化学试剂配制方法.doc

实验常用试剂、缓冲液的配制方法 当溶液的浓度表示为物质的量浓度时，单位为摩尔每升(mol/L)，量的符号为c例如c (HNO3)=1mol/L；当溶液的浓度表示为质量浓度时，单位为克每升（g/L）、微克每毫升（g/ml）等，量的符号为 例如（U）=10.0g/ml ；如果溶液浓度以质量分数给出量的符号为 例如(NaCl)=10% ，表示100g 该溶液中含有10g 氯化钠，即10g氯化钠溶于90g 水中 ，单位无量纲；如果溶液浓度以体积分数给出，量的符号为例如(HCl)=5% ，表示100mL 该溶液中含有浓盐酸5mL ，单位无量纲。1、1M Tris-HCl 组份浓度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）配制量 1L 配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值 浓HCl7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2、1.5 M Tris-HCl组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） 配制量 1L 配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2）配制量 100mL 配置方法 1. 称取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 6、10 M醋酸铵 组份浓度 10 M醋酸铵 配制量 100mL 配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22m滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 9、10（W/V）SDS组份浓度 10（W/V）SDS 配制量 100mL 配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68加热溶解。 2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。 10、2 N NaOH 组份浓度 2N NaOH 配制量 100mL配置方法 1.量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。 2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 11、2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl 配制量 100mL 配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。 2. 室温保存。 12、5 M NaCl组份浓度 5 M NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4保存。 13、20（W/V）Glucose 组份浓度 20（W/V）Glucose配制量 100mL配置方法 1. 称取20g Glucose置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100mL。 3. 高温高压灭菌后，4保存。 17、0.5M EDTA 组份浓度 0.5 M EDTA (pH8.0) 配制量 1L 配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA2H2O，置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。 18、1 M DTT 组份浓度 1 M DTT 配制量 20mL 配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。 2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22m滤器过滤除菌。 3. 适量分成小份后，-20保存。 19、10mM ATP 组份浓度 10mM ATP 配制量 20mL 配置方法 1. 称取121mg Na2ATP3H2O，加入到50mL塑料离心管内。 2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。 3. 适量分成小份，-20保存。 生物化学实验常用试剂的配制方法 1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 组份浓度 0.5mol/L 配制量 2L 配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。 2.用去离子水溶解并稀释至2L。2、0.5mol/L盐酸溶液 组份浓度 0.5mol/L 配制量 2L 配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。 2.用去离子水稀释至2L。 14、10（W/V）过硫酸铵组份浓度 10（W/V）过硫酸铵 配制量 10mL 配置方法 1.称取1g过硫酸铵。 2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。 3.贮存于4。 注意：10过硫酸胺溶液在4保存时间可使用2周左右， 超过期限会失去催化作用。 26、15三氯乙酸溶液 组份浓度 15配制量 2L 配置方法 称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。 27、1谷氨酸溶液 组份浓度 1 配制量 0.5L配置方法 1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 28、1丙酮酸溶液 组份浓度 1 配制量 0.5L 配置方法 1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 29、0.1的碳酸氢钾溶液 组份浓度 0.1配制量 0.5L 配置方法 称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。 30、0.05的碘乙酸溶液 组份浓度 0.05 配制量 0.25L 配置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。 31、Locke氏溶液 配制量 2L 配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸 氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。 32、0.2mol/L的丁酸溶液 组份浓度 0.2mol/L 配制量 1L 配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。 2.用1mol/L的氢氧化钠中和。 3.再用去离子水定容至1L。 33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 组份浓度 0.1mol/L 配制量 10L配置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。 34、0.1mol/L的碘溶液 组份浓度 0.1mol/L 配制量 1L 配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。 2.用去离子水溶解并定容至1L。3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。 35、10氢氧化钠溶液 组份浓度 10 配制量 2L 配置方法 称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。 36、10盐酸溶液 组份浓度 10 配制量 0.2L 配置方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。 37、0.1标准丙氨酸溶液 组份浓度 0.1 配制量 0.5L 配置方法 称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。 38、0.1标准谷氨酸溶液 组份浓度 0.1 配制量 0.5L配置方法 称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。 39、0.1水合茚三酮乙醇溶液 组份浓度 0.1 配制量 1L配置方法 称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。 40、酚溶液 配置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止710小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。 41、0.5淀粉溶液 组份浓度 0.5 配制量 0.1L 配置方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。 42、对羟基联苯试剂配置方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5氢氧化钠溶液中， 配制成1.5的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮或无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，应摇匀后使用。