扩张型心肌病HLA.doc

扩张型心肌病患者HLA-DQB1基因的多态性临床心血管病杂志 2000年第3期第16卷 临床研究作者：王秋芬廖玉华龚非力毛焕元张金枝单位：王秋芬（同济医科大学心血管疾病研究所同济医科大学附属协和医院心内科武 汉，430022）；廖玉华（同济医科大学心血管疾病研究所同济医科大学附属协和医院心内科武汉，430022）；龚非力（同济医科大学免疫学教研 室）；毛焕元（同济医科大学心血管疾病研究所同济医科大学附属协和医院心内科武汉，430022）；张金枝（同济医科大学心血管疾病研究所同济医科 大学附属协和医院心内科武汉，430022）关键词：王秋芬；廖玉华；龚非力；毛焕元；张金枝摘要目的：探讨扩张型心肌病(DCM)的遗传背景及免疫学发病机制。方法：借助聚合酶链式反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术对84例DCM患者和143例正常人进行了HLA-DQB1基因型别分析。结果：与正常对照组相比，HLA-DQB10303等位基因频率降低，其RR值为0.41，P0.01。结论：研究进一步证实免疫遗传学在部分DCM发病机制中具有重要意义。携带HLA-DQB10303等位基因的个体可能对DCM具有抗性。HLA-DQB1 gene polymorphism in patientswith dilated cardiomyopathyWANG Qiu-fen1LIAO Yu-hua1GONG Fei-li2MAO Huan-yuan1ZHANG Jin-zhi1(1Department of Cardiology,Institute of Cardiovascular DiseaseTongji Medical University,Wuhan 430022；2Department of Immunology Tongji Medical University)AbstractObjective:To probe into the genetic background and immunopathogenesis of dilated cardiomyopathy.Method:HLA-DQB1 gene polymorphism in 84 patients with DCM and 143 normal control subjects was analyzed by using the polymerase chain reaction/sequence specific primer (PCR/SSP) technique.Result:The frequency of HLA-DQB10303 allele was significantly lower in patients than that in the controls,RR of DCM patients was 0.41,P0.01.Conclusion:These findings further verify that immunogenetics play a predominant pathogenetic role in a subset of DCM patients.Individuals carrying HLA-DQB10303 alleles may be resistant to DCM.Key wordsCardiomyopathy,congestiveHLA-DQB1 genesImmunogeneties扩张型心肌病(DCM)病因尚未完全阐明。近年来研究证明，DCM发病学与遗传因素、病毒感染及自身免疫有关。其主要证据为：已观察到许多DCM家族性病例1；DCM患者心肌中可检出肠病毒核糖核酸；DCM患者血清中可检出特异性抗心肌抗体，并可导致心肌自身免疫性损伤2；部分DCM患者心脏内皮细胞HLA-类抗原的表达增加3，4。HLA-类基因包括DR、DQ和DP，编码着具有高度多态性的细胞表面糖蛋白，这些糖蛋白对免疫反应的调节，包括对一些疾病的易感性起着十分重要的作用，普遍认为HLA抗原与自身免疫性疾病具有相关性5。HLA-类分子的重要作用是将抗原提呈给T细胞受体，再导致抗原特异性免疫反应6。本文借助近年来国外新发展的Polymerase Chain Reaction/Sequence Specific Primer (PCR/SSP)技术，比较DCM患者与正常人HLA-DQB1等位基因频率，探讨HLA与DCM的相关性。1对象与方法1.1研究对象DCM组：DCM患者84例，其中男55例，女29例，平均年龄(416.4)岁；均为本院心内科19921997年收治的湖北地区住院患者。DCM诊断符合1980年WHO/ISFC标准。对照组：湖北地区无血缘关系的健康献血员143例，其中男98例，女45例，平均年龄(385.1)岁。1.2方法取DCM患者5 ml全血，以EDTA抗凝，提取基因组DNA，借助PCR/SSP技术7，分析HLA-DQB1等位基因的型别。具体步骤：先提取基因组DNA并计算其含量，再与22对具有HLA-DQB1等位基因特异性的引物进行PCR反应，最后通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。1.3统计学处理基因频率的计算采用直接计数法，两组的比较采用2检验。相对危险性(RR)按公式RR=ad/bc计算。式中a为携带某一特定HLA型别的病例数；d为不携带某一特定HLA型别的对照人数；b为不携带某一特定HLA型别的病例数；c为携带某一特定HLA型别的对照组人数。2结果DCM组HLA-DQB1*0303基因频率明显低于对照组，其余基因频率两组比较无显著性差异(见表1)。