高中生物 专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定课件 新人教版选修1.ppt

专题5dna和蛋白质技术 课题1dna的粗提取与鉴定 dna的提取是现代生物技术进行中药鉴别的最关键步骤 总dna的有效提取要求材料中的dna尽可能少地降解 dna的质量将直接关系到实验的成败 不同的研究目的对dna的纯度和量的要求不尽相同 课题背景 课题1dna的粗提取与鉴定 课题2多聚酶链式反应扩增dna片段 课题3血红蛋白的提取和分离 课题目标 尝试对植物或动物组织中的dna进行粗提取 了解dna的物理化学性质 理解dna粗提取以及dna鉴定的原理 一 基础知识 1 提取dna的方法 dna不溶于酒精溶液 但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精 利用这一原理 可以将dna与蛋白质进一步分离 1 dna的溶解性 在不同浓度的nacl溶液中溶解度 当氯化钠的物质的量浓度为2mol l时 dna的溶解度最大 浓度为0 14mol l时 dna的溶解度最低 利用这一原理 可以使dna在盐溶液中溶解或析出 在nacl溶液浓度低于0 14mol l时 dna的溶解度随nacl溶液浓度的增加而逐渐降低 在0 14mol l时 dna溶解度最小 当nacl溶液浓度继续增加时 dna的溶解度又逐渐增大 问题1 dna在nacl溶液中的溶解度如何变化 问题2 如何通过控制nacl溶液的浓度使dna在盐溶液中溶解或析出 洗涤剂能够瓦解细胞膜 但对dna没有影响 2 dna对酶 高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质 但是对dna没有影响 大多数蛋白质不能忍受60 80 的高温 而dna在80 以上才会变性 2 dna的鉴定 二苯胺染色法 dna与二苯胺 沸水浴 会染成蓝色 甲基绿染色法 甲基绿与dna结合 呈绿色 典型例题 下列有关 dna粗提取与鉴定 实验的叙述 正确的是 多选 a 新鲜猪血 菜花等动植物材料均可用于dna的粗提取b 植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水胀破c dna不溶于95 的冷酒精而溶于2mol l的nacl溶液d 溶有dna的nacl溶液中加人二苯胺试剂 需沸水浴加热后冷却 再观察颜色 cd 方法点拨 1 新鲜猪血中大量成熟红细胞内无dna 2 植物材料需先用纤维素酶和果胶酶破坏细胞壁再吸水胀破 3 dna不溶于95 的冷酒精而溶于2mol l的nacl溶液 1 实验材料的选取 二 实验设计 1 选取原则 材料易得 dna含量丰富 提取简便 2 选材鸡血细胞 2 破碎细胞 获取含dna的滤液 1 动物细胞 加入蒸馏水 搅拌过滤后收集滤液 2 植物细胞 加入洗涤剂和食盐 搅拌研磨后过滤收集滤液 3 去除滤液中的杂质 方案一 30ml含dna的滤液 2mol lnacl 同方向搅拌 dna溶解 加入蒸馏水 dna析出 过滤得到过滤物 放到2mol lnacl溶液中溶解 dna nacl溶解液 问题1 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分 核蛋白 多糖和rna等杂质 问题2 为什么反复地溶解与析出dna 能够除去杂质 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质 用低盐浓度使dna析出 能除去在低盐溶液中的杂质 方案二 30ml滤液 嫩肉粉 木瓜蛋白酶 静置10 15分钟 dna滤液方案三 30ml滤液 60 75 恒温保温10 15分钟 过滤获得dna滤液 问题3 方案二与方案三的原理有什么不同 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白质 使提取的dna与蛋白质分开 方案三是利用dna和蛋白质对高温耐受性的不同 使蛋白质变性 与dna分离 4 dna的析出与鉴定 1 析出 滤液 同体积冷却95 酒精白色丝状物 2 溶解 将白色丝状物溶于2mol l的nacl溶液中 3 鉴定 沸水5min 典型例题 d 方法点拨 下表有关 dna粗提取和鉴定 的相关操作中所选取的试剂 错误的是 1 可以利用dna在氯化钠溶液中的溶解度不同 将dna分子溶解或析出 2 dna不容易酒精 因此可以用95 的冷酒精提取杂质较少的dna 三 操作提示 3 二苯胺试剂要现配现用 否则会影响鉴定的效果 1 以鸡血为实验材料时 每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠 防止血液凝固 2 加入洗涤剂后 动作要轻缓 柔和 否则容易产生大量的泡沫 不利于后续步骤的操作 加入酒精和用玻璃棒搅拌时 动作要轻缓 以免加剧dna分子的断裂 导致dna分子不能形成絮状沉淀 课堂小结 2015江苏卷 25 图1 2分别为 dna的粗提取与鉴定 的实验中部分操作步骤示意图