稀释到30nM，将300L这种染色液直接移取到标本上，用一个塑料的盖玻片使染液在玻片上分布均匀。4.2 将标本在暗房中室温培养30分钟。4.3 小心的移去盖玻片，