Daicel手性柱使用溶剂的限制.doc

手性柱应用介绍1 Daicel手性柱使用溶剂的限制众所周知，手性柱固定相对溶剂很敏感，使用时稍有不慎，即可对固定相造成不可修复的损伤。一般情况下，要避免使用的溶剂有丙酮、氯仿、二氯甲烷、THF和DMSO等，即使少量上述溶剂残留在管路、进样阀中也是色谱柱的潜在威胁，所以事先必须清洗干净。2 为什么柱效会降低？有没有再生方法？所有大赛璐柱子在出厂前均已检测柱效合格。造成柱效降低的原因有：1） 柱效急速下降绝大多数情况是色谱柱固定相被损伤(溶解/水解脱落)，造成固定相损伤的物质可能来源于样品，溶剂，也可能来源于上一次进样残留于管路、进样阀中的杂质。这种情况对柱子冲洗或再生已无效。2） 柱效逐渐下降原因：有强保留物质逐渐聚集在柱头筛板甚至是固定相上解决办法：用强溶剂冲洗或更换筛板3） 旧柱子能分开的化合物换上新柱子就分不开了原因：“记忆效应”（有时，也有批次间的差异），一些强保留物质（如additive）保留在固定相上对手性诱导环境有一定的影响。解决办法：如果之前用过添加剂，就在流动相中继续添加此类添加剂，并对柱子平衡数小时再进样，但此方法有时仍然解决不了问题，这时应该可虑更换其它的分离条件。3 如果样品不溶于正己烷/醇体系，怎么办？一般情况下，分析用时，0.5-1mg/mL的浓度就可以满足检测，所以不用加大样品浓度对于酸、碱化合物，在流动相中适当的加入少量的强酸或强碱（如TFA/DEA）有助于样品的溶解，推荐添加浓度在0.1-0.2%，大于此浓度会损坏固定相。4 几种常用手性柱的使用（以5和10填料为例）1）Chiralpak AD IPA：0-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane） EtOH: 0-15% in alkane or 60-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane） MeOH: (1)0-100% EtOH or IPA in MeOH or 0-15% ACN in MeOH Ideal starting conditions: MeOH/EtOH 50:50(v/v) when alcohol mixtures are required (2)0-15% in alkane or 60-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane） 【注意：使用纯极性溶剂做流动相后，此色谱柱应做到专柱专用】 ACN：not compatible with alkane 0-100% IPA in ACN or 0-15% MeOH or EtOH in CAN 【注意：使用纯极性溶剂做流动相后，此色谱柱应做到专柱专用】 MTBE: Not allowed Acid: TFA or CH3COOH, 0.5%, Typically 0.1%Base: DEA or Butyl amine or Ethanol amine, 0.5%, Typically 0.1% Column-Temp: below 40DEG2）Chiralpak AD-H 同Chiralpak AD，不同之处在于，当使用正己烷/乙醇（甲醇）体系时，醇比例范围可以是0-100%3） Chiralpak OD-H同AD-H，不同之处在于，OD-H可以使用MTBE/alkane（或Alkane/EtOH），MTBE50%, 当使用MTBE后，色谱柱平衡时间要加长4） Chiralpak OD 同OD-H，不同之处在于，OD不能使用ACN体系CYCLOBOND I 2000 CYCLOBOND I 2000 是-环糊精化学键合固定相，CYCLOBOND I 2000及其衍生物CYCLOBOND I 2000 AC，SP和RSP可以运行于反相或极性有机相模式。极性有机相是无水的极性系统，适合快速分离和制备。CYCLOBOND I 2000 DM-环糊精甲基化产物，甲基化产物CYCLOBOND I 2000 固定相的羟基基团甲基化的产物，会产生以下三种情况。最通常的影响尤其是这种衍生物在极性有机相模式中，将损失分辨率。其次，较少的情况，有些化合物在天然环糊精上不能溶解，而在甲基化固定相溶解很好。第三种，也是最重要的，许多化合物在两种固定相中都可以溶解，但是显示出相反洗脱顺序。主要是由于庞大的甲氧基在空穴口造成空间影响的结果。在CYCLOBOND I 2000 DM 固定相上，冠醚，邻苯二甲酸，芴和一些农药，在反相模式即可以分离，而用CYCLOBOND I 2000 固定相是不可能的。CYCLOBOND I 2000 SP，RSP-环糊精,S- 羟丙基酯和R,S- 羟丙基酯-环糊精表面的羟基不是与“S”，就是与外消旋“RS” 环氧丙烷反应。扩展了氢键结合性能，能适应从芳香环到手性中心更大位距，或在咪康唑中当氢键结合基团被屏蔽时。对于某些像美沙酮这样的物质的分离，有时“S” 型显示出更高选择性和效率。CYCLOBOND I 2000 RSP 能被认为是通用手性固定相，另外还有分离非芳香结构额外特性，例如：t-boc 氨基酸和环状酯。没有芳香基团外消旋物在CYCLOBOND I 2000 RSP 柱子上经常成功分离。另外，CYCLOBONDI 2000 RSP 分离同系列物质比其它手性固定相效率更高。在制药工业手性分离中，它是最有用和应用较广衍生物之一。CYCLOBOND I 2000 SN， CYCLOBOND I 2000 RN，CYCLOBOND I 2000 DMP-环糊精,的氨基甲酸盐衍生物是CYCLOBOND I 2000 系列中最有用的工具。这些柱子是少数多种模式手性固定相之一，并能够在三种截然不同流动相中使用。每一种溶剂模式在不同机理下起作用，经常有新方法，和不同的机遇。CYCLOBOND I 2000 SN 和CYCLOBOND I 2000 RN 性能更强，适用化合物范围更宽。由于亚萘基衍生物加入额外手性到环糊精结构上，在正相溶剂中，用“R” 与“S” 对比洗脱顺序相反是可能的。偶而，从反相变为正相流动相，出峰顺序颠倒。在正相模式中，为了更有效的分离，在分析物中必须存在丌- 酸性的一半或通过衍生化引入。这里有许多在反相模式中，用这些亚萘基氨基甲酸盐实际应用的例子。无论怎样，在后来的研究中发现，这些例子中的大部分在极性有机溶剂中更有效。在许多情况像吡啶苯乙哌啶酮，在分析物中存在的官能团，在反相模式中，能防止包含络合，极性有机模式很成功。CYCLOBOND I 2000 A