高中生物 专题2 动物细胞工程 2.4 动物细胞融合与单克隆抗体课件 新人教版选修3.ppt

2 4动物细胞融合与单克隆抗体 2 2 2动物细胞融合与单克隆抗体 杂合的原生质体 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 温故知新 植物体细胞杂交过程 材料1 1970年 有两位科学家做了一个人 鼠细胞融合的实验 以证明细胞膜的流动性 那么 如何实现人 鼠细胞的融合 动物细胞融合后还有什么用途呢 人 鼠 想像图 科幻电影对人 鼠杂交种的想像 合作探究 一 动物细胞融合 如何实现人 鼠细胞的融合 阅读教材52页相关内容 思考下列问题 1 动物细胞融合的概念是什么 2 动植物细胞在结构上有何区别 这对它们杂交或融合过程有什么影响 3 植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些 那动物细胞融合呢 为什么可以使用灭活的病毒促进动物细胞融合 不灭活的病毒能作为诱导剂吗 为什么 用灭活的病毒诱导动物细胞融合的过程 2 过程 杂合的细胞 2个完整的杂交细胞ab 5 植物体细胞杂交可得到杂种植株 动物细胞融合后能象电影上一样形成杂种动物个体吗 为什么 植物细胞a 植物细胞b 原生质体a 原生质体b 原生质体融合 杂合的原生质体 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 4 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同 是什么原理 融合的过程一样吗 你能参照植物细胞杂交过程写出动物细胞融合过程吗 6 动物细胞融合的意义 应用 意义 突破有性杂交方法的局限 使远缘杂交成为可能 应用 1 成为研究细胞遗传 细胞免疫 肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 2 为制造单克隆抗体开辟了新途径 鼠 鸡 鼠 兔 鼠 猴 人 鼠 人 兔 人 鸡 人 蛙 酵母菌 鸡 人 胡萝卜等 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 结果 诱导方法 融合过程 融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物 动物细胞融合的比较 获得杂种细胞 小结7 去壁 诱融 生壁 组培 材料1 在基因工程中 采用抗原 抗体杂交法检测基因表达产物需用到纯度很高的抗体 材料2 传统获得抗体的方法 把某种抗原反复注射到动物体内 然后从动物血清中分离出所需抗体 用这种方法获得的抗体 不仅产量低 而且抗体的特异性差 纯度低 反应不够灵敏 思考 1 抗体由哪种细胞产生的 2 抗体的传统生产方法的缺陷是什么 3 能否通过相应效应b细胞体外培养的方式大量获得抗体 不能 原因是在体外培养的条件下效应b细胞不能无限增殖 合作探究 二 单克隆抗体的制备 材料3 效应b淋巴细胞在体内只能由b淋巴细胞增殖分化而来 不再进行分裂 在体外培养的条件下 也很难分裂 提示 1 什么细胞可以产生抗体 2 什么细胞可以无限增殖 思考 用什么方法才能让b淋巴细胞在体外培养时既能产生抗体又能无限增殖 b淋巴细胞与癌细胞融合 材料4 每一个效应b细胞只分泌一种特异性抗体材料5 1975年 米尔斯坦和柯勒首先将抗原注射入小鼠体内 然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的b淋巴细胞 与小鼠骨髓瘤细胞融合 得到多种杂交细胞 在特定的选择性培养基中可筛选出杂交瘤细胞 经过再次筛选和抗体检测 得到能产生特定抗体的杂交瘤细胞 但纯度达不到100 对单一杂交瘤细胞进行克隆培养 获得足够数量的细胞 在体外培养或注射到小鼠体内增殖 从细胞培养液或小鼠的腹水中 可提取出大量抗体 由于产生抗体的细胞来自一个杂交瘤细胞 故产生的抗体称为单克隆抗体 请根据以上材料 讨论设计单克隆抗体制备过程图 讨论 注射抗原 效应b细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交瘤细胞 选择性培养基筛选1 抗原 抗体杂交法 克隆化培养 筛选2 效应b细胞 小鼠 注射抗原 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基筛选1 多种杂交瘤细胞 能产生特定抗体的杂交瘤细胞 筛选2 克隆化培养抗体检测 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 杂交瘤细胞特点 既可以产生特异性抗体 又可以大量增殖 多种杂交细胞 克隆化培养抗体检测 b淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 单克隆抗体的制备过程 思考以下问题 1 如何获得效应b细胞 融合细胞几种类型 2 本过程中进行了两次筛选 目的分别是什么 第1次筛选要淘汰哪些细胞 3 本过程利用的那些技术 4 杂交瘤细胞有何特点 5 如何培养杂交瘤细胞并提取单克隆抗体 6 拓展阅读 如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化养 融合后的细胞经选择性培养基培养后 能存活的细胞就是杂交瘤细胞 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞 通常用 有限稀释法 来选择 将杂交瘤细胞稀释 用多孔细胞培养板培养 使每孔不超过一个细胞 通过培养让其增殖 然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体 那么上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔 阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞 挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释 一般需进行3 4次 直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞 该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养 专一抗体检验阳性 2 原理 细胞膜的流动性 细胞增殖 1 技术 动物细胞融合 动物细胞培养 4 杂交瘤细胞的特点 既可以产生特异性抗体 又可以大量增殖 3 两次筛选的目的 第一次选出杂交瘤细胞 第二次选出产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞 小结 单克隆抗体的应用信息 材料6 诊断疾病 识别作用 如同位素标记单克隆抗体 可诊断肿瘤 心血管畸形等 优点 单克隆抗体的应用 用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗 如单克隆抗体 药物 生物导弹 优点 准确 高效 简易 快速 位置准确 疗效高 副作用小 阅读教材p54相关内容 试说明单克隆抗体有何应用 优点是什么 1 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合 得到杂交细胞 经培养可产生大量的单克隆抗体 与骨髓瘤细胞融合的是 a 经过免疫的b淋巴细胞b 没经过免疫的t淋巴细胞c 经过免疫的t淋巴细胞d 没经过免疫的 淋巴细胞 a 巩固练习 2 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中 正确的是 诱导融合的方法完全相同b 所用的技术手段基本相同c 操作步骤基本相同d 都能形成杂种细胞 d 3 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是 a 由小鼠能产生抗体的b淋巴细胞与肝细胞融合b 由小鼠一个b淋巴细胞诱导融合而成c 由小鼠一个b淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成d 由小鼠一个b淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 d 4 只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 a pegb 灭活的病毒c 电刺激d 离心 b 5 单克隆抗体制备过程中 骨髓瘤细胞和b淋巴细胞诱导融合后 要用特