药物中糖类和二元醇类化合物的分析.doc

药物中糖类和二元醇类化合物的分析摘要：本注解描述了三根不同的阴离子交换柱以安培法检测药品中常见的简单糖类，糖醇类和二元醇类化合物的方法；并比较了IonPac ICE-AS1离子排斥柱，CarbonPac PA10柱和CarbonPac MA1柱等三种方法分析药物中糖类和二元醇类的选择性。结果表明，CarboPac MA1柱分离安培检测法可以分析药物成分中的二元醇类和碳水化合物。CarboPac PA10柱也可以分离糖醇和碳水化合物，但不适于分离丙烯乙二醇和丙三醇。IonPac ACE-AS1分析柱和NG1保护柱可以快速分离丙烯乙二醇和丙三醇 关键词：阴离子交换柱；安培法；非处方药物；抑制型电导法 前言 药物中的有些成分不具有发色团，不能用吸收法检测。其中一些成分，如糖类化合物，二元醇类，糖醇类，胺类和含硫化合物可以被氧化，因此可以用安培检测器检测。这种检测方法可以使能被氧化的物质在特定电位下检测，而那些不能被氧化的化合物不被检测1,2。安培检测器具有检测范围宽和检测限低的特点。 本文描述了三根不同的阴离子交换柱以安培法检测药品中常见的简单糖类，糖醇类和二元醇类化合物的方法。选择了两种口服的非处方药物止咳剂和流感药物。这两种药物中均含有简单的糖类化合物，糖醇类和二元醇类化合物，这些化合物在其他药物中也比较常见。而且，这两种药物中含有的无机和有机阴离子成分可以用IonPac AS14和IonPac AS11柱分离并用抑制型电导法检测3。比较了IonPac ICE-AS1离子排斥柱，CarbonPac PA10柱和CarbonPac MA1柱等三种方法分析药物中糖类和二元醇类的选择性。ICE-AS1离子排斥柱的树脂珠是表面完全磺化的聚乙烯-二乙烯基苯聚合物，柱容量为27meq柱，中等亲水性。这种柱子的保留机理是离子排斥，空间排斥和吸附。弱离子化的酸可以根据pKa的不同，大小的差异和疏水性的不同实现分离。这种柱子是分离脂肪族有机酸以及复杂样品和高离子强度样品中醇类化合物的理想柱子。CarbonPac PA10柱对单糖具有高度选择性，CarbonPac MA1柱主要用来分离糖醇和二元醇类化合物。有关这两种柱子的详细介绍请参考TN20。IonPac ICE-AS1离子排斥柱和CarbonPac PA10柱，不包括CarbonPac MA1柱，都能兼容含有机溶剂的淋洗液，所以可以用有机溶剂清洗柱子。报道了CarbonPac MA1柱的检测限，线性范围，选择性，准确度和精密度。有关CarbonPac PA10柱分析单糖的方法请参考TN404。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Dionex DX-500装置，包括GP40梯度泵(在线脱气)，ED40电化学检测器，LC30或LC25柱温箱和AS3500自动进样器。PeakNet色谱工作站。 氢氧化钠，50%(w/w)；高氯酸，70%(w/w)；去离子水，18M-cm电阻或更高 1.2样品预处理 将1g药品与9g水混合得到稀释10倍的样品溶液，而后依次稀释得到100倍和1000倍稀释溶液。样品溶液的密度可以通过测量已知体积的质量得到，然后根据其密度计算最终的浓度。粗体表示的组分的浓度可以通过阴离子交换安培检测，其他组分的浓度可以用IonPac AS14和AS11柱抑制电导分离检测。 2结果与讨论 图1是用100mM高氯酸作淋洗液且用IonPac ACE-AS1分析柱和NG1保护柱分离山梨醇，丙三醇和丙烯乙二醇的标准谱图。分离是等度分离，可以缩短每个样品分析的时间，提高样品通量。丙三醇，丙烯乙二醇和糖醇可以在10min内得到分离。样品中的溶解氧在总的渗透体积处流出， 8min前在基线上以负峰形式出现。使用NG1中性保护柱提高了总的渗透体积，使氧负峰远离分析物。不使用NG1中性保护柱，蔗糖，山梨醇，麦芽糖醇和甘露醇可以很好的分离，但氧负峰干扰丙烯乙二醇的峰。减小或消除氧负峰的方法就是进样前将样品脱气。 柱 子：IonPac ACE-AS1分析柱，NG1保护柱淋洗液：100mM 高氯酸流速：2.0mL/min进样体积：10L检测器：脉冲安培检测器，铂电极峰： 1. 葡萄糖2. 山梨醇3. 丙三醇4. 丙烯乙二醇图1 IonPac ACE-AS1柱分离药物中常见二元醇、糖醇和糖类化合物的标准谱图柱 子：CarboPac PA10柱 淋洗液：18mM NaOH 流速：1.5 mL/min 进样体积：10L 检测器：脉冲安培检测器，金电极 峰： 1. 丙烯乙二醇 2. 丙三醇 3. 山梨醇 4. 甘露醇 5. 麦芽糖醇 6. 葡萄糖 7. 蔗糖图2是用CarboPac PA10柱氢氧化钠等度分离丙烯乙二醇，丙三醇，山梨醇，甘露醇，麦芽糖醇，蔗糖和葡萄糖的标准谱图。丙烯乙二醇和丙三醇在接近死体积处淋洗，不能基线分离。 丙烯乙二醇，丙三醇，山梨醇，甘露醇，麦芽糖醇和蔗糖能够用CarboPac MA1柱完全分离，如图3所示。用PA10柱和MA1柱分离上述化合物可以通过调节淋洗液的强度缩短分析时间，但分离度会变差。 柱 子：CarboPac MA1柱 淋洗液：480mM NaOH 流速：0.4mL/min 进样体积：10L 检测器：脉冲安培检测器，金电极 峰： 1. 丙烯乙二醇, 10mg/L 2. 丙三醇, 10mg/L 3. 山梨醇, 10mg/L 4. 甘露醇, 10mg/L 5. 麦芽糖醇, 10mg/L 图3 CarboPac MA1柱分离二元醇、糖醇和糖类化合物的标准谱图图4和图5比较了IonPac ACE-AS1分析柱和MA1柱分析止咳剂的选择性。一般情况下，IonPac ACE-AS1分析柱的峰洗脱顺序与MA1柱相反。IonPac ACE-AS1分析柱上早洗脱的糖醇和碳水化合物分离度较差，丙烯乙二醇和丙三醇可以完全分离。图6是用MA1柱分离多症状伤风/流感药的色谱图。 图4 IonPac ACE-AS1柱分离止咳剂的糖醇和丙三醇的标准谱图图5 CarboPac MA1柱分离止咳剂的糖醇和丙三醇的标准谱图3.结论 CarboPac MA1柱分离安培检测法可以分析药物成分中的二元醇类和碳水化合物。CarboPac PA10柱也可以分离糖醇和碳水化合物，但不适于分离丙烯乙二醇和丙三醇。IonPac ACE-AS1分析柱和NG1保护柱可以快速分离丙烯乙二醇和丙三醇，但是分离大部分碳水化合物和有些糖醇无效。 参考文献 1. Rocklin RA. Practical Guide to HPLC Detection; D. Parriott, Ed.; Chapter 6, Electrochemical Detection, Academic Press: San Diego, CA, 1993, pp 145-173. 2. Rocklin RD. J. Chromatogr. 1991, 546, 175-187. 3. Dionex Corporation, “Quantification of Anions in Pharmaceuticals”, Application Note 116. 4. Dionex Corporation,