TriZOL小量法制备RNA.doc_第1页
TriZOL小量法制备RNA.doc_第2页
TriZOL小量法制备RNA.doc_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

Mini-pre Total RNA with TriZOL幼嫩组织若干，液氮研磨，分装成100mg小份至预冷E.P.管100mg 样品加入1ml TriZOL抽提几分钟（颠倒混匀）12,000g 、28离心10min吸取上清（含RNA），转移至新的1.5ml E.P.管中HomogenizationPhase Separation此前可于70放置1月再抽提1530放置5min加0.2ml (1/5V TriZOL) 氯仿，充分抽提15 sec.15-30放置23min形成上层无色水相、中间相和下层有机相12,000g、28离心15min中间相和有机相可用于DNA和蛋白质抽提吸取上清，转移至新的1.5ml E.P.管中加0.5ml (1/2V TriZOL) 异丙醇15-30放置10minRNA PrecipitationRNA RedissolvingRNA Wash12,000g、28离心10min小心弃去上清，得胶体状RNA在75%乙醇中，RNA沉淀可于28放置1周、570放置1年加11.5 ml (1V TriZOL) 75%乙醇，涡旋混匀7,500g、28离心5min小心弃去上清，留下胶体状RNA过干会使RNA难以溶解干燥510min溶于RNase-free水中，枪头打匀，55-60温浴10 min1.5% Agrose胶检测 测定浓度进一步纯化所需试剂及用品：液 氮氯 仿异 丙 醇DEPC75%乙醇（DEPC处理的水配制）RNase-free水1.5 ml离心管1ml、0.2ml、0.1ml、0.01ml枪头各若干玻璃及塑料制品的处理：（均可用0.5% NaOH浸泡15min，用ddH2O冲洗干净，灭菌备用。）玻璃器皿：150烘烤4 hrs塑料制品：离心管和枪头用含DEPC的ddH2O浸泡过夜，烘干，灭菌备用。或者：0.5M NaOH浸泡10min，用ddH2O冲洗干净，灭菌。RNase-free ddH2O：ddH2O + DEPC过夜（0.010.05% ），灭菌备用。仪 器：台式高速冷冻离心机或者：大型高速冷冻离心机磨样用具Note:1. Always wear disposable gloves.2. Use sterile, disposable plasticware and automatic pipettes reserved for RNA work to cross-contamination with RNase from shared equipment. 3. Downstream handling of the TriZOL requires that nondisposab
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课设设计

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论