高效液相色谱法测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量.doc

高效液相色谱法测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量目的建立高效液相色谱法测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量。方法采用AgilengtEclipsePlus-C18色谱柱，流动相：乙腈-0.1%磷酸(14：86)；流速：0.6ml min-1；检测波长230nm。结果芍药苷在0.48008.160范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为98.94%，RSD=0.36%(n=6)。结论本方法操作简便，专属性强，结果准确，可用于测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量。【关键词】芎钩天麻丸；含量测定；芍药苷；高效液相色谱法芎钩天麻丸是由川芎、钩藤、当归、石决明、桑寄生、细辛、珍珠母、黄芩、白芍、天麻等14味药材加工制成的医院制剂，具有滋肾平肝、潜阳熄风、除晕止痛、降血压之功效，主治肝阳上亢、血虚失养引起的高血压，紧张性、血管性神经性头疼、头晕1。白芍为方中君药，芍药苷为白芍的主要有效成分，具有扩张血管、保护脑缺血、抗血栓、抗血小板聚集、抗高血脂等作用，对芎钩天麻丸疗效的发挥起重要作用。现行质量标准中未收载含量测定项目，不能有效的控制药品质量。本文以芍药苷为指标成分，建立了测定芎钩天麻丸中芍药苷的高效液相测定法，为该制剂的质量控制提供了客观的含量评价方法。1仪器与试药1.1仪器Agilengt1260高效液相色谱仪，AUW-220D电子分析天平DSQ10260超声仪。1.2试药芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110736-201035)；乙腈为色谱纯，水为本单位自制重蒸馏水，其余试剂为分析纯。芎钩天麻丸由柘城县人民医院提供。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：AgilengtEclipsePlus-C18色谱柱(4.6100mm)流动相：乙腈-0.1%磷酸(14：86)为流动相2；流速0.6ml min-1；检测波长230nm；进样量10l；理论板数按芍药苷峰计算应不低于30003。2.2线性关系考察取黄芩苷对照品约12.0mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按照“2.1”项色谱条件，分别进样1、3、5、7、9、11、13、15、17l，记录芍药苷峰面积值，以峰面积积分值(Y)对对照品浓度(X)进行线性回归，得回归方程：Y=235.05674X 12.52003r=0.9999。结果表明，黄芩苷对照品在0.48008.1600范围内与峰面积值呈良好的线性关系。2.3供试品溶液及阴性对照溶液的制备取本品约0.1g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。另取缺白芍的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照溶液。2.4干扰试验取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10l，按照“2.1”项色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，黄芩苷的保留时间为8.818min，理论塔板数为3512，黄芩苷与相邻峰的分离度大于1.5，峰型对称。 2.5 精密度试验 取2.2对照品溶液，重复进样6 次，每次10 l，记录绿原酸峰面积，RSD=0.39%(n=6)，表明精密度良好。 2.6 稳定性试验 取同一对照品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24 h进样测定，RSD=0.43%，供试品溶液在24 小时内峰面积基本稳定。 2.7 加样回收率试验 称取6 份已知含量为6.173 mg/g的样品约0.05 g，精密称定，分别置16 号锥形瓶中，分别精密加入对照品储备液1 ml，按照“2.4”项下供试品溶液制备方法制备溶液，按照“2.1”项色谱条件，分别测定，结果见表1。 表1 加样回收率试验结果 称样量 样中黄芩苷的含量 对照加入量 测得黄芩苷的含量 回收率 平均回收率 RSD (g) (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%) 0.05132 0.3168 0.4800 0.7904 99.20 0.04937 0.3048 0.4800 0.7806 99.46 0.04898 0.3024 0.4800 0.7729 98.79 98.94 0.36 0.05064 0.3126 0.4800 0.7809 98.52 0.05028 0.3104 0.4800 0.7828 99.04 0.04966 0.3066 0.4800 0.7759 98.64 取3批样品，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，各进样10 l，按外标法计算绿原酸的含量，结果见表2。 表2 3批样品中黄芩苷的含量 样品编号 1 2 3 样品含量(mg/g) 6.092 6.123 6.112 3 讨论 3.1 提取溶剂的选择 有文献报道以稀乙醇为提取溶剂3，经过比较发现以甲醇为溶剂测定含量所得的含量高。 3.2 流动相选择 本试验曾用甲醇