表1两组HLA-DQBI等位基因频率的比较HLA等位基因HLA-DQBI对照组(143例)DCM组(84例)PRR例数阳性率/%例数阳性率/%02013323.081214.2903016041.964148.8103022718.881113.1003036243.362023.810.010.4104011611.1922.38040232.1000.0005012215.3989.5205022114.6989.52050353.5055.95050410.7011.1906013020.981619.0506022517.481113.10060342.8022.3806041611.1978.33060510.7000.00060800.0011.193讨论尽管DCM病因尚不清楚，但普遍认为环境因素和遗传因素均参与了该病的发生。业已发现DCM患者血清中存在大量特异性抗心肌自身抗体，这些抗体与心肌细胞表面特定靶分子结合，可引起心肌损害2。因而认为DCM属于一种自身免疫性疾病。家族性DCM的大量存在提示遗传因素在DCM发生发展中起着重要作用1。HLA-类基因的编码产物具有不同的分子结构和抗原特异性，可在细胞和分子水平调控机体的免疫应答。HLA-类抗原是T细胞识别外来抗原的限制性成分，其基本作用是参与将抗原提呈给T细胞受体，从而介导抗原特异性免疫应答6。因此，特定的HLA-类等位基因产物可能选择性提呈特定的致病性自身抗原。为此，在寻找DCM遗传标志的研究中，特别重视HLA分子与疾病的关联情况。许多研究证实了特定的HLA-类基因的表现型与基因型与DCM相关联810。Limas等5发现55%的抗受体抗体阳性的患者属于HLA-DQB1*0602基因型，而18%的抗体阴性的患者属此基因型(P0.01)；73%的DQB1*0602基因型患者抗抗体阳性，而33%的其他基因型的患者抗抗体阳性(P0.01)。这些结果提示自身抗体的产生与家族性心肌病的易感性之间有密切的相关性。本研究发现，DCM患者HLA-DQB1*0303基因频率降低，其RR值为0.41。进一步证实DCM与HLA-类基因具有相关性。HLA-类基因与自身免疫性疾病易感性相关的机制仍在探讨中。DCM与HLA相关的机制可能是特定的 HLA-类基因与DCM的易感基因处于连锁不平衡状态或者特定的HLA-类基因本身即为DCM易感基因之一。后者的机制可能是特定HLA-类基因编 码的产物具有特定的氨基酸组成和空间构型，它们所形成的HLA-类抗原结合槽有助于选择性提呈与DCM有关的致病性自身免疫肽，从而导致DCM的发生。本研究进一步证实免疫遗传学在部分DCM发病机制中具有重要意义。本项目为卫生部资助课题(96-2-105)参考文献1Michels V V,Moll P P,Miller F A,et al.The frequency of familial dilated cardiomyopathy in a series of patients with idiopathic dilated cardiomyopathy.N Engl J Med,1992,326:77822Liao Y H.Functional analysis of autoantibodies against ADP/ATP carrier from dilated cardiomyopathy.Int J Cardiol,1996,54:1651693李运有，马文珠，吴翔，等.扩张型心肌病心脏HLA-类抗原的异位表达及其意义，中华心血管病杂志，1993，21：15174Hammond E H,Menlove R L,Yowell R L,et al.Vascular HLA-DR expression correlates with pathologic changes suggestive of ischaemia in idiopathic dilated cardiomyopathy.Clin Immunol,1993,68:1972035Limas C,Limas C J,Boudoulas H,et al.HLA-DQA1 and-DQB1 gene haplotypes in familial cardiomyopathy.Am J Cardiol,1994,74:5105126Bodmer L G,Marsh S G E,Albert E D,et al.Nomenclature for factors of the HLA system.Tissue Antigens,1994,44:1187Olerup O,Zetterquist H.HLA-DR typing by PCR amplification with sequence-specific primers (PCR-SSP) in 2 hours:An alternative to serological DR typing in clinical practice including donor-recipient matching in cadaveric transplantations.Tissue Antigens,1992,39:2252358Carlquist J F,Monlove R L,Murray M B,et al.HLA Class (DR and DQ) antigen associations in idiopathic dilated cardiomyopathy.Circulation,1991,83:5155229Limas C J,Limas C,Goldenberg I F,et al.Possible involvement of the HLA-DQB1 gene in susceptibil