生物化学实验常用缓冲液的配制方法 1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液组份浓度 0.2mol/L （pH 6.0）配制量 1L配置方法 1. 称取磷酸氢二钠12水 8.82 g。 2. 称取磷酸二氢钠2水 27.34g。 3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。2、洗脱液 组份浓度 0.15mol/L （含0.15mol/L氯 配制量 10L 化钠的0.005mol/L 配置方法 1.称取氯化钠87.66g。 pH 6.0的磷酸缓冲液）2. 用0.2mol/L pH6.0的 磷酸缓冲液250mL溶解。 3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。 3、0.3mol/L磷酸缓冲液组份浓度 0.3mol/L （pH7.8）配制量 0.5L 配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠12水49.150g。 2.磷酸二氢钠2水2.000g。 3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。4、0.2mol/L乙酸缓冲液组份浓度 0.2mol/L （pH4.6） 配制量 2L配置方法 1.准确称取乙酸钠3水54.44g。 2. 加入23mL冰乙酸，溶解。 3. 用去离子水溶解并定容至2L。4保存。 5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸 组份浓度 0.2mol/L 缓冲液配制量 各1L （pH 2.6、4.6、6.6）配置方法 1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO412水143.256g，用去离子水定容至2L。2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸1水42.028g用去离子水溶解定容至2L。3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：pH值 A（mL） B（mL）2.6 109.0 891.04.6 467.5 532.56.6727.5272.54. 按上表混匀后，4保存。6、20SSC 缓冲液配制量 1L （pH7.0） 配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。 2.准确称取88.2g柠檬酸钠2水。 3.溶解于800mL去离子水中。 4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。 5.加去离子水定容至1L。注意：按实验需要可分装后高压灭菌。 10SSC、5SSC、1SSC可由20SSC做相应稀释得到。 7、0.15mol/L氯化钠- 组份浓度 0.15mol/L 乙二胺四乙酸二钠配制量 1L 缓冲液配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。 （pH8.0）2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。 3. 溶于800mL去离子水中。 4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。5.加去离子水定容至1L。 8、1/15mol/L的磷酸盐 组份浓度 0.15mol/L 缓冲液配制量 1L （pH7.6） 配置方法1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO42水11.876g（或磷酸氢二钠12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。 3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将和按1.4：8.6比例混合即可。9、5Tris-GlycineBuffer组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（w/v）SDS （SDS-PAGE电泳缓冲液） 配制量 1L配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。 10、5SDS-PAGE组份浓度 250mM Tris-HCl（pH6.8） Loading Buffer10（W/V） SDS0.5（W/V） BPB50（V/V） 甘油 5（W/V） -巯基乙醇 配制量 5mL配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。1M Tris-HCl 1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份（500l/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将25l的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右玻璃仪器的洗涤及各种洗涤液的配制实验中所使用的玻璃器皿清洁与否直接影响实验结果。由于器皿的不清洁或被污染，往往造成较大的实验误差，甚至会出现相反的实验结果。因此，玻璃器皿的洗涤清洁工作是非常重要的。玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸溜水冲洗。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来不及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干备用。 1. 初用玻璃器皿的清洗 新购买的玻璃器皿表面常附着有游离的碱性物质，先用肥皂水（或去污粉）洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1%2%盐酸溶液中过夜（不少于4h），再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗23次，在100130烘箱内烘干备用。2. 使用过的玻璃器皿的清洗 （1）一般玻璃器皿 如试管、烧杯、锥形瓶等（包括量筒）。先用自来水洗刷至无污物，再选用大小合适的毛刷蘸取去污粉（掺入肥皂粉）刷洗或浸入肥皂水内。将器皿内外，特别是内壁，细心刷洗，用自来水冲洗干净后再用蒸馏水洗23次，热的肥皂水去污能力更强，可有效地洗去器皿上的油污。洗衣粉与去污粉较难冲洗干净而常在器壁上附有一层微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。烘干或倒置在清洁处备用。凡洗净的玻璃器皿，不应在器壁上带有水珠，否则表示尚未洗干净，应再按上述方法重新洗涤。若发现内壁有难以去掉的污迹，应分别使用下述的各种洗涤剂予以清除，再重新冲洗。用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解。再在肥皂水中煮510min，用软布或脱脂棉擦拭，立即用自来水冲洗，然后在稀洗涤液中浸泡0.52h,自来水冲去洗涤液,最后用蒸馏水换洗数次,待干后,浸于95%乙醇中保存备用.使用时在火焰上烧去乙醇。用此法洗涤和保存的载玻片和盖 玻片清洁透亮，没有水珠。检查过活菌的载玻片或盖玻片应先在2%新洁尔灭溶液中浸泡24h，然后上述方法洗涤方法洗涤与保存。玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需要用洗涤液浸泡数小时，然后用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水洗23次后备用。 （2）量器 如吸量管、滴定管、量瓶等。使用后应立即浸泡于凉水中，勿使物质干涸。工作完毕后用流水冲洗，以除去附着的试剂、蛋白质等物质，晾干后浸泡在铬酸洗液中46h（或过夜），再用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水冲洗24次，风干备用。（3）其他 具有传染性样品的容器（如分子克隆、病毒玷污过的容器）常规先进行高压灭菌或其他形势的消毒，再进行清洗。盛过各种毒品（特别是剧毒药品和放射性核素物质的容器）必须经过专门处理，确知没有残余毒物存在时方可进行清洗。否则使用一次性容器。装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酸皂溶液（来苏水）或0.25%新洁尔灭消毒液内24h或煮沸0.5h,再用上述方法洗涤。 3. 洗涤液的种类和配制方法 （1）铬酸洗液 （重铬酸钾一硫酸洗液，简称洗液或清洁液）广泛用于玻璃器皿的洗涤，常用的配制方法有4种 取100mL工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后慢慢地加入重铬酸钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解后冷却，贮于带玻璃塞的细口瓶内。 称取5g重铬酸钾粉末置于250mL烧杯中，加水5mL，尽量使其溶解。慢慢加入100mL浓硫酸，边加边搅拌，冷却后贮存备用。 称取80g重铬酸钾，溶于1000mL自来水中，慢慢加入工业浓硫酸1000mL，边加边搅拌。 称取200g重铬酸钾，